ICS65.020.2054CCSB6154西 藏 自 治 區(qū) 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB54/T0489.3—XXXX32025-07-28發(fā)布 2025-08-28實(shí)施西藏自治區(qū)市場監(jiān)督管理局??發(fā)布DB54/T0489.3DB54/T0489.3—XXXXPAGE\*ROMANPAGE\*ROMANIII目 次前言 II引言 III范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語和定義 1場地要求 2培養(yǎng)基配制 2組織培養(yǎng) 3煉苗移栽 4出圃 4建檔 5附錄A（資料性） MS培養(yǎng)基配制 6附錄B（規(guī)范性） 瓶苗質(zhì)量分級(jí)表 7附錄C（規(guī)范性） 病蟲害防治表 8附錄D（規(guī)范性） 出圃苗質(zhì)量分級(jí)表 9參考文獻(xiàn) 10前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由西藏自治區(qū)林業(yè)和草原標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。引 言巨柏sagt..國植物紅皮書（IUCN）123DB54/T0489.3DB54/T0489.3—XXXXPAGEPAGE10巨柏?zé)o性繁殖技術(shù)規(guī)程第3部分：組培范圍本文件規(guī)定了巨柏組培快繁的場地要求、培養(yǎng)基配制、組織培養(yǎng)、煉苗移栽及出圃、建檔等。本文件適用于西藏自治區(qū)巨柏組培快繁育苗。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB5749 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T6001 育苗技術(shù)規(guī)程LY/T1882 林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。巨柏柏科柏木屬喬木，高30m～45m，胸徑1m～3m.，稀達(dá)6m。產(chǎn)于西藏雅魯藏布江流域的郎縣、米林等地，甲格以西分布較多。[來源：中國植物志,有修改]外植體用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體。[來源：LY/T1882]培養(yǎng)基根據(jù)植物營養(yǎng)原理和植物組織培養(yǎng)的要求人工配制的營養(yǎng)基質(zhì)。[來源：LY/T1882]接種在無菌條件下將經(jīng)體表滅菌后的外植體置入培養(yǎng)基的過程。[來源：LY/T1882]繼代培養(yǎng)外植體經(jīng)初代培養(yǎng)后，再次以及以后各次接種于新培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)的過程。場地要求組培室操作間操作間主要進(jìn)行培養(yǎng)基和培養(yǎng)母液的配制及培養(yǎng)基滅菌工作。可細(xì)分為儲(chǔ)藏室，稱量室，操作室，ASodumhydoxieNaO，鹽酸（Hydrochloricacid，HCl），蔗糖，瓊脂等化學(xué)試劑。緩沖間接種室是開展巨柏組培苗滅菌、接種和繼代工作的空間。要求為無菌潔凈空間。培養(yǎng)間煉苗區(qū)是巨柏組培瓶苗材料移栽前的過度空間。搭建蔭棚，有遮蔭噴水設(shè)施。保持溫度37℃以下，濕度50%以上。苗圃栽植床排水良好，栽植床采用深溝高畦，畦寬1.6m～2.0m，溝深20cm～30cm，寬20cm，溝與～3085%以上。苗圃的建設(shè)按照GB/T6001的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。培養(yǎng)基配制培養(yǎng)容器和接種器械的清洗使用洗滌劑浸泡30min后，對(duì)培養(yǎng)容器和接種器械進(jìn)行刷洗，采用清水清洗3遍后干燥備用。清水標(biāo)準(zhǔn)參照GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基母液的配制培養(yǎng)基采用Murashige和Skoog（MurashigandSkoogMedium，MS）基本培養(yǎng)基，所需各元素見附錄A。配制方法按照LY/T1882的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。激素母液配制1-NphtaleeacticaciNAA和吲哚-3Indle--acticaciIA。NAA和IAA激素母液配制方法為：使用電子天平稱取100mg95%酒精預(yù)溶，在100ml容量瓶中加入超純水定容，蓋上蓋子后上下?lián)u晃15次以上，配制成1mg/ml的激素母液放置于100ml避光玻璃容器中備用。初代培養(yǎng)基的配制初代培養(yǎng)基配方為MS培養(yǎng)基。用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值為6.5.分裝至240ml組培瓶中。配制方法按照LY/T1882的4.2.1培養(yǎng)基配制的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。繼代培養(yǎng)基的配制繼代培養(yǎng)基配方為MS+0.3mg/LNAA+0.05mg/LIAA。用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值為6.5，分裝至240ml組培瓶中。配制方法按照LY/T1882的4.2.1培養(yǎng)基配制的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。生根培養(yǎng)基的配制生根培養(yǎng)基配方為MS+0.3mg/LNAA+0.05mg/LIAA1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值為6.5.分裝至240ml組培瓶中。