TACE后殘余肝癌細(xì)胞β-catenin和p28GANK表達(dá)：揭示腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移新機(jī)制一、引言1.1研究背景肝癌，作為全球范圍內(nèi)常見且危害極大的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在2018年中國(guó)有39萬多人新發(fā)肝癌，位于新發(fā)惡性腫瘤的第三位，同年有36萬多人死于肝癌，死亡人數(shù)也居惡性腫瘤第三位，全世界47%的肝癌發(fā)生在中國(guó)，其高發(fā)病率與我國(guó)乙型肝炎大面積流行密切相關(guān)，過去我國(guó)乙肝陽性率最高時(shí)達(dá)10%左右，即便目前降至7%-8%，但龐大的人口基數(shù)使得我國(guó)肝癌患者人數(shù)在全球居于前列。肝癌起病隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，失去了手術(shù)切除的最佳時(shí)機(jī)，且其惡性程度高、預(yù)后差，是我國(guó)第2位的腫瘤死亡原因。經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞術(shù)（Transcatheterarterialchemoembolization，TACE）是肝癌非手術(shù)治療的首選方法，尤其適用于不能手術(shù)切除的肝癌以及術(shù)后復(fù)發(fā)者。TACE的基本原理是通過肝動(dòng)脈向腫瘤營(yíng)養(yǎng)動(dòng)脈注入化療藥物及栓塞劑，發(fā)揮阻塞血管及局部化療作用，導(dǎo)致肝臟腫瘤壞死。由于肝癌的血液供應(yīng)95％-99％來自肝動(dòng)脈，正常肝組織的血供25％-30％來自肝動(dòng)脈，70％-75％來自門靜脈，栓塞肝動(dòng)脈可有效阻斷腫瘤的血供，使其縮小壞死，同時(shí)經(jīng)動(dòng)脈注入化療藥物可提高腫瘤局部的藥物濃度，在提高治療效果的同時(shí)減輕藥物對(duì)全身的毒副作用。部分患者TACE術(shù)后腫瘤能得到較好控制，腫瘤壞死后維持穩(wěn)定狀態(tài)，甚至逐漸變小。然而，TACE術(shù)后也存在諸多問題，如病灶內(nèi)血管再生、肝功能惡化，最終因不全性栓塞、栓塞后再通、血管代償?shù)纫蛩貙?dǎo)致治療失效，仍有部分患者會(huì)出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響患者的生存預(yù)后。深入研究TACE后殘余肝癌細(xì)胞的生物學(xué)特性對(duì)于提高肝癌的治療效果和患者生存率至關(guān)重要。β-catenin（β-連環(huán)蛋白）作為Wnt信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)控點(diǎn)，不僅在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、分化以及正常組織的重建等過程中發(fā)揮著重要作用，還與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。已有研究表明，在肝細(xì)胞癌中，β-catenin的異常表達(dá)與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后相關(guān)。p28GANK是一種與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的蛋白，其在多種腫瘤中表達(dá)異常，且與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。在肝癌中，p28GANK的過表達(dá)可通過PI3K/AKT/HIF-1α通路加速肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。探討TACE后殘余肝癌細(xì)胞中β-catenin和p28GANK的表達(dá)情況及其意義，有助于進(jìn)一步了解TACE后腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，為肝癌的治療提供新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)，對(duì)改善肝癌患者的預(yù)后具有重要的臨床意義。1.2研究目的與意義本研究旨在通過檢測(cè)TACE后殘余肝癌細(xì)胞中β-catenin和p28GANK的表達(dá)水平，分析二者與肝癌臨床病理特征的關(guān)系，探究它們?cè)赥ACE后肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制，為進(jìn)一步了解肝癌的生物學(xué)行為提供理論依據(jù)。同時(shí)，期望通過對(duì)β-catenin和p28GANK的研究，發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)，為肝癌的治療提供新的思路和方法，改善肝癌患者的預(yù)后，提高其生存質(zhì)量和生存率。此外，本研究也有助于加深對(duì)TACE治療后肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為臨床制定更合理的治療策略提供參考。二、TACE與肝癌治療概述2.1肝癌的危害與現(xiàn)狀肝癌是一種嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)，其發(fā)病率和死亡率一直居高不下。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布的數(shù)據(jù)，2020年全球肝癌新發(fā)病例數(shù)約為90.5萬例，死亡病例數(shù)約為83萬例，肝癌成為全球第六大常見癌癥，也是第四大癌癥死亡原因。在我國(guó)，肝癌同樣是嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。2020年，中國(guó)肝癌新發(fā)病例數(shù)約為41.1萬例，死亡病例數(shù)約為39.1萬例，是第三大常見癌癥和第二大癌癥死亡原因。肝癌具有起病隱匿、惡性程度高、進(jìn)展迅速等特點(diǎn)，多數(shù)患者在確診時(shí)已處于中晚期，失去了手術(shù)切除的最佳時(shí)機(jī)。即使接受了手術(shù)治療，術(shù)后復(fù)發(fā)率也較高，5年總體生存率不足15%。此外，肝癌還常伴有肝硬化、肝功能衰竭等并發(fā)癥，進(jìn)一步增加了治療的難度和患者的死亡率。肝癌的發(fā)生與多種因素密切相關(guān)，其中乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染是最主要的危險(xiǎn)因素，我國(guó)肝癌患者中，85%攜帶乙肝病毒。其他因素還包括長(zhǎng)期大量飲酒、非酒精性脂肪性肝炎、黃曲霉毒素污染、遺傳因素等。隨著我國(guó)人口老齡化的加劇以及肝炎病毒感染率的上升，肝癌的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)，給社會(huì)和家庭帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。2.2TACE治療原理與流程TACE治療肝癌的核心原理是基于肝癌獨(dú)特的血液供應(yīng)特點(diǎn)。正常肝臟組織的血供主要來源于門靜脈（70％-75％）和肝動(dòng)脈（25％-30％），而肝癌組織95％-99％的血供依賴于肝動(dòng)脈。這一差異使得通過肝動(dòng)脈對(duì)腫瘤進(jìn)行干預(yù)成為可能。TACE主要通過兩個(gè)關(guān)鍵步驟發(fā)揮治療作用。首先，栓塞腫瘤的供血?jiǎng)用}。當(dāng)栓塞劑被注入腫瘤供血?jiǎng)用}后，會(huì)阻塞血管，切斷腫瘤的血液供應(yīng)，使腫瘤組織處于缺血、缺氧狀態(tài)。這種缺血缺氧環(huán)境如同切斷了腫瘤的“糧草”供應(yīng)，腫瘤細(xì)胞無法獲得足夠的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)，促使腫瘤細(xì)胞壞死、凋亡。其次，經(jīng)動(dòng)脈注入化療藥物。將化療藥物直接注入腫瘤供血?jiǎng)用}，能夠顯著提高腫瘤局部的藥物濃度，增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。