細(xì)胞免疫功能檢測(cè)常用有哪幾種方法細(xì)胞免疫（CMⅠ）是由多種細(xì)胞相互作用的結(jié)果。免疫細(xì)胞間相互作用導(dǎo)致多種細(xì)胞因子的釋放。因此細(xì)胞功能測(cè)定不僅涉及T細(xì)胞的數(shù)量和功能與包括各類(lèi)因子活性測(cè)定，因此評(píng)價(jià)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能不僅程序復(fù)雜，且很難標(biāo)準(zhǔn)化。一、遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)的體外檢測(cè)方法皮膚試驗(yàn)和接觸性過(guò)敏的誘發(fā)是檢測(cè)遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)（DTH）的兩種常用方法。皮膚試驗(yàn)中誘發(fā)對(duì)曾經(jīng)使病人致敏的抗原的再次應(yīng)答，而接觸性過(guò)敏是測(cè)試受者對(duì)從未接觸過(guò)的物質(zhì)發(fā)生致敏的能力。1．皮膚試驗(yàn)用皮膚試驗(yàn)診斷DTH，常用的抗原有結(jié)核菌純蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類(lèi)試驗(yàn)時(shí)在前臂皮內(nèi)注射少量可溶性抗原，24～48小后，測(cè)量紅腫硬結(jié)的大小，硬結(jié)直徑大于10mm即被看作為陽(yáng)性。表明受試者對(duì)該病原菌有了一定的細(xì)胞免疫能力，若皮試無(wú)反應(yīng)，可用更高濃度的抗原重復(fù)試驗(yàn)，若仍無(wú)反應(yīng)即為陰性，需排除皮試技術(shù)誤差，也可能受試者從未接觸過(guò)此抗原，也可能由于細(xì)胞免疫功能缺損，或由于細(xì)胞免疫功能缺損，或由于嚴(yán)重感染（麻疹、慢性播散性結(jié)核）造成的無(wú)反應(yīng)性。2．接觸性過(guò)敏常應(yīng)用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）誘生接觸性過(guò)敏?；衔锱c皮膚蛋白質(zhì)結(jié)合而導(dǎo)致DTH反應(yīng)。在動(dòng)物試驗(yàn)時(shí)，初次皮膚上涂抹DNCB后間隔7～10天再激發(fā)刺激，則皮膚出現(xiàn)即為陽(yáng)性。此試驗(yàn)人類(lèi)已不使用。二、細(xì)胞免疫的體外檢測(cè)方法體外檢測(cè)淋巴細(xì)胞的數(shù)量和功能，最易采集的是血標(biāo)本，首先需分離或純化淋巴細(xì)胞，一般使用葡聚糖-泛酰葡胺配成比重為1.077的淋巴細(xì)胞分層液，當(dāng)將血液重疊于淋巴細(xì)胞分層液之上離心時(shí)，由于紅細(xì)胞（1.092）、多形核白細(xì)胞（1.090）、淋巴細(xì)胞（1.070）的比重不同而相互分開(kāi)。淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞在血漿和分泌液交界處形成一薄層。仔細(xì)分出這一薄層的細(xì)胞，其中淋巴細(xì)胞占80%，單核細(xì)胞占20%，淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞占80%，B細(xì)胞占4%～10%，其作為非DT、非B細(xì)胞。1．T細(xì)胞計(jì)數(shù)

（1）E花環(huán)法：人類(lèi)T細(xì)胞表面有SRBC受體（CD2）能與SRBC結(jié)合形成玫瑰花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，將經(jīng)分層液分離的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經(jīng)37℃培養(yǎng)5～10分鐘放4℃過(guò)夜，取細(xì)胞懸計(jì)數(shù)，外周血淋巴細(xì)胞中約70%～80%淋巴細(xì)胞結(jié)成花環(huán)即為T(mén)細(xì)胞。目前此方法已用來(lái)分離T細(xì)胞，而不用做T細(xì)胞計(jì)數(shù)。（2）用單克隆抗體計(jì)數(shù)T細(xì)胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細(xì)胞結(jié)合，再用FITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進(jìn)行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細(xì)胞稱為CD3細(xì)胞即總T細(xì)胞。正常人在PBM中T細(xì)胞占70%～80%。正常人的CD4細(xì)胞和CD8細(xì)胞之和應(yīng)與CD3細(xì)胞數(shù)一致。CD4細(xì)胞與CD8細(xì)胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小于1.7。2．T細(xì)胞活化試驗(yàn)T細(xì)胞能被非特異的物質(zhì)稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。