ICS65.020DB22B05吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T3193—2020番茄灰霉病診斷與防治技術(shù)規(guī)程Codeofpracticefordiagnosisandcontrolagainsttomatogreymold吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T3193—2020前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)。本文件的主要起草人：王曉梅、陶淑霞、孫周平、趙秀香、曹國先、崔四川、曲夢楠、趙子健、王瑤、張丹。IDB22/T3193—2020番茄灰霉病診斷與防治技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了番茄灰霉病的病害診斷與防治技術(shù)。本文件適用于番茄灰霉病的病害診斷、病原鑒定和綜合防治。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainreaction，PCR是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法。4番茄灰霉病診斷與防治技術(shù)程序的構(gòu)成番茄灰霉病診斷與防治技術(shù)程序主要包括以下幾個(gè)階段，程序流程圖如圖1所示。1DB22/T3193—20205病害診斷5.1癥狀診斷5.1.1莖葉癥狀葉片染病，多從葉尖開始，病斑呈“V”字形向內(nèi)擴(kuò)展，初期呈水漬狀，淺褐色，有不明顯的深淺相間輪紋，潮濕時(shí)，病斑表面生有灰色霉層；莖部染病，多發(fā)生在分枝處或基部，初期產(chǎn)生水漬狀小點(diǎn)，后迅速擴(kuò)展成長橢圓形，潮濕時(shí)，表面會(huì)有灰色霉層，莖部染病嚴(yán)重的可以繞莖一周，病枝易折斷，有時(shí)病部以上植株枯死。典型癥狀見附錄A.1。5.1.2花果癥狀花上染病，病菌多從柱頭和花瓣侵入，潮濕時(shí)，病部會(huì)有灰色霉層；幼果染病，多從果柄向果面擴(kuò)展，在果柄附近形成灰褐色至黃褐色壞死斑，空氣濕潤時(shí)果面上會(huì)有灰色霉層，后期會(huì)引起花瓣、果實(shí)腐爛。典型癥狀見附錄A.1。5.2病原診斷5.2.1顯微觀察在普通光學(xué)顯微鏡10×10倍下進(jìn)行形態(tài)觀察，病菌的孢子梗數(shù)根叢生，褐色，頂端具1次～2次分枝，分枝頂端密生小柄，其上生大量分生孢子。分生孢子圓形至橢圓形，單細(xì)胞，近無色，大小(5.5μm～16μm)×(5.0μm～9.25μm)，分生孢子梗(811.8μm～1772.1μm)×(11.8μm～19.8μm)。病原菌形態(tài)圖見附錄A.2。采集具有典型灰霉病病斑的番茄病葉，用毛刷刷取葉片上的孢子于盛有無菌水的燒杯中，采用稀釋平板法，挑取單個(gè)孢子，放置PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，27℃條件下黑暗培養(yǎng)3d，待產(chǎn)孢后鏡檢，初步確定為灰葡萄孢后進(jìn)行菌絲擴(kuò)繁培養(yǎng)。以基因組DNA為模板，采用通用引物ITS4/ITS5（ITS4：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’/ITS5：5’-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’）對病原物ITS區(qū)域擴(kuò)增，PCR反應(yīng)參數(shù)按附錄B.2的要求執(zhí)行。PCR產(chǎn)物送交生物技術(shù)公司進(jìn)行測序。2DB22/T3193—2020病害防治應(yīng)采取“預(yù)防為主，綜合防治”的原則，在選用抗病品種的基礎(chǔ)上，加強(qiáng)栽培管理，結(jié)合生態(tài)防控和化學(xué)防控進(jìn)行病害綜合治理。6.2防治方法6.2.1農(nóng)業(yè)防治6.2.1.1品種選擇選用優(yōu)質(zhì)、耐病、株型緊湊的番茄品種。6.2.1.2清潔田園定植前徹底清理前茬作物的殘株、爛葉和雜草等；在棚內(nèi)多處用硫磺粉，每畝2kg～3kg，拌上鋸末分多處點(diǎn)燃，密閉24h后通風(fēng)排味。6.2.1.3土壤消毒對土壤采用生石灰消毒，每畝80kg～100kg，整地時(shí)深翻入土壤20cm，澆透水，一周后可以定植栽培。6.2.1.4合理輪作與非茄科作物進(jìn)行5年以上輪作。6.2.1.5田間管理在溫度允許條件下，白天注意通風(fēng)降濕，相對濕度控制在60%以下，夜間相對濕度控制在85%以下。采用農(nóng)膜下軟管滴灌或溝灌，要小水勤澆，避免大水漫灌，減少地上部濕度，有效控制肥水。溫度白天保持在25℃～28℃，夜溫不低于18℃～15℃，地溫不低于15℃。藥劑使用應(yīng)符合GB/T8321（所有部分）和NY/T1276的規(guī)定，不同機(jī)制殺菌劑應(yīng)交替使用，嚴(yán)格按照農(nóng)藥安全間隔期采收。