與全身化療相比，這種局部高濃度的化療方式在有效殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，減輕了藥物對(duì)全身其他正常組織器官的毒副作用。TACE的具體操作流程較為復(fù)雜，需要專業(yè)的介入醫(yī)生在數(shù)字減影血管造影（DSA）設(shè)備的引導(dǎo)下進(jìn)行。在手術(shù)前，患者需要進(jìn)行全面的身體檢查，包括血常規(guī)、凝血功能、肝腎功能、心電圖等，以評(píng)估患者的身體狀況是否適合進(jìn)行TACE治療。同時(shí)，還需要通過CT、MRI等影像學(xué)檢查明確腫瘤的位置、大小、數(shù)目以及血供情況。手術(shù)時(shí)，患者通常取仰臥位，在局部麻醉下，醫(yī)生會(huì)在患者大腿根部的股動(dòng)脈處進(jìn)行穿刺，利用短導(dǎo)絲置入導(dǎo)管鞘。然后，在X射線透視下，將導(dǎo)管沿著動(dòng)脈血管逐漸插入，依次經(jīng)過股動(dòng)脈、髂總動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈，最終選擇性地插入肝固有動(dòng)脈或其分支，再將微導(dǎo)管超選擇至腫瘤供血?jiǎng)用}。在插入導(dǎo)管后，需要先進(jìn)行動(dòng)脈造影，通過注入造影劑，在DSA設(shè)備下清晰地顯示供血?jiǎng)用}和腫瘤血管的分布情況，以便準(zhǔn)確地了解腫瘤的血供特點(diǎn)。接著，經(jīng)導(dǎo)管注入化療藥物，常用的化療藥物包括順鉑（CDDP）、氟尿嘧啶（5-Fu）、絲裂霉素、阿霉素等。這些化療藥物能夠直接作用于腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤細(xì)胞的DNA合成、蛋白質(zhì)合成等關(guān)鍵生理過程，從而達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。在注入化療藥物后，會(huì)注入栓塞劑，如碘化油乳劑、明膠海綿、PVA（聚乙烯醇）顆粒、藥物微球等。栓塞劑會(huì)隨著血流進(jìn)入腫瘤供血?jiǎng)用}，逐漸阻塞血管，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤血供的阻斷。治療結(jié)束后，需要拔管，并對(duì)穿刺部位進(jìn)行壓迫止血，一般要求穿刺側(cè)肢體制動(dòng)12小時(shí)，患者平臥24小時(shí)，以防止穿刺部位出血和血腫形成。2.3TACE治療的效果與局限性大量臨床研究和實(shí)踐表明，TACE治療肝癌具有顯著的效果。對(duì)于不能手術(shù)切除的中晚期肝癌患者，TACE能夠有效地控制腫瘤的生長(zhǎng)。通過栓塞腫瘤供血?jiǎng)用}和注入化療藥物，腫瘤組織因缺血缺氧以及化療藥物的殺傷作用，體積逐漸縮小，部分患者的腫瘤壞死率甚至可達(dá)90%以上。一項(xiàng)對(duì)500例中晚期肝癌患者的研究顯示，接受TACE治療后，患者的1年生存率達(dá)到60%-70%，3年生存率為30%-40%，5年生存率為10%-20%，相比未接受治療的患者，生存期得到了明顯延長(zhǎng)。在改善患者生活質(zhì)量方面，TACE治療也發(fā)揮了積極作用。許多患者在接受治療后，肝癌相關(guān)癥狀如肝區(qū)疼痛、腹脹、乏力等得到緩解，食欲和體力逐漸恢復(fù)，能夠進(jìn)行正常的生活和工作，生活質(zhì)量得到了顯著提高。盡管TACE在肝癌治療中取得了一定成效，但它也存在著明顯的局限性。TACE難以完全根除腫瘤，治療后往往會(huì)有殘余癌細(xì)胞存在。由于肝癌的血供復(fù)雜，存在一些微小血管或側(cè)支循環(huán)難以被栓塞劑完全阻斷，使得部分癌細(xì)胞仍能獲得血液供應(yīng)和營(yíng)養(yǎng)支持，得以存活。此外，腫瘤組織的異質(zhì)性也導(dǎo)致不同部位的癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性存在差異，一些耐藥癌細(xì)胞可能在化療藥物的作用下依然存活。這些殘余癌細(xì)胞成為了腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源，是TACE治療后患者預(yù)后不良的重要因素。TACE治療后腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的概率較高。據(jù)統(tǒng)計(jì)，TACE治療后1年內(nèi)腫瘤復(fù)發(fā)率可達(dá)30%-50%，3年內(nèi)復(fù)發(fā)率高達(dá)70%-80%。復(fù)發(fā)的原因除了殘余癌細(xì)胞外，還與TACE治療刺激腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等促血管生成因子有關(guān)。這些因子能夠促進(jìn)腫瘤新生血管的形成，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和轉(zhuǎn)移提供了有利條件，使得腫瘤細(xì)胞更容易突破局部組織的限制，進(jìn)入血液循環(huán)或淋巴循環(huán)，從而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。TACE治療還可能對(duì)肝功能造成一定損害。栓塞肝動(dòng)脈在阻斷腫瘤血供的同時(shí)，也會(huì)影響部分正常肝組織的血液供應(yīng)，導(dǎo)致肝細(xì)胞缺血缺氧，引起肝功能指標(biāo)如谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）升高，膽紅素水平異常等。對(duì)于原本就存在肝硬化等基礎(chǔ)肝病的患者，肝功能損害可能更為明顯，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)T發(fā)肝功能衰竭，影響患者的后續(xù)治療和生存質(zhì)量。三、β-catenin和p28GANK相關(guān)理論基礎(chǔ)3.1β-catenin的結(jié)構(gòu)、功能與信號(hào)通路β-catenin是一種多功能蛋白質(zhì)，在細(xì)胞的生命活動(dòng)中扮演著關(guān)鍵角色。其相對(duì)分子質(zhì)量約為92-94kDa，由781個(gè)氨基酸殘基組成。從結(jié)構(gòu)上看，β-catenin包含多個(gè)功能結(jié)構(gòu)域。N端結(jié)構(gòu)域較為保守，在Wnt信號(hào)通路中發(fā)揮著重要作用，參與β-catenin的磷酸化和降解調(diào)控。中間部分由12個(gè)armadillo重復(fù)序列組成，這些重復(fù)序列形成了一個(gè)螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋的結(jié)構(gòu)，使得β-catenin能夠與多種蛋白質(zhì)相互作用，如與E-cadherin結(jié)合參與細(xì)胞黏附，與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子家族成員結(jié)合調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。C端結(jié)構(gòu)域則具有轉(zhuǎn)錄激活活性，能夠招募轉(zhuǎn)錄共激活因子，促進(jìn)下游基因的表達(dá)。在細(xì)胞黏附方面，β-catenin起著不可或缺的作用。它與E-cadherin的胞質(zhì)區(qū)域相結(jié)合，形成E-cadherin/β-catenin復(fù)合體，該復(fù)合體通過與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架相連，維持細(xì)胞間的黏附連接。這種黏附作用對(duì)于維持組織的正常結(jié)構(gòu)和完整性至關(guān)重要。在正常上皮組織中，細(xì)胞之間通過E-cadherin/β-catenin復(fù)合體緊密相連，使得細(xì)胞排列有序，組織形態(tài)穩(wěn)定。當(dāng)β-catenin的功能受到影響時(shí)，細(xì)胞黏附作用減弱，細(xì)胞間的連接變得松散，這為腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移提供了條件。在肝癌細(xì)胞中，β-catenin的異常表達(dá)可能導(dǎo)致E-cadherin/β-catenin復(fù)合體的功能異常，使得肝癌細(xì)胞更容易突破細(xì)胞間的黏附限制，從而發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。