ICS65.020.20

CCSB61

46

海南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB46/T646—2024

斑蘭葉（香露兜）組培快繁技術(shù)規(guī)程

Technicalcodeofpracticefortissuecultureandrapidpropagationofpandan

2024-09-23發(fā)布2024-11-01實(shí)施

海南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB46/T646—2024

目次

前言................................................................................III

引言.................................................................................IV

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義.........................................................................1

4組培工廠要求.......................................................................1

5接種前準(zhǔn)備.........................................................................2

5.1試劑...........................................................................2

5.2滅菌...........................................................................2

5.3人員要求.......................................................................2

6外植體采集與處理...................................................................2

6.1采集圃選擇.....................................................................2

6.2外植體采集.....................................................................2

6.3外植體處理.....................................................................3

7組培快繁...........................................................................3

7.1接種與檢查.....................................................................3

7.2愈傷組織誘導(dǎo)...................................................................3

7.3叢生芽誘導(dǎo).....................................................................3

7.4增殖培養(yǎng).......................................................................3

7.5叢生芽循環(huán)再生.................................................................3

7.6生根培養(yǎng).......................................................................3

7.7煉苗...........................................................................4

8容器苗培育.........................................................................4

8.1苗圃地設(shè)施條件.................................................................4

8.2育苗時(shí)期.......................................................................4

8.3育苗容器.......................................................................4

8.4育苗基質(zhì).......................................................................4

8.5基質(zhì)消毒.......................................................................4

8.6基質(zhì)裝填.......................................................................4

8.7移栽...........................................................................4

8.8苗圃管理.......................................................................4

8.9煉苗...........................................................................5

8.10出圃..........................................................................5

9育苗檔案...........................................................................5

10組培快繁技術(shù)流程圖................................................................5

附錄A（資料性）斑蘭葉組培快繁培養(yǎng)基配方.............................................6

I

DB46/T646—2024

附錄B（資料性）斑蘭葉組培快繁技術(shù)檔案記錄表..........................................7

附錄C（資料性）斑蘭葉組培快繁技術(shù)流程圖..............................................9

參考文獻(xiàn)..............................................................................10

II

DB46/T646—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由海南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所、海南興科熱帶作物工程技術(shù)有限公司、海

南熱作高科技研究院有限公司、海南椰蘭香島食品科技有限公司、海南熱作兩院種業(yè)科技有限責(zé)任公司、

海南好奇妙國(guó)際貿(mào)易有限公司、廣州市名花香料有限公司。

本文件主要起草人：吉訓(xùn)志、張昂、魚(yú)歡、秦曉威、宗迎、閆林、賀書(shū)珍、初眾、郝朝運(yùn)、唐冰、

鄧文明、茍亞峰、溫晚兒、溫綺、唐躍東、李貴雨、章斌卿、魯玉俠。

III

DB46/T646—2024

引言

本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)提請(qǐng)注意，聲明符合本文件時(shí)，可能涉及6.2、6.3、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、

7.6與《一種斑蘭葉種苗的高通量繁育技術(shù)》（ZL202010100076.7）相關(guān)專利的使用。

本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)對(duì)于該專利的真實(shí)性、有效性和范圍無(wú)任何立場(chǎng)。

該專利權(quán)人已向本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)承諾，愿意同任何申請(qǐng)人在合理且無(wú)歧視的條款和條件下，就專

利授權(quán)許可進(jìn)行談判。該專利權(quán)人的聲明已在本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)備案。相關(guān)信息可以通過(guò)以下聯(lián)系方式

獲得：

專利權(quán)人：中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所。

地址：海南省萬(wàn)寧市興隆熱帶植物園。

請(qǐng)注意除上述專利外，本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)

任。

IV

DB46/T646—2024

斑蘭葉（香露兜）組培快繁技術(shù)規(guī)程

警示——使用本文件的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本文件并未指出所有可能的安全問(wèn)題。

使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧⒈ＷC符合國(guó)家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。

1范圍

本文件規(guī)定了斑蘭葉（PandanusamaryllifoliusRoxb.）組培快繁的組培工廠化要求、接種前準(zhǔn)

備、外植體采集與處理、組培快繁、容器苗培育、育苗檔案和組培快繁技術(shù)流程。

本文件適用于斑蘭葉（香露兜）組培苗快速繁育。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T317白砂糖

NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

DB46/T578斑蘭葉（香露兜）種苗繁育技術(shù)規(guī)程

DB46/T579林下間作斑蘭葉（香露兜）技術(shù)規(guī)程

DB46/T645斑蘭葉（香露兜）組培苗

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

外植體explant

從生長(zhǎng)正常的斑蘭葉植株上獲取的用于建立植物組培快繁體系的起始材料。

3.2

培養(yǎng)材料culturematerial

包含外植體、愈傷組織及叢生芽等需要進(jìn)行接種培養(yǎng)的材料。

3.3

試管苗test-tubeseedling

利用外植體（3.1）采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)在培養(yǎng)容器中經(jīng)系列培養(yǎng)至達(dá)到出廠標(biāo)準(zhǔn)的小植株。

3.4

容器苗containerseedling

將試管苗（3.3）裝入有育苗基質(zhì)的育苗容器中經(jīng)培育至可出圃供大田定植的斑蘭葉種苗。

3.5

繁殖代數(shù)reproductivegeneration

以叢生芽分芽后，再次進(jìn)行繼代培養(yǎng)，重新獲得更多叢生芽的繁殖周期。

1

DB46/T646—2024

4組培工廠化要求

按照NY/T2306的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

5接種前準(zhǔn)備

5.1試劑

5.1.1培養(yǎng)基配制試劑

培養(yǎng)基配制所需試劑見(jiàn)附錄A，其中大量元素、微量元素及鐵鹽為分析純（AR）試劑。有機(jī)元素、

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及卡拉膠為生物試劑（BR）。碳源推薦使用符合GB/T317規(guī)定的白砂糖。

5.1.2酸堿度調(diào)節(jié)試劑

酸堿度調(diào)整所需氫氧化鈉、氫氧化鉀、鹽酸為分析純?cè)噭?/p>

5.1.3消毒試劑

使用過(guò)濾的潔凈自來(lái)水稀釋配制醫(yī)用95%乙醇（酒精）至體積分?jǐn)?shù)為75%，或直接使用醫(yī)用75%乙醇。

使用過(guò)濾的潔凈自來(lái)水稀釋配制分析純氯化汞至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%。

注：《危險(xiǎn)化學(xué)品安全管理?xiàng)l例》給出了危險(xiǎn)化學(xué)品的安全管理方法。

5.2滅菌

5.2.1培養(yǎng)基、器皿、水

培養(yǎng)基配制完后，分裝至組培瓶中。121℃，0.15Mpa高壓滅菌，培養(yǎng)基滅菌20min～25min，器皿、

水滅菌30min，取出冷卻備用。

5.2.2接種器材

推薦使用電熱滅菌器進(jìn)行滅菌。槍狀鑷子與解剖刀先用75%乙醇擦拭，待電熱滅菌器溫度升至

250℃～300℃，再將其插入電熱滅菌器中進(jìn)行滅菌，第一次滅菌3min～4min，每次接種后滅菌≥15s。

5.2.3超凈工作臺(tái)

先用75%乙醇擦洗超凈工作臺(tái)臺(tái)面，再滅菌30min后關(guān)掉紫外燈，通風(fēng)15min～20min。

5.3人員要求

滅菌操作人員應(yīng)持有特種設(shè)備作業(yè)人員證。接種人員應(yīng)在更衣室更換工作服、工作鞋、戴帽子和口

罩后進(jìn)入接種室（或經(jīng)過(guò)風(fēng)淋室后進(jìn)入接種室），操作前雙手應(yīng)用75%乙醇消毒。操作中如手部離開(kāi)工

作臺(tái)，應(yīng)再次用75%乙醇消毒。

6外植體采集與處理

6.1采集圃選擇

選擇園藝性狀良好、生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的斑蘭葉種植園，標(biāo)記優(yōu)良單株后作為外植體采集圃。

6.2外植體采集

2

DB46/T646—2024

從采集圃（見(jiàn)6.1）中選取優(yōu)良母株上長(zhǎng)2cm～3cm的幼嫩分蘗，用小刀從其基部切下，裝入無(wú)菌袋，

帶回實(shí)驗(yàn)室備用。

6.3外植體處理

6.3.1采集的幼嫩分蘗（見(jiàn)6.2）剝?nèi)ト~鞘與葉片，加入洗衣粉浸泡30min，用自來(lái)水沖洗干凈，轉(zhuǎn)

