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T/NAIA0265-TechnicalregulationsfordiagnosisandpreventionofEscherichiacolidiseaseinsheep2023-12-18發(fā) 2023-12-31實(shí)寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié) 發(fā)T/NAIA0265-T/NAIA0265-GB/T1.1-20201部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定T/NAIA0265-T/NAIA0265-GB4789.6GB4789.38食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)GB4789.41食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)?zāi)c桿菌科檢驗(yàn)GB19489SN/T2025SN/T2984致病性大腸桿菌（extraintestinalpathogenicEscherichiacoli, 100-60日齡內(nèi)的羔羊。圈不腹瀉，有的帶有神經(jīng)癥狀，也有的病例出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎，多于病后4～12h死亡。保存時(shí)間不超過(guò)72h。樣品均需采取低溫（0℃～4℃）保存和運(yùn)輸。將無(wú)菌采集的羔羊臟器組織、腸組織和腸系膜淋巴結(jié)的表面進(jìn)行火焰滅菌，剪取深部1毫米組恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24h后，可觀察到伊紅美藍(lán)瓊脂上形成有金屬光澤的黑色單一菌落，見附錄B.1（1血平板上有中等大小、具有溶血圓的灰色圓形單一菌落，見附錄B.1（2PCRPCR片段大?。?465bp），見附錄B.3。取10只6-8周齡F級(jí)雌性小鼠，分成試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組5只。將4.6中鑒定均符合的大腸桿菌分離株制成濃度約為0.50.3m用于稀釋菌液的無(wú)菌生理鹽水。注射后觀察3d并將死亡的小鼠在無(wú)菌操作下取其肺臟、肝臟、脾臟組織分別接種于EMB，37℃培養(yǎng)24h，挑取大腸桿菌疑似菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，結(jié)果與接種菌株一致則說(shuō)明待檢大腸桿菌分離株為EPEC。配合藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行抗生素治療，使用劑量參照說(shuō)明書。內(nèi)服土霉素2g，早中晚各1次，連服3～5日；內(nèi)服新霉素10mg/kg，早晚各1次，連服3日；肌注慶大霉素注射液0.1mL/kg，早晚各1天1次，連用3日；肌注甲砜霉素20mg/kg，早晚各1次，連用3～5日；內(nèi)服磺胺脒1g，間隔6h服用0.5g0.2g1mL；異常興奮病羊灌服水合氯醛0.2g；脫水病羊靜脈注射5%葡萄糖氯化鈉溶液50～100mL。蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，傾入無(wú)菌平皿，4℃血平板培養(yǎng)基：牛心浸粉15.0g，氯化鈉5.0g，豌豆浸粉3.0g，瓊脂15.0g溶于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，冷卻至50-55℃時(shí)無(wú)菌操作加入10%無(wú)菌脫纖維羊血，混勻，傾入無(wú)菌瓊脂15.0g，蛋白胨和酵母粉25.0g，鹽類6.0g，色素1.4g，生長(zhǎng)因子3.5g溶于1000mL蒸餾水1E.coli16SrRNAPrimer

引物序列（5′Primersequence(5′-

片段大小Product 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG- 5′-GGTTACCTTGTTACGACT