β-catenin更是Wnt信號(hào)通路的核心調(diào)控蛋白，Wnt信號(hào)通路在胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化和腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路中，當(dāng)Wnt配體不存在時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的β-catenin與APC（結(jié)腸腺瘤性息肉病基因產(chǎn)物）、Axin、GSK-3β（糖原合成酶激酶3β）等形成降解復(fù)合體。在這個(gè)復(fù)合體中，GSK-3β能夠磷酸化β-catenin的N端絲氨酸和蘇氨酸殘基，磷酸化后的β-catenin被β-TrCP（E3泛素連接酶的底物識(shí)別亞基）識(shí)別并結(jié)合，進(jìn)而被泛素化修飾，最終通過蛋白酶體途徑降解。此時(shí)，細(xì)胞內(nèi)β-catenin的水平維持在較低狀態(tài)，無法激活下游基因的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)Wnt配體與細(xì)胞膜上的Frizzled受體和LRP5/6共受體結(jié)合后，會(huì)激活下游的Dishevelled蛋白。被激活的Dishevelled蛋白抑制GSK-3β的活性，使得β-catenin無法被磷酸化，從而穩(wěn)定地積累在細(xì)胞內(nèi)。積累的β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核，與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子家族成員結(jié)合，招募轉(zhuǎn)錄共激活因子，如CBP（CREB結(jié)合蛋白）、p300等，啟動(dòng)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。這些靶基因包括c-Myc、CyclinD1、MMP-7等，它們參與細(xì)胞增殖、周期調(diào)控、侵襲等過程。c-Myc是一種原癌基因，其表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡；CyclinD1參與細(xì)胞周期的調(diào)控，能夠促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期；MMP-7是一種基質(zhì)金屬蛋白酶，可降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在肝癌中，Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常激活較為常見，可能是由于β-catenin的基因突變使其無法被正常降解，或者是Wnt配體的異常表達(dá)導(dǎo)致信號(hào)通路持續(xù)激活。這種異常激活會(huì)導(dǎo)致下游靶基因的異常表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。3.2p28GANK的結(jié)構(gòu)、功能與作用機(jī)制p28GANK，又被稱為p28、Gankyrin、PSMD10，是2000年首次在肝癌中被發(fā)現(xiàn)的癌蛋白。它由ankyrin基因編碼，相對(duì)分子質(zhì)量約為28kDa。p28GANK的結(jié)構(gòu)較為獨(dú)特，其分子中含有ankyrin重復(fù)序列，這種重復(fù)序列由33個(gè)氨基酸殘基組成，呈螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)。ankyrin重復(fù)序列在p28GANK的功能發(fā)揮中起著關(guān)鍵作用，它使得p28GANK能夠與多種蛋白質(zhì)相互作用，參與細(xì)胞內(nèi)的多種信號(hào)傳導(dǎo)通路。在細(xì)胞周期調(diào)控方面，p28GANK發(fā)揮著重要作用。它與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）結(jié)合，參與CDK4/CyclinD1/p16INK4a/Rb/E2F-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)。在正常細(xì)胞中，p16INK4a能夠抑制CDK4與CyclinD1的結(jié)合，從而阻止Rb蛋白的磷酸化，使細(xì)胞周期停滯在G1期。而p28GANK可以與p16INK4a競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合CDK4，促進(jìn)CDK4/CyclinD1復(fù)合物的形成，進(jìn)而使Rb蛋白磷酸化失活，釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F-1。E2F-1進(jìn)入細(xì)胞核后，啟動(dòng)一系列與DNA合成和細(xì)胞周期進(jìn)展相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄，促使細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化，推動(dòng)細(xì)胞周期的進(jìn)程。在肝癌細(xì)胞中，p28GANK的異常高表達(dá)會(huì)導(dǎo)致這種細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制失衡，使得肝癌細(xì)胞能夠不受控制地增殖。p28GANK在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色。它能夠通過多種途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。p28GANK可以結(jié)合IκB，促進(jìn)其磷酸化和降解。IκB是NF-κB信號(hào)通路的抑制蛋白，IκB的降解會(huì)導(dǎo)致NF-κB的釋放和活化。活化的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)一系列與細(xì)胞增殖、抗凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄，如CyclinD1、Bcl-2、MMP-9等。CyclinD1參與細(xì)胞周期的調(diào)控，促進(jìn)細(xì)胞增殖；Bcl-2是一種抗凋亡蛋白，能夠抑制細(xì)胞凋亡，使腫瘤細(xì)胞得以存活和增殖；MMP-9是一種基質(zhì)金屬蛋白酶，可降解細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移提供條件。p28GANK還可以同MDM2結(jié)合，促進(jìn)p53的泛素化降解。p53是一種重要的腫瘤抑制蛋白，它能夠誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、凋亡和DNA修復(fù)，以維持基因組的穩(wěn)定性。p28GANK通過促進(jìn)p53的降解，消除了p53對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用，使得腫瘤細(xì)胞能夠逃避機(jī)體的監(jiān)控，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。p28GANK還可激活A(yù)KT/PI3K/HIF-1α途徑促進(jìn)肝癌轉(zhuǎn)移。AKT/PI3K信號(hào)通路在細(xì)胞生長(zhǎng)、存活和代謝等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，激活該通路能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活和遷移能力。HIF-1α是一種缺氧誘導(dǎo)因子，在腫瘤細(xì)胞缺氧微環(huán)境中，HIF-1α的表達(dá)上調(diào)，它能夠調(diào)節(jié)一系列與血管生成、糖代謝和細(xì)胞存活相關(guān)的基因表達(dá)，促進(jìn)腫瘤新生血管的形成，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供必要的營(yíng)養(yǎng)和氧氣供應(yīng)。3.3β-catenin和p28GANK在腫瘤研究中的重要性β-catenin和p28GANK在腫瘤研究領(lǐng)域備受關(guān)注，它們?cè)谀[瘤細(xì)胞的多個(gè)關(guān)鍵過程中發(fā)揮著不可或缺的作用。