配制方法按照LY/T1882的4.2.1培養(yǎng)基配制的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。培養(yǎng)基滅菌將分裝好的培養(yǎng)基放入滅菌鍋中，在121℃，0.5MPa的環(huán)境中滅菌25min后，冷卻凝固后，保存在無菌環(huán)境中備用。組織培養(yǎng)外植體來源選用巨柏健康植株上的種子。外植體準(zhǔn)備采集巨柏為國家一級(jí)保護(hù)野生植物，外植體的采集應(yīng)按程序辦理并獲得“采集證”。外植體的采集時(shí)間為晴天。選用生長健壯、無病蟲害母株的果實(shí)，晾曬脫殼后獲得巨柏種子。以生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)浸泡種子，去掉水面漂浮種子，下沉種子晾干備用。預(yù)處理將種子用紗布包裹，在流水下沖洗30min～120min。用干紗布吸水濾干備用。表面消毒75%的酒精處理6030%次氯酸鈉處理10min，無菌水清洗5遍后，用無菌濾紙吸干多余水分備用。初代培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上，將滅菌好的種子平放于初代培養(yǎng)基中，使種子平鋪于培養(yǎng)基之上。選用240ml的組培瓶進(jìn)行初代培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基20ml～30ml，接種密度為5株/瓶。在光照2000Lux，光培養(yǎng)/暗培養(yǎng)為14h/10h，溫度24℃±2℃，濕度70%±10%的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)周期40d。繼代培養(yǎng)待萌發(fā)的無菌苗長至8cm以上，在超凈工作臺(tái)上將無菌苗剪成2cm左右的帶芽莖段，接種到增殖培240ml20ml～305株/2000Lux，光培養(yǎng)/暗培養(yǎng)為14h/10h，溫度24℃±2℃，濕度70%±10%的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。增殖周期40d生根培養(yǎng)待增殖后的叢生芽單芽長至3cm～5cm時(shí)，在超凈工作臺(tái)上切割單芽或莖段轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基上，切割長度3cm以上。在光照2000Lux，光培養(yǎng)/暗培養(yǎng)為14h/10h，溫度24℃±2℃，濕度70%±10%的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)20d～30d。煉苗移栽選取高度7cm5d。移栽1g/L3s～5sVV2：1移栽后噴足定根水，遮蔭保濕，防止前期高溫灼傷，后期逐漸放寬溫光條件，使其與外界環(huán)5d～7d1g/L0.8g/L0.6g/L后期管理水分管理移栽前期保持土壤濕潤，不可偏干。夏季應(yīng)在早晚澆水，入秋后土壤稍干為宜，冬季盡量減少水分。施肥管理d～45d淋施一次。病蟲害管理按照附錄C的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。出圃出圃要求12cm103cm要求苗生長健壯，無病蟲害，無黃葉、爛葉。出圃苗移栽時(shí)須保護(hù)好根系。出圃苗質(zhì)量分級(jí)出圃苗的質(zhì)量分級(jí)見附錄C。建檔檔案內(nèi)容組培室基本情況組培育苗技術(shù)及管理措施、苗木產(chǎn)量質(zhì)量、苗木成本。各項(xiàng)試驗(yàn)設(shè)計(jì)、病蟲害調(diào)查。檔案記載和保存應(yīng)指定專人記錄并保存，積累數(shù)據(jù)，及時(shí)分析，為提高組培育苗技術(shù)和經(jīng)營管理水平提供依據(jù)。附 錄 A（資料性）MS下面給出了MS培養(yǎng)基的配制配方。表A.1MS培養(yǎng)基配制基本元素名稱工作液濃度（mg/L）母液濃度（g/L）1L培養(yǎng)基取用量大量元素（10倍）NH4NO3165016.5100mlKNO3190019MgSO4·7H2O3703.7CaCl２·2H2O4404.4KH2PO41701.7微量元素（100倍）KI0.830.08310mlH3BO36.20.62MnSO4·4H2O22.32.23ZnSO4·7H2O8.60.86Na2MnO4·2H2O0.250.025CuSO4·5H2O0.0250.0025CoCl2·6H2O0.0250.0025鐵鹽（100倍）FeSO4·7H2O27.82.7810mlNa2-EDTA·2H2O37.33.73有機(jī)成分（100倍）肌醇1001010ml煙酸0.50.05維生素0.50.05維生素0.10.01甘氨酸20.2附 錄 B（規(guī)范性）下面給出了巨柏組培瓶苗的分級(jí)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。表B.1瓶苗質(zhì)量分級(jí)表指標(biāo)I級(jí)II級(jí)III級(jí)根數(shù)（條）>9>7>5苗高（cm）>9>8>7葉片數(shù)（片）>11>7>5主莖粗（mm）>1.2>0.8>0.5污染情況無污染無污染無污染整體感愈傷組織附著無愈傷組織附著量愈傷組織附著附 錄 C（規(guī)范性）下面給出了巨柏病蟲害的名稱、發(fā)病部位、危害方式及防治方法。表C.1病蟲害防治表病蟲害名稱發(fā)病部位危害方式防治方法薄翅蜂虎葉片吸食葉片汁液。1%阿維菌素2000倍液或5%吡蟲啉3000倍液噴施防治枯干病樹干常見的真菌病害，通過巨柏傷口侵入。及時(shí)修剪柏樹枝條，保持枝條干燥通風(fēng)，使用70%甲基硫菌靈可濕性粉劑800倍液噴霧。柏木虱葉片吸食巨柏葉片汁液。及時(shí)修剪患病枝葉，噴施25%撲虱靈可濕性粉劑6000倍;或40%樂果劃氧化樂果1000倍液防治。柏樹粉蚧葉片1%阿維菌素2000倍液或5%吡蟲啉3000倍的蟲害。柏蛾樹干、葉片寄生在巨柏樹上，造成葉片萎黃，呈現(xiàn)蛾蝕狀。使用對(duì)25%滅幼噴灑防治，清除葉片上的蟲卵。柏樹銹病葉