附件

《兩型肝芟瘍春安弟室珍惻技木規(guī)星》

（2023年電力彼）

中國疾病預(yù)防控制中心

二。二三年十月

9錄

前言............................................1

第一章丙型肝炎病毒感染...........................4

1.HCV病毒學(xué)特點..................................4

2.HCV傳播途仔和致病機制..........................7

3.HCV感染分期和臨床表現(xiàn).........................8

4.HCV感染檢測標(biāo)志物..............................9

5.I1CV感染的治療.................................11

參考文獻..........................................12

第二章樣品的采集、保存和運輸....................16

1.樣品采集.......................................16

2.樣品的接收、保存和運輸........................17

參考文獻..........................................19

第三章HCV抗體檢測................................20

1.HCV抗體檢測方法...............................20

2.HCV抗體檢測方法的選擇和應(yīng)用..................24

參考文獻..........................................25

第四章HCV核酸檢測................................27

1.HCV核酸檢測方法...............................27

2.HCV核酸檢測方法的選擇和應(yīng)用..................28

參考文獻..........................................31

第五章HCV抗原檢測................................32

1.HCV抗原檢測方法...............................32

2.HCV抗原檢測方法的選擇和應(yīng)用..................34

參考文獻..........................................35

第六章HCV感染檢測流程...........................37

1.個體診斷相關(guān)檢測流程及結(jié)果報告................37

2.血液篩查相關(guān)檢測流程及結(jié)果報告................41

3.流行病學(xué)調(diào)查相關(guān)檢測流程及結(jié)果報告............44

參考文獻..........................................45

第七章HCV基因序列分析...........................47

1.HCV基因分型檢測方法和應(yīng)用.....................47

2.HCV耐藥檢測方法和應(yīng)用.........................50

3.HCV分子溯源檢測方法和應(yīng)用.....................52

參考文獻..........................................54

第八章HCV細(xì)胞培養(yǎng)和中和抗體檢測.................58

1.HCV細(xì)胞培養(yǎng)方法...............................58

2.HCV細(xì)胞培養(yǎng)方法在HCV中和抗體檢測中的應(yīng)用....61

參考文獻..........................................61

第九章HCV檢測實驗室的室內(nèi)質(zhì)量控制...............64

1.質(zhì)控品.........................................64

2.質(zhì)控品的檢測頻次和位置........................65

3.質(zhì)控規(guī)則和質(zhì)控圖..............................66

4.失控原因分析和處理............................68

參考文獻..........................................70

第十章HCV檢測實驗室生物安全和職業(yè)暴露...........71

1.HCV檢測實驗室生物安全注意事項.................71

2.HCV職業(yè)暴露及處理措施.........................73

參考文獻..........................................76

韻<

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的一種主要經(jīng)血液

傳播的疾病，HCV慢性感染可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥和纖維化，部分

患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌，對患者的健康和生命產(chǎn)生危

害。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，截至2019年全球約有5800萬人患有

慢性丙型肝炎，2019年丙型肝炎新發(fā)感染約150萬人，約有29

萬人死于HCV感染，其中大部分由肝硬化或肝細(xì)胞癌引起。2019

年僅有21%的慢性丙型肝炎患者得到診斷。世界衛(wèi)生組織在2016

年發(fā)布的《2016-2021年全球衛(wèi)生部門病毒性肝炎戰(zhàn)略》中提出

“到2030年消除作為主要公共衛(wèi)生危害的病毒性肝炎”的目標(biāo),

其中一個指標(biāo)是到2030年90%以上的HCV感染者得到診斷。我

國在2021年發(fā)布的《消除丙型肝炎公共衛(wèi)生危害行動工作方案

（2021-2030年）》中要求加大丙型肝炎檢測力度,提高檢測發(fā)

現(xiàn)率，實施醫(yī)療機構(gòu)和重點人群“應(yīng)檢盡檢”、大眾人群“愿檢

盡檢”策略、抗體陽性者“核酸檢測全覆蓋”策略。

HCV感染的實驗室檢測為丙型肝炎患者的檢測發(fā)現(xiàn)和診斷提

供關(guān)鍵依據(jù)，并在評估抗病毒治療效果以及鑒定病毒亞型和耐藥

性等工作中具有不可或缺的重要作用。自2011年發(fā)布《丙型肝

炎病毒實驗室檢測技術(shù)規(guī)范（試行）》以來，HCV感染檢測技術(shù)

不斷發(fā)展，檢測試劑性能顯著提高，新的檢測服務(wù)策略不斷出現(xiàn)

并逐步推廣應(yīng)用。同時，丙型肝炎防治工作的推進對HCV檢測提

出了新的要求。

為實現(xiàn)2030年消除病毒性肝炎的目標(biāo)，進一步加強我國HCV

感染檢測的規(guī)范性，提高實驗室檢測質(zhì)量，中國疾病預(yù)防控制中

心性病艾滋病預(yù)防控制中心組織專家對《丙型肝炎病毒實驗室檢

測技術(shù)規(guī)范》進行了修訂。近年來由于直接抗病毒藥物（DAAs）

可使95%以上的丙型肝炎患者得到治愈，世界衛(wèi)生組織大力倡導(dǎo)

簡化HCV感染檢測和診斷流程，縮短檢測和診斷時間，以使丙型

肝炎患者盡快得到治療。本次修訂工作參考了世界衛(wèi)生組織以及

國內(nèi)外對HCV感染檢測的最新指南和技術(shù)指導(dǎo)文件，充分考慮了

HCV感染檢測技術(shù)和檢測策略的進步，廣泛征集了丙型肝炎檢測

和防治等領(lǐng)域?qū)＜业男抻喗ㄗh，并切實結(jié)合了我國丙型肝炎防治

工作的需求。修訂后的《丙型肝炎病毒實驗室檢測技術(shù)規(guī)范（2023

版）》（以下簡稱《規(guī)范》）共分十章，包括：丙型肝炎病毒感

染，樣品的采集、保存和運輸，HCV抗體檢測，HCV核酸檢測，

HCV抗原檢測，HCV感染檢測流程，HCV基因序列分析，HCV細(xì)胞

培養(yǎng)和中和抗體檢測，HCV檢測實驗室的室內(nèi)質(zhì)量控制及HCV檢

測實驗室生物安全和職業(yè)暴露。新版《規(guī)范》將對進一步規(guī)范和

提升我國HCV檢測工作質(zhì)量起到重要推動作用。

本《規(guī)范》參加編寫和審核的單位：中國疾病預(yù)防控制中心

性病艾滋病預(yù)防控制中心、中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控

制所、中國食品藥品檢定研究院、軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院、

北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部、北京大學(xué)人民醫(yī)院、北京地壇醫(yī)院、北京友誼

2

醫(yī)院、上海市疾病預(yù)防控制中心、中國科學(xué)院上海巴斯德研究所、

北京清華長庚醫(yī)院、北京佑安醫(yī)院、北京市紅十字血液中心、中

國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所、中國醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院。

