DB1307張家口市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：張家口市農(nóng)業(yè)科學(xué)院、北京市農(nóng)林科學(xué)院、河北巡天農(nóng)業(yè)科技有限1“張雜谷”品種分子鑒定技術(shù)規(guī)程及溶液配制、引物信息、參照品種信息、操作程序、數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì)、判定規(guī)則等技術(shù)要求。由于不同谷子品種遺傳組成不同，基因組DNA中簡4儀器設(shè)備5試劑及溶液配制2送驗(yàn)樣品可為種子、幼苗、葉片、果穗等組織或器官。對(duì)谷子材料隨機(jī)數(shù)取至少5個(gè)個(gè)體組成混合），部，在上部輕輕的插入梳子，使其聚合1h以上。灌膠時(shí)應(yīng)勻速防止液600mL，拔出梳子。90W恒功率預(yù)電泳3用移液器吹吸加樣槽，清除氣泡和雜質(zhì)，插入樣品梳子。每一個(gè)加樣孔點(diǎn)入5率電泳至上部的指示帶（二甲苯青FF）到達(dá)膠板的中部。電泳結(jié)束后注：預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小在150bp以下時(shí)電泳時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短，擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小在300bp以上g）漂洗：雙蒸水漂洗1min。等體積混合不同熒光SSR標(biāo)記（FAM，ROX）擴(kuò)增產(chǎn)物，混勻后從混合液中吸取1μL加入到分析儀專用96孔板孔中。板中各孔分別加9.1數(shù)據(jù)記錄不同型號(hào)DNA分析儀間可能存在的系統(tǒng)誤差，上兩個(gè)等位變異，小片段數(shù)據(jù)在前，大片段數(shù)據(jù)在后；缺失位點(diǎn)9.2數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)4A.1主要儀器設(shè)備A.1.2高壓電泳儀A.1.3垂直電泳槽及配套的制膠附件A.1.4普通電泳儀A.1.5水平電泳槽及配套的制膠附件A.1.6高速冷凍離心機(jī)A.1.7水平搖床A.1.8膠片觀察燈A.1.10微量移液器A.1.11磁力攪拌器A.1.12紫外分光光度計(jì)A.1.13微波爐A.1.14高壓滅菌鍋A.1.15酸度計(jì)A.1.16水浴鍋或金屬浴A.1.17冰箱A.1.18制冰機(jī)A.1.19凝膠成像系統(tǒng)或紫外透射儀A.1.20DNA分析儀基于毛細(xì)管電泳，有片段分析功能和數(shù)據(jù)分析軟件，能夠分辨1個(gè)核苷酸大小的B.1.5乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-稱取186.1gNa2EDTA.2H2O溶于800mL水中，加固體氫氧化鈉調(diào)pH值至8.0，定容稱取60.55gTris堿溶于水中，加HC稱取146g固體氯化鈉溶于水中，定容至5超純水720μL定容至每種終濃度2.5mmol/L工作液。量取超純水分別配制上游引物和下游引物終稱取尿素450g，量取10倍TBE緩沖液100mL，40%PAGE膠112.5mL，定容至10量取49.75mL無水乙醇，250μL冰醋量取1mLBind緩沖液，加入5μLBind原液，混勻。稱取Tris堿108g，硼酸55g，量取0.5m量取10倍TBE緩沖液500mL，加水定容至5量取100mL冰醋酸，加水定容至10A52注2：多個(gè)品種在某一SSR位點(diǎn)上可能具有相同的等位變異，在確認(rèn)這些品種該位點(diǎn)等位變異大小與參照品種相同注3：參照品種共40個(gè)，覆蓋了幾乎全部在0.05以上的所有等位變異；擴(kuò)展參照品種共20個(gè)，主要補(bǔ)充基因頻率在0.05以下的稀有等位變異。熒光毛細(xì)管電泳只需從核心參照品種名單中選擇部分或全部使用，普通變性聚丙烯酰胺凝膠電泳需要將核心：