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T/NAIA0352-PCR法IdentificationoftomatoingredientsinfoodsofplantoriginReal-timePCRmethod2024-12-25發(fā) 2025-01-01實(shí)寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié) 發(fā)T/NAIA0352-T/NAIA0352- 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定T/NAIA0352-T/NAIA0352-PCRGB/T GB/T 實(shí)時(shí)熒光 Real-timeCt Cycle內(nèi)參照探針：FAM-CTCTTTGCAGTCCTCCCTTGGGCT-DNAAPCR1.5mL離心管，PCRPCR分析天平（0.1mg）DNADNA將A溶液做適當(dāng)稀釋,使用核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計(jì)分別檢測(cè)260nm和280nm處的吸光D260n=50μg/m雙鏈A或38μg/m單鏈AA的濃度按照式(1)D280比值在1.5~2.1之間時(shí)，適宜于PC擴(kuò)增。擴(kuò)增前將所有樣品A稀釋至10ng/uL~50ng/μ。??×??×

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A——260nm處的吸光值NPCR表 實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體體積2至注1：空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)時(shí)，用ddH2ODNAPCR實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)參數(shù)為：95℃30s；95℃5s、60℃30s，40個(gè)循環(huán)，在每次循環(huán)的退火時(shí)收集熒以下條件有一條不滿足時(shí),試驗(yàn)視為無效VIC熒光信號(hào)檢出，且出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，Ct值FAM熒光信號(hào)檢出，Ct值FAM熒光信號(hào)檢出，Ct值FAM熒光信號(hào)檢出，且出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，Ct值在符合9.1Ct值≤35.0Ct值≥40.035.0＜Ct值＜40.0Ct35.0＜Ct值＜40.0，則判定Ct值≥40.0，測(cè)判定被檢樣品陰性。按照GB/T27403-2008附錄D附錄（資料性植物基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）DNA以某植物基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）提取步驟（以干燥樣品為例在新的1.5mL離心管中加入150μLCXDBuffer和300μL把HiBindDNA結(jié)合柱套在2.0mL收集管中，將離心管中所有液體轉(zhuǎn)移至柱子中。室溫將HiBindDNA700μLDNAWashBuffer（已用無水乙醇稀釋）至少重復(fù)步驟2.7將HiBindDNA結(jié)合柱重新套回收集管中，≥10000×g離心空柱2min將吸附柱轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50μL～100μL65℃預(yù)熱的Elut