專(zhuān)題十生物工程

定考向

(1)植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交技術(shù)。(8)DNA的粗提取和鑒定。

(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)及干細(xì)胞的應(yīng)用。(9)DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定。

(3)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體的制備。(10)基因工程的應(yīng)用。

(4)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)。(11)蛋白質(zhì)工程。

(5)胚胎工程的理論基礎(chǔ)及應(yīng)用。(12)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性。

(6)重組DNA技術(shù)的基本工具。(13)關(guān)注生殖性克隆與治療性克隆。

(7)基因工程的基本操作程序。(14)生物武器及其對(duì)人類(lèi)的危害。

建網(wǎng)絡(luò)

限制酶、①DNA連接酶、載體——軍!植物

原理I-④細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性

細(xì)

工具胞

工

程

目的基因的篩選與獲取一I通物組織用彝植物體細(xì)胞雜交

I家:玩二…)失錠'寸猱美?

②基因表達(dá)載體的構(gòu)建一向栗作

細(xì)

I程序產(chǎn)理■⑤細(xì)胞增殖

將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞一呼胞

動(dòng)物細(xì)

工國(guó)里獲得新細(xì)胞，不形成個(gè)體

I/程胞培養(yǎng)

目的基因的檢測(cè)與鑒定—J發(fā)

-展

曲飛邛個(gè)作嫁曲更.......八

動(dòng)胞核移意獲得克隆動(dòng)物個(gè)體

洵步及磷基五撲犯對(duì)現(xiàn)象？”.....

物

細(xì)———,好細(xì)胞膜的流動(dòng)性

③基因一(操作對(duì)象］胞

蛋動(dòng)物細(xì)

工

白胞融合方法PEG融合法、電融合法、

生

程

預(yù)期功能一設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)f推測(cè)質(zhì)——山滅活病毒誘導(dǎo)法

物

氨基酸序列f改造或合成基因一獲T基本思路卜工

程

技［苴-步驟,⑦給小鼠注射抗原

得所需蛋白質(zhì)

術(shù)

可產(chǎn)生自然界不存在的新蛋白質(zhì)T結(jié)果「

工色至璧如一所需細(xì)胞已免疫的B淋巴細(xì)胞和

體的制備「骨髓瘤細(xì)胞

程

最后的⑧產(chǎn)生專(zhuān)一抗體的雜交

篩選瘤細(xì)胞

實(shí)質(zhì)⑨早期胚胎在相同生理環(huán)境條件

一下空間位置的轉(zhuǎn)移

堂義充分發(fā)揮雌性?xún)?yōu)良個(gè)體的繁殖潛能

選材發(fā)育良好、形態(tài)正常的

⑩桑甚胚或囊胚

邑J加快繁殖速度

判對(duì)錯(cuò)

⑴植物體細(xì)胞雜交過(guò)程中，需先脫分化再誘導(dǎo)融合。()

⑵肝細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中通常在培養(yǎng)液中通入5%的CO?刺激細(xì)胞呼吸。（）

⑶雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體。（）

⑷再生出細(xì)胞壁是原生質(zhì)體融合成功的標(biāo)志。（）

⑸胚胎移植中，供體和受體相當(dāng)于雙親中的父本和母本。（）

（6）DNA連接酶能將兩堿基通過(guò)氫鍵連接起來(lái)。（）

⑺載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選的標(biāo)記基因。（）

（8）蛋白質(zhì)工程被廣泛用于改進(jìn)酶的性能或開(kāi)發(fā)新的工業(yè)用酶。（）

⑼轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉植株的抗蟲(chóng)效果必須通過(guò)分子檢測(cè)進(jìn)行鑒定。（）

（10）PCR的產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定。（）

回歸教材

1.融合后得到的雜種細(xì)胞再經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)可形成愈傷組織，并可進(jìn)一步發(fā)育成完整的

雜種植株。（選擇性必修3.P37）

2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需氣體主要有和CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO?的主要作

用是維持培養(yǎng)液的pH.（選擇性必修3.P44）

3.每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，把一種B淋巴細(xì)胞與能在體外大量

增殖的骨髓瘤細(xì)胞融合，所得到的融合細(xì)胞就可能大量增殖，產(chǎn)生足夠數(shù)量的特

定抗體。（選擇性必修3.P49）

4.植物體細(xì)胞雜交是指將不同來(lái)源的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞,

并將雜種細(xì)胞培育成新植物體的技術(shù)。再生出細(xì)胞壁是原生質(zhì)體融合成功的標(biāo)志。

（選擇性必修3.P38圖2-4）

5.胚胎移植是指將通過(guò)體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀

態(tài)相同的雌性動(dòng)物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。其中提供胚胎的個(gè)體稱(chēng)

