上海國際旅行衛(wèi)生保健中心實(shí)驗(yàn)室

章琪方筠王家棟

Telmail:第一局部：食源性急性胃腸炎綜述食源性急性胃腸炎流行現(xiàn)狀Source:FoodborneOutbreakReportingSystem:///主要病原體：毒素介導(dǎo)〔Toxin-mediated):水樣便病毒：諾如，輪狀，星狀，腺病毒細(xì)菌：蠟樣芽孢桿菌，產(chǎn)氣莢膜梭菌，金黃色葡萄球菌，產(chǎn)腸毒素型大腸桿菌侵襲性病原體〔Invasivemicrobes):膿血便細(xì)菌：大腸桿菌〔侵襲性、致病性、出血性〕，沙門氏菌，空腸彎曲桿菌，志賀氏菌，艱難梭菌原蟲：賈第鞭毛蟲，溶組織內(nèi)阿米巴滲透性病原體〔Penetratingmicrobes):系統(tǒng)感染細(xì)菌：傷寒、副傷寒沙門氏菌，鼠疫桿菌感染途徑：病人接觸：諾如病毒、志賀氏菌、出血性大腸桿菌旅行：大腸桿菌、沙門氏菌、賈第鞭毛蟲郵輪：諾如病毒〔Cruise-shipvirus〕動物接觸：沙門氏菌，出血性大腸桿菌，賈第鞭毛蟲疫水：隱孢子蟲，出血性大腸桿菌污染的食物：沙門氏菌致病性：感染劑量：〔病原體顆粒數(shù)〕隱孢子蟲：10-100志賀氏菌：10-100出血性大腸桿菌：10-100空腸彎曲桿菌：104–106沙門氏菌：105–108霍亂弧菌：105–108產(chǎn)腸毒素型大腸桿菌：108鼠疫桿菌：109SlutskerL,etal.AnnInternMed1997;126:505-13食源性急性胃腸炎的防控仍然是很大的挑戰(zhàn)！諾如病毒：10-100第二局部：諾如病毒介紹歷史：In1929,Zahorskyproposedthename“wintervomitingdisease〞todescribesoutbreaksofpresumedviralgastroenteritisInthe1940s,GordondemonstratedthatpooledstoolfiltratesobtainedfrompatientsinaninstitutionaloutbreakofnonbacterialgastroenteritiscouldinfectinoculatedvolunteersIn1968,CDCinvestigatedanoutbreakofvomitingdiseaseinanelementaryschoolinNorwalkOH:50%ofstudentsandteachersdevelopedgastroenteritisKaplanusedimmuneelectronmicroscopytoidentifyviralparticlesinthestoolsofvolunteersinfectedwiththe“Norwalk〞strainVirusinitiallyclassifiedassmallroundviruses,laterreclassifiedascaliciviruseswhengenomeclonedDr.AlbertKapikian1972,electronmicroscopySmallRound-StructuredVirus(SRSV)27nmKapikianAZ,etal.Visualizationbyimmuneelectronmicroscopyofa27-nmparticleassociatedwithacuteinfectiousnonbacterialgastroenteritis.JVirol,1972,10(5):1075-1081.美國2006年諾如病毒引起的急性胃腸炎數(shù)量發(fā)生場所疫情數(shù)量郵輪37養(yǎng)老院37餐館13醫(yī)院7學(xué)校3聚會3其它26總計

126流行現(xiàn)狀：我國流行現(xiàn)狀1996年和1997年分別在北京和太原開展的人群血清標(biāo)本中的諾瓦克樣病毒特異性IgG抗體檢測說明，北京市諾瓦克樣病毒抗體總檢出率為88.8％以上。太原市總檢出率在78.6％以上。1998-2002在福州地區(qū)用RT-PCR方法對288份腹瀉患者糞便標(biāo)本諾瓦克樣病毒病原檢測顯示，諾瓦克樣病毒基因組I的陽性率為11.1％，主要是7歲以上兒童及成人；諾瓦克樣病毒基因組Ⅱ的陽性率為28.8％，主要是6月齡至3歲嬰幼兒。我國流行現(xiàn)狀根本特征：發(fā)病率高、致病劑量低、抵抗力強(qiáng)，被WHO定為B類病原體；對加熱、低溫具有較強(qiáng)抵抗性〔能耐受零度以下到60℃〕；對酸堿和去污劑等具有較強(qiáng)的抵抗性(通常10ppm或10mg/L含氯去污劑處理30分鐘不能有效殺滅病原體〕；無法培養(yǎng)，無有效小動物模型；型別眾多，無有效保護(hù)性抗體，常引起重復(fù)感染；復(fù)制機(jī)制還不清楚，無有效治療藥物及疫苗病原學(xué)：

