Q/LB.□XXXXX-XXXX醫(yī)用供體豬病原微生物監(jiān)測技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了醫(yī)用供體豬生產(chǎn)過程中的代孕母豬、醫(yī)用供體豬，飲水和日糧，隔離器，使用物品等醫(yī)用供體豬及其物品的微生物學(xué)監(jiān)測技術(shù)要求。本文件適用于醫(yī)用供體豬生產(chǎn)和交付過程中微生物質(zhì)量控制。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T14926.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物沙門菌檢測方法GB/T14926.41實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無菌動(dòng)物生活環(huán)境及糞便標(biāo)本的檢測方法GB/T16551豬瘟診斷技術(shù)GB/T18448.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

體外寄生蟲檢測方法GB/T18448.6實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

蠕蟲檢測方法GB/T18448.10實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腸道鞭毛蟲和纖毛蟲檢測方法GB/T18638流行性乙型腦炎診斷技術(shù)GB/T18641偽狂犬病診斷方法GB/T18648非洲豬瘟診斷技術(shù)GB/T18935口蹄疫診斷技術(shù)GB/T19915.7豬鏈球菌2型熒光PCR檢測方法GB/T22917豬水泡病病毒熒光RT-PCR檢測方法GB/T27521豬流感病毒核酸RT-PCR檢測方法GB/T34750副豬嗜血桿菌檢測方法GB/T35901豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR檢測方法GB/T35912豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法GB/T36789動(dòng)物狂犬病病毒核酸檢測方法NY/T548豬傳染性胃腸炎診斷技術(shù)NY/T564豬巴氏桿菌病診斷技術(shù)NY/T

1186豬支原體肺炎診斷技術(shù)SN/T

1447豬傳染性胸膜肺炎檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T1919豬細(xì)小病毒病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T3307口岸食源性疾病腺病毒PCR檢測方法SN/T3741.1國境口岸鼠類攜帶病原體檢測方法第1部分：致病性鉤端螺旋體PCR檢測方法SN/T3954國境口岸尼帕病毒RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測方法SN/T4748淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T5196豬輪狀病毒感染檢疫技術(shù)規(guī)范WS/T269布魯氏菌病診斷WS284人感染高致病性禽流感診斷標(biāo)準(zhǔn)WS301戊型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)WS/T486弓形蟲病的診斷DB50/T1043無菌（Germ-free，GF）豬生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范DB22/T3283豬血凝性腦脊髓炎病毒檢測TaqMan熒光定量PCR法術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。

醫(yī)用供體豬medicaldonorpigs通過生物工程技術(shù)獲得，用于提供醫(yī)療用途的活器官或生物材料制備的低免疫原性豬及群體。

隔離環(huán)境isolationenvironment與外界完全隔離，可阻斷任何外源微生物侵入的封閉空間。[來源：GB/T14925—2010]