本《規(guī)范》編寫學(xué)術(shù)顧問：莊輝、蔣巖

本《規(guī)范》編寫主持人：金聰

本《規(guī)范》編寫人員：金聰、邢文革、沈立萍、饒慧瑛、賈

繼東、魯鳳民、王雅杰、周誠、鐘勁、鐘平、邱茂鋒、李敬云

本《規(guī)范》審核人員：魏來、韓孟杰、劉中夫、葛利榮、吳

昊、葛紅衛(wèi)、何玉先、姜擁軍、李健、馬麗英

本《規(guī)范》自發(fā)布之日起施行，同時終止《丙型肝炎病毒實

驗室檢測技術(shù)規(guī)范（2011年版）》

本《規(guī)范》適用于全國所有的丙型肝炎病毒檢測實驗室。

本《規(guī)范》解釋權(quán)屬于中國疾病預(yù)防控制中心。

3

第一章兩型阿炎痣毒感為

丙型肝炎病毒(HepatitisCvirus,HCV)于1989年被正

式命名，之前曾稱為腸道外傳播的非甲非乙型肝炎病毒，1991年

被歸為黃病毒科(Flaviviridae)。丙型肝炎是由HCV感染引起

的一種肝臟炎癥，其嚴(yán)重程度從輕微病癥到終身嚴(yán)重疾病，包括

肝硬化和肝癌。目前尚無針對丙型肝炎的有效疫苗，HCV感染的

預(yù)防主要依賴于在醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)以及在高危人群中減少暴露風(fēng)

險。本章主要介紹了HCV的病毒學(xué)特點、傳播途徑和致病機制、

感染分期和臨床表現(xiàn)、感染檢測標(biāo)志物以及治療方案。

1.HCV病毒學(xué)特點

1.1HCV的病毒形態(tài)、基因組結(jié)構(gòu)及復(fù)制周期

HCV屬于黃病毒科(Flaviviridae)的丙型肝炎病毒屬

(Hepacivirus)。HCV是有包膜的單股正鏈RNA病毒，病毒體為

球狀顆粒，直徑約為40?60nm,去除包膜后暴露其中的核衣殼，

直徑約為33nm。

HCV基因組長度約為9.6kb,編碼單一的開放讀碼框(open

readingframe,ORF)。HCV的ORF兩側(cè)分別為5,非編碼區(qū)和31

非編碼區(qū)，HCV前體蛋白翻譯起始于5'非編碼區(qū)的內(nèi)部核糖體位

點(internalribosomeentrysite,IRES)。翻譯啟動后首先

產(chǎn)生一個約3000個氨基酸的IICV前體蛋白。前體蛋白可被宿主

蛋白酶加工成為組成病毒顆粒的三個結(jié)構(gòu)蛋白Core.El和E2,

4

同時被HCV自身編碼的蛋白酶和宿主蛋白酶共同加工，成為七個

非結(jié)構(gòu)蛋白P7、非2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B（圖1）。

CElE2p7NS2NS34A4BNS5ANS5B

圖1HCV基因組結(jié)構(gòu)

C：核衣殼；E1/E2：包膜糖蛋白；P7：離子通道；NS2：自身蛋白

酶；NS3：絲氨酸蛋白酶（N端1/3）、解旋酶（C端2/3）；NS4A：

絲氨酸蛋白酶輔助因子；NS4B：膜整合蛋白；NS5A：調(diào)節(jié)病毒復(fù)

制和組裝的因子；NS5B：RNA依賴的RNA聚合酶

HCV感染宿主肝細(xì)胞后經(jīng)過病毒顆粒入胞、基因組翻譯、RNA

復(fù)制以及成熟病毒顆粒的組裝和釋放完成整個復(fù)制周期，具體為:

HCV附著于肝細(xì)胞表面并與相關(guān)受體結(jié)合，通過內(nèi)吞作用進入細(xì)

胞并被轉(zhuǎn)運到胞內(nèi)體；胞內(nèi)體的低PH環(huán)境促使HCV包膜與胞內(nèi)

體膜融合，觸發(fā)了HCVRNA的脫殼和釋放；HCVRNA釋放后由基

因組中的IRES開始翻譯生成前體蛋白，前體蛋白經(jīng)蛋白酶切割

為成熟的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白并與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜緊密結(jié)合，其中

NS3/4A.NS4B、NS5A和NS5B與病毒RNA及宿主細(xì)胞中參與復(fù)制

5

的蛋白組裝成復(fù)制復(fù)合體，在NS5B聚合酶的催化下，以HCV正

鏈RNA為模板啟動負(fù)鏈RNA的合成，再以負(fù)鏈RNA為模板合成

大量的正鏈RNA；正鏈RNA和核心蛋白相接觸并被包裹為核心顆

粒，從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以出芽方式形成病毒顆粒，病毒顆粒經(jīng)高爾基體由

分泌途徑出胞（圖2）。HCV復(fù)制效率很高，每日復(fù)制的病毒顆

?？筛哌_10需個拷貝。

圖2HCV復(fù)制周期示意圖

1.2HCV的分型

依據(jù)HCV基因組序列的同源性和進化距離大小，HCV分為基

因型和亞型，按照國際慣例以阿拉伯?dāng)?shù)字表示HCV基因型，以小

寫英文字母表示基因亞型，如la、2b、3c等。HCV主要分為6個

6

基因型，HCV基因型和亞型存在明顯的地域分布差異?；?-3

型最普遍，呈全球性分布，其中l(wèi)a和1b占所有HCV感染的60%

以上。1型和2型主要流行于歐洲、美洲和亞洲|；3型主要流行

于南亞地區(qū)；4型主要流行于中非和中東地區(qū)；5型主要流行于

南非；6型主要流行于東南亞地區(qū)。我國流行的HCV以1b和2a

基因型較為常見，其中以1b型為主，約占60%以上；其次為2

型、3型和6型，4型和5型非常少見。

2.HCV傳播途徑和致病機制

HCV的傳播途徑主要有三種，即血液傳播，性接觸傳播和母

嬰垂直傳播，血液傳播是最主要的傳播途徑。我國自1993年對

獻血員篩查HCV抗體，2015年開始對HCV抗體陰性的獻血員實

行HCVRNA篩查，目前通過輸血或血液制品傳播的現(xiàn)象較為少

見。近年來我國HCV最主要的傳播方式包括：使用被HCV污染的

醫(yī)療器械進行侵襲性操作，以共享注射器具方式注射毒品等。HCV

不會通過母乳、食品或水源傳播，也不會通過與感染者擁抱、握

手、共用餐具等方式傳播。

研究認(rèn)為HCV感染的致病機制主要分為兩個方面，一是細(xì)胞

免疫介導(dǎo)的肝臟免疫損傷，即HCV感染肝細(xì)胞后誘發(fā)人體免疫反

應(yīng)，淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞攻擊肝細(xì)胞造成肝臟病

理損害；二是HCV感染的直接致病作用，HCV在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制干

擾了肝細(xì)胞蛋白合成，引起肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能改變，造成肝細(xì)胞

