探究·實(shí)踐DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定

（一）實(shí)驗(yàn)原理2.DNA片段電泳鑒定的原理：（1）DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷，在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，這個(gè)過程就是電泳。（2）PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。（3）凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來。

DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定

探究·實(shí)踐深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用（二）目的要求1．了解PCR和電泳鑒定的基本原理。

2．嘗試進(jìn)行PCR的基本操作并用電泳鑒定PCR的產(chǎn)物。（三）材料用具

DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定

探究·實(shí)踐深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用PCR儀（自動(dòng)控溫，實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增）微量離心管（實(shí)際上是進(jìn)行PCR反應(yīng)的場所）

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探究·實(shí)踐深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用（三）材料用具體積刻度

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探究·實(shí)踐深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用（三）材料用具調(diào)節(jié)旋鈕吸液桿一次性吸液槍頭推動(dòng)桿卸槍頭按鈕微量移液器PCR儀（自動(dòng)控溫，實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增）微量離心管（實(shí)際上是進(jìn)行PCR反應(yīng)的場所）微量移液器（用于向微量離心管轉(zhuǎn)移PCR配方中的液體）

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探究·實(shí)踐（三）材料用具深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用PCR儀（自動(dòng)控溫，實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增）微量離心管（實(shí)際上是進(jìn)行PCR反應(yīng)的場所）微量移液器（用于向微量離心管轉(zhuǎn)移PCR配方中的液體）

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探究·實(shí)踐（三）材料用具深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用離心機(jī)（使反應(yīng)液集中在管的底部）1.移液：用微量移液器按照PCR反應(yīng)體系配方或PCR試劑盒的說明書，在微量離心管中依次加入各組分。深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用

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探究·實(shí)踐（四）PCR步驟2.離心：待所有組分都加入后，蓋嚴(yán)離心管的蓋子，將微量離心管放入離心機(jī)里，離心約10s，使反應(yīng)液集中在離心管的底部（提高反應(yīng)速率）。（四）PCR步驟深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用

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探究·實(shí)踐3.反應(yīng)：參照下表的參數(shù)，設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。將裝有反應(yīng)液的微量離心管放入PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。預(yù)變性：使DNA充分變性，以利于引物更好地和模板結(jié)合。（四）PCR步驟深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用

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探究·實(shí)踐電泳儀電泳槽梳子2.制備凝膠：（1）將溫?zé)岬沫傊侨芤貉杆俚谷肽＞撸⒉迦牒线m大小的梳子，以形成加樣孔。（3）將電泳緩沖液加入電泳槽中，電泳緩沖液沒過凝膠1mm為宜。（2）待凝膠溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝膠放入電泳槽內(nèi)。(電泳緩沖液用來維持PH值，使DNA帶負(fù)電荷)(梳子孔為加樣孔，加樣孔側(cè)連電極負(fù)極)（五）電泳步驟深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用

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探究·實(shí)踐將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液（內(nèi)含指示劑）混合，再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)。留一個(gè)加樣孔加入指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物。3.加樣：接通電源，根據(jù)電泳槽陽極至陰極之間的距離來設(shè)定電壓，一般為1～5V/cm。待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時(shí)，停止電泳。4.電泳：（五）電泳步驟深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用

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探究·實(shí)踐（六）注意事項(xiàng)1.為避免外源DNA等因素的污染，PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理。2.該實(shí)驗(yàn)所需材料可以直接從公司購買，緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在-20℃儲(chǔ)存。使用前，將所需試劑從冰箱拿出，放在冰塊上緩慢融化。3.在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時(shí)，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換。4.在進(jìn)行操作時(shí)，一定要戴好一次性手套。5.PCR擴(kuò)增不能隨意加大試劑用量。深度學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)導(dǎo)入新課遷移應(yīng)用

DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定

探究·實(shí)踐（七）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1.你是否成功擴(kuò)增出DNA片段？判斷的依據(jù)是什么？可以在紫外燈下直接觀察到DNA條帶的分布及粗細(xì)程度來評(píng)價(jià)擴(kuò)增的結(jié)果。進(jìn)行電泳鑒定的結(jié)果應(yīng)該是一條條帶。如果擴(kuò)增不成功，可能的原因有：漏加了PCR的反應(yīng)成分，各反應(yīng)成分的用量不當(dāng)，PCR程序設(shè)置不當(dāng)?shù)?。如果擴(kuò)增結(jié)果不止一條條帶，可能的原因有：引物設(shè)計(jì)不合理，它們與非目的序列有同源性或容易形成二聚體；退