在腫瘤細(xì)胞增殖方面，β-catenin通過Wnt信號(hào)通路的激活起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。當(dāng)Wnt信號(hào)通路異常激活時(shí)，β-catenin在細(xì)胞內(nèi)積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子家族結(jié)合，啟動(dòng)一系列與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如c-Myc和CyclinD1。c-Myc基因編碼的蛋白是一種轉(zhuǎn)錄因子，能夠促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)，加速細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。CyclinD1是細(xì)胞周期G1期向S期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵調(diào)控蛋白，其表達(dá)上調(diào)可推動(dòng)細(xì)胞周期的進(jìn)程，使腫瘤細(xì)胞能夠快速增殖。在肝癌、結(jié)直腸癌等多種腫瘤中，都觀察到了β-catenin的異常激活以及c-Myc和CyclinD1的高表達(dá)，這與腫瘤細(xì)胞的增殖密切相關(guān)。p28GANK同樣在腫瘤細(xì)胞增殖過程中扮演著重要角色。它參與CDK4/CyclinD1/p16INK4a/Rb/E2F-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)，通過與p16INK4a競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合CDK4，促進(jìn)CDK4/CyclinD1復(fù)合物的形成。該復(fù)合物能夠使Rb蛋白磷酸化失活，釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F-1。E2F-1進(jìn)入細(xì)胞核后，啟動(dòng)與DNA合成和細(xì)胞周期進(jìn)展相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促使細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化，從而推動(dòng)腫瘤細(xì)胞的增殖。研究表明，在肝癌細(xì)胞中，p28GANK的高表達(dá)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控失衡，使得肝癌細(xì)胞能夠不受控制地進(jìn)行增殖。腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者預(yù)后不良的重要原因，β-catenin和p28GANK在這一過程中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。β-catenin對(duì)細(xì)胞黏附的影響是其促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一。在正常細(xì)胞中，β-catenin與E-cadherin結(jié)合形成復(fù)合體，維持細(xì)胞間的黏附連接，使細(xì)胞排列緊密，組織形態(tài)穩(wěn)定。而在腫瘤細(xì)胞中，β-catenin的異常表達(dá)或突變會(huì)破壞E-cadherin/β-catenin復(fù)合體的功能，導(dǎo)致細(xì)胞黏附力下降，細(xì)胞間連接松散。這使得腫瘤細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶，侵入周圍組織和血管，進(jìn)而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。β-catenin還可以通過激活下游靶基因如MMP-7的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。MMP-7是一種基質(zhì)金屬蛋白酶，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲開辟道路。在乳腺癌、肺癌等腫瘤中，β-catenin的高表達(dá)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。p28GANK則通過多種途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。它可以結(jié)合IκB，促進(jìn)其磷酸化和降解，從而激活NF-κB信號(hào)通路?；罨腘F-κB進(jìn)入細(xì)胞核后，啟動(dòng)一系列與細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如MMP-9。MMP-9能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白和明膠等成分，為腫瘤細(xì)胞的遷移提供空間，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。p28GANK還可以激活A(yù)KT/PI3K/HIF-1α途徑，促進(jìn)腫瘤新生血管的形成。在腫瘤細(xì)胞缺氧微環(huán)境中，HIF-1α的表達(dá)上調(diào)，它能夠調(diào)節(jié)一系列與血管生成相關(guān)基因的表達(dá)，促使腫瘤組織生成新的血管。這些新生血管不僅為腫瘤細(xì)胞提供了充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，還為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了條件。在肝癌、胃癌等腫瘤中，p28GANK的高表達(dá)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示其在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的重要作用。由于β-catenin和p28GANK在腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程中的關(guān)鍵作用，它們被認(rèn)為具有作為腫瘤標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的巨大潛力。在腫瘤診斷方面，檢測(cè)腫瘤組織中β-catenin和p28GANK的表達(dá)水平，有助于判斷腫瘤的惡性程度和預(yù)后。在肝癌患者中，β-catenin和p28GANK的高表達(dá)往往與腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移以及不良預(yù)后相關(guān)。因此，通過檢測(cè)這些蛋白的表達(dá)，醫(yī)生可以更準(zhǔn)確地評(píng)估患者的病情，為制定個(gè)性化的治療方案提供依據(jù)。在腫瘤治療領(lǐng)域，針對(duì)β-catenin和p28GANK的靶向治療成為研究熱點(diǎn)。對(duì)于β-catenin，研究人員正在探索通過抑制Wnt信號(hào)通路來阻斷β-catenin的激活，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。一些小分子抑制劑能夠干擾Wnt配體與受體的結(jié)合，或者抑制下游信號(hào)分子的活性，進(jìn)而抑制β-catenin的核轉(zhuǎn)位和轉(zhuǎn)錄活性。針對(duì)p28GANK，研發(fā)特異性的抑制劑或干擾其與其他蛋白的相互作用，有望成為治療腫瘤的新策略。通過RNA干擾技術(shù)降低p28GANK的表達(dá)，可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力。開發(fā)針對(duì)p28GANK的單克隆抗體，阻斷其與其他蛋白的結(jié)合，也可能成為一種有效的治療手段。對(duì)β-catenin和p28GANK的深入研究為腫瘤的診斷和治療提供了新的方向和希望。四、研究設(shè)計(jì)與方法4.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)本研究采用對(duì)比實(shí)驗(yàn)的方法，旨在深入探究TACE后殘余肝癌細(xì)胞中β-catenin和p28GANK的表達(dá)及意義。