變性和壞死，直接損害肝臟。

7

3.HCV感染分期和臨床表現(xiàn)

HCV可引起急性或慢性感染。急性HCV感染者通常沒有癥狀

或癥狀輕微，約有30%(15-45%)的感染者不經(jīng)任何治療即可在

感染6個月之內(nèi)(其中多數(shù)在出現(xiàn)癥狀后的3個月內(nèi))自行清除

病毒，這一比例因地區(qū)和人群而異。其余70%(55%-85%)的急

性HCV感染者會進展到慢性HCV感染，即感染持續(xù)6個月以上。

如果不經(jīng)有效治療，部分慢性丙型肝炎患者可進展為肝硬化和肝

細(xì)胞肝癌。

3.1急性丙型肝炎

約80%的急性HCV感染者在臨床上通常表現(xiàn)為癥狀輕微或沒

有癥狀的亞臨床感染。約20%-25%的患者表現(xiàn)為急性肝炎，通常

為無黃疸型(約占75%),僅有不到1%的患者可發(fā)生急性肝衰竭。

部分急性HCV感染者可能出現(xiàn)乏力、食欲減退、惡心、腹脹和右

季肋部不適或疼痛、尿色深、糞便蒼白、關(guān)節(jié)疼痛，少數(shù)可伴有

低熱和黃疸等癥狀。

3.2慢性丙型肝炎

慢性丙型肝炎患者大多數(shù)無癥狀或僅有輕微癥狀，最常見的

表現(xiàn)是乏力。部分患者有肝病面容、黃疸、肝掌、蜘蛛痣、以及

輕度肝脾腫大。大多數(shù)慢性丙型肝炎患者的血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT)

水平輕度升高，大約1/3的患者ALT水平正常。

3.3丙型肝炎肝硬化

慢性丙型肝炎患者中約5-15%可在20年內(nèi)進展為肝硬化。代

8

償期肝硬化的定義是有肝硬化的病理或影像、內(nèi)鏡、生化及臨床

證據(jù)，但沒有發(fā)生腹水、食管胃靜脈曲張破裂出血或肝性腦病等

嚴(yán)重并發(fā)癥者。丙型肝炎肝硬化患者大多數(shù)無明顯癥狀，或僅有

乏力、腹脹、食欲降低等非特異癥狀；部分患者可見肝病面容、

黃疸、肝掌、蜘蛛痣、腹壁靜脈曲張。實驗室檢查可見不同程度

血清氨基轉(zhuǎn)移酶升高、膽紅素升高、白蛋白降低和血小板減少。

內(nèi)鏡檢查可見食管胃靜脈曲張。影像學(xué)檢查可見肝臟縮小、表面

不光滑、裂隙增寬，肝實質(zhì)呈顆粒樣或結(jié)節(jié)樣，門靜脈增寬、脾

臟增大、門體側(cè)枝循環(huán)形成；肝臟彈性測定顯示硬度增加。代償

期肝硬化每年有3-4%進展為失代償期肝硬化，其定義是肝硬化患

者發(fā)生腹水、食管胃靜脈曲張破裂出血、肝性腦病等嚴(yán)重并發(fā)癥。

3.4HCV相關(guān)肝細(xì)胞肝癌

絕大多數(shù)丙型肝炎所致的肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular

carcinoma,HCC）發(fā)生在肝硬化基礎(chǔ)之上。在丙型肝炎肝硬化患

者中，每年約有2%-4%可進展為HCC。其診斷主要靠影像學(xué)檢查,

甲胎蛋白及其他腫瘤標(biāo)志物可作為輔助指標(biāo)。

4.HCV感染檢測標(biāo)志物

HCV暴露后首先引起急性感染，即在暴露于HCV后6個月內(nèi)

出現(xiàn)HCV感染的標(biāo)志物（先出現(xiàn)HCVRNA和HCV核心抗原p22,

隨后出現(xiàn)HCV抗體）。在無抗病毒治療的情況下，一部分HCV感

染者通常在感染后6個月內(nèi)自發(fā)清除HCV感染（圖3A）,其余

感染者因在6個月內(nèi)未能清除病毒感染，轉(zhuǎn)為慢性HCV感染，即

9

慢性丙型肝炎（圖3B）。感染過HCV后，HCV抗體可持續(xù)存在,

但其并非中和抗體，不能提供持久保護。無論感染者是自發(fā)清除

病毒，還是在抗病毒治療后治愈，可再次被同種基因型或不同基

因型的HCV感染。

在HCV暴露1-2周后可檢測到HCVRNA,HCVRNA達到高峰

（105"107IU/mL）的時間略早于血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）

水平達到峰值和臨床癥狀出現(xiàn)。以游離形式存在的HCV核心抗原

P22與RNA水平呈正相關(guān)，使用靈敏的試劑也可較早被檢測到。

之后的6-10周可能仍無HCV抗體應(yīng)答產(chǎn)生，這個時期被稱作血

清學(xué)檢測“窗口期”，在此期間抗體無法被檢測到。HCV感染檢

測標(biāo)志物的動態(tài)變化如圖3所示。

近年來的一些報告提示存在隱匿性HCV感染，即在沒有任何

血清學(xué)標(biāo)記物的情況下檢測到HCVRNAo隱匿性HCV感染可能是

由于個體具有潛在的免疫抑制，例如艾滋病毒感染的人群。

10

(A)自限性HCV感染；(B)慢性HCV感染

5.HCV感染的治療

聚乙二醇干擾素-a(Peg-IFN-a)聯(lián)合利巴韋林方案(PR)

曾是治療慢性丙型肝炎的標(biāo)準(zhǔn)抗病毒方案。其1年療程的總體持

續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答率(sustainedvirologicresponse,SVR)為60%

左右，對HCV基因型1、4型療效較差(SVR為44%?53Q,對

2、3型療效較好(73%)o但是其副作用較大，而且不適用于失

代償期肝硬化患者，現(xiàn)臨床上已經(jīng)不再應(yīng)用。

目前臨床抗病毒治療方案應(yīng)用直接抗病毒藥物(direct

actingantiviralagents,DAAs)有效阻斷HCV在肝內(nèi)的復(fù)制。

DAAs是一類小分子化合物，通過抑制HCV生命周期中特異性的

蛋白或酶，例如HCV非結(jié)構(gòu)蛋白NS3/4A、NS5A和NS5B等，發(fā)揮

抗病毒作用。DAAs主要包括NS3/4A蛋白酶抑制劑、NS5A蛋白

抑制劑和NS5B聚合酶抑制劑等。NS3/4A蛋白酶抑制劑類包括

11

有：格拉瑞韋、格卡瑞韋、達諾瑞韋、伏西瑞韋等，NS5A蛋白

抑制劑包括有：達拉他韋、維帕他韋、可洛派韋、哌侖他韋、艾

爾巴韋、來迪派韋、依米他韋、拉維達韋等，NS5B聚合酶抑制劑

包括有索磷布韋等。世界衛(wèi)生組織指南推薦的DAAs方案為：索

磷布韋/維帕他韋、格卡瑞韋/哌侖他韋、索磷布韋聯(lián)合達拉他韋，

均是泛基因型方案。我國《丙型肝炎防治指南》（2022版）首先

推薦泛基因型方案。根據(jù)藥物的療效、安全性以及可及性，我國

推薦的泛基因型DAAs方案為：索磷布韋/維帕他韋、可洛派韋聯(lián)