為“供體”，接受胚胎的個(gè)體叫“受體”。（選擇性必修3.P61）

6.在基因工程操作中，DNA連接酶將雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái)，恢復(fù)被限制酶

切開(kāi)的磷酸二酯鍵。（選擇性必修3.P72）

7.在基因工程操作中，真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過(guò)

人工改造的。這些質(zhì)粒上常有特殊的標(biāo)記基因，如四環(huán)素抗性基因、氨葦青霉素

抗性基因等，便于重組DNA分子的篩選。（選擇性必修3.P72）

8.在其他工業(yè)方面，蛋白質(zhì)工程被廣泛應(yīng)用于改進(jìn)酶的性能或開(kāi)發(fā)新的工業(yè)用酶。

（選擇性必修3.P95）

9.目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，只有通過(guò)檢測(cè)與

鑒定才能知道，這也是檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉是否培育成功的一步。首先是分子水平

的檢測(cè)，其次還需要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。（選擇性必修3.P82）

10.上述過(guò)程可以在PCR擴(kuò)增儀中自動(dòng)完成，完成以后，常采用瓊脂糖凝膠電泳

來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。（選擇性必修3.P79）

.............................

[I明核心:

微專(zhuān)題1微專(zhuān)題1細(xì)胞工程與胚胎工程

1?植物組織培養(yǎng)的過(guò)程原理：植物細(xì)胞的全能性

:秦荏「無(wú)菌〔高底I二港的蓍去楊康:：

A[激素（生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素等）：A

41#<-----------------------------------------------，

?因林培弟基

脫分化f/C再分化移

栽

，細(xì)胞排列疏松、無(wú)規(guī)則,生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)物利用愈傷

:是一種高度液泡化的呈組織，制作人工種子利

:不定形的薄壁組織團(tuán)塊用胚狀體

①植物組織培養(yǎng)中添加蔗糖的目的是提供營(yíng)養(yǎng)和調(diào)節(jié)滲透壓。

②脫分化階段不需光，再分化階段需光。

③生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素的比值高時(shí)，促進(jìn)根的分化、抑制芽的形成；比值低時(shí)，

促進(jìn)芽的分化、抑制根的形成。

④體內(nèi)細(xì)胞未表現(xiàn)全能性的原因：在特定的時(shí)間和空間條件下，基因的表達(dá)具有

選擇性。

2.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)

原理：植物細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性

「物理法：電融合法、離心法

纖維素酶和誘導(dǎo)

果膠酶處理融合.化學(xué)法：PEG融合法、高Ca?+-高pH

去除細(xì)胞壁-融合法

1,--------7/

?-7,Q”克眼了運(yùn)緣雜更不由科性小

馬鈴卜、上再生、仆皿…布

馬鈴薯再生制脫分化「再分化f

細(xì)胞原生質(zhì)傕/細(xì)胞喔v

?-一正在融雜種

黑合的原細(xì)胞愈傷再生出雜種

番茄番"U生質(zhì)體A組織小植株植株

細(xì)胞原生質(zhì)體王灰怦」1

（甬星由疝質(zhì)壁（施合完宸的標(biāo)志1

提醒①與再生細(xì)胞壁密切相關(guān)的細(xì)胞器是高爾基體。

②原生質(zhì)體融合后有多種結(jié)果需要篩選。

③從變異角度看，植物體細(xì)胞雜交技術(shù)屬于染色體數(shù)目變異，雜種植株的基因型、

染色體和染色體組數(shù)目均為原兩植物直接相加。

3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理：細(xì)胞增殖

0其分■化程度價(jià)、婢殘:一般具有細(xì)胞貼壁'：

能力強(qiáng)、更私子培家；和接觸抑制的特點(diǎn):

A

傳

細(xì)

原胰蛋白酶處理

代

胞

幼齡動(dòng)剪碎代或離心法收集

懸

培

物組織后分瓶以養(yǎng).：培

液

養(yǎng)

胰蛋白酉每、膠原養(yǎng)

塊

蛋白酶（或用機(jī)是.涔培養(yǎng)上’

