生物化實驗考試試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.蛋白質(zhì)定量常用的方法是（）A.凱氏定氮法B.雙縮脲法C.福林-酚試劑法D.以上都是2.測定酶活性時，底物濃度最好是Km的（）A.1倍B.5倍C.10倍以上D.0.5倍3.紙層析法分離氨基酸依據(jù)的原理是（）A.吸附B.分配C.離子交換D.分子篩4.蛋白質(zhì)變性后，其性質(zhì)有（）A.溶解度增加B.一級結(jié)構(gòu)破壞C.生物學活性喪失D.黏度下降5.分光光度計測量的是（）A.透過光強度B.吸收光強度C.散射光強度D.發(fā)射光強度6.SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)依據(jù)的是（）A.蛋白質(zhì)電荷不同B.蛋白質(zhì)分子量不同C.蛋白質(zhì)等電點不同D.蛋白質(zhì)溶解度不同7.酶促反應(yīng)中，決定反應(yīng)特異性的是（）A.酶蛋白B.輔酶C.底物D.輔基8.下列哪種物質(zhì)可作為固定化酶的載體（）A.瓊脂糖B.葡萄糖C.甘油D.乙醇9.透析的原理是（）A.吸附B.分配C.分子篩D.離子交換10.蛋白質(zhì)等電點是指（）A.蛋白質(zhì)溶液的pH=7時溶液的pHB.蛋白質(zhì)凈電荷為零時溶液的pHC.蛋白質(zhì)溶液的pH=pKa時溶液的pHD.蛋白質(zhì)溶液的pH=pKb時溶液的pH二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.下列屬于蛋白質(zhì)沉淀方法的有（）A.鹽析B.有機溶劑沉淀C.重金屬鹽沉淀D.生物堿試劑沉淀2.酶活性測定的影響因素包括（）A.底物濃度B.酶濃度C.pH值D.溫度3.常用的蛋白質(zhì)分離純化方法有（）A.離心B.層析C.電泳D.透析4.下列關(guān)于SDS的說法正確的是（）A.是一種陰離子去污劑B.能破壞蛋白質(zhì)分子間的氫鍵和疏水作用C.與蛋白質(zhì)結(jié)合后使蛋白質(zhì)帶負電荷D.可用于測定蛋白質(zhì)分子量5.層析技術(shù)的類型包括（）A.離子交換層析B.凝膠過濾層析C.親和層析D.吸附層析6.測定蛋白質(zhì)含量的方法有（）A.紫外分光光度法B.考馬斯亮藍法C.Bradford法D.Lowry法7.影響酶促反應(yīng)速率的因素有（）A.抑制劑B.激活劑C.底物濃度D.酶濃度8.蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)包括（）A.α-螺旋B.β-折疊C.β-轉(zhuǎn)角D.無規(guī)卷曲9.固定化酶的優(yōu)點有（）A.穩(wěn)定性提高B.可反復(fù)使用C.易與底物和產(chǎn)物分離D.酶活性增強10.電泳的類型有（）A.紙電泳B.醋酸纖維素薄膜電泳C.聚丙烯酰胺凝膠電泳D.瓊脂糖凝膠電泳三、判斷題（每題2分，共10題）1.鹽析法沉淀蛋白質(zhì)是可逆的。（）2.酶的最適溫度是酶的特征性常數(shù)。（）3.蛋白質(zhì)變性后，其一級結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)都被破壞。（）4.SDS-PAGE中，蛋白質(zhì)泳動速度只與分子量有關(guān)。（）5.透析可用于分離大小不同的分子。（）6.所有酶都需要輔酶或輔基才能發(fā)揮活性。（）7.凝膠過濾層析中，小分子物質(zhì)先被洗脫出來。（）8.紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量時，常用的波長是280nm。（）9.固定化酶的活性一定比游離酶高。（）10.等電聚焦電泳可用于測定蛋白質(zhì)的等電點。（）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述鹽析法沉淀蛋白質(zhì)的原理。答：鹽析是通過向蛋白質(zhì)溶液中加入大量中性鹽，使蛋白質(zhì)分子表面電荷被中和，水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度降低而從溶液中沉淀析出。不同蛋白質(zhì)鹽析所需鹽濃度不同，借此可分離蛋白質(zhì)。2.簡述酶活性測定的基本要求。答：①底物濃度：需足夠大，一般為Km的10倍以上。②酶濃度：適量，保證反應(yīng)速度與酶量成正比。③溫度：需在最適溫度，保持反應(yīng)體系恒溫。④pH值：在酶的最適pH條件下進行測定。3.簡述SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)的原理。答：SDS是陰離子去污劑，能與蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白質(zhì)帶上大量負電荷，掩蓋原有電荷差異。在電場作用下，蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中泳動，其速度僅取決于分子量大小，從而實現(xiàn)分離。4.簡述透析的原理和應(yīng)用。答：透析利用半透膜的分子篩原理，小分子物質(zhì)能透過半透膜，大分子物質(zhì)不能。應(yīng)用于去除生物大分子溶液中的小分子雜質(zhì)，如鹽類、單糖等，也可用于更換緩沖液。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)在生物化學研究中的重要性。答：蛋白質(zhì)分離純化是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ)。通過分離可得到單一蛋白質(zhì)，利于深入研究其特性、作用機制等。還能用于制備藥用蛋白質(zhì)、酶制劑等。不同技術(shù)組合可提高純度，為生物化學各領(lǐng)域研究提供關(guān)鍵支持。2.結(jié)合實驗，討論影響酶促反應(yīng)速率的因素在實際應(yīng)用中的意義。答：在實際應(yīng)用中，底物濃度、酶濃度、溫度、pH等影響酶促反應(yīng)速率。如工業(yè)生產(chǎn)中，可通過控制底物濃度和酶濃度提高產(chǎn)量；利用最適溫度和pH提高酶活性、降低成本。了解這些因素能優(yōu)化反應(yīng)條件，提高生產(chǎn)效率和質(zhì)量。3.討論固定化酶在工業(yè)生產(chǎn)中的優(yōu)勢與面臨的挑戰(zhàn)。答：優(yōu)勢在于穩(wěn)定性提高，可反復(fù)使用，易與底物和產(chǎn)物分離，能連續(xù)化生產(chǎn)，降低成本。挑戰(zhàn)是固定化過程可能降低酶活性，載體選擇和固定化方法較復(fù)雜，且固定化酶使用壽命有限，需不斷優(yōu)化改進。4.討論電泳技術(shù)在生物化學分析中的應(yīng)用及發(fā)展趨勢。答：電泳可分離、鑒定蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子，分析其純度、分子量等。如SDS-PAGE測蛋白質(zhì)分子量，核酸電泳檢測完整性。發(fā)展趨勢是向高分辨率、自動化、微型化發(fā)展，結(jié)合其他技術(shù)實現(xiàn)更精準、快速分析。答案一、單項選擇題1.D2.C3.B4.C5.B6.B7.A8.A9.C10.B二、多項選擇題1.ABCD2.ABCD