合索磷布韋，泛基因型方案針對HCV各型均有效（不論是否有肝

硬化，包括干擾素初治和經(jīng)治）。針對HCV基因1b型的治療，

我國推薦的方案包括：艾爾巴韋/格拉瑞韋、來迪派韋/索磷布韋、

依米他韋聯(lián)合索磷布韋、達諾瑞韋/利托那韋聯(lián)合拉維達韋及利

巴韋林。95%以上的慢性丙型肝炎患者經(jīng)過12周DAAs治療后可

獲得SVR,獲得SVR后可改善肝功能、逆轉(zhuǎn)肝纖維化、降低肝硬

化失代償以及HCC的發(fā)生率，改善預(yù)后以及提高生活質(zhì)量。

參考文獻

1.StevenRoger,AlexandraDucancelle,He1eneLe

Guillou-Guillemette,etal.HCVvirologyanddiagnosis.

Clinicsandresearchinhepatologyand

gastroenterology2021；45（3）：101626.

2.PeninF,DubuissonJ,ReyFA,etal.Structuralbiology

12

ofhepatitisCvirus.Hepatology,2004,39(1)：5-

19Moradpour,D,Penin,F,RiceMF.Replicationof

HepatitisCvirus.NatRevMicrobiol.2007；5(6)：453-

63.

3.Moradpour,D,Penin,F,RiceMF.Replicationof

HepatitisCvirus.NatRevMicrobiol.2007；5(6)：453-

63.

4.GerresheimGK,RoebE,MichelAM,etal.HepatitisC

VirusDownregulatesCoreSubunitsofOxidative

Phosphorylation,ReminiscentoftheWarburgEffectin

CancerCells.Cells.2019Nov8；8(11)：1410.

5.BorgiaSM,HedskogC,ParhyB,etal.Identification

ofanovelhepatitisCvirusgenotypefromPunjab,

India：expandingclassificationofhepatitisCvirus

into8genotypes.J.Infect.Dis.,2018,218(11)：1722-

1729

6.ShahR,AhovegbeL,NiebelM,etal.Non-epidemicHCV

genotypesinlow-andmiddle-incomecountriesandthe

riskofresistancetocurrentdirect-actingantiviral

regimens[J].Journalofhepatology,2021,75(2)：462-

73.

13

7.LuL,NakanoT,HeY,etal.HepatitisCvirusgenotype

distributioninChina：predominanceofcloselyrelated

subtypelbisolatesandexistenceofnewgenotype6

variants[J].Journalofmedicalvirology,2005,75(4)：

538-49.

8.WHO.HepatitisC[EB/0L].[2023-06-7]

https：//www.who.int/news-room/fact-

sheets/detai1/hepatitis-c.

9.WHO.GuidelinesonHepatitisBandCTesting[M].

Geneva：WorldHealthOrganization,2017.

10.AASLD-IDSAHCVGuidancePanel.HepatitisCGuidance

2018Update：AASLD-IDSARecommendationsforTesting,

Managing,andTreatingHepatitisCVirus

Infection.ClinInfectDis.2018；67(10)：1477-1492.

11.KanwalF,SingalAG.Surveillancefor

HepatocellularCarcinoma：CurrentBestPracticeand

FutureDirection.Gastroenterology.2019；157(1.)：54-

64.

12.LuciaParlati,ClemenceHollande,StanislasPol.

TreatmentofhepatitisCvirusinfection.Clinicsand

researchinhepatologyandgastroenterology2021Jul；

45(4)：101578.

14

13.YeeBE,NguyenNH,ZhangB,etal.Sustained

virologicalresponseanditstreatmentpredictorsin

hepatitisCvirusgenotype4comparedtogenotypes1,

2,and3：ameta-analysis.BMJOpenGastroenterol.

2015；2(l)：e000049.

14.RockeyDC,FriedmanSL.FibrosisRegressionAfter

EradicationofHepatitisCVirus：FromBenchto

Bedside.Gastroenterology.2021；160(5)：1502-1520.

15.CalvarusoV,CabibboG,CacciolaI,etal.Incidence

ofHepatocellularCarcinomainPatientsWithIICV-

AssociatedCirrhosisTreatedWithDirect-Acting

AntiviralAgents.Gastroenterology.2018；155(2)：411-

421.

16.EuropeanAssociationfortheStudyoftheLiver.

EASLrecommendationsontreatmentofhepatitisC：

finalupdateoftheseries.JHepatol2020；73(5)：

1170-218.

17.中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會.丙型

肝炎防治指南(2022年版)[J].中華肝臟病雜志，2022,

30(12)：1332-1348.

