ICS67.040CCSC1499CBPIAFreeze-driedpowderofanimalblood-derivedsuperoxidedismutaseⅠT/CBPIA0010—2025 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14技術(shù)要求 25檢驗(yàn)規(guī)則 3 3附錄A（規(guī)范性）超氧化物歧化酶(SOD)活力的測(cè)定方法 5ⅡT/CBPIA0010—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中國(guó)生化制藥工業(yè)協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)生化制藥工業(yè)協(xié)會(huì)、華東理工大學(xué)、上海市質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)技術(shù)研究院、上海舒澤生物科技研究所、上海綠梅生物科技有限公司、甘肅養(yǎng)泰和生物科技有限公司、寧波邁康爾生物科技有限公司、武漢岐生堂天然生物制品有限公司、遼寧未來生物科技有限公司、河南壽酒集團(tuán)有限公司、北京和頤林生物科技有限公司、上海圣岳生物科技有限公司、上海和森生物科技股份有限公司、陜西科聚美康生物科技有限公司、河北鈺健生物科技有限公司、深圳市活力悠生物科技有限公司。本文件主要起草人：袁勤生、裘偉民、周家春、萬一、樓秀余、莫宏春、韓斌、魏利夫、范立強(qiáng)、彭亞鋒、顧宇翔、張薇、程榆茗、陳石良、韓效亮、韓彬、邱金家、高茹云、周羽。ⅢT/CBPIA0010—2025超氧化物歧化酶是生物和食品領(lǐng)域研究常用的原料之一，國(guó)內(nèi)超氧化物歧化酶的生產(chǎn)技術(shù)已經(jīng)成熟。超氧化物歧化酶的來源廣泛，質(zhì)量指標(biāo)和適用的檢測(cè)方法各異。超氧化物歧化酶的活性通過檢測(cè)酶催化產(chǎn)生的還原性物質(zhì)進(jìn)行表征。雖然《超氧化物歧化酶活性檢測(cè)方法》（GB/T41906-2022）、《保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的測(cè)定》（GB/T5009.171-2003）已公告，但這些標(biāo)準(zhǔn)對(duì)超氧化物歧化酶活力的定義不夠精準(zhǔn)。本文件提出動(dòng)物血來源超氧化物歧化酶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、超氧化物歧化酶活力的定義、超氧化物歧化酶活力測(cè)定方法。1T/CBPIA0010—2025動(dòng)物血來源超氧化物歧化酶凍干粉本文件界定了動(dòng)物血來源超氧化物歧化酶（SOD）凍干粉的技術(shù)要求、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以動(dòng)物血為原料，經(jīng)溶血、沉淀、壓濾、超濾、熱處理、柱層析、滅菌、冷凍干燥等工藝生產(chǎn)的超氧化物歧化酶（SOD）凍干粉，可作為保健食品、化妝品、醫(yī)用藥品的原料。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件?！馟B/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志●GB4789.2食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定●GB4789.3食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)●GB4789.4食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)●GB4789.10食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)●GB4789.15食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)●GB5009.3食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測(cè)定●GB5009.4食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測(cè)定●GB5009.5食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定●食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中總砷及無機(jī)砷的測(cè)定●GB5009.12食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測(cè)定●GB5009.17食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中總汞及有機(jī)汞的測(cè)定●GB7718食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則●DB35/T1148-2011福建省地方標(biāo)準(zhǔn)原料用超氧化物歧化酶3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.12T/CBPIA0010—2025超氧化物歧化酶（SOD）能夠催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，把超氧陰離子自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫的金屬酶。