一、工作簡(jiǎn)況

1任務(wù)來源

根據(jù)2022年自然資源部下發(fā)的《關(guān)于印發(fā)2022年度自然資源標(biāo)準(zhǔn)制修訂

工作計(jì)劃的通知》（自然資辦發(fā)[2022]39號(hào)），由自然資源部第三海洋研究所、國(guó)

家海洋標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量中心和福建中益制藥有限公司制定的《海藻中巖藻黃質(zhì)的測(cè)定方

法高效液相色譜法》（立項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)202222009）行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

2制定背景

巖藻黃質(zhì)（Fμcoxanthin）是一種含量豐富的海洋天然類胡蘿卜素，廣泛存

在于海帶、羊棲菜、裙帶菜、銅藻等大型褐藻中。由于具有特殊的環(huán)氧及丙二烯

鍵結(jié)構(gòu)，使得巖藻黃質(zhì)具有很強(qiáng)的生物活性，包括抗腫瘤、抗炎、抗氧化、減肥

等多種生物活性。首先在抗腫瘤方面，1990年Okμzμmi等首次報(bào)道，巖藻黃質(zhì)

10μg/mL孵育3天后可降低62%的成人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株(GOTO)的增殖。

Okμztllni等研究證實(shí)巖藻黃質(zhì)可抑制由強(qiáng)皮膚促癌物十四烷酞佛波醋酸酷(TPA)

誘導(dǎo)的小鼠表皮鳥氨酸脫羧酶活性增強(qiáng)，據(jù)此推測(cè)其可能對(duì)皮膚癌有抑制作用。

1993年okμzμmi等報(bào)道，巖藻黃質(zhì)對(duì)N-乙基-N'-硝基-亞硝基胍誘導(dǎo)的十二指腸

癌形成具有抑制作用。Masashi等報(bào)道了巖藻黃質(zhì)對(duì)急性髓性白血病HL-60細(xì)胞

株的作用，結(jié)果顯示巖藻黃質(zhì)對(duì)HL-60細(xì)胞可發(fā)揮顯著的增殖抑制作用。Elichi

等研究發(fā)現(xiàn)巖藻黃質(zhì)可明顯降低前列腺癌細(xì)胞存活率，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Swadesh

K等人研究發(fā)現(xiàn)巖藻黃質(zhì)對(duì)人肝癌HePG2細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用，因此，巖

藻黃質(zhì)對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有不同程度的抑制作用。其次，研究發(fā)現(xiàn)巖藻黃質(zhì)還具

體外抗氧化活性，其抗氧化活性甚至強(qiáng)于維生素C和E。此外，Kenjis等發(fā)現(xiàn)質(zhì)

抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的大鼠眼葡萄膜炎(Elμ)，且其抗炎作用與尼松龍相當(dāng)。特別是近

年來研究發(fā)現(xiàn)，巖藻黃質(zhì)能夠顯著地燃燒脂肪細(xì)胞，消除脂肪堆積的作用，從而

起到顯著的減肥效果，更使巖藻黃質(zhì)在減肥藥市場(chǎng)中占據(jù)重要的地位，因此，巖

藻黃質(zhì)是一個(gè)用途廣泛的海洋生物活性物質(zhì)。

巖藻黃質(zhì)作為褐藻中一個(gè)重要的生物活性成分，潛在巨大開發(fā)應(yīng)用價(jià)值，

1

可作為評(píng)判藻類質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)性成分。然而，由于目前尚未有海藻中巖藻

黃質(zhì)的測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)，無法為藻類質(zhì)量評(píng)判提供統(tǒng)一規(guī)范的檢測(cè)方法，因此，迫

切需要制定不同海藻中巖藻黃質(zhì)含量測(cè)定方法。本項(xiàng)目擬制定海藻中巖藻黃質(zhì)的

測(cè)定方法-高效液相色譜法，為藻類質(zhì)量評(píng)判提供一種客觀、準(zhǔn)確、規(guī)范的方法，

為海藻中巖藻黃質(zhì)的開發(fā)利用提供重要參考依據(jù)，促進(jìn)海藻的開發(fā)利用，提升標(biāo)

準(zhǔn)在海藻開發(fā)利用的支撐作用。

3主要工作過程、標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所做的工作

3.1主要工作過程

自接到任務(wù)通知之日起，本標(biāo)準(zhǔn)草案編制的主要工作過程如下：

（1）準(zhǔn)備階段（2022年9月～2022年12月）

該階段主要工作是會(huì)同參加起草單位成立標(biāo)準(zhǔn)起草工作組，明確各參與起草

單位和主要起草人的分工，并制定工作方案。標(biāo)準(zhǔn)的主要起草人對(duì)過去各自的實(shí)