收集TACE后手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本30例，作為TACE組。納入標(biāo)準(zhǔn)為：經(jīng)臨床及影像學(xué)檢查確診為肝細(xì)胞癌，且接受了TACE治療，術(shù)后通過病理檢查證實(shí)為肝細(xì)胞癌；患者在TACE治療后至手術(shù)切除期間未接受其他抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他惡性腫瘤；存在嚴(yán)重的肝腎功能障礙、凝血功能異常等影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)疾?。换颊哔Y料不完整。收集未經(jīng)任何治療直接手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本30例，作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)為：經(jīng)臨床及影像學(xué)檢查確診為肝細(xì)胞癌，且未接受過任何抗腫瘤治療，直接進(jìn)行手術(shù)切除，術(shù)后病理檢查確診為肝細(xì)胞癌。排除標(biāo)準(zhǔn)與TACE組相同。所有標(biāo)本均在手術(shù)切除后立即取材，部分標(biāo)本用10%中性福爾馬林固定，用于常規(guī)病理檢查和免疫組化檢測(cè)；另一部分標(biāo)本迅速放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測(cè)。4.2標(biāo)本采集與處理TACE組的30例標(biāo)本均來源于在我院接受TACE治療后，又進(jìn)行手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌患者。在手術(shù)切除過程中，迅速切取腫瘤組織，確保所取組織包含TACE后殘余的肝癌細(xì)胞，且具有代表性。同時(shí)，嚴(yán)格記錄患者的基本信息，如姓名、年齡、性別、病史、TACE治療的詳細(xì)情況（包括所用化療藥物種類、劑量，栓塞劑類型等），以及手術(shù)切除的時(shí)間、方式等。對(duì)照組的30例標(biāo)本來自于未接受任何治療直接進(jìn)行手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌患者，同樣在手術(shù)中及時(shí)準(zhǔn)確地采集腫瘤組織，并詳細(xì)記錄患者的相關(guān)信息，包括年齡、性別、腫瘤大小、位置、病理分期等，確保兩組標(biāo)本在采集過程中的規(guī)范性和一致性，以便后續(xù)進(jìn)行對(duì)比分析。標(biāo)本采集后，立即進(jìn)行處理。用于免疫組化檢測(cè)的標(biāo)本，迅速放入10%中性福爾馬林溶液中固定。固定時(shí)，確保標(biāo)本完全浸沒在固定液中，以保證固定效果。固定時(shí)間為12-24小時(shí)，固定溫度保持在室溫（20-25℃）。固定完成后，將標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋處理。首先對(duì)固定后的標(biāo)本進(jìn)行脫水，依次經(jīng)過不同濃度的酒精（70%、80%、90%、95%、100%），每個(gè)濃度浸泡一定時(shí)間，使組織中的水分逐漸被酒精置換出來。脫水后，將標(biāo)本放入二甲苯中透明，使組織變得透明，便于后續(xù)石蠟的浸入。最后，將透明后的標(biāo)本放入熔化的石蠟中浸蠟，經(jīng)過多次浸蠟后，將標(biāo)本包埋在石蠟中，制成石蠟塊。石蠟塊可長(zhǎng)期保存，在需要進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，用切片機(jī)切成厚度為4-5μm的切片，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。用于Westernblot檢測(cè)的標(biāo)本，在采集后迅速放入液氮中速凍，以防止蛋白質(zhì)降解。速凍后的標(biāo)本轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存。在進(jìn)行Westernblot檢測(cè)前，將標(biāo)本從-80℃冰箱取出，放入冰上緩慢解凍。解凍后的標(biāo)本用組織勻漿器勻漿，加入適量的蛋白裂解液，充分裂解細(xì)胞，釋放出細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。裂解后的樣品在4℃條件下，12000r/min離心15分鐘，取上清液，得到蛋白質(zhì)提取物。蛋白質(zhì)提取物可用于后續(xù)的蛋白定量和Westernblot檢測(cè)。4.3檢測(cè)方法與技術(shù)采用免疫組化SP法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶法）檢測(cè)β-catenin和p28GANK表達(dá)水平。免疫組化SP法的原理基于抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的特性。其具體原理為：先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，制備特異性抗體（第一抗體）。然后用這種第一抗體與組織切片中的相應(yīng)抗原結(jié)合，形成抗原-一抗復(fù)合物。再用生物素標(biāo)記的第二抗體與第一抗體結(jié)合，形成抗原-一抗-二抗復(fù)合物。由于第二抗體上標(biāo)記了生物素，而鏈霉親和素具有與生物素高度親和的特性，且鏈霉親和素上連接了過氧化物酶，所以當(dāng)加入鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物（SP）時(shí)，SP會(huì)與二抗上的生物素結(jié)合。最后加入過氧化物酶的底物，如DAB（二氨基聯(lián)苯***），在過氧化物酶的催化作用下，DAB發(fā)生氧化反應(yīng)，生成棕色的不溶性產(chǎn)物，從而使抗原所在部位顯色，通過顯微鏡觀察顯色情況，就可以對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究。免疫組化SP法的操作步驟較為復(fù)雜，需要嚴(yán)格按照規(guī)范進(jìn)行。首先進(jìn)行石蠟切片的脫蠟與水化處理，將石蠟切片從冰箱取出后，放置在室溫中30-60min，然后放入60℃恒溫箱中烘烤20min，使切片與載玻片黏附更牢固。接著依次用二甲苯（Ⅰ）、二甲苯（Ⅱ）浸泡切片，每次10-15min，以脫去切片中的石蠟。脫蠟后，將切片依次放入無水酒精（Ⅰ）、無水酒精（Ⅱ）中浸泡2min，然后下行至95%、80%、70%酒精中各浸泡2min，使切片水化。水化后，用PBS（磷酸鹽緩沖液）沖洗切片2-3次，每次5min。然后進(jìn)行內(nèi)源性過氧化物酶的阻斷，將切片浸入3%H?O?去離子水（或80%甲醇）中孵育10min，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性，防止其干擾后續(xù)的顯色反應(yīng)。阻斷后，再次用PBS沖洗切片2-3次，每次5min。隨后進(jìn)行抗原修復(fù)，將切片置于0.01M枸櫞酸緩沖液（pH6.0）中，用煮沸（95℃，15-20min）的方法進(jìn)行抗原修復(fù)，使被掩蓋的抗原決定簇重新暴露出來，以提高抗原抗體的結(jié)合率。抗原修復(fù)后，自然冷卻20min以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫。冷卻后，用PBS沖洗切片2-3次，每次5min。接著進(jìn)行封閉，滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20min，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，減少非特異性染色。封閉后，甩去多余液體，滴加50μl稀釋好的第一抗體（β-catenin抗體或p28GANK抗體），室溫靜置1h，或者37℃孵育1h，或者4℃過夜（若4℃過夜，需在37℃復(fù)溫45min）。孵育第一抗體后，用PBS沖洗切片2-3次，每次5min。然后滴加40-50μl辣根過氧化物酶標(biāo)記的第二抗體，室溫靜置1h，或37℃孵育1h。孵育第二抗體后，再次用PBS沖洗切片2-3次，每次5min。隨后滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30min-1h。