《雞血藤中原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素的測(cè)定-高效液相色譜法》編制說明柄花素的測(cè)定-高效液相色譜法〉等5項(xiàng)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制定計(jì)劃的預(yù)通知》(桂質(zhì)協(xié)字〔2025〕19號(hào))文件精神，由廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院提出，金秀瑤族芒柄花素的測(cè)定-高效液相色譜法》(項(xiàng)目編號(hào)：2024-0203)。方標(biāo)準(zhǔn)，如《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(第二卷)和《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)》第五期等?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2020年版載雞血藤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有性(一)成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作組標(biāo)準(zhǔn)主要起草人員人員姓名負(fù)責(zé)人研究員中醫(yī)學(xué)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院主要參加人員胡仁傳副研究員民族植物學(xué)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院張穎副主任藥師中藥化學(xué)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院助理研究員廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院主任藥師中藥資源學(xué)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院金秀瑤族自治縣大健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心副院長(zhǎng)瑤醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究金秀瑤族自治縣瑤醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院院長(zhǎng)瑤醫(yī)藥臨床金秀瑤族自治縣瑤醫(yī)醫(yī)院研究員中藥學(xué)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院馮軍副主任藥師廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院李星宇副主任藥師藥理學(xué)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院副院長(zhǎng)中醫(yī)學(xué)/瑤醫(yī)藥臨床金秀瑤族自治縣瑤醫(yī)醫(yī)院屈信成副主任藥師中藥鑒定廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院研究實(shí)習(xí)員分子鑒定廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院王倩云研究實(shí)習(xí)員中藥鑒定廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院副主任金秀瑤族自治縣大健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心品牌建設(shè)股股長(zhǎng)金秀瑤族自治縣大健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心霍娟娟金秀瑤族自治縣大健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心覃飛辦公室副主任瑤醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究金秀瑤族自治縣瑤醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院二級(jí)主任科員瑤醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究金秀瑤族自治縣瑤醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院覃鈺凌中藥士中藥學(xué)金秀瑤族自治縣瑤醫(yī)醫(yī)院韋壹靈中藥學(xué)金秀瑤族自治縣瑤醫(yī)醫(yī)院(二)收集整理文獻(xiàn)資料《中國(guó)藥典》(2020年版)《廣西壯族自治區(qū)瑤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(第一卷)雞血藤九層風(fēng)(坐掌崩)《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(第二卷)雞血藤(勾勒給)《團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)》T/GXAS459-2023《地方標(biāo)準(zhǔn)》DB44/T2234-2020雞血藤林下栽培技術(shù)規(guī)程(三)研討確定標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)編制工作組在對(duì)收集的資料進(jìn)行整理研究之后，2025年召開標(biāo)準(zhǔn)編制(四)調(diào)研及形成征求意見稿、送審稿2025年4月，在前期工作的基礎(chǔ)上，通過理清邏輯脈絡(luò)，整合相關(guān)的雞血測(cè)定-高效液相色譜法》(草案)2025年5月，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組在廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院會(huì)議室組織的測(cè)定-高效液相色譜法》(草案)進(jìn)行征求意見會(huì)。最終討論形成團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《雞血藤中原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素的測(cè)定-高效液相色譜法》(征求意見稿)和編制說明。測(cè)定-高效液相色譜法中的雞血藤、含量測(cè)定、高效液相色譜等的術(shù)語和定義、(一)標(biāo)準(zhǔn)涉及的技術(shù)原理及依據(jù)定量分析：按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則0512的規(guī)定測(cè)(二)標(biāo)準(zhǔn)涉及技術(shù)的具體實(shí)施方案總計(jì)17批，經(jīng)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院胡仁傳副研究員鑒定為豆科植物密編號(hào)采集時(shí)間金秀瑤族自治縣三角鄉(xiāng)大橋屯金秀瑤族自治縣羅香鄉(xiāng)百色市龍川鎮(zhèn)百色市龍川鎮(zhèn)防城港市防城區(qū)防城港市上思縣百色市田林縣百色市隆林各族自治縣崇左市天等縣百色市那坡縣老撾12.