際操作經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行了總結(jié)和交流，同時(shí)查閱國(guó)內(nèi)外最新的相關(guān)文獻(xiàn)資料，為標(biāo)準(zhǔn)起

草做好充分準(zhǔn)備。

（2）標(biāo)準(zhǔn)起草階段（2023年1月～2024年6月）

根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)涉及到的關(guān)鍵問題展開一系列實(shí)驗(yàn)。對(duì)測(cè)定巖藻黃質(zhì)的液相色譜

條件的摸索，對(duì)海帶、羊棲菜、裙帶菜和銅藻中巖藻黃質(zhì)的提取方法中的提取溶

劑、提取次數(shù)、料液比等樣品提取步驟進(jìn)行優(yōu)化，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在本標(biāo)準(zhǔn)中給出

推薦的方法，提高了本標(biāo)準(zhǔn)的適用性和可操作性。在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過主要

起草人之間的實(shí)踐工作與經(jīng)驗(yàn)的交流和討論，完成驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)和報(bào)告、完成了標(biāo)準(zhǔn)

文本和標(biāo)準(zhǔn)編制說明的編制。

3.2標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所做工作

張怡評(píng)(自然資源部第三海洋研究所)：負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)的總體框架設(shè)計(jì)，負(fù)責(zé)資料

收集，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的編寫。

陳偉珠(自然資源部第三海洋研究所)：負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的整體審核，負(fù)責(zé)

標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的審核和修改，參與標(biāo)準(zhǔn)的總體框架設(shè)計(jì)、參與標(biāo)準(zhǔn)草

2

案編寫和編制說明的編寫。

朱宇珍(南方海洋科學(xué)與工程廣東省實(shí)驗(yàn)室(湛江))：參與標(biāo)準(zhǔn)的總體框架設(shè)

計(jì)，參與標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的審核和修改。

戚怡(廣東醫(yī)科大學(xué)、廣東湛江海洋醫(yī)藥研究院)：參與標(biāo)準(zhǔn)的總體框架設(shè)計(jì)，

參與標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的審核和修改。

吳科鋒(廣東醫(yī)科大學(xué)、廣東湛江海洋醫(yī)藥研究院)：參與標(biāo)準(zhǔn)的總體框架設(shè)

計(jì)，參與標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的審核和修改。

楊婷(自然資源部第三海洋研究所):負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)編制前樣品提取方法、色譜條

件等實(shí)驗(yàn)分析。

洪專(自然資源部第三海洋研究所)：參與標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的審核和

修改。

袁玲玲(國(guó)家海洋標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量中心)：參與標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的審核和修

改。

晉文慧(自然資源部第三海洋研究所)：參與前樣品提取方法、色譜條件等實(shí)

驗(yàn)分析。

蔡德（廣東醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院）：參與標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的審核

和修改。

方華(自然資源部第三海洋研究所)：參與標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的審核和

修改。

邱遠(yuǎn)望（福建中益制藥有限公司）：參與標(biāo)準(zhǔn)的總體框架設(shè)計(jì)，參與標(biāo)準(zhǔn)草

案編寫和編制說明的審核和修改。

陳暉(自然資源部第三海洋研究所)：參與標(biāo)準(zhǔn)草案編寫和編制說明的審核和

修改。

二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容

1編制原則

1.1與相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的一致性

目前尚未有海藻中巖藻黃質(zhì)的測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)，本標(biāo)準(zhǔn)的制定填補(bǔ)了巖藻黃質(zhì)

3

測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)的空白，豐富了海藻標(biāo)準(zhǔn)體系，有利于海藻產(chǎn)業(yè)的開發(fā)。

1.2適用性

本標(biāo)準(zhǔn)充分考慮了液相色譜的工作原理及特點(diǎn)，同時(shí)兼顧該儀器使用的環(huán)境、

檢測(cè)條件，可廣泛應(yīng)用于海藻中巖藻黃質(zhì)的定量定性分析。

1.3目的性

本標(biāo)準(zhǔn)的制定準(zhǔn)確地測(cè)定海藻中巖藻黃質(zhì)含量，為海藻中巖藻黃質(zhì)指標(biāo)性成

分評(píng)價(jià)提供統(tǒng)一規(guī)范的方法，其更好地應(yīng)用于生活和生產(chǎn)中，促進(jìn)海藻相關(guān)產(chǎn)品