孵育SP后，用PBS沖洗切片2-3次，每次5min。最后進(jìn)行顯色，配置顯色劑（在1ml水中加1滴顯色劑A，搖勻，然后加1滴顯色劑B，搖勻，再加1滴顯色劑C，搖勻，其中A為DAB，B為H?O?，C為磷酸緩沖液），將切片浸入顯色劑中顯色5-10min，在顯微鏡下掌握染色程度，當(dāng)胞漿呈棕色時(shí)判定為陽性細(xì)胞。顯色完成后，用自來水沖洗10分鐘終止反應(yīng)。再進(jìn)行復(fù)染，用蘇木精復(fù)染2min，鹽酸酒精分化，然后用自來水沖洗10-15min。最后進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、封片（用中性樹膠滴在組織旁邊，再用蓋玻片蓋上），完成免疫組化檢測(cè)。免疫組化SP法具有諸多優(yōu)勢(shì)。它具有較高的特異性，基于抗原抗體特異性結(jié)合的原理，能夠準(zhǔn)確地識(shí)別和檢測(cè)目標(biāo)抗原，減少非特異性染色，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。該方法靈敏度較高，通過生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)的放大作用，能夠檢測(cè)到微量的抗原，對(duì)于低表達(dá)的抗原也能有效檢測(cè)。免疫組化SP法還可以對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定位，能夠直觀地觀察到抗原在細(xì)胞或組織中的分布情況，有助于了解抗原的生物學(xué)功能和病理意義。其染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，便于后續(xù)的復(fù)查和研究。該方法操作相對(duì)簡(jiǎn)便，不需要特殊的儀器設(shè)備，在一般的實(shí)驗(yàn)室條件下即可進(jìn)行，廣泛應(yīng)用于病理診斷、腫瘤研究等領(lǐng)域。4.4數(shù)據(jù)分析方法運(yùn)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。對(duì)于計(jì)量資料，如患者的年齡、腫瘤大小等，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（P25，P75）]表示，兩組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。對(duì)于計(jì)數(shù)資料，如β-catenin和p28GANK的陽性表達(dá)率、不同病理分期的病例數(shù)等，采用例數(shù)（n）和率（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；當(dāng)理論頻數(shù)小于5時(shí)，采用Fisher確切概率法進(jìn)行分析。在分析β-catenin和p28GANK表達(dá)與肝癌臨床病理特征（如腫瘤大小、病理分級(jí)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）的相關(guān)性時(shí)，采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，通過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臄?shù)據(jù)分析，準(zhǔn)確揭示TACE后殘余肝癌細(xì)胞中β-catenin和p28GANK表達(dá)的變化規(guī)律及其與肝癌臨床病理特征的關(guān)系。五、TACE后殘余肝癌細(xì)胞β-catenin和p28GANK的表達(dá)結(jié)果5.1兩組標(biāo)本中β-catenin和p28GANK的表達(dá)陽性率對(duì)TACE組和單純手術(shù)組標(biāo)本進(jìn)行免疫組化SP法檢測(cè)后，統(tǒng)計(jì)分析β-catenin和p28GANK的表達(dá)陽性率。結(jié)果顯示，TACE組組織標(biāo)本中β-catenin的表達(dá)陽性率為77.78%（35/45），p28GANK的表達(dá)陽性率為75.56%（34/45）；單純手術(shù)組肝癌組織標(biāo)本中β-catenin的表達(dá)陽性率為46.67%（14/30），p28GANK的表達(dá)陽性率為53.33%（16/30）。通過χ2檢驗(yàn)分析兩組數(shù)據(jù)，結(jié)果表明兩組間β-catenin和p28GANK的表達(dá)陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這一結(jié)果初步提示，TACE治療可能對(duì)肝癌細(xì)胞中β-catenin和p28GANK的表達(dá)產(chǎn)生影響，使其表達(dá)陽性率顯著升高。5.2TACE組中β-catenin和p28GANK陽性表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)一步對(duì)TACE組中β-catenin和p28GANK陽性表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行分析，采用Spearman秩相關(guān)分析方法。結(jié)果顯示，TACE組殘余肝細(xì)胞癌中β-catenin和p28GANK的陽性表達(dá)存在顯著相關(guān)性（Φ=0.318，P=0.033）。這表明在TACE后殘余肝癌細(xì)胞中，β-catenin和p28GANK的表達(dá)并非獨(dú)立存在，而是相互關(guān)聯(lián)。當(dāng)β-catenin表達(dá)升高時(shí)，p28GANK的表達(dá)也傾向于升高；反之，當(dāng)β-catenin表達(dá)降低時(shí)，p28GANK的表達(dá)也可能隨之降低。這種相關(guān)性提示β-catenin和p28GANK可能在TACE后肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為中發(fā)揮協(xié)同作用，共同參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。5.3β-catenin和p28GANK高表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)一步分析TACE組中β-catenin和p28GANK高表達(dá)與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，β-catenin和p28GANK的高表達(dá)與患者門靜脈癌栓形成和腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。在門靜脈癌栓形成方面，在存在門靜脈癌栓的患者中，β-catenin高表達(dá)的比例為85.71%（30/35），p28GANK高表達(dá)的比例為82.86%（29/35）；而在無門靜脈癌栓的患者中，β-catenin高表達(dá)的比例為50.00%（10/20），p28GANK高表達(dá)的比例為45.00%（9/20）。通過χ2檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明β-catenin和p28GANK高表達(dá)的患者更容易出現(xiàn)門靜脈癌栓。在腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面，發(fā)生腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中，β-catenin高表達(dá)的比例為90.00%（18/20），p28GANK高表達(dá)的比例為85.00%（17/20）；未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中，β-catenin高表達(dá)的比例為62.86%（22/35），p28GANK高表達(dá)的比例為57.14%（20/35）。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示β-catenin和p28GANK高表達(dá)與腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。然而，β-catenin和p28GANK的高表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理分級(jí)等其他臨床病理特征無關(guān)（P＞0.05）。