15

第二章?lián)衩牟衫m(xù)、保存鈾包物

本章介紹了用于HCV感染檢測的全血、血清、血漿、干血斑

等樣品的采集和處理方法，適用于HCV抗體、抗原、核酸和基因

型檢測。樣品采集按照試劑盒說明書及臨床樣品采集標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

程進行。樣品采集后的保存、運輸條件應(yīng)參照不同檢測系統(tǒng)對樣

品保存、運輸?shù)囊髨?zhí)行。

1.樣品采集

1.1采樣前準(zhǔn)備

根據(jù)檢測項目的具體要求，在樣品采集前應(yīng)制定詳細(xì)的樣

本采集方案，比如確定采集樣品的種類，保存及運輸?shù)臅r限和

方法，確認(rèn)樣品儲存條件。采樣前應(yīng)檢查所需物品，比如采血

用具、皮膚消毒用品、采血管和廢棄物容器等是否已備齊，是

否在有效期內(nèi)。尤其關(guān)注受檢者信息與樣品容器表面的標(biāo)記是

否一致，并注明樣品采集時間及唯一編碼，保證檢驗樣品的記

錄可追溯。

1.2血液樣品采集

采集血液樣品宜選擇適宜的室內(nèi)（外）空間，患者取臥位或

坐位，按照臨床采血技術(shù)要求操作。

靜脈血：靜脈血采集按照衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，消毒局部皮膚，用

加有抗凝劑的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽

取靜脈血轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻10T5次,

16

以防止血液凝固。

末梢全血：將采血部位局部消毒后，采用無菌采血針穿刺取

血，成人采血部位以左手無名指為宜，1歲及以下嬰幼兒通常自

拇指或足跟兩側(cè)采血，應(yīng)該盡量避免從耳垂處取血。

干血斑：穿刺采集的末梢血或抽取的靜脈血約so-ioorii滴

加在濾紙上，注意不要讓血液滴落在其它物體表面造成污染。置

5(TC烘箱中干燥15分鐘或在常溫放置5小時以上，待血樣干燥

后即制成干血斑，包裝好后送檢。

血清：將采集的靜脈血在室溫自然放置1-2小時，待血液凝

固和血塊收縮后離心，即可得到血清。

血漿：將采集的抗凝靜脈血進行離心即可分離得到血漿。用

于核酸RNA檢測的血漿樣品，要求使用不含抗凝劑或含EDTA或

ACD抗凝劑的無菌真空采血管及配套采血器靜脈采血。如進行

PCR檢測，不能使用含肝素抗凝劑的采血管，避免PCR反應(yīng)受到

抑制。

2.樣品的接收、保存和運輸

2.1樣品接收

2.1.1樣品接收前應(yīng)檢查送檢樣品的完整性，運送是否符

合要求，查看樣品送檢登記表填寫情況，核對樣品與化驗單是否

符合，檢查樣品管有無破損和溢漏、干血斑樣品包裝是否完整等

情況。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和容器

消毒。

17

2.1.2查看樣品的質(zhì)量，如血液樣品有無嚴(yán)重溶血、微生

物污染、乳糜血、黃疸等，記錄并明確樣品狀況對相應(yīng)的檢測是

否造成影響。對于不合格樣品，實驗室需通知臨床重新采集并進

行記錄。

2.1.3及時登記有關(guān)參數(shù)，包括樣品試管上的相關(guān)資料如

受檢者代號、試管編號、性別、年齡以及送檢單位和送檢日期等。

2.2樣品保存

靜脈血液標(biāo)本采集后應(yīng)及時送檢，在4-6小時內(nèi)完成送檢

及離心分離血清/血漿。用于HCVRNA檢測的樣品建議在4小時

內(nèi)送至實驗室。

用于抗體或抗原檢測的血清或血漿樣品如在1周內(nèi)進行檢

測，可存放于2-8C。用于HCVRNA檢測的血清或血漿樣品如在

72小時內(nèi)進行檢測，可存放于2-8。（2。所有樣品長期保存超過2

周時，應(yīng)置于-8CTC保存。

2.3樣品運輸

2.3.1全血樣品在短時間可送達時，如10分鐘左右，可在

室溫下運送；如需長途運輸或氣溫較高時，需在2七-10。。的冷藏

條件下運送，固定冰點材料應(yīng)放置在血液的最上層，并且不得與

血液直接接觸。運輸全血時，不得使用-65￡或以下溫度條件下

制備的固定冰點材料或干冰。

2.3.2凍存的血清或血漿樣品應(yīng)使用-18七或以下溫度條件

下制備的固定冰點材料或干冰在冰凍條件下運送。

18

2.3.3樣品運送必須有記錄并符合生物安全要求。

參考文獻

1.中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會.靜脈血液標(biāo)本采集指

南：WS/T661-2020[S].北京：中華人民共和國國家衛(wèi)生健

康委員會，2020.

2.國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.人類血液樣本采集與處理：GB/T

38576-2020[S].北京：國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會，2020.

3.WHO.GuidelinesonHepatitisBandCTesting[M].

Geneva：WorldHealthOrganization,2017.

4.中國合格評定國家認(rèn)可委員會.醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可

準(zhǔn)則的應(yīng)用要求：CNAS-CL02-A001ES].北京：中國合格評定

國家認(rèn)可委員會，2021.

19

第三車HCV擾體衿惻

本章介紹了HCV抗體的檢測方法、檢測方法的選擇和應(yīng)用

等。

1.HCV抗體檢測方法

HCV抗體檢測方法主要分為酶聯(lián)免疫吸附試驗、化學(xué)發(fā)光免

疫分析試驗、快速檢測試驗、和免疫印跡試驗等。

1.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosorbent

assay,ELISA)

間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測HCV抗體的基本原理是以HCV

抗原包被固相載體，用辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG與被檢樣

品中的HCV抗體反應(yīng)，以鄰苯二胺(OPD)或3,3',5,5'一

四甲基聯(lián)苯胺(TMB)等底物顯色后，利用酶標(biāo)儀等儀器進行定

性結(jié)果判斷。其主要反應(yīng)過程如下：加入經(jīng)樣品稀釋液稀釋的被

檢樣品，樣品中的HCV抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合

物；其他免疫球蛋白及樣品中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,

在洗滌過程中被洗去；加酶標(biāo)抗人IgG與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)

合；洗滌后，固相載體上的酶量相應(yīng)顯示特異性抗體的量；加底

物顯色后加入終止液，利用酶標(biāo)儀等儀器分析結(jié)果。

雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗也應(yīng)用于HCV抗體的檢測,

使用HCV抗原包被固相載體，加入生物素化HCV抗原與被檢樣品

中HCV抗體的混合物進行反應(yīng)，形成“包被抗原-抗體-生物素抗

20

原”結(jié)構(gòu)的免疫復(fù)合物，并結(jié)合在固相載體上。通過洗滌去除未

結(jié)合的生物素抗原和抗體，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素,

形成“包被抗原-抗體-生物素抗原-酶標(biāo)記親和素”結(jié)構(gòu)的免疫

復(fù)合物，加底物顯色后加入終止液，利用酶標(biāo)儀等儀器分析結(jié)果。

1.2化學(xué)發(fā)光免疫分析試驗(chemiluminescence

immunoassay,CLIA)

化學(xué)發(fā)光免疫分析試驗是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測定

技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗

體等的檢測分析技術(shù)。HCV抗體的化學(xué)發(fā)光免疫分析試驗與酶聯(lián)

免疫吸附試驗原理相同，采用間接法或雙抗原夾心法原理檢測

HCV抗體，通過自動化程度較高的化學(xué)發(fā)光儀分析結(jié)果?；瘜W(xué)發(fā)

光免疫分析試驗根據(jù)不同的標(biāo)記方法分為兩種：

1.2.1化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析試驗：化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分

析試驗又稱化學(xué)發(fā)光免疫分析試驗(CLIA),是一種用化學(xué)發(fā)光

劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光

物質(zhì)有口丫咤酯類化合物—acridiniumester(AE),是有效的發(fā)