到超凈工作臺(tái)中。

6.3.2經(jīng)6.3.1處理的材料，用75%乙醇浸泡消毒30s，倒出乙醇，用無(wú)菌水沖洗2次，再用無(wú)菌解

剖刀和槍狀鑷子在接種盤上切成長(zhǎng)1.0cm～1.5cm的外植體。

6.3.3外植體（見(jiàn)6.3.2）用0.1%氯化汞溶液消毒8min，期間不斷搖動(dòng)，消毒結(jié)束將氯化汞溶液倒入

回收瓶，用無(wú)菌水沖洗4～5次。

7組培快繁

7.1接種與檢查

7.1.1接種時(shí)一手拿組培瓶，一手輕輕取下蓋子，用鑷子將經(jīng)消毒的外植體（見(jiàn)6.3.3）送入瓶中，

輕輕一壓與培養(yǎng)基緊密接觸，并使外植體在瓶?jī)?nèi)均勻分布。組培容器還有組培袋，接種后進(jìn)行封口。

7.1.2接種完畢立即蓋上瓶蓋并做好標(biāo)記，注明材料名稱、接種日期、培養(yǎng)基類型、接種人等事項(xiàng)。

7.1.3整個(gè)培養(yǎng)期間定期檢查培養(yǎng)材料生長(zhǎng)情況，并作好記載，如發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)及時(shí)將污染瓶移出培

養(yǎng)室，待高溫滅菌后清洗或集中處理。

7.2愈傷組織誘導(dǎo)

將外植體按7.1給出的方法接種到培養(yǎng)基A（見(jiàn)附錄A），溫度22℃～25℃，暗培養(yǎng)，誘導(dǎo)40d～60

d，獲得愈傷組織。

7.3叢生芽誘導(dǎo)

將獲得的愈傷組織（見(jiàn)7.2）按7.1給出的方法接種到培養(yǎng)基B（見(jiàn)附錄A），溫度26℃～28℃，光

照強(qiáng)度2000lx～3000lx，光照時(shí)間10h/d～12h/d，誘導(dǎo)60d～90d，獲得叢生芽。

7.4增殖培養(yǎng)

7.4.1母瓶選擇

選擇叢生芽（見(jiàn)7.3）狀態(tài)良好、且無(wú)污染的組培瓶作為母瓶。

7.4.2切芽接種

打開(kāi)母瓶蓋，瓶口斜向下，取出叢生芽放于無(wú)菌接種盤上，用解剖刀將叢生芽切割成單株小芽或小

芽團(tuán)塊，按7.1給出的方法接種到培養(yǎng)基C（見(jiàn)附錄A）中，宜4～5個(gè)（團(tuán)）/瓶。溫度26℃～28℃，光

照強(qiáng)度2000lx～3000lx，光照時(shí)間10h/d～12h/d，獲得增殖叢生芽，約30d繼代一次，繁殖代數(shù)應(yīng)

≤10代。

7.5叢生芽循環(huán)再生

將在叢生芽切割（見(jiàn)7.4.2）過(guò)程中剩余的愈傷組織再次按7.3和7.4.2給出的方法依次進(jìn)行培養(yǎng)。

7.6生根培養(yǎng)

3

DB46/T646—2024

7.6.1經(jīng)增殖培養(yǎng)獲得的叢生芽（無(wú)根芽苗）（見(jiàn)7.4.2），選取其中苗高≥3cm的單株，取出放置

于無(wú)菌的接種盤上，去除莖部處多余愈傷組織，分成單株接種到裝有培養(yǎng)基D（見(jiàn)附錄A）的組培袋中，

宜接種10株/袋，封口。光照強(qiáng)度1500lx～2500lx，光照時(shí)間10h/d～12h/d，30d～40d后獲得生

根苗。

7.6.2苗高＜3cm的單株，切去根系后按7.4.2給出的方法進(jìn)行增殖培養(yǎng)。

7.7煉苗

將生根后的試管苗（見(jiàn)7.6.1），在避免強(qiáng)光直射和避雨的條件下煉苗7d～10d。

8容器苗培育

8.1苗圃地設(shè)施條件

按DB46/T578的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

8.2育苗時(shí)期

按DB46/T578的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

8.3育苗容器

按DB46/T578的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

8.4育苗基質(zhì)

按DB46/T578的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

8.5基質(zhì)消毒

按DB46/T578的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

8.6基質(zhì)裝填

按DB46/T578的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。推薦將裝滿基質(zhì)的容器裝入15孔托盤后，整齊擺放在苗床上。