TaxonomyFamilyCaliciviridaeGenus: 1.Norwalk-LikeViruses(NLVs) 2.Sapporo-LikeViruses(SLVs)GenusNoroviruses (formerlyNorwalk-LikeViruses)GenusLagovirus(rabbit,hare)GenusVesivirus(cat,pig,sealion,other)GenusNorovirus(human,bovine,swine,mouse)GenusSapovirus(human,swine)Virions(35-40nm)nonenvelopedandicosahedral

Genomestructure：LinearpositivesenseRNAof7.4-7.7kb5'3'HelProPolORF1ORF2ORF3155358537469506950758876541789530212CapsidSource:GenBankM87661GIII.1_JenaGIII.2_CH126GI.3_DesertShieldGI.7_WinchesterGI.8_BoxerGI.4_ChibaGI.5_MusgroveGI.2_SouthamptonGI.6_HesseGI.1_NorwalkGV.1_MurineGIV.1_AlphatronGII.15_J23GII.4_BristolGII.11_SW918GII.8_AmsterdamGII.9_VirginiaBeachGII.14_M7GII.7_LeedsGII.12_WortleyGII.1_HawaiiGII.16_TiffinGII.2_MelkshamGII.5_HillingdonGII.10_ErfurtGII.13_FayettevilleGII.17_CS-E1GII.3_TorontoGII.6_Seacroft.10GVGIVGIIIGIIGIClustersdifferby≥20%aminoacidpairwisedistanceGenogroupsdifferby44-55%aminoacidpairwisedistance病毒的分型〔Capsidprotein)1病毒培養(yǎng)：Cellculture:no(humanstrains)Animalmodel:no(chimpanzees)流行現(xiàn)狀：Causesanestimated23millioninfectionsperyearintheUSCauses~60%ofillnessduetoknownAccountsfor70-95%ofgastroenteritisoutbreaks感染劑量:10-100viruses：傳播途徑：Fecal-oraltransmission(sheddingforupto2-3weeks)Droplettransmission?(viaingestionofairbornedropletsofviruscontainingparticles)

Commoncauseoftraveler’sdiarrheaMaycausechronicinfectionintransplantrecipients流行病學(xué)：傳播途徑：糞-口傳播

Person-to-personFoodborneWaterborneMixed空氣傳播

Vomitus污染物

傳播途徑分類：臨床病癥： 腹瀉 86% 嘔吐 78% 腹部疼痛或絞痛 30% 惡心〔無嘔吐〕 15% 嗜睡 8% 發(fā)熱 7% 肌肉疼痛 7% 頭痛 6% 頭暈 4% 脫水 4% 寒顫 3% 喉嚨疼痛 1% 鼻出血 1% 感染持續(xù)過程：病毒顆粒持續(xù)釋放過程：診斷：實(shí)驗(yàn)室檢測

