1、項目來源

本標準來源于《廣西壯族自治區(qū)市場監(jiān)督管理局關(guān)于下達2021

年第二批廣西地方標準制修定項目計劃的通知》（桂市監(jiān)函〔2021〕

2199號）文件，由廣西動物疫病預(yù)防控制中心承擔(dān)。廣西動物疫病

預(yù)防控制中心“豬鏈球菌2型抗體的檢測酶聯(lián)免疫吸附法”編寫小組，

按GB/T1.12020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和

起草規(guī)則》的要求組織編寫的。計劃于2022年完成。

2、目的意義

豬鏈球菌病是通過接觸病豬或病豬產(chǎn)品引發(fā)的一種人獸共患傳

染病。病原豬鏈球菌血清型眾多，其中豬鏈球菌2型為最常見和毒力

最強的血清型。人感染豬鏈球菌主要是通過創(chuàng)口感染，導(dǎo)致腦膜炎、

中毒性休克綜合征等疾病，甚至引起死亡，帶來嚴重的公共衛(wèi)生問題。

近年來，與廣西毗連的越南和泰國等東盟國家均有報道人感染豬鏈球

菌2型并死亡的病例。美國、英國、葡萄牙、澳大利亞、荷蘭等國也

相繼出現(xiàn)了人感染豬鏈球菌的報道。在越南和我國香港地區(qū)，豬鏈球

菌已成為引起成人腦膜腦炎的第一和第三大病原。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，全

球因豬鏈球菌感染已引致400人以上死亡，其感染和發(fā)病有逐年增多

的趨勢。因此，預(yù)防豬鏈球菌病不僅是全世界養(yǎng)豬業(yè)的迫切需求，也

是全球公共衛(wèi)生急需解決的焦點問題。我國豬鏈球菌病疫情也十分嚴

峻，病原主要以豬鏈球菌2型（SS2）和馬鏈球菌獸疫亞種（SEZ）

為主。1998年夏季江蘇南通地區(qū)及2005年7月四川資陽地區(qū)，由豬

鏈球菌2型感染豬群出現(xiàn)暴發(fā)性死亡事例，并引起多名相關(guān)從業(yè)人員

死亡，一度引發(fā)極大的社會恐慌。而近幾年來，廣西人感染豬鏈球菌

1

發(fā)病數(shù)呈逐年上升趨勢，2018～2020年廣西分別有34、65、95人感

染豬鏈球菌2型并發(fā)病。廣西是養(yǎng)豬大省，年平均氣溫高、環(huán)境濕度

大，利于豬鏈球菌2型的擴散傳播，且廣西防城港、百色、崇左3個

地級市中的8個縣（市）與越南交界，陸地邊境線長1020公里。邊

境地區(qū)山林密布，野生動物眾多。越南等東南亞國家由于防控水平低，

豬鏈球菌病等人獸共患病可能通過野生動物的跨境活動和動物及動

物產(chǎn)品的非法貿(mào)易傳入廣西乃至國內(nèi)。因此，在廣西開展家畜及野生

動物豬鏈球菌檢測項目的研究，尤其是豬鏈球菌2型的研究及診斷方

法的開發(fā)。不僅能掌握野生動物攜帶豬鏈球菌的情況，更能有效遏制

東南亞疫情的傳入，對豬鏈球菌病等人獸共患病的防控具有十分重要

的意義。

動物機體在被動免疫或感染病原后會相應(yīng)產(chǎn)生特異性抗體，通過

檢測抗體，監(jiān)視其變化情況可以評價預(yù)防接種效果、協(xié)助臨床診斷、

觀察療效、判斷預(yù)后，有助于流行病學(xué)調(diào)查。及時、快速、準確的檢

測動物的豬鏈球菌2型抗體，具有重要作用。然而，當(dāng)前國內(nèi)外檢測

豬鏈球菌2型尚無統(tǒng)一的標準，各類檢測方法良莠不齊，不能對豬群

感染鏈球菌或免疫豬鏈球菌疫苗后產(chǎn)生的抗體進行有效監(jiān)測。亟需建

立一種針對豬鏈球菌2型抗體的特異性強、敏感性好、高效率、低成