反應(yīng)式如下：2O2-+2H+→H2O2+O23.2超氧化物歧化酶（SOD）活力超氧化物歧化酶（SOD）活力定義：25℃,pH8.20條件下，1mL反應(yīng)液中每1min抑制連苯三酚自氧化速率50%所需的SOD量為一個(gè)活力單位。4一般要求4.1感官要求感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法色澤淡藍(lán)綠色取適量試樣置于清潔、干燥的白瓷盤中，在自然光線下觀察其色澤和狀態(tài)，并嗅其氣味狀態(tài)粉末氣味具本品特有的氣味4.2理化指標(biāo)理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2理化指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法一級(jí)二級(jí)三級(jí)SOD活力，U/mg≥800050003000蛋白質(zhì)，w/%≥GB5009.5第一法水分，w/%≤3.0GB5009.3第一法總灰分，w/%≤3.0GB5009.4第一法鉛（Pb）/（mg/kg）≤GB5009.12總砷（以As計(jì)）/（mg/kg）≤總汞（Hg）/（mg/kg）≤0.1GB5009.174.3微生物限量微生物限量應(yīng)符合表3的規(guī)定。3T/CBPIA0010—2025表3微生物限量項(xiàng)目采樣方案a及限量（若非指定，均以CFU/g表示）檢驗(yàn)方法ncmM菌落總數(shù)5210000GB4789.2大腸菌群52GB4789.3平板計(jì)數(shù)法金黃色葡萄球菌500/25g-GB4789.10沙門氏菌500/25g-GB4789.4霉菌≤25GB4789.15a樣品的分析及處理按GB4789.1執(zhí)行。5檢驗(yàn)規(guī)則5.1出廠檢驗(yàn)每批次產(chǎn)品須經(jīng)企業(yè)質(zhì)量檢驗(yàn)部門檢驗(yàn)合格，并附有產(chǎn)品合格證明后方可出廠。出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目包括：感官指標(biāo)、酶活力、蛋白質(zhì)、水分、菌落總數(shù)、大腸菌群。同一原料、同一班次生產(chǎn)的產(chǎn)品為一批次。5.2型式檢驗(yàn)產(chǎn)品正常生產(chǎn)時(shí)，每半年應(yīng)進(jìn)行一次型式檢驗(yàn)。型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為本文件要求的全部項(xiàng)目。型式檢驗(yàn)的樣品在出廠檢驗(yàn)合格產(chǎn)品中抽取。有下列情形之一時(shí)，也應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a)新產(chǎn)品正式投產(chǎn)時(shí)；b)原料、工藝發(fā)生重大變化時(shí)；c)停產(chǎn)三個(gè)月，恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí)；e)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督管理部門提出型式檢驗(yàn)要求時(shí)。5.3判定規(guī)則所檢項(xiàng)目全部合格，判定該批產(chǎn)品合格或型式檢驗(yàn)通過；產(chǎn)品所檢項(xiàng)目有一項(xiàng)不合格，允許在同批產(chǎn)品中加倍抽樣，對(duì)不合格項(xiàng)進(jìn)行復(fù)驗(yàn)，若仍不合格，即判定該批產(chǎn)品為不合格產(chǎn)品或型式檢驗(yàn)不予通過。微生物指標(biāo)不得復(fù)檢。6標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期6.1標(biāo)志4T/CBPIA0010—2025產(chǎn)品內(nèi)外包裝的標(biāo)志應(yīng)符合GB7718食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則的規(guī)定。6.2包裝產(chǎn)品應(yīng)在無菌條件下用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)襯材料應(yīng)符合食品衛(wèi)生要求。6.3運(yùn)輸運(yùn)輸工具必須清潔、衛(wèi)生。運(yùn)輸過程中不得曝曬、雨淋、受潮。不得與有毒、有害、有腐蝕、有異味的物品混裝運(yùn)輸。6.4貯存產(chǎn)品應(yīng)貯存于常溫、干燥、衛(wèi)生、通風(fēng)、避光的倉(cāng)庫(kù)中。嚴(yán)禁與有毒、有害、有腐蝕、易揮發(fā)或有異味的物品同庫(kù)貯存。嚴(yán)禁露天堆放、日曬、雨淋或靠近熱源。