屏障環(huán)境barrierenvironment應(yīng)作為隔離環(huán)境的第一層保障，用于放置和使用無菌隔離器。[來源：GB/T14925—2010]代孕母豬病原微生物篩查代孕母豬應(yīng)外觀健康、無異常，未注射豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗；應(yīng)排除經(jīng)胎盤垂直傳播的疾病，包括豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病、豬細(xì)小病毒病等。病原篩查方法參照GB/T16551、GB/T18641、NY/T679和SN/T1919執(zhí)行。篩查應(yīng)在胚胎植入前1周完成。醫(yī)用供體豬微生物監(jiān)測采樣采樣管的準(zhǔn)備宜采用自帶無菌拭子的無菌螺帽蓋采樣管。也可自制帶螺帽蓋離心管和棉簽作為采樣工具。采樣管應(yīng)在保質(zhì)期內(nèi)的、且包裝完好。宜經(jīng)過環(huán)氧乙烷滅菌處理，或提前進(jìn)行高溫高壓滅菌處理。采樣當(dāng)天放入屏障設(shè)施的傳遞窗內(nèi)，并紫外滅菌30min及以上。采樣管轉(zhuǎn)入隔離器在確保醫(yī)用供體豬飼養(yǎng)隔離器傳遞通道內(nèi)部密封罩密封狀態(tài)下，取下傳遞通道外側(cè)密封罩，將無菌采樣管放入傳遞通道，密封外側(cè)密封罩。新鮮配制1.5%~2.0%的過氧乙酸從傳遞通道外側(cè)密封罩上的消毒孔，對傳遞通道內(nèi)部空間進(jìn)行噴霧消毒。噴霧時(shí)間不宜低于5min。消毒完之后密封消毒孔，等待30min以上。通過醫(yī)用供體豬飼養(yǎng)隔離器操作手套，從隔離器內(nèi)部取下傳遞通道內(nèi)側(cè)密封罩，將無菌采樣管移入隔離器內(nèi)，重新罩上傳遞通道的內(nèi)側(cè)密封罩。采樣過程根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求用拭子采集樣本（如豬肛門拭子、鼻拭子或新鮮糞便等），立即裝回采樣管，并旋緊螺帽蓋。采樣管轉(zhuǎn)出隔離器取下傳遞通道內(nèi)部密封罩，將采樣管轉(zhuǎn)移至隔離器的傳遞通道內(nèi)部，罩好內(nèi)部密封罩，再打開隔離器傳遞通道的外部密封罩，將采樣管取出，重新罩上外部密封罩。按照5.1.2的要求對傳遞通道進(jìn)行再次消毒。微生物監(jiān)測檢測方法醫(yī)用供體豬的病原微生物檢測按表1所列方法進(jìn)行。病原微生物檢測目錄檢測項(xiàng)目檢測方法病毒非洲豬瘟病毒GB/T18648口蹄疫病毒GB/T18935日本乙型腦炎病毒GB/T18638偽狂犬病毒GB/T18641豬傳染性胃腸炎病毒NY/T548豬繁殖與呼吸綜合征病毒GB/T35912豬流感病毒GB/T27521豬水皰病毒GB/T22917豬瘟病毒GB/T16551豬戊型肝炎病毒W(wǎng)S301豬圓環(huán)病毒GB/T35901狂犬病毒GB/T36789淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒SN/T4748輪狀病毒SN/T5196尼帕SN/T3954人流感病毒W(wǎng)S284豬細(xì)小病毒SN/T1919豬腺病毒SN/T3307豬血凝性腦脊髓炎病毒DB22/T3283細(xì)菌布魯氏菌WS/T269多殺巴氏桿菌NY/T564副豬嗜血桿菌GB/T34750鉤端螺旋體SN/T3741.1表1病原微生物檢測目錄（續(xù)）檢測項(xiàng)目檢測方法細(xì)菌沙門氏菌GB/T14926.1豬肺炎支原體NY/T1186豬鏈球菌GB/T19915.7豬胸膜肺炎放線桿菌SN/T1447寄生蟲弓形蟲病WS/T486其他蠕蟲GB/T18448.6鼠賈第鞭毛蟲GB/T18448.10體外寄生蟲GB/T18448.1判定標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)過程中的醫(yī)用供體豬19項(xiàng)病毒全項(xiàng)目均不應(yīng)檢出，細(xì)菌中布魯氏菌不應(yīng)檢出，寄生蟲中弓形蟲不應(yīng)檢出。交付的醫(yī)用供體豬表1所列31項(xiàng)病原微生物均不應(yīng)檢出。監(jiān)測頻率出生28天內(nèi)完成至少2次的檢測，抽樣方法按NY/T541的規(guī)定進(jìn)行。飲水和日糧微生物監(jiān)測飲水微生物監(jiān)測采樣與培養(yǎng)無菌條件下，取飲用水1mL，經(jīng)0.45μm薄膜過濾法處理，采用R2A瓊脂培養(yǎng)基，30℃~35℃培養(yǎng)不少于5天。判定標(biāo)準(zhǔn)需氧菌總數(shù)應(yīng)不得超過100cfu/mL。日糧微生物監(jiān)測采樣與培養(yǎng)按照日糧總量的5%進(jìn)行抽樣檢查。無菌條件下，每袋無菌豬日糧取25g，加入25mL無菌水，充分混勻，靜置10min。取上清液1mL，接種到胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA），30℃~35℃培養(yǎng)3天~5天。判定標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)無任何可見菌落。隔離器和使用物品的微生物學(xué)監(jiān)測隔離器的微生物學(xué)監(jiān)測檢測前的準(zhǔn)備隔離器的準(zhǔn)備