光標(biāo)記物，通過啟動發(fā)光試劑而發(fā)光，強烈的直接發(fā)光可在一秒

鐘內(nèi)完成，為快速的閃爍發(fā)光。叫咤酯作為標(biāo)記物用于免疫分析，

其化學(xué)反應(yīng)簡單、快速、無須催化劑。檢測小分子抗原采用競爭

法，檢測大分子抗原則采用夾心法，非特異性結(jié)合少，本底低；

與大分子的結(jié)合不會減小所產(chǎn)生的光量，從而增加靈敏度。

1.2.2化學(xué)發(fā)光酶免疫分析試驗：從標(biāo)記免疫分析角度，

21

化學(xué)發(fā)光酶免疫分析試驗(chemiluminescentenzyme

immunoassay,CLEIA)應(yīng)屬于酶免疫分析,只是反應(yīng)的底物是發(fā)

光劑，操作步驟與酶聯(lián)免疫吸附試驗完全相同。以酶標(biāo)記抗原或

抗體進行免疫反應(yīng)，免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物。

該方法又分為如下三類：

1.2.2.1HRP標(biāo)記的CLEIA：常用的底物為魯米諾或其衍

生物如異魯米諾，是一類重要的發(fā)光試劑。魯米諾的氧化反應(yīng)在

堿性緩沖液中進行，在過氧化物酶及活性氧(過氧化陰離子(T,

單線態(tài)氧。2,羥自由基0H-,過氧化氫乩。2)存在下生成激發(fā)態(tài)

中間體，當(dāng)其回到基態(tài)時發(fā)光，其波長為425mn。早期用魯米諾

直接標(biāo)記抗原或抗體，但標(biāo)記后發(fā)光強度降低而使靈敏度受到影

響。近來用過氧化物酶標(biāo)記抗體，進行免疫反應(yīng)后利用魯米諾作

為發(fā)光底物，在過氧化物酶和起動發(fā)光試劑(NaOH2H2O2)作用下，

魯米諾發(fā)光，發(fā)光強度依賴于酶免疫反應(yīng)物中酶的濃度。

1.2.2.2增強發(fā)光酶免疫分析(enhancedluminescence

enzymeimmunoassay,ELEIA)：在發(fā)光系統(tǒng)中加入增強發(fā)光劑

以增強發(fā)光信號，并在較長時間內(nèi)保持穩(wěn)定，便于重復(fù)測量，從

而提高分析靈敏度和準(zhǔn)確性。

1.2.2.3ALP標(biāo)記的CLEIA：所生底物為環(huán)1,22二氧乙烷

衍生物，用于化學(xué)發(fā)光酶免分析底物而設(shè)計的分子結(jié)構(gòu)中包含起

穩(wěn)定作用的基團一金剛烷基，其分子中發(fā)光基團為芳香基團和酶

作用的基團，在酶及啟動發(fā)光試劑作用下引起化學(xué)發(fā)光。

22

1.3快速檢測試驗(rapiddiagnostictests,RDTs)

快速檢測試驗是一種簡便的檢測方法，可在30分鐘內(nèi)通過

人工肉眼判讀得到定性結(jié)果。快速檢測試驗主要使用免疫膠體金

技術(shù)，主要分為以下兩類；

1.3.1免疫滲濾試驗(immunofi1trationtest)：以硝酸

纖維膜為載體，HCV抗原以點狀固定在膜上，加待檢樣品。陽性

結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點。有效試驗的質(zhì)控點必須顯

色。

1.3.2免疫層析試驗(inununochromatographictest):

以硝酸纖維膜為載體，HCV抗原以線狀固定在膜上，待檢樣品沿

著固相載體遷移，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有

效試驗的質(zhì)控線必須顯色。

1.4免疫印跡試驗(westernblot,WB)

免疫印跡試驗一般將HCV的多種抗原成分噴涂在硝酸纖維薄

膜條上，并設(shè)置了兩種不同濃度的人IgG對照帶和一條hSOD對照

帶，用于內(nèi)部對照和結(jié)果判斷。其診斷HCV感染的敏感性高、特

異性強，可檢測針對HCV不同抗原的抗體，且不需要特殊的儀器

設(shè)備。但這類檢測方法比其他血清學(xué)檢測方法的成本更高，而且

有較高比例的不確定結(jié)果。

1.5HCV抗體抗原聯(lián)合檢測試驗

近年來一類可以同時檢測HCV抗體和核心抗原的HCV抗體抗

原聯(lián)合檢測試驗(包括酶免法及發(fā)光法)在國內(nèi)外應(yīng)用，我國也

23

有產(chǎn)品獲得了注冊。HCV抗原和HCV抗體聯(lián)檢試驗的原理是基于雙

抗體夾心法檢測HCV核心抗原，或基于雙抗原夾心法檢測HCV抗體。

2.HCV抗體檢測方法的選擇和應(yīng)用

HCV抗體檢測廣泛應(yīng)用于個體的篩查檢測和臨床診斷、獻血

員篩查和原料血漿篩查、流行病學(xué)監(jiān)測等。酶聯(lián)免疫吸附試驗、

化學(xué)發(fā)光試驗和快速試驗多用于HCV感染的血清學(xué)篩查檢測，免

疫印跡試驗可用于確認(rèn)血清學(xué)抗體篩查檢測試驗的陽性結(jié)果?；?/p>

于抗體的檢測不能用于診斷HCV現(xiàn)癥感染。

在具備實驗室檢測條件或每天承擔(dān)大量檢測的情況下，建議

采用基于實驗室的檢測方法，比如酶聯(lián)免疫吸附試驗和化學(xué)發(fā)光

免疫分析試驗，進行篩查檢測，具有更高的成本效益。

快速檢測試劑的操作簡單、反應(yīng)時間快（30分鐘之內(nèi)），可

在檢測當(dāng)天獲得結(jié)果。大多數(shù)快速檢測試劑使用指尖血，可由經(jīng)

過培訓(xùn)的基層衛(wèi)生工作人員操作。因此在不具備實驗室檢測條件

的資源有限環(huán)境中或者外展檢測中建議使用快速檢測試劑，可以

極大促進HCV檢測的可及性，加強轉(zhuǎn)介和減少感染者隨訪過程中

的流失。與基于實驗室的篩查檢測試劑相比，HCV抗體的快速檢

測試劑具有可接受的敏感性和特異性。但快速檢測試劑的局限性

是一般不適用于檢測大量血液樣品，結(jié)果讀取依賴于主觀判斷，

原始檢測結(jié)果不能永久保存等。

世界衛(wèi)生組織在2021年提出HCV篩查檢測可以由個體使用

HCV抗體快速檢測試劑進行自我檢測。自我檢測是個體為了解感

24

染狀況，在私密環(huán)境下自己收集樣品進行測試并讀取結(jié)果的過程。

目前，丙型肝炎自我檢測的應(yīng)用經(jīng)驗還非常有限，但這是未來擴

大檢測的一種潛在的重要方法。

HCV抗體抗原聯(lián)合檢測主要用于HCV感染的篩查檢測，因為

HCV抗原可以比HCV抗體更早被檢測到，加入抗原可以提高早期感

染檢測的敏感性，并縮短抗體檢測試劑的檢測窗口期，但不能區(qū)