6.5保質(zhì)期在符合本文件貯存條件下存放時(shí)，產(chǎn)品保質(zhì)期為24個(gè)月。5T/CBPIA0010—2025（規(guī)范性）超氧化物歧化酶(SOD)活力的測(cè)定方法A.1一般規(guī)定本質(zhì)量規(guī)格要求除另有規(guī)定外，所用試劑的純度應(yīng)在分析純以上，所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品，應(yīng)按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備，試驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中三級(jí)水的規(guī)定。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。A.2超氧化物歧化酶(SOD)活力的測(cè)定A.2.1測(cè)定原理A.2.1測(cè)定原理在堿性條件下，連苯三酚自氧化反應(yīng)體系中的連苯三酚能迅速氧化釋放出超氧陰離子，產(chǎn)生有色的中間產(chǎn)物，從而使吸光度增加，此過程中吸光度值與反應(yīng)時(shí)間可呈良好的線性關(guān)系。在連苯三酚自氧化反應(yīng)體系中加入SOD后，因SOD催化超氧陰離子反應(yīng)為過氧化氫，有色中間產(chǎn)物的生成受阻，連苯三酚自氧化的速率降低，導(dǎo)致吸光度下降。吸光度下降值與SOD活性呈線性相關(guān)。A.2.2試劑與材料A.2.2.1鹽酸（分析純）A.2.2.2三羥甲基氨基甲烷(Tris)（分析純）A.2.2.3乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na分析純）A.2.2.4連苯三酚（分析純）A.2.2.5鹽酸溶液（10mmoL/L用微量移液器（A.2.3.6）量取鹽酸（A.2.2.1）415μL，加適量GB/T6682中二級(jí)水稀釋，定容至500mL。A.2.2.6三羥甲基氨基甲烷(Tris)-鹽酸緩沖液（50mmoL/L，pH8.20內(nèi)含1mmoL/LEDTA-2Na)：稱取三羥甲基氨基甲烷（A.2.2.2）13.114g（精確到0.0001g）和EDTA-2Na（A.2.2.3）0.744g（精確到0.0001g用GB/T6682中二級(jí)水溶解，稀釋至1800mL左右，用HCl溶液（A.2.2.5）調(diào)節(jié)pH至pH8.20(用pH計(jì)校正)，用GB/T6682中二級(jí)水定容至2000mL，冷藏保存。6T/CBPIA0010—2025A.2.2.7連苯三酚溶液（50mmoL/L稱取連苯三酚（A.2.2.4）0.1576g（精確到0.0001g用HCl溶液（A.2.2.5）溶解并定容至25mL，放入棕色瓶中，遮光冷藏保存。A.2.2.8試樣溶液：稱取適量試樣，用GB/T6682中二級(jí)水配置成適量濃度（C樣）的樣液，如1mg/mL。A.2.3儀器和設(shè)備A.2.3.1紫外分光光度計(jì)A.2.3.2pH計(jì)：精度pH0.01A.2.3.3電子分析天平：感量0.0001gA.2.3.4恒溫水浴鍋A.2.3.5石英比色皿A.2.3.6微量移液器：量程1-10μL，1-1000μLA.2.4實(shí)驗(yàn)步驟A.2.4.1試劑與樣品預(yù)熱：將Tris-HCl緩沖液（A.2.2.6）、50mmol/L連苯三酚溶液（A.2.2.7）和試樣液（A.2.2.8）在恒溫水浴鍋中25℃保溫20min；A.2.4.2連苯三酚自氧化速率測(cè)定在石英比色皿中加入3mLTris-HCl緩沖液（A.2.2.6放入紫外分光光度計(jì)（A.2.3.1）中，作為空白對(duì)照，調(diào)節(jié)儀器使波長(zhǎng)λ=325nm處光吸收值為“0”。向3mLTris-HCl緩沖液（A.2.2.6）中加入10μL左右連苯三酚溶液（A.2.2.7混合均勻，轉(zhuǎn)入石英比色皿內(nèi)，4min內(nèi)每隔30s測(cè)定一次325nm波長(zhǎng)處光吸收A值，計(jì)算每分鐘光吸光變化值(△A/min記錄為△A連/min。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，調(diào)整連苯三酚溶液（A.2.2.7）的加入體積V連，使得自氧化率△A連/min為0.070±0.002。A.2.4.3試樣溶液（A.2.2.8）抑制連苯三酚自氧化速率測(cè)定取3mLTris-HCl緩沖液（A.2.2.6加入適量體積預(yù)熱的試樣溶液（A.2.2.8混合均勻，再加入A.2.4.2步驟所得V連體積的連苯三酚溶液（A.2.2.7）后混合均勻，混合液轉(zhuǎn)入石英比色皿中，4min內(nèi)每隔30s測(cè)定一次325nm波長(zhǎng)處光吸收A值，計(jì)算每分鐘光吸收變化值，記錄為△A酶/min。7T/CBPIA0010—2025為減少加樣誤差，可適當(dāng)稀釋試樣溶液，使試樣溶液的加入量在5-10μL范圍內(nèi)。記錄稀釋倍數(shù)D。A.2.5結(jié)果計(jì)算A.2.5.1試樣的超氧化物歧化酶（SOD）活力EQ\*jc3\*hps14\o\al(\s\up4(酶),5)EQ\*jc3\*hps14\o\al(\s\up4(/),%)EQ\*jc3\*hps14\o\al(\s\up7(反應(yīng)液總體積),試樣液體積)EQ\*jc3\*hps11\o\al