械的方法）處理

提醒①動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中兩次使用胰蛋白酶的作用不同：

第一次：處理剪碎的組織，使其分散成單個(gè)細(xì)胞。

第二次：使貼壁細(xì)胞從瓶壁上脫落下來(lái)，分散成單個(gè)細(xì)胞。

②避免雜菌污染的措施：培養(yǎng)液及培養(yǎng)用具滅菌處理，加入一定量的抗生素，定

期更換培養(yǎng)液。

③區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的關(guān)鍵是是否分瓶培養(yǎng)。

4.單克隆抗體的制備原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的增殖

，一，朝漱免疫殺燒產(chǎn)生更多的歷林■已加片包

［給'小鼠注射特定抗原）［提取骨髓瘤細(xì)胞）

擴(kuò)大▼培養(yǎng)

從脾中分離B［直熊蹙細(xì)胞）

淋巴細(xì)胞

?社大毒，曾理，

/、熊分"3必在"彳本

3育爸^必?cái)_本誘導(dǎo)融合

不能大量增殖

：動(dòng)物細(xì)胞融合突破了有

L'性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣

】雜交成為可能

未融合細(xì)胞，B-B細(xì)胞

瘤-瘤細(xì)胞，雜交瘠細(xì)胞

」：「篩選一=二一上前甫透癢語(yǔ)1

空飛隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)-々智4嚅孑f懿

［產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞）:雜交法篩選

（體內(nèi)培養(yǎng)（小鼠腹腔內(nèi)）］［體外培親（培養(yǎng)液中））

MH不南1H務(wù)）擾原€勺

「簞克隆抗慶）.才名皿收差導(dǎo)，。特定

I-----擾原發(fā)生特尋性?專(zhuān)

令，異且可大量制備

5.動(dòng)物體細(xì)胞（核移植枝檢克隆技術(shù)

原理：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性

提醒（1）核移植獲得的克隆動(dòng)物與提供細(xì)胞核的親本性狀可能不同的三個(gè)原

因：①克隆動(dòng)物遺傳物質(zhì)來(lái)自?xún)蓚€(gè)親本；②發(fā)育過(guò)程中可能發(fā)生基因突變或染色

體變異；③外界環(huán)境可能引起表型改變。

⑵克隆動(dòng)物的產(chǎn)生屬于無(wú)性繁殖，而試管動(dòng)物則是在體外受精形成受精卵，由

受精卵發(fā)育成的個(gè)體，因此屬于有性繁殖。

6.胚胎移植的操作流程

遺傳性狀優(yōu)良和生產(chǎn)能力強(qiáng)的

［選擇一供體、有健康的體質(zhì)和正常繁

對(duì)供、受

體的選擇殖能力的受體

和處理漏。同期發(fā)情處理和對(duì)供體母畜進(jìn)

〔一理廠行超數(shù)排卵處理算性腺漱漾

|配種或進(jìn)行人工授*斷不在原牘胚由故移植，國(guó)為此

口全化程度高，移植成功率很

▼i收集沖卵例另外不能宜接封植兔精行

對(duì)胚胎的/______

對(duì)月丕胎進(jìn)行質(zhì)量檢查0這時(shí)胚

收集、檢被檢查卜

胎應(yīng)發(fā)育到蓼.?要囊映階段

查、處理卜

'［處理）直接向受體移植或放入-196七

的液氮中保存

［移植胚胎）

［對(duì)豆體進(jìn)行妊娠檢查）

7.胚胎分割無(wú)性繁殖或克隆

材料A發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑黃胚或囊胚

無(wú)鬲胚胎分割可增加動(dòng)物后代的數(shù)量，其實(shí)質(zhì)

是動(dòng)物的無(wú)性繁殖或克隆

對(duì)囊月丕分割時(shí)，注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割.

成功

否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)

關(guān)鍵

育。對(duì)未知性別的胚胎可以取滋養(yǎng)層細(xì)胞，

、點(diǎn),

做DNA分析進(jìn)行性別鑒定

考向1圍繞細(xì)胞工程的進(jìn)展和操作，考查科學(xué)探究能力

1.某同學(xué)利用帶頂芽的幼莖為材料進(jìn)行植物離體培養(yǎng)，制作了一個(gè)便攜的“試

管植物”掛件，下列關(guān)于制作過(guò)程的說(shuō)法正確的是（）

A.培養(yǎng)基雖然已經(jīng)經(jīng)過(guò)滅菌過(guò)程，但也會(huì)有部分試管苗出現(xiàn)褐化現(xiàn)象

B.培養(yǎng)過(guò)程中帶頂芽的幼莖需經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化出芽和根