本的檢測方法，從而快速診斷機體感染狀況，及時制定相應(yīng)的防控策

略，對保護易感豬群、高危人群具有非常重要的意義。

3、國內(nèi)外標準對比情況

通過檢索美國標準及英國標準未有查詢到具體的豬鏈球菌抗體

檢測相關(guān)標準。當(dāng)前，國內(nèi)外豬鏈球菌2型抗體檢測技術(shù)有瓊脂擴散

2

試驗、間接血凝、免疫膠體金檢測方法。但是，上述方法在實際應(yīng)用

中尚存在一定的不足或缺陷。如：瓊脂擴散試驗耗時太長、敏感性較

低；間接血凝試驗受電解質(zhì)、溫度、酸堿度影響較大，結(jié)果不穩(wěn)定；

免疫膠體金檢測結(jié)果不穩(wěn)定，容易出現(xiàn)假陽性和假陰性，而且沒有相

關(guān)檢測標準，影響豬鏈球菌2型抗體的準確檢測。

豬鏈球菌2型感染動物機體后會產(chǎn)生特異性抗體，酶聯(lián)免疫吸附

試驗（ELISA）通過將抗原吸附在固相載體，在載體上進行免疫酶反

應(yīng)，通過底物顯色，用分光光度計判定結(jié)果。利用抗原抗體特異性和

酶催化反應(yīng)的高靈敏性，有效的建立了豬鏈球菌2型抗體檢測方法，

操作簡便、準確性高、耗時少，適合快速檢測豬鏈球菌2型抗體，用

于家畜及野生動物豬鏈球菌2型感染流行病學(xué)調(diào)查以及疫苗免疫效

果評估。但該方法目前國內(nèi)外沒有相關(guān)的統(tǒng)一標準，本課題組制定標

準建立相應(yīng)的檢測規(guī)程，作為研究工作的重點，并承諾本標準內(nèi)容與

各項指標不低于國家強制性標準、推薦性國家標準和行業(yè)標準。

4、編制過程

（1）接到任務(wù)后，廣西動物疫病預(yù)防控制中心結(jié)合近幾年的科

研情況和人員情況，成立了以韋顯凱為組長，鄭敏、閉璟珊、周慶安、

張燦星、李軍等同志為成員的標準編制課題組，負責(zé)標準的起草工作。

（2）為了確保制定的標準具有科學(xué)性、先進性、實用性和可操

作性，標準編制課題組根據(jù)工作方案和任務(wù)要求進行了分工，分成2

個小組，其中一個小組負責(zé)做生產(chǎn)實踐的調(diào)查研究，深入到廣西南寧、

來賓、柳州、河池、梧州、賀州、玉林、北海、百色、桂林、崇左等

地一些規(guī)?；i場、散養(yǎng)戶及屠宰場進行實地調(diào)查研究，了解我區(qū)生

3

豬養(yǎng)殖鏈球菌病防控有關(guān)情況，并查閱相關(guān)的技術(shù)檔案和規(guī)章制定，

收集流行病學(xué)資料；另一個小組負責(zé)查閱國內(nèi)外豬鏈球菌檢測方面的

標準、技術(shù)資料和研究報告，并進行實驗比對。

（3）起草完成標準征求意見稿

最后課題組將兩個小組收集的材料進行匯總和整理，起草完成標

準征求意見稿。

（4）廣泛征求意見，形成網(wǎng)上征求意見稿

2022年4月將標準征求意見稿（1稿），分別送有關(guān)生產(chǎn)、技術(shù)

推廣、科研、教學(xué)和標準化等方面專家征求意見。發(fā)出征詢專家意見

表8份，收回8份，8位專家提出了修改意見65條，采納59條。根

據(jù)專家意見修改完善標準征求意見稿，形成網(wǎng)上征求意見稿。

5、關(guān)鍵技術(shù)指標依據(jù)和來源

廣西動物疫病預(yù)防控制中心長期致力于廣西地區(qū)動物疫病防控

研究，承擔(dān)了大量的疫病防控研究工作，從人員配備以及儀器設(shè)備等

均符合項目開展的需要。課題組長期承擔(dān)廣西壯族自治區(qū)動物疫病預(yù)

