云南省pcr試題題庫及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.核酸雜交技術(shù)C.基因測(cè)序技術(shù)答案：A2.PCR反應(yīng)體系中不包括（）A.模板DNAB.逆轉(zhuǎn)錄酶C.引物答案：B3.下列哪種堿基對(duì)不是PCR反應(yīng)中涉及的（）A.A-TB.G-UC.C-G答案：B4.PCR擴(kuò)增循環(huán)數(shù)一般在（）A.10-20B.20-40C.40-60答案：B5.用于PCR的Taq酶主要特性是（）A.耐高溫B.耐低溫C.耐高壓答案：A6.引物設(shè)計(jì)的要求不包括（）A.長度適宜B.富含稀有堿基C.避免自身互補(bǔ)答案：B7.PCR反應(yīng)變性溫度一般在（）A.50-60℃B.70-80℃C.90-95℃答案：C8.決定PCR特異性的關(guān)鍵因素是（）A.緩沖液B.引物C.dNTP答案：B9.以下哪種不屬于定量PCR方法（）A.終點(diǎn)法B.實(shí)時(shí)熒光定量法C.數(shù)字PCR法答案：A10.PCR反應(yīng)的延伸溫度一般在（）A.72℃B.82℃C.92℃答案：A二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系的主要成分包括（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTP答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)結(jié)果的因素有（）A.引物設(shè)計(jì)B.循環(huán)次數(shù)C.反應(yīng)溫度D.DNA模板質(zhì)量答案：ABCD3.引物的設(shè)計(jì)原則包含（）A.長度一般18-25bpB.G+C含量40-60%C.避免引物二聚體D.引物自身不能有發(fā)夾結(jié)構(gòu)答案：ABCD4.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有應(yīng)用（）A.疾病診斷B.親子鑒定C.物種鑒定D.基因克隆答案：ABCD5.以下屬于PCR相關(guān)技術(shù)的有（）A.RT-PCRB.qPCRC.LAMPD.multiplexPCR答案：ABCD6.PCR產(chǎn)物分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.測(cè)序C.高效液相色譜D.紫外分光光度計(jì)檢測(cè)答案：ABC7.PCR中常用的緩沖液成分有（）A.Tris-HClB.氯化鎂C.氯化鈉D.甘油答案：ABCD8.PCR假陽性結(jié)果可能原因是（）A.引物特異性差B.實(shí)驗(yàn)污染C.模板濃度過高D.Taq酶活性過高答案：AB9.數(shù)字PCR優(yōu)點(diǎn)有（）A.絕對(duì)定量B.靈敏度高C.不受抑制劑影響D.可檢測(cè)低水平基因變異答案：ABD10.在臨床診斷中使用PCR優(yōu)勢(shì)在于（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.快速D.可檢測(cè)多種病原體答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR只可以擴(kuò)增雙鏈DNA。（×）解析：也可擴(kuò)增單鏈DNA經(jīng)變性后形成的雙鏈結(jié)構(gòu)。2.Taq酶具有3'→5'外切酶活性。（×）解析：Taq酶不具有3'→5'外切酶活性。3.引物的長度越長越好。（×）解析：引物長度有適宜范圍，過長易出現(xiàn)錯(cuò)配等問題。4.PCR循環(huán)數(shù)越多，擴(kuò)增效果一定越好。（×）解析：過多循環(huán)數(shù)可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增等問題。5.只要模板DNA量足夠，其他條件不重要。（×）解析：反應(yīng)體系、引物、溫度等條件均對(duì)PCR重要。6.普通PCR可以進(jìn)行核酸定量分析。（×）解析：普通PCR一般只能定性，定量需特殊技術(shù)。7.引物濃度過高會(huì)增加引物二聚體形成的可能性。（√）8.熒光定量PCR必須有熒光標(biāo)記引物。（×）解析：也可用熒光探針等其他熒光標(biāo)記方式。9.PCR反應(yīng)不需要模板DNA也能進(jìn)行。（×）解析：模板DNA是PCR反應(yīng)的基礎(chǔ)。10.在同一PCR體系中可以同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)不同片段。（√）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)原理。利用DNA熱變性原理，通過高溫使模板DNA變性解鏈；降溫使引物與模板退火結(jié)合；適溫下Taq酶以dNTP為原料，按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)實(shí)現(xiàn)特定DNA片段擴(kuò)增。2.列舉PCR實(shí)驗(yàn)中防止污染的主要措施。實(shí)驗(yàn)區(qū)合理分區(qū)，如試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)等；使用一次性耗材；實(shí)驗(yàn)前后清潔消毒儀器和臺(tái)面；操作規(guī)范，避免氣溶膠產(chǎn)生等。3.簡(jiǎn)述定量PCR相比普通PCR的優(yōu)勢(shì)。定量PCR能準(zhǔn)確測(cè)定起始模板核酸的拷貝數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的絕對(duì)定量或相對(duì)定量分析，可用于疾病早期診斷、療效監(jiān)測(cè)等，普通PCR一般只能判斷有無目標(biāo)片段，無法定量。4.引物設(shè)計(jì)時(shí)需考慮哪些重要參數(shù)？需考慮長度，一般18-25bp；G+C含量，40-60%；引物間避免互補(bǔ)配對(duì)形成二聚體；避免自身發(fā)夾結(jié)構(gòu)，且引物3'端不能有連續(xù)多個(gè)相同堿基等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在腫瘤診斷中的應(yīng)用及局限性。應(yīng)用：可檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因變異，輔助診斷；檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物基因表達(dá)量輔助病情判斷等。局限性：易污染致假陽性；對(duì)低表達(dá)或少量變異檢測(cè)能力有限；不同實(shí)驗(yàn)室操作差異可能影響結(jié)果準(zhǔn)確性。2.談?wù)勀銓?duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR應(yīng)用前景的看法。前景廣闊。在傳染病診斷中可快速定量病原體載量指導(dǎo)治療；疾病早期診斷、療效評(píng)估作用大；還用于科研如研究基因表達(dá)調(diào)控。但需注意規(guī)范操作，開發(fā)更精準(zhǔn)更便捷的技術(shù)。3.若PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陰性，可能有哪些原因并如何解決？原因：模板質(zhì)量差，如降解、濃度過低；引物設(shè)計(jì)不佳；Taq酶活性低；反應(yīng)條件不適等。解決：重新提取優(yōu)質(zhì)模板，優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，檢測(cè)酶活性并更換，優(yōu)化反應(yīng)溫度、循環(huán)數(shù)等條件。4.