藥劑管理按附錄C要求執(zhí)行。3DB22/T3193—2020可選用10%腐霉利煙劑、15%腐霉·百菌清煙劑、15%異菌·百菌清煙劑點(diǎn)燃防病。傍晚點(diǎn)燃，閉棚過夜，次日早晨通風(fēng)，隔6d～7d再熏1次。6.2.3.2.2噴霧法在病害發(fā)生前或發(fā)生初期，在保護(hù)地相對濕度較低時(shí)可以采用噴霧法進(jìn)行病害預(yù)防或者治療，噴霧要求均勻周到，不留死角?？蛇x擇使用的藥劑種類及用量見表1，用藥方法參照說明書。表1防治番茄灰霉病主要藥劑種類及防治方法用藥量使用次數(shù)（次）2～32～32～32～32～32～32～32～32～32～32～32～32～32～3序號藥劑名稱及劑型使用時(shí)期施用方法（畝）1266%甲硫·乙霉威WP48%菌核·福美雙WP25%菌核·福美雙WP50%克菌丹WP發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病前期發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病初期發(fā)病前期56g～75g常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧常規(guī)噴霧75g～150g60g～80g34155g～190g75g～100g40g～50g550%異菌脲WP650%啶酰菌胺WG730%啶?！た┚鍿C38%唑醚·啶酰菌SC500g/L氟吡菌酰胺·嘧霉胺SC45%異菌脲·氟啶胺SC22.5%啶氧菌酯SC40%甲硫·福美雙SC43%腐霉利SC45mL～60mL40mL～50mL60mL～80mL40mL～50mL26mL～36mL100mL～140mL100mL～120mL9mL～12mL89101112134DB22/T3193—2020AA附錄A（資料性附錄）番茄灰霉病病害癥狀圖片及病原菌形態(tài)圖片A.1病害癥狀圖A.1～A.2給出了番茄灰霉病不同發(fā)病部位典型癥狀。5DB22/T3193—2020A.2病原菌形態(tài)圖A.3～A.4給出了番茄灰霉病病原菌形態(tài)。圖A.3病原菌分生孢子、分生孢子梗和分生孢子小梗（手繪圖片）6DB22/T3193—2020BB附錄B（規(guī)范性附錄）CTAB法提取病原菌基因組DNAB.1CTAB法提取基因組DNA具體操作步驟B.1.1將清洗干凈的研砵，研杵及藥匙滅菌備用，配置好的CTAB提取液置于65℃水浴中預(yù)熱；B.1.2先加入少量滅菌的石英砂于適量擴(kuò)繁的病菌菌絲體中迅速研磨后分裝于離心管中，再加入事先預(yù)熱的CTAB700μL，反復(fù)顛倒震蕩，使其充分混溶，65℃水浴1h，期間每隔15min拿出顛倒搖勻一次，并開蓋放氣，防止因?yàn)闅怏w受熱膨脹而使蓋子崩開；B.1.3取出冷卻后，加入等體積的苯酚氯仿，輕輕翻轉(zhuǎn)，混勻后，常溫離心10min(12000rpm)；B.1.4移取上清液至新離心管中，加入2倍體積的無水乙醇，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)離心管，使DNA沉淀，待白色絮狀沉淀出現(xiàn)后，放置于-20℃冰箱30min以上，常溫離心10min（8000rpm）；B.1.5棄上清液，吸取適量75％的酒精于離心管中，輕輕搖勻，離心5min（8000rpm），漂洗2次，晾干后，加適量TE緩沖液，4℃溶解；B.1.6用1.5％的瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA。B.2PCR反應(yīng)體系和參數(shù)B.2.1反應(yīng)體系10×PCRBuffer為5μL，25mMMgCl2加1μL，10mMdNTP加5μL，5u/μLTaqDNA酶加2μL，模板DNA加1.5μL，無菌雙蒸水補(bǔ)足至50μL。B.2.2反應(yīng)參數(shù)B.2.2.194℃預(yù)變性5min，94℃變性1min，48.5℃退火50s，72℃延伸1min共35個(gè)循環(huán)，72℃溫浴10min，4℃保存；B.2.2.2PCR產(chǎn)物檢測使用0.8％的瓊脂糖凝膠，用0.5×TBE電泳緩沖液，100V電泳30～40mB.2.2.3在凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行電泳結(jié)果觀察，判斷是否為預(yù)擴(kuò)增長度的條帶，無非特異性條帶，且濃7DB22/T3193—2020CC附錄C（規(guī)范性附錄）農(nóng)藥管理C.1采購不得采購國家禁止使用的農(nóng)藥。應(yīng)從正規(guī)渠道采購下列農(nóng)藥，并索取購藥憑證或發(fā)票：——有資質(zhì)農(nóng)藥經(jīng)營單位經(jīng)營的農(nóng)藥；——有農(nóng)藥登記證或農(nóng)藥臨時(shí)登記證的農(nóng)藥；——有農(nóng)藥生產(chǎn)許可證或農(nóng)藥生產(chǎn)批準(zhǔn)文件的農(nóng)藥；——有產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及合格