的開發(fā)，增強(qiáng)海藻產(chǎn)業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力。

2.確定標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容的論據(jù)和理由

海帶、羊棲菜和裙帶菜經(jīng)一定比例的甲醇水溶液，銅藻經(jīng)一定比例的乙醇水

溶液提取后的巖藻黃質(zhì)，可通過C18反相分離，用紫外檢測(cè)器在450nm吸收波

長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)色譜圖中巖藻黃質(zhì)的保留時(shí)間、峰面積與巖藻黃質(zhì)對(duì)照品的保

留時(shí)間、峰面積進(jìn)行對(duì)比，實(shí)現(xiàn)定性和定量分析。

2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

目的：為了選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng)，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。

實(shí)驗(yàn)方法：對(duì)巖藻黃質(zhì)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如圖1a巖藻黃質(zhì)光譜圖，圖1b巖藻黃質(zhì)色譜圖所示，巖藻黃質(zhì)

最大吸收波長(zhǎng)為450nm，與文獻(xiàn)一致，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)450nm。

6.155提取的

1.40

1.40

1.35

1.35

1.30

1.30

1.25

1.25

1.20

1.20

1.15

1.15

451.1

1.106.149

1.10

1.05

1.05

1.00

1.00

0.95

0.95

0.90

0.90

0.85

0.85

0.80

0.80

0.750.75

0.700.70

AU

AU

0.650.65

0.600.60

0.550.55

0.500.50

0.450.45

0.400.40

0.350.35

0.300.30

0.25266.60.25

0.200.20

0.150.15

333.2

0.100.10

0.050.05

721.2

0.000.00

-0.05-0.05

250.00300.00350.00400.00450.00500.00550.00600.00650.00700.00750.00800.000.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.00

納米分鐘

ab

4

圖1巖藻黃質(zhì)光譜圖（a）色譜圖（b）

2.2柱子的選擇

目的：為了選擇合適的柱子，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。

實(shí)驗(yàn)方法：在流動(dòng)相為甲醇/水(V/V,90/10)、流速是1mL/min、25℃條件下

分別考察不同填料型號(hào)的色譜柱對(duì)巖藻黃質(zhì)及其雜質(zhì)的分離效果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：由表1所示，在相同的色譜條件下，巖藻黃質(zhì)及其雜質(zhì)在三種不

同色譜柱上的分離度均達(dá)到1.5，理論塔板數(shù)均高于5000，但是樣品在Agilent

SB-C18和RD-C18（5μm）這兩根柱子保留時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，因此選擇Themo

HypersilGOLD作為檢測(cè)色譜柱。

表1提取的巖藻黃質(zhì)樣品在不同填料色譜柱條件下的分離結(jié)果

色譜柱出峰時(shí)間min塔板數(shù)*104分離度

AgilentSB-C1811.810.778.78

AgilentSB-C1811.610.699.46

中譜紅RD-C18（5μm）12.411.174.79

中譜紅RD-C18（5μm）12.401.1612.67

ThemoHypersilGOLD6.101.254.43

ThemoHypersilGOLD6.081.234.15

2.3流動(dòng)相比例的選擇

目的：為了選擇合適的流動(dòng)相，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。

實(shí)驗(yàn)方法：在色譜柱為ThemoHypersilGOLD、流速1mL/min和25℃常溫

條件下，分別考察不同流動(dòng)相為甲醇/水（V/V，85/15、90/10、95/5）對(duì)銅藻中提

取巖藻黃質(zhì)的分離效果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：由表2所示，甲醇與水的不同比例作為流動(dòng)相，其中甲醇/水(V/V,

85/15)的分離度最大但同時(shí)保留時(shí)間較長(zhǎng)，甲醇/水90/10的比例保留時(shí)間相對(duì)較

短，分離度，塔板數(shù)均高于流動(dòng)相甲醇/水（V/V，95/5），因此選擇甲醇/水（V/V，

90/10）。

表2提取的巖藻黃質(zhì)樣品在不同流動(dòng)相條件下的分離結(jié)果

不同流動(dòng)相比例出峰時(shí)間min塔板數(shù)*104分離度

甲醇：/水(V/V,85/15)11.241.115.30

甲醇：/水(V/V,90/10)11.271.143.10

甲醇：/水(V/V,90/10)5.861.202.22

甲醇：/水(V/V,90/10)5.861.211.96

甲醇：/水(V/V,95/5)4.090.481.68

5

甲醇：/水(V/V,95/5)4.100.491.75

2.4柱溫的選擇

目的：為了選擇合適的柱溫，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。

實(shí)驗(yàn)方法：在色譜柱為ThemoHypersilGOLD、流速1mL/min和流動(dòng)相為甲

醇/水(V/V,90/10)條件下分別考察不同柱溫（25℃、30℃、35℃）對(duì)銅藻中提取

巖藻黃質(zhì)的分離效果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：由表3所示，25℃、30℃和35℃條件下，樣品分離度也均達(dá)到