8.7移栽

取出經(jīng)過(guò)煉苗的試管苗（見(jiàn)7.7）并洗凈其培養(yǎng)基，澆透育苗基質(zhì)后，將試管苗種入基質(zhì)中，葉片

及莖部全部露出，壓實(shí)基質(zhì)。淋足定根水，并用50%多菌靈可濕性粉劑500倍液噴淋消毒。苗高＜6cm的

試管苗可扦插在沙床上培育30d～60d后再移栽到育苗容器。

8.8苗圃管理

8.8.1水肥管理

勤查看基質(zhì)濕度，保持基質(zhì)濕潤(rùn)。當(dāng)種苗新葉長(zhǎng)度≥5cm時(shí)，每7d～10d施肥1次。前2個(gè)月推薦葉

面肥濃度為0.5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）速溶復(fù)合肥（15-15-15）液態(tài)肥，第3個(gè)月起推薦使用相同肥料濃度為2%～

3%的液態(tài)肥，噴施量以種苗葉片濕潤(rùn)為宜。

8.8.2溫度管理

通過(guò)覆膜、水簾與冷熱風(fēng)機(jī)等方式調(diào)節(jié)溫度，溫度宜保持在20℃～35℃。

4

DB46/T646—2024

8.8.3光照管理

移栽后用遮光度60%～75%遮陽(yáng)網(wǎng)遮蓋蔭棚，避免陽(yáng)光直射。如遇高溫天氣，宜在蔭棚及其四周臨時(shí)