C.將消毒好的幼芽切斷接種于培養(yǎng)基表面時(shí)，不能劃破培養(yǎng)基

D.若幾天后在幼莖基部觀察到有菌落生長(zhǎng)，則原因肯定是培養(yǎng)基滅菌不徹底

2.科學(xué)家利用馬鈴薯和西紅柿葉片分離原生質(zhì)體并進(jìn)行細(xì)胞雜交，最終獲得了

雜種植株，相關(guān)過(guò)程如圖所示。有關(guān)分析正確的是（）

撕去下表爵缸力保溫叫

②細(xì)胞雜交與雜種植株

酶溶淹及滲透壓穩(wěn)定原生質(zhì)體沉

%原生質(zhì)體懸浮2用的存H

表皮已消劑，葉段漂浮其上于培養(yǎng)皿底于清洗培養(yǎng)基細(xì)胞耳片

毒的葉片

A.過(guò)程①應(yīng)將葉片上表皮向上，置于含纖維素酶和果膠酶的等滲或略高滲溶液

中

B.過(guò)程②中的原生質(zhì)體由細(xì)胞膜、液泡膜及兩層膜之間的細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成

C.④過(guò)程常用滅活病毒誘導(dǎo)法，目的是促進(jìn)原生質(zhì)體融合

D.⑤進(jìn)行脫分化和再分化過(guò)程，雜種植株一定具有馬鈴薯和西紅柿的優(yōu)良性狀

3.下圖為單克隆抗體制備過(guò)程的示意圖。下列相關(guān)敘述，正確的是（）

細(xì)胞融合細(xì)胞篩選

脾B淋巴細(xì)胞\Q.OqQQoQ

/

卑隆化;培養(yǎng)I

骨髓瘤細(xì)胞

小抗檢測(cè)獲得所需細(xì)胞

A.每個(gè)脾B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生多種抗體

B.細(xì)胞融合可使用滅活病毒，滅活病毒的抗原結(jié)構(gòu)依然存在

C.細(xì)胞篩選和細(xì)胞融合時(shí)所用的培養(yǎng)液在成分上相同

D.克隆化培養(yǎng)過(guò)程中雜交瘤細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)接觸抑制的現(xiàn)象

4.干細(xì)胞是一類(lèi)具有自我更新能力的細(xì)胞，能產(chǎn)生特定組織甚至生物體的所有

細(xì)胞類(lèi)型。根據(jù)個(gè)體發(fā)育過(guò)程中干細(xì)胞出現(xiàn)的次序和發(fā)育潛能的不同，可分為胚

胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。下列相關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.胚胎干細(xì)胞分化為完整個(gè)體體現(xiàn)了已分化動(dòng)物細(xì)胞具有全能性

B.已分化細(xì)胞可在體外被誘導(dǎo)成為一種類(lèi)似于胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞

C.利用成體干細(xì)胞進(jìn)行疾病治療理論上無(wú)需考慮免疫排斥的問(wèn)題

D.將干細(xì)胞用于臨床上的疾病治療可能存在導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)

5.HEK293細(xì)胞是人工改造后的人胚腎細(xì)胞，為細(xì)胞系細(xì)胞，具有貼壁生長(zhǎng)的特

性。分瓶時(shí)，一瓶細(xì)胞可分到幾瓶中培養(yǎng)，這個(gè)瓶數(shù)稱(chēng)為分瓶比，分瓶數(shù)越多，

分瓶比越大。下列關(guān)于HEK293細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.在HEK293細(xì)胞培養(yǎng)液中加入血清可補(bǔ)充蛋白質(zhì)和生長(zhǎng)因子

B.HEK293細(xì)胞的培養(yǎng)需要95%空氣和5%C02的氣體環(huán)境

C.分瓶前應(yīng)用胰蛋白酶處理貼壁生長(zhǎng)的HEK293細(xì)胞

D.分瓶比越大，HEK293細(xì)胞分瓶換液的周期越短

6.常用的核移植方?法主要有細(xì)胞質(zhì)內(nèi)注射法和透明帶下注射法兩種。前者是用

微型注射針將供體細(xì)胞的細(xì)胞核吸出注入去核卵母細(xì)胞質(zhì)內(nèi)；后者是直接將供體

細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞透明帶內(nèi)，然后促使兩個(gè)細(xì)胞融合，從而具有發(fā)育的全能