分既往感染和現(xiàn)癥感染，也不能區(qū)分急性和慢性丙型肝炎病毒感

染。

需要注意的是，僅進行抗體檢測，可能出現(xiàn)假陽性或假陰性

的結(jié)果。在一些自身免疫性疾病患者中，可出現(xiàn)HCV抗體檢測結(jié)

果的假陽性。如懷疑HCV抗體檢測結(jié)果假陽性，可使用另一種抗

體檢測試劑再次檢測確認(rèn)抗體陽性結(jié)果。此外，在存在免疫功能

抑制的患者中，比如存在艾滋病、惡性腫瘤化學(xué)治療、造血干細(xì)

胞移植、實體器官移植、血液透析、低Y-球蛋白血癥、全身使

用糖皮質(zhì)激素等情況下，HCV抗體檢測結(jié)果可能出現(xiàn)假陰性。對

于近6個月內(nèi)暴露于HCV的急性HCV感染者，也可出現(xiàn)HCV抗體檢測

結(jié)果的假陰性。如懷疑HCV抗體檢測結(jié)果假陰性，應(yīng)進行HCV核酸

檢測以確認(rèn)感染情況。

參考文獻

1.中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.丙型肝炎診斷:

WS213-2018ES],北京：中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育

25

委員會，2018.

2.WHO.GuidelinesonHepatitisBandCTesting[M].

Geneva：WorldHealthOrganization,2017.

3.ChevaliezS.StrategiesfortheimprovementofHCV

testinganddiagnosis.ExpertRevAntiInfectTher.

2019；17(5)：341-347.

4.ChevaliezS,PawlotskyJM.Newvirologicaltoolsfor

screening,diagnosisandmonitoringofhepatitisBand

Cinresource-limitedsettings.JHepatol.2018;69(4):

916-926.

5.WHO.AcceleratingaccesstohepatitisCdiagnostics

andtreatment[M].Geneva：WorldHealthOrganization,

2021.

6.MannsMP,ButiM,GaneE,etal.HepatitisCvirus

infection.NatRevDisPrimers.2017；3：17006.

7.FornsX,CostaJ.HCVvirologicalassessment.J

Hepatol.2006；44(1Suppl)：S35-S39.

8.WHO.RecommendationsandguidanceonhepatitisCvirus

self-testing[M].Geneva：WorldHealthOrganization,

2021.

26

第四奉HCV核磁檜洲)

本章介紹了HCV核酸檢測的方法，檢測方法的選擇和應(yīng)用

等。

1.HCV核酸檢測方法

HCV核酸檢測包括HCVRNA的定性檢測和定量檢測。目前商

業(yè)化HCVRNA檢測試劑的主要實驗原理基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

(polymerasechainreaction,PCR)技術(shù)，在我國臨床實驗室

以熒光定量PCR技術(shù)為主，其他檢測技術(shù)原理還包括轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的

擴增技術(shù)等。

1.1實時熒光定量PCR技術(shù)

實時熒光定量PCR技術(shù)是在傳統(tǒng)逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)基礎(chǔ)

上，應(yīng)用結(jié)合熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fluorescenceresonance

energytransfer,FRET)原理設(shè)計不同的熒光探針，對擴增核

酸片段進行定量檢測。主要包括三個步驟：①提取樣品中的HCV

RNA；②對提取的HCVRNA進行逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增；③實時熒光

檢測PCR擴增產(chǎn)物。

1.2轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴增技術(shù)(transcription-mediated

amplification,TMA)

TMA的原理是利用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶向T7RNA聚合酶的共同作

用，在恒溫條件下擴增RNA。TMA使用的引物含有T7RNA聚合酶

結(jié)合位點，使得反轉(zhuǎn)錄合成的cDNA可以作為T7RNA聚合酶的模

板，在T7RNA聚合酶的作用下合成大量的RNA拷貝。擴增出來

27

的RNA重新進入TMA循環(huán)，成為下一輪復(fù)制的模板。TMA優(yōu)點包

括特異性強、靈敏度高、檢測用時較短、反應(yīng)條件簡單、擴增在

恒溫進行，無需專門的熱循環(huán)儀器。

2.HCV核酸檢測方法的選擇和應(yīng)用

HCV核酸定性檢測能夠快速和靈敏地檢測出病毒核酸，可應(yīng)

用于臨床診斷和獻血員篩查。HCV核酸定量檢測可應(yīng)用于臨床診

斷及治療效果評估。目前，HCV核酸定量檢測試劑的最低定量限

可以達到15IU/mL,與核酸定性檢測試劑的最低檢測限相近。

2.1HCV感染診斷

對于成年人和18月齡以上兒童、青少年，如果血清學(xué)篩查

檢測結(jié)果為陽性，HCVRNA的定性和定量檢測均可作為確認(rèn)病毒

感染的首選策略。對HCV感染高風(fēng)險人群，或者近期有明確流行

病學(xué)史、臨床表現(xiàn)呈急性丙型肝炎特征且排除免疫抑制狀杰的個

體，若血清學(xué)篩查檢測為陰性，也可直接進行HCVRNA檢測，以

及時發(fā)現(xiàn)急性期感染和窗口期感染。

HCV感染者自愈或經(jīng)過治療清除病毒后，雖然HCV抗體可以

長期在體內(nèi)存在并被檢測到，但沒有保護效果，個體仍可再次被

HCV感染。對于曾經(jīng)感染過HCV的個體，如果懷疑自己再次感染

THCV,需要進行HCVRNA檢測以確認(rèn)再次感染。

HCV感染的母嬰傳播率約為5%,約25%至50%的HCV感染兒

童可在4歲前自愈。由于母體的HCV抗體可以通過胎盤進入胎兒

體內(nèi)并可存在18個月，18月齡以下兒童的HCV抗體陽性并不一

28

定代表HCV感染。對于18月齡以下兒童，HCV感染只能通過HCV

RNA檢測進行確認(rèn)。新生兒如在母親分娩時發(fā)生HCV感染，在出

生后1-2周可在血清中檢測到HCVRNAo由于對2個月至6個月

的HCV暴露兒童進行HCVRNA檢測能得到可靠的陽性和陰性結(jié)

果，并且與18個月時的最終檢測結(jié)果相關(guān)，美國肝病協(xié)會(AASLD)

在2021年發(fā)布的指南中建議最早可在2個月時進行HCVRNA檢

測。我國丙型肝炎診斷行標(biāo)建議6個月后復(fù)查HCVRNA仍為陽性

者，可確診為慢性HCV感染。

近年來，HCV核酸即時檢測(point-of-caretesting,POCT)

商業(yè)化試劑的發(fā)展擴大了HCV感染檢測服務(wù)可及性，特別是在社

區(qū)可以診斷HCV現(xiàn)癥感染以及監(jiān)測治療效果。P0CT能夠在現(xiàn)場

環(huán)境中進行實驗室定性和定量核酸檢測，可避免樣品長途運輸導(dǎo)