防控制中心業(yè)務(wù)項目《豬鏈球菌病流行病學(xué)調(diào)查與防控》，對廣西地

區(qū)生豬鏈球菌病的流行情況有系統(tǒng)深入的調(diào)查，掌握了大量第一手的

流行病學(xué)實踐數(shù)據(jù)。

為夯實制定標準的科學(xué)依據(jù)，項目組對廣西豬鏈球菌病進行了系

統(tǒng)流行病學(xué)調(diào)查及數(shù)據(jù)總結(jié),重點了解廣西生豬豬鏈球菌病的感染

率、感染強度、血清型以及耐藥性。2013～2018年，廣西動物疫病

預(yù)防控制中心承擔(dān)了國家公益性項目“豬鏈球菌病防控技術(shù)研究與示

范”的子課題，2015～2017年，承擔(dān)了原廣西水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局科技推

4

廣項目“中越邊境豬鏈球菌病防控研究與示范”。與南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)

部動物疫病診斷與免疫重點實驗室以及OIE豬鏈球菌病診斷實驗室

密切合作，對中越邊境的豬鏈球菌病進行監(jiān)測和防控。發(fā)現(xiàn)菌株GX10

對昆明小鼠和BALB/c小鼠致死率均為100%，菌株GX11對BALB/c

小鼠致死率80%，菌株GX10、GX11對BALB/c小鼠的LD50分別為

4.5×105CFU、3.6×109CFU。表明廣西BALB/c小鼠對豬鏈球菌的敏

感性高于昆明小鼠，更適合作為豬鏈球菌致病性研究動物模型，詳見

表1和表2。

表1部分菌株對昆明小鼠和BALB/c小鼠致病性試驗

Table1PathogenicitytestofdifferentstrainstoKunmingmiceandBALB/cmice

死亡數(shù)（只）

攻毒數(shù)（只）

組別血清型Numberofdeaths

Offensive

GroupSerumtype昆明小鼠BALB/c小鼠

number

KunmingmiceBALB/cmice

GX75500

GX91500

GX108555

GX112504

GX1229500

其他型其他5500

HA98012503

生理鹽水組500

5

表2對BALB/c小鼠有致病性的菌株不同濃度的毒力試驗

Table2TestofdifferentconcentrationofpathogenicbacteriainBALB/cmice

組別攻毒數(shù)（只）死亡數(shù)（只）Numberofdeaths

GroupOffensivenumberGX10GX11HA9801

原液5534

10?15423

10?25200

10?35000

生理鹽水5000

本研究建立的豬鏈球菌2型抗體ELISA方法可應(yīng)用于監(jiān)測豬群

的豬鏈球菌2型感染狀況，同時用于評估疫苗免疫后的效果。運用豬

鏈球菌2型ELISA抗體檢測試劑盒連續(xù)5年對東興市、那坡縣、大

新縣的屠宰場和免疫豬場進行豬鏈球菌2型抗體水平進行監(jiān)測，其中

屠宰場每個示范每年監(jiān)測300份血清，免疫豬場每個示范每年監(jiān)測

100份以上血清。屠宰場豬鏈球菌2型抗體平均陽性率為27.00%，免

疫豬場豬鏈球菌2型抗體平均陽性率為93.37%，屠宰場和免疫場血

清豬鏈球菌2型抗體平均陽性率差異顯著（P<0.01），詳見表3。

6

表3.2016-2020年屠宰場和免疫豬場豬鏈球菌2型抗體監(jiān)測結(jié)果

Table3.DetectionresultsofStreptococcussuistype2antibodyinslaughterhousesandimmunized

pigfarms,2016-2020

屠宰場Slaughterhouse免疫場Immunefield

樣品數(shù)陽性率（%）陽性率（%）

陽性數(shù)樣品數(shù)陽性數(shù)