性。我國(guó)科學(xué)家于2017年底培育出的體細(xì)胞克隆猴“中中”和“華華”采用的

就是后者。下列有關(guān)敘述正確的是（）

A.供體細(xì)胞注入卵母細(xì)胞透明帶內(nèi)后，就可自行進(jìn)入卵母細(xì)胞

B.“中中”和“華華”的性狀由多個(gè)親本共同決定，屬于有性生殖

C.相比之下，透明帶下注射法對(duì)供體細(xì)胞核和卵母細(xì)胞的損傷更小

D.“中中”和“華華”核DNA均來(lái)自供體細(xì)胞，質(zhì)DNA均來(lái)自去核卵母細(xì)胞

7.嵌合體在免疫學(xué)上的含義是指一個(gè)機(jī)體身上有兩種或兩種以上染色體組成不

同的細(xì)胞系同時(shí)存在，彼此能夠耐受，不產(chǎn)生排斥反應(yīng)，相互間處于嵌合狀態(tài)。

如圖表示構(gòu)建嵌合體小鼠的實(shí)驗(yàn)，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

發(fā)育育成成白白一一年心力.、

鼠的受精卵即、植人代售分娩廣步少、

母鼠嵌合體幼鼠,

1虺田胞胚彼毛黑白相同）

A.過(guò)程①中的培養(yǎng)液需要適時(shí)更換

B.胚胎在囊胚階段開(kāi)始分化，其中的滋養(yǎng)層細(xì)胞將發(fā)育成胎膜和胎盤(pán)

C.嵌合體幼鼠的一個(gè)細(xì)胞中同時(shí)有白鼠和黑鼠的基因

D.囊胚中分離的胚胎干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)可發(fā)育成多種組織

8.制備敲除小鼠需要將編輯過(guò)的敲除基因轉(zhuǎn)入小鼠胚胎干細(xì)胞，移植至正常小

鼠的早期胚胎中，植入代孕母鼠子宮。出生的F1小鼠發(fā)育成熟后互相交配，鑒

定F2代小鼠基因型，篩選得到純合的基因敲除小鼠。下列相關(guān)說(shuō)法不正確的是

()

A.實(shí)驗(yàn)中F1代小鼠體細(xì)胞中均含有敲除基因

B.利用胚胎分割技術(shù)可以獲得更多的子代個(gè)體

C.早期胚胎的體外培養(yǎng)需要無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境

D.檢測(cè)代孕小鼠激素水平的變化可確定胚胎移植是否成功

微專(zhuān)題2基因工程

1.基因工程的3種基本工具

作用識(shí)別雙鏈DNA分子特定的核甘酸序列并切開(kāi)

‘限制性?xún)?nèi).特定部位兩個(gè)核昔酸之間的磷酸二酯鍵

切核靛而使用①一般用同種限制酶切割載體和目的基因

方屋②不同的限制酶也能切割出相|uj的黏性末端

關(guān)切明色不同,勺貂性味螂，則能使基因尹土注定,由

連接，圓免自身環(huán)化在父白連摟，誕高連接的甯沃性

—而①E-co〃DNA連接酶只能連接黏性末端

連接酶一I—②T4DNA連接酶能連接黍占性末端和平末端

一①能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在并大量復(fù)制

一三:一)—②有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)

載體一

-----------③具有特殊的標(biāo)記基因以便對(duì)含目的基因的受

體細(xì)胞進(jìn)行篩選

2.基因工程的操作流程

(1)目的基因的獲取

包拈基因俎文改C1MM文序

t，從基因文庫(kù)中獲取,已知目的基因兩埒

-利用PCR技術(shù)擴(kuò)增……破片列

,十人產(chǎn)「利用mRNA反轉(zhuǎn)錄合成

人工合成-

匚通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法合成

去國(guó)咐婦)、且不用手模極＜……-----

提醒：①?gòu)腸DNA文庫(kù)獲取的目的基因不含啟動(dòng)子和終止子。

②PCR過(guò)程中需要耐高溫的DNA聚合酶(Tag酶)。

⑵基因表達(dá)載體的構(gòu)建一一重組質(zhì)粒的構(gòu)建

提醒：①基因工程中的載體與細(xì)胞膜上的載體不同。

②啟動(dòng)子、終止子

a.啟動(dòng)子（DNA片段）W起始密碼子（位于mRNA上）。

b.終止子（DNA片段）W終止密碼子（位于mRNA上）。

③目的基因插入位置：?jiǎn)?dòng)子與終止子之間。

④利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥物時(shí)，應(yīng)將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子連接

到一起。

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

廬礪「植物體細(xì)胞或受精卵——農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)

陛粗廠化法、花粉管通道法

目的基因等'

入受體細(xì)胞巨到——般為受精卵——“顯微注射法”

的方法,

［微生物）一原核生物——“Ca?+處理法”

提醒：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中的“兩個(gè)兩次”