儀器與試劑儀器：AgiLent1260高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司),電子天平XSR205DU(梅特勒-托利多公司),水浴鍋HH-6(國(guó)華常州儀器制造有限公司),超聲波清洗器KS-3200DE(昆山潔力美超聲儀器有限公司),手提式高速粉碎機(jī)DFY-500C(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)。試劑：原兒茶酸(批號(hào)：110808-202207,純度98.0%)、兒茶素(批號(hào)：110877-202306,純度98.0%)、表兒茶素(批號(hào)：110878-201703,純度98.0%)、芒柄花素(批號(hào)：111703-202401,純度98.0%)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。3.1供試品溶液制備取雞血藤藥材粉末1g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入二氯甲烷-甲醇(4:1)50ml,稱量，超聲處理(功率100W,頻率40kHz)60min,放冷，用二氯甲烷-甲醇(4:1)補(bǔ)足減失的量，搖勻，過濾，減壓濃縮至干，甲醇溶解并定容至5ml,0.22um微孔濾膜過濾，即得。3.2對(duì)照品溶液制備精密稱取原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素適量，用甲醇超聲(功率100W,頻率40kHz)溶解并定容，制得質(zhì)量濃度分別為2.57、2.58、48.07、2.50mg/ml的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液。原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素質(zhì)量濃度分別為0.129、0.129、2.404、0.125mg/mL。3.3色譜條件3.3.1流動(dòng)相的選擇分別考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸水溶液體系，結(jié)果以乙腈-磷酸水溶液體系得到的保留時(shí)間適中，色譜圖峰形較好。經(jīng)對(duì)比梯度和等度兩種洗脫方式，發(fā)現(xiàn)乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脫時(shí)供試品中原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素色譜峰對(duì)稱因子在0.95至1.05之間，峰形良好，且與其他成分的分離度大于1.5,結(jié)果穩(wěn)定，符合分析要求。故選擇乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脫進(jìn)行分析，見表2。時(shí)間(min)乙腈(%)0.2%磷酸水(%)0599利用二極管陣列檢測(cè)器在210~400nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)4個(gè)成分的最大吸收波長(zhǎng)分別為260、279、279、277nm,故本實(shí)驗(yàn)選0供試品分別采用TechmateSTC18(4.6mm×250mm,5μm)、AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，DAD檢測(cè)器),相同的色譜條件下平行進(jìn)樣，進(jìn)樣離，其中以TechmateSTC18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱的分離效果及峰綜上，色譜條件：TechmateSTC18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱；流柱溫為30℃。3.4方法學(xué)驗(yàn)證取混合對(duì)照品溶液適量，加甲醇稀釋后定容，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以對(duì)照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表3?；貧w方程r線性范圍/(mg/mL)原兒茶酸兒茶素芒柄花素00進(jìn)樣濃度(mg/ml)R2=0.9995.0圖3兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線峰面積峰面積0進(jìn)樣濃度(mg/ml)0圖4表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線00取混合對(duì)照品溶液適量，按“3.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，計(jì)算得到原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素峰面積的RSD分別為0.83%、0.75%、0.46%、0.52%,表明儀器精密度良好。3.4.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一批雞血藤供試品(S1)6份，按“3.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素峰面積的RSD分別為1.86%、1.73%、1.15%、1.47%,表明該方法重復(fù)性良好。取雞血藤供試品溶液(S1),分別于0、2、4、8、16、24h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素峰面積的RSD分別為0.85%、0.68%、0.38%、0.55%,表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。精密稱取已知成分含量的雞血藤供試品(S1)1g,共6份，按100%的比例加入各對(duì)照品，按“3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“3.3”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算上述4個(gè)成分平均加樣回收率分別為99.20%、98.61%、99.39%、100.04%,RSD分別為0.80%、0.44%、0.76%、1.10%,表明方法準(zhǔn)確度良好，結(jié)果見表4。測(cè)得量/mg原兒茶酸兒茶素芒柄花素3.4.6樣品含量測(cè)定件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣品中4個(gè)成分的含量，結(jié)果見表5。編號(hào)原兒茶酸兒茶素芒柄花素1324五、國(guó)內(nèi)外同類標(biāo)準(zhǔn)制修訂情況與法律