WB實(shí)驗(yàn)試題及答案

單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.WB實(shí)驗(yàn)中用于分離蛋白質(zhì)的技術(shù)是（）A.離子交換層析B.凝膠過(guò)濾C.SDSD.親和層析2.轉(zhuǎn)膜時(shí)常用的膜是（）A.尼龍膜B.PVDF膜C.硝酸纖維素膜D.以上都可3.封閉液的主要作用是（）A.固定蛋白質(zhì)B.防止非特異性結(jié)合C.促進(jìn)抗體結(jié)合D.溶解蛋白質(zhì)4.一抗孵育的最佳溫度通常是（）A.4℃B.25℃C.37℃D.56℃5.WB實(shí)驗(yàn)中常用的顯色方法不包括（）A.化學(xué)發(fā)光法B.放射性自顯影C.酶標(biāo)顯色法D.熒光顯色法6.蛋白質(zhì)樣品在進(jìn)行SDS前需要進(jìn)行（）處理A.透析B.超濾C.變性D.復(fù)性7.分離大分子蛋白質(zhì)宜選用（）濃度的聚丙烯酰胺凝膠A.高B.低C.中等D.都可以8.以下哪種物質(zhì)可作為SDS中的電泳緩沖液成分（）A.Tris-HClB.PBSC.檸檬酸D.醋酸9.二抗的作用是（）A.識(shí)別抗原B.識(shí)別一抗C.標(biāo)記抗原D.標(biāo)記一抗10.轉(zhuǎn)膜時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致（）A.蛋白質(zhì)未轉(zhuǎn)到膜上B.蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移過(guò)度C.膜破裂D.無(wú)影響答案：1.C2.C3.B4.A5.B6.C7.B8.A9.B10.B多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.WB實(shí)驗(yàn)中可能用到的試劑有（）A.SDSB.考馬斯亮藍(lán)C.脫脂奶粉D.辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗2.影響SDS分離效果的因素有（）A.凝膠濃度B.電泳電壓C.樣品上樣量D.緩沖液pH3.轉(zhuǎn)膜過(guò)程中需要注意的事項(xiàng)有（）A.膜與凝膠的貼合B.轉(zhuǎn)膜裝置的正負(fù)極C.轉(zhuǎn)膜時(shí)間D.轉(zhuǎn)膜溫度4.封閉液的成分可以是（）A.牛血清白蛋白B.明膠C.吐溫20D.蔗糖5.選擇一抗時(shí)需要考慮的因素有（）A.抗體的特異性B.抗體的效價(jià)C.抗體的來(lái)源D.抗體的濃度6.以下哪些屬于WB實(shí)驗(yàn)的步驟（）A.蛋白質(zhì)提取B.凝膠制備C.轉(zhuǎn)膜D.顯色7.蛋白質(zhì)提取過(guò)程中常用的方法有（）A.超聲破碎B.勻漿法C.反復(fù)凍融法D.離心法8.SDS中，上樣緩沖液的成分包含（）A.SDSB.甘油C.溴酚藍(lán)D.DTT9.化學(xué)發(fā)光法顯色需要用到的試劑有（）A.魯米諾B.過(guò)氧化氫C.底物緩沖液D.顯色劑10.WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果條帶出現(xiàn)異常的原因可能有（）A.抗體濃度過(guò)高B.封閉不充分C.轉(zhuǎn)膜不完全D.電泳時(shí)間過(guò)長(zhǎng)答案：1.ACD2.ABCD3.ABCD4.AB5.ABC6.ABCD7.ABC8.ABCD9.ABC10.ABCD判斷題（每題2分，共10題）1.SDS只能分離蛋白質(zhì)，不能分離核酸。（）2.轉(zhuǎn)膜時(shí)，蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上是依靠電場(chǎng)力。（）3.封閉時(shí)間越長(zhǎng)，非特異性結(jié)合的可能性越低。（）4.一抗和二抗都必須是針對(duì)目標(biāo)蛋白的抗體。（）5.提高電泳電壓可以加快蛋白質(zhì)分離速度，且不會(huì)影響分離效果。（）6.蛋白質(zhì)樣品在進(jìn)行SDS前不需要定量。（）7.PVDF膜在使用前需要進(jìn)行甲醇活化。（）8.顯色后條帶過(guò)淡一定是抗體濃度過(guò)低導(dǎo)致的。（）9.實(shí)驗(yàn)中使用的抗體可以反復(fù)凍融。（）10.不同來(lái)源的一抗和二抗可以隨意搭配使用。（）答案：1.√2.√3.×4.×5.×6.×7.√8.×9.×10.×簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述SDS的原理。答案：SDS能使蛋白質(zhì)變性并帶上大量負(fù)電荷，消除蛋白質(zhì)分子間原有電荷差異。在聚丙烯酰胺凝膠電場(chǎng)中，蛋白質(zhì)分子依據(jù)分子大小不同進(jìn)行分離，小分子遷移快，大分子遷移慢。2.封閉液的作用及常用封閉液有哪些？答案：作用是防止膜上未結(jié)合蛋白質(zhì)的區(qū)域與抗體發(fā)生非特異性結(jié)合。常用封閉液有脫脂奶粉、牛血清白蛋白，它們能占據(jù)膜上空白位點(diǎn)，減少非特異吸附。3.轉(zhuǎn)膜過(guò)程中為什么要注意正負(fù)極？答案：蛋白質(zhì)帶有負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。轉(zhuǎn)膜時(shí)需保證凝膠靠近負(fù)極，膜靠近正極，這樣蛋白質(zhì)才能從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上，若正負(fù)極錯(cuò)誤，蛋白質(zhì)無(wú)法正確轉(zhuǎn)移。4.簡(jiǎn)述WB實(shí)驗(yàn)中蛋白質(zhì)提取的要點(diǎn)。答案：選擇合適提取方法，如超聲、勻漿等破碎細(xì)胞釋放蛋白。注意保持低溫抑制蛋白酶活性，添加蛋白酶抑制劑防止蛋白降解，提取后離心去除雜質(zhì)，準(zhǔn)確測(cè)定蛋白濃度。討論題（每題5分，共4題）1.在WB實(shí)驗(yàn)中，如果條帶出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，可能有哪些原因及解決方法？答案：原因可能是樣品上樣量過(guò)大、蛋白質(zhì)未充分溶解、凝膠不均一。解決方法：減少上樣量；確保樣品充分溶解，可適當(dāng)加熱、超聲處理；重新制備均勻凝膠，注意凝膠凝固條件。2.討論不同顯色方法在WB實(shí)驗(yàn)中的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：化學(xué)發(fā)光法靈敏度高，可檢測(cè)低豐度蛋白，但試劑有有效期，需暗室操作；酶標(biāo)顯色法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定，但靈敏度有限；熒光顯色法可實(shí)現(xiàn)多蛋白檢測(cè)，線(xiàn)性范圍寬，不過(guò)需要熒光成像設(shè)備，成本較高。3.如何提高WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性？答案：嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，如溫度、時(shí)間、試劑濃度等；使用高質(zhì)量試劑和抗體，做好抗體保存；規(guī)范操作流程，包括蛋白提取、電泳、轉(zhuǎn)膜等；設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)取平均值。4.分