1.5，理論塔板數(shù)均高于5000，因此選擇柱溫選擇25℃。

表3提取的巖藻黃質(zhì)樣品在不同柱溫條件的分離結(jié)果

柱溫℃出峰時(shí)間min塔板數(shù)*104分離度

25℃5.861.202.42

25℃5.871.192.12

305.641.272.19

305.651.272.37

355.381.371.69

355.411.341.81

2.5流速的選擇

目的：為了選擇合適的流速，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。

實(shí)驗(yàn)方法：在色譜柱為ThemoHypersilGOLD、流動(dòng)相為甲醇/水(V/V，90/10)

何柱溫25℃條件下，分別考察不同流速（0.80、1.00、1.20mL/min）對(duì)銅藻提取

的巖藻黃質(zhì)的分離效果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：由表4所示，在不同流速條件下，理論塔板數(shù)均高于5000，隨

著流速的加大，樣品保留時(shí)間縮短，但分離度下降，流速為1.2mL/min時(shí)分離

度最小，因此流速選擇常規(guī)的1mL/min。

表4提取的巖藻黃質(zhì)樣品在不同流速條件的分離結(jié)果

流速mL/min出峰時(shí)間min塔板數(shù)*104分離度

0.87.441.382.82

0.87.421.372.71

15.901.192.38

15.881.212.24

1.24.921.081.61

1.24.921.081.03

6

2.6前處理方法的優(yōu)化

目的：為了尋找合適的前處理方法，提高海藻中巖藻黃質(zhì)的提取得率。

實(shí)驗(yàn)方法：選取海帶、裙帶菜、羊棲菜和銅藻為海藻代表，采用超聲提取法

提取海帶、裙帶菜、羊棲菜中的巖藻黃質(zhì)，通過單因素實(shí)驗(yàn)考察了提取方式、提

取溶劑、提取時(shí)間、料液比和提取次數(shù)對(duì)樣品中巖藻黃質(zhì)提取得率的影響；采用

水浴回流法提取銅藻中的巖藻黃質(zhì)，基于單因素實(shí)試驗(yàn)結(jié)果，采用回流提取方法，

以乙醇濃度、提取溫度、提取時(shí)間、料液比為自變量，選取最優(yōu)條件設(shè)計(jì)銅藻巖

藻黃質(zhì)提取工藝的響應(yīng)面試驗(yàn)，確定最佳提取工藝。

2.6.1海帶中巖藻黃質(zhì)提取工藝研究

1單因素實(shí)驗(yàn)

1.1考察不同提取方式對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響：

精密稱取2.00g（精確到0.01g）干海帶粉2份，按順序編號(hào)，固定料液

比為1:25，分別加入甲醇溶液50mL，一份90℃回流提取30min，另一份超聲

提取30min，分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲

醇定容至50mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為

試樣溶液進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其巖藻黃質(zhì)含量。

60.00

）50.00

ug/g

40.00

30.00

20.00

10.00

海帶中巖藻黃質(zhì)含量（

0.00

超聲回流

提取方式

圖2不同提取方式對(duì)海帶中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖2所示，超聲提取和加熱回流提取兩種不同的提取方式對(duì)海帶中巖藻

黃質(zhì)含量的影響相差不大。加熱回流提取的提取得率略高于超聲提取，考慮到

實(shí)際操作的方便性，選擇超聲提取法作為海帶中巖藻黃質(zhì)提取的方法進(jìn)行后續(xù)

7

實(shí)驗(yàn)。

1.2考察不同提取溶劑對(duì)海帶中巖藻黃質(zhì)提取率的影響

精密稱取2.00g（精確到0.01g）海帶粉2份，按順序編號(hào)，固定料液比為

1:25，分別加入甲醇和乙醇溶液50mL超聲提取30min，分別濾紙過濾，濾液

轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，各取1mL樣品

溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后差重，混

勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃質(zhì)含量。

50.00

45.00

）

40.00

ug/g35.00

30.00

25.00

20.00

15.00

10.00

海帶中巖藻黃質(zhì)含量（5.00

0.00

甲醇乙醇

提取溶劑

圖3不同提取溶濟(jì)對(duì)海帶中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖3所示，不同的有機(jī)試劑對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響較大，采用甲醇提取

