pcr培訓(xùn)班考試題及答案河南

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.復(fù)性C.延伸D.轉(zhuǎn)化答案：D2.Taq酶的特點(diǎn)是（）A.耐高溫B.耐低溫C.耐高壓D.耐高鹽答案：A3.PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)，其長(zhǎng)度一般為（）A.10-15bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B4.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)體系的成分（）A.dNTPB.模板DNAC.限制性內(nèi)切酶D.引物答案：C5.PCR技術(shù)的發(fā)明人是（）A.克里克B.穆利斯C.沃森D.桑格答案：B6.進(jìn)行PCR反應(yīng)的儀器是（）A.離心機(jī)B.酶標(biāo)儀C.擴(kuò)增儀D.電泳儀答案：C7.退火溫度一般比引物的Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃答案：B8.PCR反應(yīng)中，延伸時(shí)間主要取決于（）A.模板長(zhǎng)度B.引物長(zhǎng)度C.Taq酶活性D.dNTP濃度答案：A9.下列關(guān)于PCR模板的說法錯(cuò)誤的是（）A.可以是基因組DNAB.不能是RNAC.純度要高D.不能有抑制劑答案：B10.引物的作用是（）A.提供3'-OH末端B.提供5'-OH末端C.提供能量D.激活Taq酶答案：A二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)體系包含（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPE.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物設(shè)計(jì)C.反應(yīng)溫度D.循環(huán)次數(shù)E.Taq酶用量答案：ABCDE3.引物設(shè)計(jì)的原則包括（）A.長(zhǎng)度合適B.GC含量適中C.避免引物二聚體D.特異性強(qiáng)E.3'端不能互補(bǔ)答案：ABCDE4.PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測(cè)序D.酶切分析E.熒光定量檢測(cè)答案：ABCDE5.下列哪些是Taq酶的特性（）A.具有5'→3'聚合酶活性B.具有3'→5'外切酶活性C.耐高溫D.催化dNTP聚合E.不需要鎂離子答案：ACD6.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要注意的事項(xiàng)有（）A.防止污染B.準(zhǔn)確配置反應(yīng)體系C.嚴(yán)格控制溫度D.選擇合適的引物E.正確操作儀器答案：ABCDE7.熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)有（）A.靈敏度高B.定量準(zhǔn)確C.可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)D.高通量E.操作簡(jiǎn)單答案：ABCD8.下列哪些可以作為PCR的模板（）A.病毒核酸B.線粒體DNAC.葉綠體DNAD.細(xì)菌基因組DNAE.cDNA答案：ABCDE9.PCR技術(shù)可應(yīng)用于（）A.基因克隆B.疾病診斷C.法醫(yī)鑒定D.遺傳育種E.序列分析答案：ABCDE10.關(guān)于PCR循環(huán)次數(shù)，說法正確的是（）A.一般25-35次B.過多易出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增C.過少產(chǎn)物量不足D.根據(jù)模板量調(diào)整E.根據(jù)引物量調(diào)整答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)中，變性溫度越高越好。（×）2.引物的GC含量越高，退火溫度越低。（×）3.Taq酶沒有3'→5'外切酶活性，所以保真性較差。（√）4.模板DNA的濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（×）5.熒光定量PCR可以對(duì)基因進(jìn)行絕對(duì)定量和相對(duì)定量。（√）6.PCR產(chǎn)物一定是特異性擴(kuò)增的結(jié)果。（×）7.引物設(shè)計(jì)時(shí)，引物自身不能有互補(bǔ)序列。（√）8.PCR反應(yīng)體系中的鎂離子濃度對(duì)反應(yīng)無影響。（×）9.只要引物設(shè)計(jì)正確，PCR反應(yīng)就能成功。（×）10.不同的PCR儀設(shè)置的參數(shù)可能不同。（√）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR基于DNA半保留復(fù)制原理，通過高溫變性使雙鏈DNA解鏈，低溫退火讓引物與模板結(jié)合，適溫延伸在Taq酶作用下合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)擴(kuò)增目的DNA片段。2.引物設(shè)計(jì)的要點(diǎn)有哪些？答案：長(zhǎng)度15-30bp，GC含量40%-60%，避免引物二聚體，3'端不能互補(bǔ)，特異性要強(qiáng)，且盡量減少錯(cuò)配。3.如何防止PCR實(shí)驗(yàn)中的污染？答案：實(shí)驗(yàn)前對(duì)儀器、試劑等進(jìn)行清潔、滅菌；分區(qū)操作，避免交叉污染；使用一次性耗材；操作時(shí)戴口罩、手套等。4.簡(jiǎn)述熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR擴(kuò)增，熒光信號(hào)強(qiáng)度與產(chǎn)物量成正比，通過監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)反映擴(kuò)增情況，從而實(shí)現(xiàn)定量分析。五、討論題（每題5分，共20分）1.在PCR實(shí)驗(yàn)中，出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增條帶的原因及解決方法。答案：原因可能是引物特異性差、退火溫度低、模板有雜質(zhì)等。解決方法：重新設(shè)計(jì)引物，提高退火溫度，優(yōu)化反應(yīng)體系，純化模板DNA。2.比較傳統(tǒng)PCR和熒光定量PCR的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：傳統(tǒng)PCR優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、成本低，可擴(kuò)增目的片段；缺點(diǎn)是不能定量，靈敏度有限。熒光定量PCR優(yōu)點(diǎn)是定量準(zhǔn)確、靈敏度高、可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)；缺點(diǎn)是儀器和試劑貴，操作要求高。3.如何優(yōu)化PCR反應(yīng)條件以獲得更好的結(jié)果？答案：優(yōu)化模板質(zhì)量與濃度，合理設(shè)計(jì)引物，調(diào)整Taq酶用量，精確