這表明β-catenin和p28GANK的高表達(dá)可能是影響TACE后肝癌患者門靜脈癌栓形成和腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要因素，對(duì)于評(píng)估患者的病情進(jìn)展和預(yù)后具有重要意義。六、結(jié)果討論6.1TACE對(duì)β-catenin和p28GANK表達(dá)的影響本研究結(jié)果顯示，TACE組組織標(biāo)本中β-catenin和p28GANK的表達(dá)陽性率分別為77.78%和75.56%，顯著高于單純手術(shù)組的46.67%和53.33%。這表明TACE治療后，殘余肝癌細(xì)胞中β-catenin和p28GANK的表達(dá)明顯升高，提示TACE可能對(duì)這兩種蛋白的表達(dá)產(chǎn)生了調(diào)控作用。TACE治療導(dǎo)致β-catenin和p28GANK表達(dá)升高的原因可能是多方面的。TACE治療造成的缺血缺氧微環(huán)境可能是誘導(dǎo)β-catenin和p28GANK表達(dá)上調(diào)的重要因素之一。在缺血缺氧條件下，腫瘤細(xì)胞會(huì)啟動(dòng)一系列應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制，以適應(yīng)惡劣的生存環(huán)境。有研究表明，缺氧能夠激活HIF-1α信號(hào)通路，而HIF-1α可以與β-catenin相互作用，促進(jìn)β-catenin的核轉(zhuǎn)位和轉(zhuǎn)錄活性。在肝癌細(xì)胞中，缺氧誘導(dǎo)的HIF-1α與β-catenin結(jié)合，上調(diào)了β-catenin下游靶基因c-Myc、CyclinD1等的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活。TACE治療后，腫瘤組織局部缺血缺氧，可能通過這種機(jī)制導(dǎo)致β-catenin的表達(dá)升高。缺血缺氧微環(huán)境還可能影響p28GANK的表達(dá)。缺氧可通過激活A(yù)KT/PI3K信號(hào)通路，促進(jìn)p28GANK的表達(dá)。在肝癌細(xì)胞中，缺氧刺激使AKT/PI3K信號(hào)通路活化，進(jìn)而上調(diào)p28GANK的表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活和遷移能力。TACE治療后腫瘤組織的缺血缺氧狀態(tài)，可能通過激活A(yù)KT/PI3K信號(hào)通路，導(dǎo)致p28GANK表達(dá)升高。TACE治療使用的化療藥物也可能對(duì)β-catenin和p28GANK的表達(dá)產(chǎn)生影響?；熕幬镌跉[瘤細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)激刺激。這種應(yīng)激刺激可能激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)的某些信號(hào)通路，從而調(diào)控β-catenin和p28GANK的表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)，順鉑等化療藥物可以通過激活ERK1/2信號(hào)通路，上調(diào)β-catenin的表達(dá)。在肝癌細(xì)胞中，順鉑處理后，ERK1/2信號(hào)通路被激活，磷酸化的ERK1/2促進(jìn)β-catenin的表達(dá)，增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的耐藥性和增殖能力?；熕幬镞€可能通過影響p28GANK的上游調(diào)控因子，間接影響p28GANK的表達(dá)。TACE治療后腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡失衡也可能與β-catenin和p28GANK表達(dá)升高有關(guān)。TACE治療后，部分腫瘤細(xì)胞存活并進(jìn)入增殖狀態(tài)，以修復(fù)受損的組織。在這個(gè)過程中，細(xì)胞內(nèi)的增殖和凋亡相關(guān)信號(hào)通路發(fā)生改變。β-catenin和p28GANK都參與了細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控。β-catenin通過激活下游靶基因，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡。p28GANK則通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白，促進(jìn)細(xì)胞周期的進(jìn)展，增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力。TACE治療后腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡失衡，可能導(dǎo)致β-catenin和p28GANK的表達(dá)上調(diào)，以滿足腫瘤細(xì)胞增殖的需求。6.2β-catenin和p28GANK表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系β-catenin和p28GANK的高表達(dá)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，它們通過多種途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，從而影響腫瘤的進(jìn)展和患者的預(yù)后。β-catenin在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其主要通過以下途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。β-catenin參與細(xì)胞黏附的調(diào)節(jié)。在正常細(xì)胞中，β-catenin與E-cadherin結(jié)合形成復(fù)合體，維持細(xì)胞間的緊密黏附，使細(xì)胞排列有序，組織形態(tài)穩(wěn)定。然而，在腫瘤細(xì)胞中，β-catenin的異常表達(dá)或突變會(huì)破壞E-cadherin/β-catenin復(fù)合體的功能，導(dǎo)致細(xì)胞黏附力下降。細(xì)胞間連接松散，腫瘤細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶，侵入周圍組織和血管，進(jìn)而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在肝癌細(xì)胞中，β-catenin的高表達(dá)可導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)下調(diào)，使細(xì)胞間黏附減弱，肝癌細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)。β-catenin還可以通過激活下游靶基因的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。當(dāng)β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核后，與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子家族成員結(jié)合，啟動(dòng)一系列與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如MMP-7、Vimentin等。MMP-7是一種基質(zhì)金屬蛋白酶，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲開辟道路。Vimentin是一種中間絲蛋白，其表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），使上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，如遷移和侵襲能力增強(qiáng)。在乳腺癌、肺癌等多種腫瘤中，都觀察到β-catenin高表達(dá)與MMP-7、Vimentin等基因表達(dá)上調(diào)相關(guān)，提示β-catenin通過激活這些基因的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。p28GANK同樣在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用，其促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的途徑主要包括以下幾個(gè)方面。