的巖藻黃質(zhì)含量高于乙醇，因此后續(xù)選擇甲醇作為提取溶劑。

1.3考察不同甲醇濃度對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.00g（精確到0.01g）海帶粉6份，按順序編號(hào)，固定料液比為

1:25，分別以0%、20%、40%、60%、80%和100%甲醇濃度超聲提取30min，

分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50

mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)

足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取

得率巖藻黃質(zhì)含量。

8

60.00

50.00

）

40.00

ug/g

30.00

20.00

巖藻黃質(zhì)含量（10.00

0.00

020406080100120

甲醇濃度（%）

圖4不同甲醇濃度對(duì)海帶中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖4所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著甲醇濃度的升高而提高，直到甲醇濃

度為80%后開始出現(xiàn)下降趨勢(shì)，因此可以確定甲醇最佳提取濃度為80%。

1.4考察不同超聲時(shí)間對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響：

精密稱取2.00g（精確到0.01g）海帶粉5份，按順序編號(hào)，固定料液比為

1:25，以80%甲醇濃度超聲提取10、20、30、40和50min后，分別濾紙過

濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，各取1

mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后差

重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃質(zhì)

60.00

）55.00

ug/g

50.00

45.00

40.00

35.00

海帶中巖藻黃質(zhì)含量（

30.00

0102030405060

超聲時(shí)間（min）

含量。

圖5不同超聲時(shí)間對(duì)海帶中巖藻黃質(zhì)含量的影響

9

由圖5所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先升高趨勢(shì)，當(dāng)

超聲提取30min后呈平緩趨勢(shì)，增加幅度很小，說明海帶中巖藻黃質(zhì)在超聲提

取30min后，已全部基本被提取出來，因此超聲提取的最佳提取時(shí)間為30

min。

1.5考察不同料液比對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.00g（精確到0.01g）海帶粉5份，按順序編號(hào)，固定80%甲醇

濃度，以1:5、1:15、1:25、1:35和1:45料液比條件下超聲提取30min后，分別

濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，

各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取

前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖

藻黃質(zhì)含量。

70.00

）60.00

ug/g50.00

40.00

30.00

20.00

10.00

海帶中巖藻黃質(zhì)含量（

0.00

1：51：151：251：351：45

料液比

圖6不同料液比對(duì)海帶中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖6所示，海帶中巖藻黃質(zhì)的提取率隨著料液比的增加而增加，當(dāng)料液

比增加到1:25時(shí)，之后提取得率趨于平緩，這可能是由于當(dāng)料液比為1:25時(shí)，

巖藻黃質(zhì)已基本全部提取出來，再增加溶劑用量只會(huì)增加成本，而提取得率不

會(huì)再增加，因此可以確定最優(yōu)的料液比為1:25。

1.6考察不同提取次數(shù)對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.00g（精確到0.01g）海帶粉1份，固定料液比為1:25，以

80%甲醇水溶液超聲提取30min，，并按上述的步驟再提取兩次，每次分別濾紙

10

過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，各取

1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后

差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃

質(zhì)含量。

60.00

）50.00

ug/g

40.00

30.00

20.00

10.00

海帶中巖藻黃質(zhì)含量（

0.00

123

提取次數(shù)（次）

圖7不同提取次數(shù)對(duì)海帶中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖7所示，回流提取第一次時(shí)，提取液中的巖藻黃質(zhì)提取率最大，所提

取含量約占總提取量的80%左右，提取第二次時(shí)，提取率迅速降低所提取含量

約占總提取量的10%左右，第三次提取液中巖藻黃質(zhì)含量較少，根據(jù)測(cè)定結(jié)

果，再考慮到提取成本，故選擇最適提取次數(shù)為兩次。

2.6.2裙帶菜中巖藻黃質(zhì)提取工藝研究

1單因素實(shí)驗(yàn)

1.1考察不同提取方式對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）裙帶菜粉2份，按順序編號(hào)，固定料液比

為1:25，分別加入甲醇溶液50mL一份90℃回流提取30min，另一份超聲提

取30min，分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇

定容至50mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試

樣溶液補(bǔ)足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)

算其提取得率巖藻黃質(zhì)含量。

11

35

）30

ug/g

25

20

15

10

5

裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0

超聲回流

提取方式

圖8不同提取方式對(duì)裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖8所示，超聲提取和回流提取對(duì)巖藻黃質(zhì)含量影響相差不大，超聲提