美將g的基國(guó)相接?到?。?至的丁-0/VA的

中間書(shū)位

才旨祕(mì)插入g的基因的丁-D/VAM病接到自

彳本ZR月包季色彳本的。/VA上

將令g的基13的「金赳營(yíng)劭導(dǎo)入農(nóng)■狂菌

指令g的基EJ的T-D/VA導(dǎo)入?堂彳本Ze月包

⑷目的基因的檢測(cè)與鑒定

PCR等技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞染色體DNA上是

------------11—二否插入了目的基因

目的基因吧寺------檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA

檢測(cè)與鑒-抗原■一抗體架交

定鼐—檢測(cè)目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)

個(gè)體生物學(xué)水平鑒定一—?立砧正必必

----------------抗蟲(chóng)或抗病接種實(shí)驗(yàn)等

提醒：PCR不僅可用于獲取和擴(kuò)增目的基因，還能用于檢測(cè)受體細(xì)胞中是否含有

目的基因或受體細(xì)胞中的目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNAo

3.蛋白質(zhì)工程

預(yù)期的蛋白質(zhì)功能

:豆臼逐布最'：操作

［蔓叨生盛__'手段設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋臼質(zhì)結(jié)構(gòu)

改造現(xiàn)有蛋壬/流程：推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列

白質(zhì)，或制結(jié)果

造一種新的耳：I

蛋臼質(zhì):找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核昔

:酸序列(基因)

考向2結(jié)合基因工程的過(guò)程，考查分析問(wèn)題的能力

9.在基因工程中可利用PCR進(jìn)行體外DNA片段的擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂

糖凝膠電泳來(lái)鑒定。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()

A.PCR利用了DNA熱變性的原理，通過(guò)調(diào)節(jié)溫度來(lái)控制DNA雙鏈的解聚及與引

物的結(jié)合

B.PCR擴(kuò)增的特異性一般是由引物的特異性決定的

C.瓊脂糖凝膠中的DNA分子和擴(kuò)增的引物被核酸染料染色后，可在紫外燈下檢

測(cè)出來(lái)

D.DNA在瓊脂糖凝膠中的遷移速率與凝膠濃度、DNA分子大小和構(gòu)象有關(guān)

10.像Bell(-TIGATCA-),BglII(-AIGATCT-)、MboI(-IGATC-)這樣，

識(shí)別序列不同、，但能產(chǎn)生相同的黏性末端的一類(lèi)限制酶被稱(chēng)為同尾酶。如圖表

示目的基因及質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)。選用不同的限制酶對(duì)質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切害U,

并用DNA連接酶進(jìn)行連接。下列分析錯(cuò)誤的是()

BellBgm

啟二

BSm

質(zhì)粒差厘

目的基因

標(biāo)記基因-

復(fù)制原點(diǎn)

選切割目的

切割質(zhì)粒結(jié)果分析

項(xiàng)基因

Bell和Bell和

A形成的重組質(zhì)粒的堿基排列順序不一定相同

BglllBglll

Bell和切割后的質(zhì)粒不可自我環(huán)化，切割后的目的基因

BMbol

Bglll可以自我環(huán)化

Bell和形成的重組質(zhì)?？杀籑bol再次切開(kāi),但可能無(wú)法

CMbol

Bglll被Bell和BglII再次切開(kāi)

切割后的質(zhì)?？梢宰晕噎h(huán)化，切割后的目的基因

DMbolMbol

也可以自我環(huán)化

A.AB.BC.CD.D

11.研究人員將大麥細(xì)胞的LTP1基因?qū)虢湍钢?，讓酵母產(chǎn)生LTP1蛋白。下圖

為該實(shí)驗(yàn)過(guò)程的部分流程。下列說(shuō)法正確的是()

A.運(yùn)用PCR擴(kuò)增LTP1基因時(shí)，應(yīng)選擇左圖的A和D作為引物

B.為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，可在引物5'端添加限制酶的識(shí)別序列

C.如圖中為了篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的啤酒酵母，只需配制含青霉素的培養(yǎng)基

D.為了讓大麥的基因在酵母中表達(dá)，需要在目的基因兩側(cè)添加大麥的啟動(dòng)子和

終止子

12.某課題組為得到青蒿素產(chǎn)量高的新品系，將青蒿素合成過(guò)程的某一一關(guān)鍵酶

基因fps在野生青蒿中過(guò)量表達(dá)，其過(guò)程如下圖所示。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是

()

櫻萍2cDNA空3用港警

酶2

總拉人DNA片段￡｝遢2重組質(zhì)粒變甩青蒿

質(zhì)粒a

A.經(jīng)圖示過(guò)程得到的fps基因不含啟動(dòng)子和終止子

B.酶1、酶2和酶3作用的化學(xué)鍵都是磷酸二醋鍵

C.圖中含fps基因的DNA片段中有酶2的識(shí)別序列

D.導(dǎo)入fps基因的青蒿植株中該基因都能過(guò)量表達(dá)

13.大腸桿菌是基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具，人生長(zhǎng)激素的基因工程過(guò)程

如圖所示。下列敘述正確的是（）

"cDNA”，、

生長(zhǎng)激素基因

人體細(xì)胞

??