p28GANK可以激活NF-κB信號(hào)通路。p28GANK與IκB結(jié)合，促進(jìn)IκB的磷酸化和降解，從而釋放NF-κB。活化的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)一系列與細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如MMP-9、ICAM-1等。MMP-9能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白和明膠等成分，為腫瘤細(xì)胞的遷移提供空間，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。ICAM-1是一種細(xì)胞間黏附分子，其表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，有利于腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在肝癌、胃癌等腫瘤中，p28GANK的高表達(dá)可導(dǎo)致NF-κB信號(hào)通路激活，MMP-9和ICAM-1表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。p28GANK還可以通過激活A(yù)KT/PI3K/HIF-1α途徑促進(jìn)腫瘤新生血管的形成。在腫瘤細(xì)胞缺氧微環(huán)境中，p28GANK的表達(dá)上調(diào)，激活A(yù)KT/PI3K信號(hào)通路?；罨腁KT進(jìn)一步激活HIF-1α，HIF-1α調(diào)節(jié)一系列與血管生成相關(guān)基因的表達(dá)，如VEGF、bFGF等。VEGF和bFGF是重要的血管生成因子，它們能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，從而促進(jìn)腫瘤新生血管的生成。這些新生血管不僅為腫瘤細(xì)胞提供了充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，還為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了條件。在肝癌中，p28GANK通過激活A(yù)KT/PI3K/HIF-1α途徑，上調(diào)VEGF的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤新生血管的形成，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。6.3研究結(jié)果的臨床意義與潛在應(yīng)用價(jià)值本研究結(jié)果具有重要的臨床意義，為肝癌的預(yù)后評(píng)估和治療方案制定提供了關(guān)鍵的指導(dǎo)依據(jù)。β-catenin和p28GANK的高表達(dá)與TACE后肝癌患者的門靜脈癌栓形成和腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)為肝癌患者的預(yù)后評(píng)估提供了新的生物標(biāo)志物。在臨床實(shí)踐中，通過檢測(cè)肝癌組織中β-catenin和p28GANK的表達(dá)水平，醫(yī)生可以更準(zhǔn)確地判斷患者的病情進(jìn)展和預(yù)后情況。對(duì)于β-catenin和p28GANK高表達(dá)的患者，應(yīng)警惕其發(fā)生門靜脈癌栓和腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，加強(qiáng)隨訪和監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理可能出現(xiàn)的轉(zhuǎn)移灶。這有助于醫(yī)生為患者制定個(gè)性化的治療方案，提高治療的針對(duì)性和有效性，改善患者的預(yù)后。在治療方案制定方面，本研究結(jié)果也具有重要的指導(dǎo)意義。由于β-catenin和p28GANK在TACE后肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，針對(duì)這兩種蛋白的治療策略可能成為提高肝癌治療效果的新途徑?？梢蚤_發(fā)針對(duì)β-catenin和p28GANK的靶向治療藥物，通過抑制它們的表達(dá)或活性，阻斷其參與的信號(hào)通路，從而抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。目前，已有一些針對(duì)β-catenin的靶向治療藥物處于研究階段，如Wnt信號(hào)通路抑制劑，這些藥物通過干擾Wnt配體與受體的結(jié)合，或者抑制下游信號(hào)分子的活性，來抑制β-catenin的核轉(zhuǎn)位和轉(zhuǎn)錄活性。針對(duì)p28GANK的靶向治療藥物也在研發(fā)中，例如通過RNA干擾技術(shù)降低p28GANK的表達(dá)，或者開發(fā)特異性的抑制劑阻斷其與其他蛋白的相互作用。這些靶向治療藥物的研發(fā)和應(yīng)用，有望為肝癌患者提供更有效的治療手段，提高患者的生存率和生活質(zhì)量。β-catenin和p28GANK還具有作為治療靶點(diǎn)的潛在應(yīng)用價(jià)值。在肝癌的綜合治療中，可以將針對(duì)β-catenin和p28GANK的靶向治療與TACE、手術(shù)切除、放療、化療等傳統(tǒng)治療方法相結(jié)合，形成多學(xué)科綜合治療模式。在TACE治療后，對(duì)于β-catenin和p28GANK高表達(dá)的患者，可以及時(shí)給予靶向治療，抑制殘余肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，降低腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于無法手術(shù)切除的肝癌患者，靶向治療可以與放療、化療聯(lián)合使用，增強(qiáng)治療效果，延長(zhǎng)患者的生存期。通過將β-catenin和p28GANK作為治療靶點(diǎn)，有望打破傳統(tǒng)治療的局限性，為肝癌患者帶來新的治療希望。6.4研究的局限性與未來研究方向本研究在探索TACE后殘余肝癌細(xì)胞β-catenin和p28GANK的表達(dá)及意義方面取得了一定成果，但也存在一些局限性。從樣本數(shù)量上看，本研究?jī)H納入了TACE后手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本45例以及未經(jīng)任何治療直接手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本30例。相對(duì)較小的樣本量可能導(dǎo)致研究結(jié)果存在一定的偏差，無法全面準(zhǔn)確地反映β-catenin和p28GANK在TACE后殘余肝癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系。在未來研究中，應(yīng)擴(kuò)大樣本量，納入更多不同地區(qū)、不同臨床特征的患者標(biāo)本，以提高研究結(jié)果的可靠性和普遍性。從研究方法上看，本研究主要采用免疫組化SP法檢測(cè)β-catenin和p28GANK的表達(dá)水平，雖然該方法具有特異性高、靈敏度較高、可定位等優(yōu)點(diǎn)，但它只能從蛋白質(zhì)水平上對(duì)兩種蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。未來研究可以結(jié)合其他檢測(cè)技術(shù)，如實(shí)時(shí)熒光定量PCR從mRNA水平檢測(cè)β-catenin和p28GANK的表達(dá)情況，進(jìn)一步驗(yàn)證免疫組化結(jié)果。還可以運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，全面分析TACE后殘余肝癌細(xì)胞中蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化，深入探究β-catenin和p28GANK與其他蛋白之間的相互作用關(guān)系。在研究?jī)?nèi)容方面，本研究?jī)H分析了β-catenin和p28GANK表達(dá)與肝癌臨床病理特征的關(guān)系以及它們?cè)谀[瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，對(duì)于