玉米穗腐病抗源鑒定及評價技術(shù)規(guī)程2024-12-30發(fā)布黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB23/T3896本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由黑龍江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院玉米研究所、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所。本文件主要起草人：扈光輝、楊劍飛、樸琳、李永剛、李春輝、李國良、王明泉、付立新、胡少新、王志國。3本文件規(guī)定了玉米穗腐病抗源鑒定及評價技術(shù)的接種體制備、抗病性鑒定圃設(shè)置、接種、病情調(diào)查和抗病性評價等要求。本文件適用于玉米種質(zhì)資源對玉米鐮孢穗腐病的田間抗性鑒定和評價。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅注日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB4404.1糧食作物種子第1部分：禾谷類NY/T1248.8玉米抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第8部分：鐮孢穗腐病DB23/T2154玉米機(jī)械化籽粒收獲栽培技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。鐮孢(F.subglutinans)、層出鐮孢(F.proliferatum)穗腐病混合菌進(jìn)行人工接種，鑒定挖掘抗穗腐病種質(zhì)資源。4接種體制備4.1鐮孢病原菌分離與致病力測定4.1.1病原菌分離取發(fā)生穗腐病的玉米籽粒，置于75%的酒精中浸泡2s～3s,取出后置于濃度為1.5%的次氯酸鈉中浸泡3min～5min,再經(jīng)無菌水換洗3次，晾干后用無菌剪刀從中間剪開后將其中一塊組織轉(zhuǎn)移至PDA平板培養(yǎng)基上，置于25℃~27℃環(huán)境中，黑暗培養(yǎng)3d后挑取病原菌至試管中保存。4.1.2致病力測定采用根部接種法根據(jù)柯赫氏法則驗證所分離的鐮孢菌為穗腐病原菌，并確定其具有一定的致病能力。4團(tuán)鐮孢、層出鐮孢。具體鑒定方法按NY/T1248.8的規(guī)定執(zhí)行。4.3病原菌的配制將高粱粒(125g)在沸水中煮20min,然后轉(zhuǎn)移到250mL三角瓶中，121℃濕熱滅菌按照NY/T1248.8提供的方法制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(Potatodextroseagar將禾谷鐮孢轉(zhuǎn)移至PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取3個～5個擴(kuò)繁的禾谷鐮孢的菌碟轉(zhuǎn)移到0.9%～1.5%的無菌鹽水中，每100mL三角瓶裝液量為15ml,28℃~30℃、可見光1501x~2001x條件下?lián)u床震蕩(150rpm～180rpm)培養(yǎng)96h～120h,雙層紗布過濾后用血球計數(shù)法調(diào)整孢子懸浮液濃度為2×10?孢子/mL,4℃條件下可保存96h。將PDA培養(yǎng)基擴(kuò)繁7d后的擬輪枝鐮孢5個菌碟轉(zhuǎn)移至裝有無菌高粱粒的三角瓶中，并在26℃、避光條件下培養(yǎng)5d,每天搖晃一次三角瓶，然后用無菌水沖洗帶菌高粱粒，雙層紗布過濾后用血球計數(shù)法調(diào)整孢子懸浮液濃度為2×10?孢子/mL,4℃條件下可保存96h。將PDA培養(yǎng)基擴(kuò)繁7d后的亞粘團(tuán)鐮孢5個菌碟轉(zhuǎn)移至裝有無菌高粱粒的三角瓶中，并在26℃、避光條件下培養(yǎng)5d,每天搖晃一次三角瓶，然后用無菌水沖洗帶菌高粱粒，雙層紗布過濾后用血球計數(shù)法調(diào)整孢子懸浮液濃度為2×10?孢子/mL,4℃條件下可保存96h。4.3.5層出鐮孢孢子懸浮液的配制將PDA培養(yǎng)基擴(kuò)繁7d后的層出鐮孢5個菌碟轉(zhuǎn)移至裝有無菌高粱粒的三角瓶中，并在26℃、避光條件下培養(yǎng)5d,每天搖晃一次三角瓶，然后用無菌水沖洗帶菌高粱粒，雙層紗布過濾后用血球計數(shù)法調(diào)整孢子懸浮液濃度為2×10?孢子/mL,4℃條件下可保存96h。4.3.6混合孢子懸浮液配制懸浮液混合，4℃條件下可保存48h。鑒定種質(zhì)資源按照晚熟、中熟、早熟3個熟期分區(qū)種植，各5鑒定材料采用單行區(qū)種植，3次重復(fù)，隨機(jī)排列，小區(qū)行長5m,行距0.65m,植株密度5.2鑒定材料播種期。播種時期按DB23/T2154規(guī)定執(zhí)行。鑒定材料種子不應(yīng)進(jìn)行包衣處理，播種方式采用人工點播，6接種接種采用花絲通道法，每株選擇上部第1個果穗，利用可定量的連續(xù)注射器，在果穗花7.1調(diào)查時間7.2調(diào)查方法8.1抗病性評價方法…………6ERSA——穗腐病平均病情級別(Earrotscoreonaverage);i——接種果穗的順序編碼；n——每份鑒定材料的接種果穗總數(shù)；計算保留1位小數(shù)，鑒定材料的抗性評價方法按附錄表A.3執(zhí)行。8.2有效性判別當(dāng)感病對照材料抗性鑒定為“感”時，該批次鑒定結(jié)果視為有效。當(dāng)鑒定材料初次鑒定結(jié)果表現(xiàn)為“抗”和“高抗”,應(yīng)在第二年進(jìn)行重復(fù)鑒定。8.4抗病性結(jié)果判定對初次鑒定為“抗”以下級別的資源，以當(dāng)年病情級數(shù)作為判定依據(jù)；對初次鑒定“抗”和“高抗”資源，需將初次鑒定結(jié)果同重復(fù)鑒定結(jié)果進(jìn)行比較，以最高病情級別作為評價結(jié)按附錄表A.3的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行抗性評價，將調(diào)查和評價結(jié)果錄入附錄表A.4。9鑒定檔案應(yīng)建立鑒定檔案，內(nèi)容包括：病原菌采集、分離、鑒定、接種體的配制、鑒定材料名稱、接種時間、調(diào)查時間、接種總株數(shù)、各病情級別發(fā)病株數(shù)和抗病性評價。附錄A(資料性)A.1不同熟期對照表A.1表A.1不同熟期對照熟期抗病對照感病對照晚熟區(qū)中熟區(qū)早熟區(qū)A.2玉米穗腐病鑒定田間病情分級表A.2表A.2玉米穗腐病鑒定田間病情分級13579A.3玉米對穗腐病抗性的評價標(biāo)準(zhǔn)表A.3表A.3玉米對穗腐病抗性的評價標(biāo)準(zhǔn)平均病情級別高抗Highlyresistant(HR)抗Resistant(R)中抗Moderatelyresista