OC重組DNA生長(zhǎng)激素

大腸桿菌質(zhì)粒

A.經(jīng)①獲得該mRNA的最佳材料是受精卵

B.通過(guò)①②過(guò)程，可以構(gòu)建基因組文庫(kù)

C.要檢測(cè)③⑥過(guò)程的產(chǎn)物可分別用PCR技術(shù)和抗原一抗體雜交技術(shù)

D.⑤過(guò)程要在低溫和較高濃度的氯化鈣溶液中處理使重組DNA易進(jìn)入受體細(xì)胞

14.蛋白質(zhì)工程是當(dāng)前的新興分子生物學(xué)技術(shù)，通過(guò)改造或合成基因，來(lái)改造現(xiàn)

有的蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)，以滿足人類(lèi)生產(chǎn)、生活的需求。下列關(guān)于蛋白質(zhì)

工程的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.蛋白質(zhì)工程技術(shù)會(huì)改變組成蛋白質(zhì)的氨基酸的種類(lèi)、數(shù)目和排列順序

B.蛋白質(zhì)工程獲得的蛋白質(zhì)都是自然界已存在的蛋白質(zhì)（天然蛋白質(zhì)）

C.蛋白質(zhì)工程不直接改造蛋白質(zhì)的原因是改造基因易于操作且改造后可遺傳

D.蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)出來(lái)的蛋白質(zhì)的活性與天然蛋白質(zhì)相似，而且穩(wěn)定性更高

15.生物安全是指與生物有關(guān)的各種因素對(duì)社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、人類(lèi)健康以及生態(tài)環(huán)境

所產(chǎn)生的危害或潛在風(fēng)險(xiǎn)。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.消除生物武器威脅、防止生物武器擴(kuò)散是生物安全防控的重要方面

B.由于技術(shù)問(wèn)題，生殖性克隆可能孕育出有嚴(yán)重生理缺陷的克隆動(dòng)物

C.為避免可能產(chǎn)生的基因歧視，基因檢測(cè)機(jī)構(gòu)不能隨意泄露基因檢測(cè)的結(jié)果

D.從外來(lái)入侵害蟲(chóng)的原產(chǎn)地引入天敵進(jìn)行治理，不會(huì)對(duì)入侵地造成生態(tài)影響

j規(guī)范寫(xiě)

長(zhǎng)難句規(guī)范答

i.植物體細(xì)胞雜交實(shí)驗(yàn)中，原生質(zhì)體要放在等滲或略高滲溶液中制備的原因—

2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要添加血清的原因__________________________________

3.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用__________________________________________

4.對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)，要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割的原因

5.質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件

6.基因工程檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入、轉(zhuǎn)錄、翻譯的方法依次為

綜合訓(xùn)練

1.下列關(guān)于植物細(xì)胞工程的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.圖中的“馬鈴薯番茄”目前沒(méi)有什么生物技術(shù)可以成功獲得，是人們處理圖

片偽造出來(lái)的

B.“馬鈴薯番茄”通過(guò)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得了成功，但沒(méi)有獲得人們預(yù)期的

性狀

C.成功培養(yǎng)原生質(zhì)體是植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的基礎(chǔ)

D.通過(guò)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)，能克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和障礙，獲得新品種

2.重組人血小板生成素（rhTPO）是一種新發(fā)現(xiàn)的造血生長(zhǎng)因子，科學(xué)家利用雙

酶切法構(gòu)建重組載體后導(dǎo)入到山羊受精卵中，獲得轉(zhuǎn)基因山羊后通過(guò)乳腺生物反

應(yīng)器生產(chǎn)rhTPO。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.雙酶切法可防止目的基因的自身環(huán)化和目的基因與質(zhì)粒的任意連接

B.目的基因不能直接注入受精卵中的原因之一是不能在受體細(xì)胞中自主復(fù)制

C.轉(zhuǎn)基因受精卵在前三次分裂過(guò)程中每個(gè)細(xì)胞的體積變小，核中遺傳物質(zhì)減少

D.乳腺作為生物反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn)是乳汁成分簡(jiǎn)單，便于提純等