年份YearSamplenuPositiveinciPositiveinci

PositiveSamplenuPositive

mberdence（%）dence（%）

numbermbernumber

201690024927.6738035292.63

201790024627.3336534193.42

201890022625.1135032693.14

201990023826.4434031291.76

202090025628.4436034595.83

合計4500121527.00a1795167693.37b

注：標注不同字母代表P<0.01，差異極顯著。

此外還通過向各地養(yǎng)殖場(戶)發(fā)放調(diào)查表格,調(diào)查生豬發(fā)病情況,

同時到各縣市的動物疫病預(yù)防控制中心調(diào)查當(dāng)?shù)厣i發(fā)病情況記載、

疫情報告表和檢疫記載等，并采集樣品檢測豬鏈球菌2型和常見豬病

的混合感染狀況。綜合流行病學(xué)調(diào)查以及實驗室檢測，發(fā)現(xiàn)在豬常見

7

疾病中，鏈球菌2型病感染率僅次于PCV2、PRRSV，平均感染率達

10.88%，其中在發(fā)病場和屠宰場的檢出率分別為11.84%和10.11%。

詳見表4。

表46種疫病檢測結(jié)果

Table4Resultof2diseasedetection

樣品來樣品SS2陽性CSFV陽PRRSV陽PEDVPCV2陽PRV陽

源數(shù)目率性率性率陽性率性率性率

sampleSampl(%)positv(%)positv(%)positve(%)posi(%)positve(%)positv

sourceeerateerateratetveraterateerate

numbe

r

發(fā)病場

morbidit15211.84(18)1.97(3)16.45(25)034.21(52)3.95(6)

yfarms

屠宰場

slaughte18810.11(19)0.53(1)11.17(21)043.09(81)0(0)

rhouses

合計34010.88(37)1.18(4)13.53(46)039.12(133)1.76(6)

分析SS2和病毒混合感染情況，在發(fā)病場中，PCV2和其他病原

的混合感染最為多見。其中，感染最高的是CSFV+PCV2，達到3.95%，

其次為PRRSV+PCV2，陽性率為3.29%，PCV2+SS2的陽性率為1.31%。

8

屠宰場二重感染較多的感染最高的是PRRSV+PCV2，達到2.66%，

其次為PCV2+SS2，陽性率為1.06%。詳見表5?

表5二重感染情況

Table5Statusofdoubleinfection

檢測項目發(fā)病場morbidityfarms屠宰場slaughterhouses合計total

Dtection樣品數(shù)陽性數(shù)陽性率樣品數(shù)陽性數(shù)陽性率陽性數(shù)陽性率

itemSamplepositive(%)Samplepositive(%)positive(%)

numbernumberpositvenumbernumberpositvenumberpositve

rateraterate

PCV2+SS221.3121.0641.17

PRRSV+C

10.6610.5320.59

SFV

PRRSV+P152188

53.2952.66102.94

CV2

CSFV+PC

63.950061.76

V2

本研究選取了平果縣的的鳳梧鄉(xiāng)百豐村興隆土豬養(yǎng)殖場、坡造鎮(zhèn)

綠德村布覺屯潘福春豬場以及四塘鎮(zhèn)紅福養(yǎng)豬場作為免疫示范豬場

進行免疫，跟蹤研究免疫抗體水平產(chǎn)生規(guī)律。使用豬鏈球菌2型

9

ELISA抗體檢測試劑盒對3個豬場，不同時間階段的180份豬血清進

行豬鏈球菌2型抗體的檢測。檢測結(jié)果如表6。實驗結(jié)果表明，仔豬

注射豬鏈球菌2型疫苗后能夠產(chǎn)生豬鏈球菌2型抗體，且免疫30d

后，抗體水平最高，免疫60d后抗體水平逐漸降低。如果仔豬不進

行豬鏈球菌疫苗免疫，仍然能夠產(chǎn)生豬鏈球菌2型抗體，但抗體水平

較低。

表6豬血清樣品的豬鏈球菌2型抗體的ELISA檢測結(jié)果

Table6TheresultsofELISAdetectionofstreptococci2antibodiesinpigserumsamples

組別二免前Beforethe二免后30天30days二免后60天60

一免前Beforethe

Groupsecondaftertheseconddaysafterthesecond

firstimmunization

immunizationexemptionexemption

抗體

陽性抗體陽抗體陽

抗體陽

數(shù)抗體陽性性數(shù)抗體陽性抗體陽性抗體陽性性率

性數(shù)

Antib率（%）Antibo率（%）率（%）數(shù)（%）

Antibod

odyAntibodydyAntibodyAntibodyAntibodyAntibod

y

positipositivepositivpositivepositivepositivey