增加一層相同遮光度的遮陽(yáng)網(wǎng)，加網(wǎng)時(shí)間為10d～20d。

8.8.4查苗、補(bǔ)苗

移栽10d后進(jìn)行查苗、補(bǔ)苗。

8.8.5除草

及時(shí)拔除苗圃內(nèi)雜草，不推薦化學(xué)除草。

8.8.6病蟲(chóng)害防治

按DB46/T579的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

8.9煉苗

按DB46/T578的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

8.10出圃

容器苗質(zhì)量符合DB46/T645的相關(guān)規(guī)定即可出圃。

9育苗檔案

見(jiàn)附錄B。

10組培快繁技術(shù)流程圖

見(jiàn)附錄C。

5

DB46/T646—2024

A

A

附錄A

（資料性）

斑蘭葉組培快繁培養(yǎng)基配方

斑蘭葉組培快繁培養(yǎng)基配方見(jiàn)表A.1。

表A.1斑蘭葉組培快繁培養(yǎng)基配方

單位為毫克/每升

培養(yǎng)基種類

培養(yǎng)基成分試劑

培養(yǎng)基A培養(yǎng)基B培養(yǎng)基C培養(yǎng)基D

硝酸鉀（KNO3）190019001900950

硝酸銨（NH4NO3）165016501650825

大量元素硫酸鎂（MgSO4?7H2O）350～450350～450350～450175～225

磷酸二氫鉀（KH2PO4）150～200150～200150～20070～100

氯化鈣（CaCl2?2H2O）400～500400～500400～500200～250

硫酸錳（MnSO4?4H2O）20～2420～2420～2420～24

硫酸鋅（ZnSO4?7H2O）8～108～108～108～10

硼酸（H3BO3）6～106～106～106～10

微量元素碘化鉀（KI）0.830.830.830.83

鉬酸鈉（Na2MoO4?2H2O）0.250.250.250.25

硫酸銅（CuSO4?5H2O）0.0250.0250.0250.025

氯化鈷（CoCl2?6H2O）0.0250.0250.0250.025

乙二胺四乙酸二鈉（Na2-EDTA）35～4035～4035～4035～40

鐵鹽

硫酸亞鐵（FeSO4?7H2O）27～3027～3027～3027～30

甘氨酸2.02.02.02.0

維生素B10.10.10.10.1

有機(jī)元素維生素B60.50.50.50.5

煙酸0.50.50.50.5

肌醇100100100100

噻苯?。═DZ）0.01～0.5———

植物生長(zhǎng)6-芐氨基嘌呤（6-BA）0.5～2.01.0～2.50.1～0.5—

調(diào)節(jié)劑萘乙酸（NAA）—0.1～0.50.01～0.05—

吲哚丁酸（IBA）———0.05～0.1

碳源白砂糖25000～3000025000～3000025000～3000020000～25000

凝固劑卡拉膠8000～100008000～100008000～100008000～10000

注1：配制培養(yǎng)基pH宜調(diào)整為5.8～6.2。

注2：培養(yǎng)基配制用水用過(guò)濾后的潔凈自來(lái)水。

6

DB46/T646—2024

B

B

附錄B

（資料性）

斑蘭葉組培快繁技術(shù)檔案記錄表

B.1試管苗

斑蘭葉試管苗組培快繁技術(shù)檔案記錄表見(jiàn)表B.1。

表B.1斑蘭葉試管苗組培快繁技術(shù)檔案記錄表

育苗單位污染率/%

接種時(shí)間接種人員

外植體來(lái)源繁殖代數(shù)/代

消毒藥劑種類消毒時(shí)間

煉苗時(shí)間出廠時(shí)間

生產(chǎn)管理

培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基配方數(shù)量（株/團(tuán)）培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)溫度光照強(qiáng)度生長(zhǎng)情況

愈傷組織誘導(dǎo)

叢生芽誘導(dǎo)

增殖培養(yǎng)

生根培養(yǎng)

試管苗數(shù)量/株

煉苗株數(shù)/株

出廠株數(shù)/株

備注

審核人（簽字）：日期：年月日

7

DB46/T646—2024

B.2容器苗

斑蘭葉容器苗組培快繁技術(shù)檔案記錄表見(jiàn)表B.2。

表B.2斑蘭葉容器苗組培快繁技術(shù)檔案記錄表

育苗單位苗圃編號(hào)

移栽時(shí)間育苗責(zé)任人

試管苗來(lái)源繁殖代數(shù)/代

育苗基質(zhì)（包括基質(zhì)種類、用

育苗容器（種類與規(guī)格）

量及配比等）

施肥管理

肥料種類施肥次數(shù)

施肥用量施肥時(shí)間

施肥方法肥料供應(yīng)商

病蟲(chóng)害防治

防治對(duì)象防治藥劑

藥劑用量防治時(shí)間

防治方法藥劑供應(yīng)商

容器苗數(shù)量/株

移栽株數(shù)/株

出圃株數(shù)/株

備注

審核人（簽字）：日期：年月日

8

DB46/T646—2024

C

C

附錄C

（資料性）

斑蘭葉組培快繁技術(shù)流程圖

斑蘭葉組培快繁技術(shù)流程圖見(jiàn)圖C.1。

選取優(yōu)良母株上長(zhǎng)2cm～3cm的幼嫩分蘗，剝?nèi)ト~鞘與葉片，加入洗衣粉浸泡30min，用自

外植體采集與處理（見(jiàn)第6章）來(lái)水沖洗干凈，轉(zhuǎn)到超凈工作臺(tái)中，用75%乙醇浸泡消毒30s，倒出乙醇，用無(wú)菌水沖洗2次，

切成長(zhǎng)1.0cm～1.5cm的外植體，用0.1%氯化汞溶液消毒8min，再用無(wú)菌水沖洗4～5次

將外植體接種到培養(yǎng)基A（見(jiàn)附錄A），溫度22℃～25℃，暗培養(yǎng)，誘導(dǎo)40d～60d，獲得

愈傷組織誘導(dǎo)（見(jiàn)7.2）愈傷組織

將獲得的愈傷組織（見(jiàn)7.2）接種到培養(yǎng)基B（見(jiàn)附錄A），溫度26℃～28℃，光照強(qiáng)度2000

叢生芽誘導(dǎo)（見(jiàn)7.3）lx～3000lx，光照時(shí)間10h/d～12h/d，誘導(dǎo)60d～90d，獲得叢生芽

將叢生芽切割成單株小芽或小芽團(tuán)塊，接種到培養(yǎng)基C（見(jiàn)附錄A）中，宜4～5個(gè)（團(tuán)）/

增殖培養(yǎng)（見(jiàn)7.4）瓶。溫度26℃～28℃，光照強(qiáng)度2000lx～3000lx，光照時(shí)間10h/d～12h/d，增殖叢生

芽，約30d繼代一次，繁殖代數(shù)應(yīng)≤10代

叢生芽循環(huán)再生（見(jiàn)7.5）

將在增殖培養(yǎng)過(guò)程中，切芽后剩余的愈傷組織再按叢生芽誘導(dǎo)方法依次進(jìn)行培養(yǎng)