致的質(zhì)量下降，并且比基于實驗室的核酸檢測方法更加容易使用。

P0CT核酸檢測通?？稍?-2小時內(nèi)提供結(jié)果。HCV抗體快運檢測

可與HCVRNA即時檢測聯(lián)合使用，在當(dāng)天診斷HCV現(xiàn)癥感染。

2.2血液篩查

HCVRNA定性檢測可用于血液篩查。采用單份樣品或多樣品

集合的方法，對采供血機構(gòu)的獻血員血液及單采血漿站的原料血

漿進行核酸檢測，降低輸血殘余危險度。

2.3抗病毒治療監(jiān)測及療效評估

檢測HCV病毒血癥對評估治療效果很重要。在引入治療性口

服DAAs治療方案之前，基于干擾素(IFN)的治療方案需要在治

29

療過程中頻繁監(jiān)測HCV病毒載量水平，以決定是否應(yīng)該停止治

療，或縮短治療時間。此前，這些檢測包括在治療第4周檢測病

毒載量以幫助預(yù)測治療的效果，然后在第12周再次檢測病毒載

量以監(jiān)測早期病毒反應(yīng)(EVR),最后在治療完成后的第12和24

周通過檢測病毒載量評價治愈效果(即持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答SVR12或

SVR24)o

引入新的DAAs治療方案后，已不再進行這些系列檢測，因

為病毒突破的幾率相對較低，而且病毒載量下降的速度與SVR無

關(guān)。大多數(shù)接受DAAs治療的人，在開始治療4周后就無法檢測

到病毒載量。對于所有基于DAA治療方案的臨床研究，治療后12

周采用高靈敏核酸檢測方法(檢測下限低于15IU/mL)檢測不

到HCVRNA是評估治療結(jié)果和治愈的終點(SVR12)。如果SVR12

無法實現(xiàn)，可以考慮以治療后24周作%替代的SVR時間點(SVR24)

評估治愈。HCVRNA的定性或定量檢測均可用于在抗病毒治療結(jié)

束后的12周或24周評估治愈情況。HCVRNA定量檢測還可應(yīng)用

于基線病毒載量檢測以及判斷抗病毒治療療效，指導(dǎo)抗病毒治療

方案。HCVRNA的POCT檢測可用于在就診當(dāng)天及時評估治愈情

況。

2.4應(yīng)用于干血斑樣品的檢測

一些HCV核酸檢測試劑可以對干血斑(driedbloodspot,

DBS)樣品進行檢測，檢測結(jié)果與血清、血漿樣品的檢測結(jié)果相

30

近。因此，在基礎(chǔ)設(shè)施不足或無法及時運送樣品到核酸檢測實驗

室的地區(qū)，可使用干血斑樣本進行HCV核酸檢測。

參考文獻

1.中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.丙型肝炎診斷：

WS213-2018ES].北京：中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育

委員會，2018.

2.WHO.AcceleratingaccesstohepatitisCdiagnostics

andtreatment[M].Geneva:WorldHealthOrganization,

2021.

3.WHO.Updatedrecommendationsonsimplifiedservice

deliveryanddiagnosticsforhepatitisCinfection[M].

Geneva：WorldHealthOrganization,2022.

4.WHO.GuidelinesonHepatitisBandCTesting[M].Geneva：

WorldHealthOrganization,2017.

5.MichaelPManns,etal.HepatitisCvirusinfection.Nat

RevDisPrimers.2017,2；3：17006o

6.BhattacharyaD,AronsohnA,PriceJ,etal.AASLD-IDSA

HCVGuidancePanel.Hepatitis0Guidance2023Update：

AASLD-IDSARecommendationsforTesting,Managing,and

TreatingHepatitisCVirusInfection[publishedonline

aheadofprint,2023May25].ClinInfectDis.2023；

31

ciad319.

7.MaheshwariA,RayS,ThuluvathPJ.AcutehepatitisC.

Lancet.2008；372(9635)：321-332.

8.FornsX,CostaJ.HCVvirologicalassessment.JHepatol.

2006；44(lSuppl)：S35-S39.

9.體外診斷試劑注冊與備案管理辦法[J].中華人民共和國國務(wù)

院公報,2021,No.1752(33)：76-88.

第五章HGV擾府.珍汕)

本章介紹了HCV抗原檢測的方法、檢測方法的選擇和應(yīng)用

等。

1.HCV抗原檢測方法

HCV核心抗原(HCVcAg)p22是HCV的一種核衣殼多肽,在病

毒組裝過程中釋放到血漿中，可以在HCV感染早期和整個HCV感染

過程中檢測到。已有的商業(yè)化檢測試劑可用于HCV核心抗原的獨

立檢測。

L1基于酶聯(lián)免疫法的HCV抗原檢測

抗原檢測ELISA試劑采用雙抗體夾心法定性或定量檢測樣品

中游離的HCV核心抗原或總核心抗原(包括游離核心抗原和核心

抗原-抗體復(fù)合物)。其基本實驗原理是：以核心抗原免疫小鼠

32

后獲得的HCV核心抗原單克隆抗體作為固相包被物，用與固相包

被物有不同抗原決定簇的HCV核心抗原單克隆抗體作為辣根過氧

化物酶標(biāo)記物，與樣品中游離的或總的HCV核心抗原反應(yīng)，通過

OPD顯色進行定性或定量測定。

大部分HCV抗原檢測試劑檢測的是樣品中游離核心抗原以

及和HCV抗體結(jié)合的核心抗原，因此在進行檢測之前需要加入尿

素、鹽酸及去垢劑等，以解離樣品中的核心抗原-抗體免疫復(fù)合

物。其它操作程序與一般的ELISA或發(fā)光技術(shù)操作基本相同，即:

加入待測樣品孵育后，洗去未結(jié)合的成分；加入酶標(biāo)記或發(fā)光物

質(zhì)標(biāo)記的核心抗原二抗，孵育后顯色，再加入終止液終止顯色;

用酶標(biāo)儀計讀取S/CO值進行陰性和陽性反應(yīng)的判斷。

將HCV抗原的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋成不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)，還可進

行HCV抗原的定量檢測。以橫坐標(biāo)為HCV抗原濃度(pg/ml),

縱坐標(biāo)為0D值，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。檢測得到待測樣品的0D值

后，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算抗原濃度。如果待測樣品的0D值超出標(biāo)

準(zhǔn)曲線上最高抗原濃度的0D值，則需用陰性血清或血漿將樣品

稀釋后再進行檢測。

1.2基于化學(xué)發(fā)光法的HCV抗原檢測

化學(xué)發(fā)光法應(yīng)用于HCV抗原檢測，其原理與ELISA方法相

同，微粒子作為固相載體使用增強了試劑的檢測靈敏度，通過預(yù)

激發(fā)液和激發(fā)液產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，測量的相對發(fā)光單位