(一)抗原檢測

1972年首先通過免疫電鏡的方法發(fā)現(xiàn)NVs，因此該方法在很長一段時間內(nèi)成為檢測NVs的經(jīng)典方法。電鏡法包括常規(guī)電鏡〔EM〕、免疫電鏡〔IEM〕以及固相免疫電鏡〔SPIEM〕三種。直接電鏡法通過將糞便標(biāo)本重懸后離心，負(fù)染病毒顆粒后直接在鏡下觀察來尋找病毒。由于NVs病毒顆粒并不具備典型的杯狀病毒特征，且糞便中病毒滴度通常較低，給直接電鏡觀察帶來了很大困難，通常要求病毒的滴度到達(dá)106/g才能到達(dá)檢測要求。免疫電鏡的方法是將重懸離心別離得到的病毒顆粒與標(biāo)準(zhǔn)血清共孵育后再經(jīng)負(fù)染后在鏡下觀察來檢測病毒。盡管這種方法可以較好地濃縮病毒顆粒，但靈敏度仍然較低，對NVs檢測的陽性率只有20%左右。固相免疫電鏡的方法是將特異性抗體直接包被載網(wǎng)，同時參加蛋白A增加抗體與標(biāo)本中抗原結(jié)合的時機(jī)，從而提高檢測的靈敏度。上述三種方法都要求觀察者具有豐富的經(jīng)驗(yàn)，同時，精密的檢測儀器、較大的勞動強(qiáng)度，都制約了該方法在NVs檢測中的應(yīng)用。免疫學(xué)檢測〔EIA〕主要通過檢測標(biāo)本中的抗原來確認(rèn)諾如病毒。該方法操作簡單，實(shí)用性較強(qiáng)，便于推廣。然而同樣由于NVs型別的多樣性，對該方法的應(yīng)用產(chǎn)生了限制。Bruin等在2006年首次報告了對兩種新上市的商品化NVsEIA檢測試劑盒的評估結(jié)果。結(jié)果說明，與傳統(tǒng)的RT-PCR方法相比，IDEIA和Ridascreen這兩個品牌的試劑盒對NVs的檢測靈敏度分別為38%和36%，特異性為96%和88%。之后的兩項(xiàng)評估結(jié)果雖然有提高，但靈敏度也僅在60.%76.9%和59%80.3%之間。說明盡管對單個樣品的診斷可能還存在問題，但可應(yīng)用于NVs大規(guī)模爆發(fā)后的篩查。(二)核酸檢測逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響(RT-PCR)：除了能更準(zhǔn)確、靈敏地檢測標(biāo)本中的諾瓦克病毒，尤其是低濃度的諾瓦克病毒感染外，最大的優(yōu)點(diǎn)在于可以進(jìn)一步對病毒進(jìn)行血清型和基因型的研究，不會受到獲得分型單克隆抗體的限制，對流行病學(xué)研究具有重要意義，是諾如病毒檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)〞。SpecimenProcessing(Faeces)ViralRecovery&RNAextractionGeneratecDNAfromRNAbyreversetranscriptionPCRNorovirusGenogroupIorIIidentified

SequencingGenotyping實(shí)驗(yàn)流程：第三局部一起郵輪諾如病毒感染疫

情的實(shí)驗(yàn)室檢測根本情況介紹UnpublishedresultsbyWangJ.andZhangZ.實(shí)驗(yàn)室診斷處置依據(jù)：?上海國際旅行衛(wèi)生保健中心腹瀉病處置預(yù)案?診斷原那么首先排除檢疫傳染病〔霍亂〕流行病學(xué)調(diào)查資料臨床病癥其它相關(guān)資料確定檢測工程，檢測方法排查方案〔一〕〔一〕輪狀病毒：1．金標(biāo)法檢測輪狀病毒抗原試劑：糞便輪狀病毒檢測試劑盒；試劑廠家：法國VEDA公司；樣本：糞便；時間：30分鐘。2．ELISA法試劑：輪狀病毒酶免檢測試劑盒；供給商：上海軒昊科技開展樣本：糞便；時間：2小時。3．熒光定量RT-PCR法試劑：輪狀病毒熒光定量RT-PCR檢測試劑盒；單位：中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所；樣本：糞便；時間：4小時。〔二〕諾如病毒1．ELISA法檢測病毒抗原試劑：EnzymeimmunoassayforthedetectionofNorovirusinstoolsamples；廠家：R-BiopharmAG；樣本：糞便；時間：4小時。2．半定量RT-PCR法〔本實(shí)驗(yàn)室〕樣本：糞便；時間：6小時。排查方案〔二〕結(jié)果：E