藥品生產技術專業(yè)教學資源庫藥物質量檢測技術講授內容項目七：典型藥物質量檢測01維生素A的含量測定任務六：維生素類藥物的質量檢測藥品生產技術專業(yè)教學資源庫1.維生素A的含量測定（1）測定方法含量測定（2）檢驗原理（3）檢驗過程藥品生產技術專業(yè)教學資源庫1.維生素A的含量測定（1）測定方法含量測定取供試品適量，精密稱定，加環(huán)已烷溶解并定量稀釋制成每毫升含9~15IU的溶液，照分光光度法，測定其吸收峰的波長，并在300nm、316nm、328nm、340nm、360nm五個波長處分別測定吸光度；計算各波長下的吸光度與328nm波長處的吸光度的比值。藥品生產技術專業(yè)教學資源庫（2）檢驗原理含量測定②測定原理③波長的選擇①三點校正法的建立藥品生產技術專業(yè)教學資源庫維生素A具有共軛多烯醇的側鏈，在325-328nm的波長范圍內具有最大吸收，可用于含量測定。含量測定①三點校正法的建立但維生素A原料中的雜質在維生素A的最大吸收波長附近也有吸收，干擾維生素A的測定。為消除雜質的干擾，《中國藥典》（2010版）采用三點校正法測定維生素A的含量。藥品生產技術專業(yè)教學資源庫本法是在三個選定的波長處測得供試品吸光度，在規(guī)定條件下根據校正公式計算吸光度A校正值后，再計算維生素A的真實含量，故本法稱為“三點校正法”。四、含量測定②測定原理①在310-340nm波長范圍內，雜質的無關吸收近似一條直線，且隨波長的增大吸光度下降；②物質對光吸收呈加和性，即在每一波長下測得的吸光度A樣=A維生素+A雜質。該法原理基于兩點：藥品生產技術專業(yè)教學資源庫三點校正法必須選擇三個波長。含量測定③波長的選擇三點波長選擇原則：一點選擇在維生素A的最大吸收波長處（λ1），其他兩點選擇在λ1兩側（λ2和λ3）。第一法與第二法選擇的這兩點有所不同。藥品生產技術專業(yè)教學資源庫第一法（等波長差法）：使λ3－λ1=λ1－λ2?！吨袊幍洹罚?010版）規(guī)定，測定維生素A醋酸酯時，3個波長為λ1=328nm，λ2=316nm，λ3=340nm，△λ=12nm。含量測定第二法（等吸收比法）：使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1?！吨袊幍洹罚?010版）規(guī)定，測定維生素醇時，3個波長為λ1=325nm，λ2=310nm，λ3=334nm。藥品生產技術專業(yè)教學資源庫①第一種方法含量測定（3）檢驗過程a.測定：將維生素A溶于環(huán)已烷，在規(guī)定波長處測定吸光度，計算吸光度比值（A/A328），并分別與《中國藥典》（2010版）規(guī)定的吸光度比值相減，即得到5個差值。判斷每個差值是否超過規(guī)定值的±0.02，如表7-10。藥品生產技術專業(yè)教學資源庫含量測定b.數據處理：如果λmax在326~329nm，且A/A328比值與藥典規(guī)定值的差值未超過規(guī)定值的±0.02，表示樣品純度較好，可直接按下式計算含量：藥品生產技術專業(yè)教學資源庫含量測定如果λmax在326~329nm，但A/A328比值與藥典規(guī)定值的差值超過規(guī)定值的±0.02，表示雜質可能有干擾，需按校正公式計算校正值。是否需用校正值計算，則應根據不同情況而定。A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)若（A328（校正）-A328)/（A328）×100%，所得數值在±3%以內，不用校正值，仍用A328計算；若所得數值在-15%~+3%，用A328(校正)計算；若所得數值小于-15%或大于+3%，采用第二法測定。如果λmax不在326~329nm，也用第二法測定。藥品生產技術專業(yè)教學資源庫含量測定計算維生素A占標示量的百分含量：由前一步驟求得的效價計算維生素A標示量的百分含量。c：結果計算計算維生素A的效價：藥品生產技術專業(yè)教學資源庫②第二種方法含量測定（3）檢驗過程a.不能用第一種方法的樣品采用第二種方法測定。b.測定：精密稱取供試品適量，置皂化瓶中，加乙醇30mL與50%氫氧化鉀溶液3mL，置水浴中煮沸回流30min，冷卻后，自冷凝管頂滴加水10mL沖洗冷凝管內部管壁，將皂化液移至分液漏斗中，皂化瓶用水60~100mL分數次洗滌，洗液并入分液漏斗中；藥品生產技術專業(yè)教學資源庫含量測定用不含過氧化物的乙醚振搖提取4次，每次振搖約5min，第一次60mL，以后各次40mL，合并乙醚液，用水洗滌數次，每次約100mL，洗滌應緩緩旋動，避免乳化，直至水層遇酚酞指示液不再顯紅色，乙醚液用鋪有脫脂棉與無水硫酸鈉的濾器過濾，濾器用乙醚洗滌，洗液與乙醚液合并，置250mL量瓶中，用乙醚稀釋至刻度，搖勻；精密量取適量，置蒸發(fā)皿內，微溫揮去乙醚，迅速加異丙醇溶解并定量稀釋制成每1mL中含維生素A9~15IU，照紫外—可見分光光度法[《中國藥典》（2010版）附錄ⅣA]，在300nm、310nm、325nm與334nm四個波長處測定吸光度，并測定吸收峰的波長。藥品生產技術專業(yè)教學資源庫四、含量測定如果λmax在323~327nm，且A300/A325比值未超過0.73，則按下式計算校正值：c.數據處理：如果校正吸光度在未校正吸光度的97%~103%，則仍以未校正的吸光度計算含量。藥品生產技術專業(yè)教學資源庫含量測定如果λmax不在323~327nm，或A300/A325比值未超過0.73；則應自上述皂化后的乙醚提取液250mL中，另精密量取適量，微溫揮去乙醚至約剩5mL，再在氮氣流下吹干，立即精密加入甲醇3mL，溶解后，精密量取500μL，注入維生素D測定法[《中國藥典》（2010版）附錄ⅦK]第二法項下的凈化用色譜柱系統，準確收集含有維生素A的流出液，在氮氣流下吹干，