取的巖藻黃質(zhì)含量略高于回流提取，同時(shí)超聲提取便于操作，因此選擇超聲提

取進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2考察不同提取溶劑對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響：

精密稱取2.0g（精確到0.01g）裙帶菜粉2份，按順序編號(hào)，固定料液比

為1:25，分別加入甲醇和乙醇溶液50mL超聲提取30min，分別濾紙過濾，濾

液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，各取1mL樣

品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后差重，

混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃質(zhì)含

35

30

ug/g)

25

20

15

10

5

裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0

甲醇乙醇

提取溶劑

量。

12

圖9不同提取溶劑對(duì)裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

9由圖所示，不同的有機(jī)試劑對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響較大，甲醇提取的巖

藻黃質(zhì)含量高于乙醇，因此后續(xù)選擇甲醇進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3考察不同甲醇濃度對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）裙帶菜粉6份，按順序編號(hào)，固定料液比

為1:25，分別以0%、20%、40%、60%、80%和100%甲醇濃度超聲提取30

min，分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容

至50mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶

液補(bǔ)足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其

提取得率巖藻黃質(zhì)含量。

35

）30

ug/g

25

20

15

10

5

裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0

020406080100120

甲醇濃度（%）

圖10不同甲醇濃度對(duì)裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖10所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著甲醇濃度的升高而提高，直到甲醇濃

度為80%后開始出現(xiàn)下降趨勢(shì)，因此可以確定甲醇最佳提取濃度為80%。

1.4考察不同超聲時(shí)間對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）裙帶菜粉5份，按順序編號(hào)，固定料液比

為1:25，以80%甲醇濃度超聲提取10，20，30，40，50min后，分別濾紙過

濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，各取1

mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后差

重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃質(zhì)

13

35

）

30

ug/g

25

20

15

裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量（

10

0102030405060

超聲時(shí)間（min)

含量。

圖11不同超聲時(shí)間對(duì)裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖11所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先升高趨勢(shì)，

當(dāng)超聲提取40min后呈平緩趨勢(shì)，由于巖藻黃質(zhì)在經(jīng)過一段時(shí)間的提取后，已

經(jīng)基本上被提取出來，因此可以確定超聲提取的最佳提取時(shí)間是40min。

1.5考察不同料液比對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）裙帶菜粉5份，按順序編號(hào)，固定80%甲

醇濃度，以1:5、1:15、1:25、1:35和1:45料液比條件下超聲提取40min后，

分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50

mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)

足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取

得率巖藻黃質(zhì)含量。

14

40

）35

ug/g30

25

20

15

10

5

裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0

1：51：151：251：351：45

料液比

圖12不同料液比對(duì)裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖12所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著甲醇溶液體積的增加而增加，含量的

最高點(diǎn)是在料液比1:25的時(shí)候，之后提取率趨于平緩，這可能是由于巖藻黃質(zhì)

已基本溶出，再增加溶劑用量只會(huì)增加成本提取率基本不會(huì)再增加，因此可以

確定最優(yōu)的料液比為1:25。

1.6考察不同提取次數(shù)對(duì)巖藻黃質(zhì)含量影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）裙帶菜粉1份，固定料液比為1:25，以

80%甲醇超聲提取40min，并按上述的步驟再提取兩次，每次分別濾紙過濾，

濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，各取1mL

樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后差

重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃質(zhì)

15

40

）35

ug/g30

25

20

15

10

5

裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0

123

提取次數(shù)

含量。

圖13不同提取次數(shù)對(duì)裙帶菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖13所示，回流提取第一次時(shí)，提取液中的巖藻黃質(zhì)提取率最大，所提

取含量約占總提取量的70%不到，提取第二次時(shí)，提取率迅速降低所提取含量

約占總提取量的30%不到，第三次提取液中巖藻黃質(zhì)含量極少，根據(jù)測(cè)定結(jié)

果，再考慮到提取成本，故選擇最適提取次數(shù)為兩次。

2.6.3羊棲菜中巖藻黃質(zhì)提取工藝研究

1單因素實(shí)驗(yàn)

1.1考察不同提取方式對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響：

精密稱取2.0g（精確到0.01g）羊棲菜粉2份，按順序編號(hào)，固定料液比

為1:25，分別加入甲醇溶液50mL一份90℃回流提取30min，另一份超聲提

取30min，分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇

定容至50mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試

樣溶液補(bǔ)足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)