T細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質(zhì)的合成增加，最終導(dǎo)致細(xì)胞分裂。在光學(xué)顯微鏡下可計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化后的淋巴細(xì)胞數(shù)，也可用氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）摻入正在分裂的淋巴細(xì)胞，用液閃測(cè)定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細(xì)胞，用液測(cè)量?jī)x檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測(cè)量的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的檢查法，稱為MTT檢測(cè)法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細(xì)胞線粒體脫氫酶的底物，細(xì)胞內(nèi)的酶可將MTT分解產(chǎn)生藍(lán)黑色甲（fromazan）產(chǎn)物。該產(chǎn)物的多少與活性細(xì)胞數(shù)正相關(guān)。結(jié)果可用酶標(biāo)檢測(cè)儀（595mm）測(cè)量匯豐銀行密度，作為MTT法的檢查指標(biāo)。此法的結(jié)果與3H-TdR摻入法平行，并能反應(yīng)試驗(yàn)中的活細(xì)胞數(shù)。3．細(xì)胞毒試驗(yàn)TC細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞、TIL細(xì)胞對(duì)其靶細(xì)胞有直接的細(xì)胞毒（殺傷）作用。常用的檢測(cè)細(xì)胞毒效應(yīng)的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細(xì)胞混合，于37℃培養(yǎng)1小時(shí)左右，51Cr即可進(jìn)入靶細(xì)胞，與胞漿蛋白結(jié)合，洗去游離的51Cr后，即可得到51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞，將待檢細(xì)胞毒性的細(xì)胞與51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞混合（比例約為50:1或100:1）靶細(xì)胞被殺傷越多，釋放到上清液中的液游離的51Cr越多，且不能被其他細(xì)胞吸收。用γ射線測(cè)量?jī)x檢測(cè)上清液中的cpm值，即可計(jì)算出待檢細(xì)胞殺傷活性的高低。細(xì)胞毒試驗(yàn)檢測(cè)Tc細(xì)胞效應(yīng)功能是否健全，及經(jīng)IgG介導(dǎo)的ADCC效應(yīng)，或NK細(xì)胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。4．混合淋巴細(xì)胞的反應(yīng)（MIR）是體外研究T細(xì)胞的較好的方法，雙向MLR常被用來(lái)篩選骨髓移植的供體。來(lái)自不同供體的淋巴細(xì)胞分別與病人的淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)4～5天，在最后8小時(shí)摻入51TdR摻入法測(cè)T細(xì)胞的反應(yīng)性?；蛴眉?xì)胞毒法觀察受刺激的T細(xì)胞與活的靶細(xì)胞混合（靶細(xì)胞來(lái)自與刺激細(xì)胞相同的個(gè)體）如果T細(xì)胞受刺激后產(chǎn)生了細(xì)胞毒T細(xì)胞，可殺死活的細(xì)胞，根據(jù)靶細(xì)胞釋放51Cr的多少算出T細(xì)胞移動(dòng)抑制因子）和LIF（白細(xì)胞移動(dòng)抑制因子）來(lái)評(píng)估細(xì)胞免疫功能。近年來(lái)應(yīng)用測(cè)定IL-2的免疫酶技術(shù)，操作簡(jiǎn)單，并能定量已取代了MIF和LIF的測(cè)定。單個(gè)核細(xì)胞與分裂原一起培養(yǎng)24小時(shí)，然后測(cè)定清液中的IL-2活性。在細(xì)胞免疫功能缺損時(shí)，特別是AIDS病人，IL-2分泌明顯降低。而有些疾病，如多發(fā)性硬化、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)等病人體內(nèi)血清中IL-2水平升高，表明病人T細(xì)胞活性增高。發(fā)生移植排斥反應(yīng)的病人尿中IL-2也可升高。也可用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定各種體液中活化的T細(xì)胞脫落的IL-2受體（CD25），一般來(lái)說(shuō)IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的，IL-2和IL-2受體的檢測(cè)可用于對(duì)某些疾病的監(jiān)測(cè)，如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞因子產(chǎn)生能力檢測(cè)是檢查細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子的生物活性或抗原性