算其提取得率巖藻黃質(zhì)含量。

16

100.00

）90.00

80.00

ug/g

70.00

60.00

50.00

40.00

30.00

20.00

10.00

羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0.00

超聲回流

提取方式

圖14不同提取方式對(duì)羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖14所示，超聲提取和回流提取對(duì)巖藻黃質(zhì)含量影響相差不大，回流提

取的巖藻黃質(zhì)含量高于超聲提取，考慮到操作的方便性選擇超聲提取進(jìn)行后續(xù)

實(shí)驗(yàn)。

1.2考察不同提取溶劑對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）羊棲菜粉2份，按順序編號(hào)，固定料液比

為1:25，分別加入甲醇和乙醇溶液50mL超聲提取30min，分別濾紙過濾，濾

液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，各取1mL樣

品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后差重，

混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃質(zhì)含

100.00

）90.00

80.00

ug/g

70.00

60.00

50.00

40.00

30.00

20.00

10.00

羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0.00

甲醇乙醇

提取溶劑

量。

17

圖15不同提取溶劑對(duì)羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖15所示，不同的有機(jī)試劑對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響較大，采用甲醇提取

的樣品溶液中巖藻黃質(zhì)含量高于采用乙醇提取，因此后續(xù)選擇甲醇作為提取溶

劑進(jìn)行考察。

1.3考察不同甲醇濃度對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）羊棲菜粉6份，按順序編號(hào)，固定料液比

為1:25，分別以0%、20%、40%、60%、80%和100%甲醇濃度超聲提取30

min，分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容

至50mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶

液補(bǔ)足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其

提取得率巖藻黃質(zhì)含量。

120.00

）

100.00

ug/g

80.00

60.00

40.00

20.00

羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0.00

020406080100120

甲醇濃度（%）

圖16不同甲醇濃度對(duì)羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖16所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著甲醇濃度的升高而提高，直到甲醇濃

度為80%后開始出現(xiàn)下降趨勢(shì)，因此可以確定甲醇最佳提取濃度為80%。

1.4考察不同超聲時(shí)間對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響：

精密稱取2.0g（精確到0.01g）羊棲菜粉5份，按順序編號(hào)，固定料液比

為1:25，以80%甲醇濃度超聲提取10，20，30，40，50min后，分別濾紙過

濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，各取1

mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后差

重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃質(zhì)

18

120.00

）110.00

100.00

ug/g

90.00

80.00

70.00

60.00

50.00

40.00

30.00

羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量（

20.00

0102030405060

超聲時(shí)間（min）

含量。

圖17不同超聲時(shí)間對(duì)羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖17所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先升高趨勢(shì)，

當(dāng)超聲提取40min后呈平緩趨勢(shì)，由于巖藻黃質(zhì)在經(jīng)過一段時(shí)間的提取后，已

經(jīng)基本上被提取出來，因此可以確定超聲提取的最佳提取時(shí)間是40min。

1.5考察不同料液比對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）羊棲菜粉5份，按順序編號(hào)，固定80%甲

醇濃度，以1:5、1:15、1:25、1:35和1:45料液比條件下超聲提取40min后，

分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50

mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)

足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取

得率巖藻黃質(zhì)含量。

19

140.00

）120.00

ug/g

100.00

80.00

60.00

40.00

20.00

羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0.00

1：51：151：251：351：45

料液比

圖18不同料液比對(duì)羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖18所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著甲醇溶液體積的增加而增加，含量的

最高點(diǎn)是在料液比1:35的時(shí)候，之后提取率趨于平緩，這可能是由于巖藻黃質(zhì)

已基本溶出，再增加溶劑用量只會(huì)增加成本提取率基本不會(huì)再增加，因此可以

確定最優(yōu)的料液比為1:35。

1.6考察不同提取次數(shù)對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）羊棲菜最粉1份，固定料液比為1:25，以

80%甲醇超聲提取40min，并按上述的步驟再提取兩次，分別濾紙過濾，濾液

轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定容至50mL，各取1mL樣品

溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后差重，混

勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃質(zhì)含量。

140.00

）120.00

ug/g

100.00

80.00

60.00

40.00

20.00

羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量（

0.00

123

提取次數(shù)（次）

20

圖19不同提取次數(shù)對(duì)羊棲菜中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖19所示，回流提取第一次時(shí)，提取液中的巖藻黃質(zhì)提取率最大，所提

取含量約占總提取量的70%左右，提取第二次時(shí)，提取率迅速降低所提取含量

約占總提取量的20%左右，第三次提取液中巖藻黃質(zhì)含量較少，根據(jù)測(cè)定結(jié)

果，再考慮到提取成本，故選擇最適提取次數(shù)為兩次。

2.6.4銅藻中巖藻黃質(zhì)提取工藝研究

1單因素實(shí)驗(yàn)

1.1考察不同提取方式對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）銅藻粉2份，按順序編號(hào)，固定料液比為

1:30，分別加入甲醇溶液50mL一份90℃回流提取30min，另一份超聲提取

30min，分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用甲醇定

容至50mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣

溶液補(bǔ)足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算

其提取得率巖藻黃質(zhì)含量。

600

500

ug/g

400

300

200

銅藻中巖藻黃質(zhì)含量100

0

超聲回流

不同提取方式考察

圖20不同提取方式對(duì)銅藻中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖20所示，超聲提取和回流提取對(duì)巖藻黃質(zhì)含量影響，回流提取的巖

藻黃質(zhì)的含量高于超聲提取，巖藻黃質(zhì)提取率為494μg/g，因此選擇回流提取

進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2考察不同提取溶劑對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

21

精密稱取2.0g（精確到0.01g）銅藻粉2份，按順序編號(hào)，固定料液比為

1:30，分別加入甲醇和乙醇溶液60mL，90℃回流提取30min，分別濾紙過濾，

濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，分別用甲醇和乙醇定容至50mL，各

取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前

后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻

540

535

530

ug/g

525

520

515

510

銅藻中巖藻黃質(zhì)含量

505

500

乙醇甲醇

不同溶劑考察

黃質(zhì)含量。

圖21不同提取溶劑對(duì)銅藻中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖21所示，不同的有機(jī)試劑對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響較大，乙醇提取的巖

藻黃質(zhì)含量高于甲醇，巖藻黃質(zhì)提取率為532μg/g，因此后續(xù)選擇乙醇進(jìn)行實(shí)

驗(yàn)。

1.3考察不同乙醇濃度對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

精密稱取2.0g（精確到0.01g）銅藻粉6份，按順序編號(hào)，固定料液比為

1:30，分別以20%、40%、60%、80%和100%乙醇濃度90℃回流提取30min，

分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用乙醇定容至50

mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)

足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取

得率巖藻黃質(zhì)含量。

22

700

）600

ug/g500

400

300

200

100

銅藻中巖藻黃質(zhì)含量（

0

1030507090110

不同乙醇濃度（%）

圖22不同乙醇濃度對(duì)銅藻中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖22所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著乙醇濃度的升高而升高，直到濃度為

60%后開始出現(xiàn)下降趨勢(shì)，巖藻黃質(zhì)提取率為648μg/g因此可以確定乙醇最佳

提取濃度60%。

1.4考察不同回流溫度對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響

分別稱取2.0g（精確到0.01g）銅藻粉5份分別置于三角燒瓶中，進(jìn)行編

號(hào)。在5個(gè)錐形瓶中按料液比1:30，60%的乙醇60mL，乙醇在恒溫（60℃、

70℃、80℃、90℃、100℃）水浴鍋中冷凝回流40min，每個(gè)樣品均提取一

次，分別濾紙過濾，濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用乙醇定容至

50mL，各取1mL樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液

補(bǔ)足提取前后差重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提

取得率巖藻黃質(zhì)含量。

23

750

700

）

650

ug/g

600

550

500

450

400

銅藻中巖藻黃質(zhì)含量（350

300

5060708090100110

不同提取溫度（℃）

圖23不同提取溫度對(duì)銅藻中巖藻黃質(zhì)含量的影響

由圖23所示，巖藻黃質(zhì)的提取率隨著溫度的升高而升高，直到溫度到

90℃后呈緩慢下降趨勢(shì)，巖藻黃質(zhì)的提取率在90℃達(dá)到673μg/g，因此可以

確定最佳提取溫度在90℃。

1.5考察不同回流時(shí)間對(duì)巖藻黃質(zhì)含量的影響：

精密稱取2.0g（精確到0.01g）銅藻粉5份，按順序編號(hào)，固定料液比為

1:30，以60%乙醇濃度回流提取10，20，30，40，50min后，分別濾紙過濾，

濾液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)編號(hào)的50mL容量瓶中，均用乙醇定容至50mL，各取1mL

樣品溶液，采用0.45μm針式濾頭過濾，濾液作為試樣溶液補(bǔ)足提取前后差

重，混勻后取1mL過濾后進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算其提取得率巖藻黃質(zhì)

24

750

700

）

650

ug/g

600

550

500

450