3.如圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可能出現(xiàn)的接觸抑制現(xiàn)象，對(duì)此下列有關(guān)敘述錯(cuò)

誤的是（)

分散生長(zhǎng)

接觸抑制

A.正常動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中均會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象

B.癌細(xì)胞無(wú)接觸抑制因而培養(yǎng)時(shí)可形成多層細(xì)胞

C.出現(xiàn)接觸抑制時(shí)細(xì)胞將停止分裂活動(dòng)

D.出現(xiàn)接觸抑制后需利用胰蛋白酶消化后才可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

4.如圖是培育抗除草劑玉米的技術(shù)路線圖，含有內(nèi)含子的報(bào)告基因只能在真核

生物中正確表達(dá)，其產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。轉(zhuǎn)化過(guò)程中愈傷組織表面

常殘留農(nóng)桿菌，會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。下列

相關(guān)敘述正確的是（）

報(bào)告基因（含有內(nèi)含子）幼胚

農(nóng)誘導(dǎo)

T-DNA

桿轉(zhuǎn)化一房面I③篩”因

抗生素菌組織

抗性基因

除草劑抗性基因G

A.過(guò)程①中除草劑抗性基因插入T—DNA中，導(dǎo)致T—DNA片段失活

B.過(guò)程②用Ca2+處理使農(nóng)桿菌細(xì)胞壁的通透性改變，成為感受態(tài)細(xì)胞

C.檢測(cè)是否轉(zhuǎn)化成功，過(guò)程③應(yīng)在培養(yǎng)基中加入除草劑和物質(zhì)K

D.轉(zhuǎn)化過(guò)程中未轉(zhuǎn)化的愈傷組織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)是因?yàn)榛蚱?/p>

移

5.胚胎工程中的很多技術(shù)手段可用于高等動(dòng)物繁殖，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.精子在自然受精時(shí)也有獲能的過(guò)程

B.胚胎分割時(shí)要均等分割，分割次數(shù)不能太多

C.胚胎工程的采卵技術(shù)可分為手術(shù)采卵和非手術(shù)采卵

D.胚胎移植只能把發(fā)育過(guò)程中的胚胎移植到受體子宮內(nèi)，才有可能成功

6.下列關(guān)于小鼠體外受精及胚胎發(fā)育的敘述，正確的是（）

A.精子在獲能溶液中于37℃、5%C02條件下培養(yǎng)的目的是使精子獲得能量

B.分割的胚胎細(xì)胞有相同的遺傳物質(zhì)，因此發(fā)育成的個(gè)體沒(méi)有表型差異

C.小鼠體外受精獲得的胚胎發(fā)育成的幼鼠屬于克隆鼠

D.注射到囊胚腔中的胚胎干細(xì)胞可以參與個(gè)體器官的發(fā)育

7.兩種遠(yuǎn)緣植物的細(xì)胞融合后會(huì)導(dǎo)致一方的染色體被排出。若其中一個(gè)細(xì)胞的

染色體在融合前由于某種原因斷裂，形成的染色體片段在細(xì)胞融合后可能不會(huì)被

全部排出，未排出的染色體片段可以整合到另一個(gè)細(xì)胞的染色體上而留存在雜種

細(xì)胞中。依據(jù)該原理，將普通小麥與耐鹽性強(qiáng)的中間偃麥草進(jìn)行體細(xì)胞雜交獲得

了耐鹽小麥新品種，過(guò)程如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

普通小麥細(xì)胞旦一普通小麥原生質(zhì)體、③雜種培養(yǎng)雜種篩選r耐鹽

中間偃麥草細(xì)胞?中間偃麥草原生質(zhì)體片*細(xì)胞④植株⑤小麥

不同制里的紫外線照射②’

A.紫外線照射可誘導(dǎo)中間偃麥草的染色體發(fā)生斷裂

B.過(guò)程③中常用滅活的病毒誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合

C.耐鹽小麥的染色體上整合了中間偃麥草的染色體片段

D.該育種技術(shù)打破了不同物種間的生殖隔離，克服了遠(yuǎn)緣雜交障礙

8.某研究小組為測(cè)定藥物對(duì)肝腫瘤細(xì)胞的治療效果，準(zhǔn)備對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤

細(xì)胞（甲）和正常肝細(xì)胞（乙）進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是（）

A.在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，可用胃蛋白酶處理

B.細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在C02培養(yǎng)箱中進(jìn)行，C02的作用是作為細(xì)胞代謝原料

C.取甲細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，傳至10~50代就會(huì)完全停止

D.乙細(xì)胞在原代培養(yǎng)過(guò)程中，最終會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象

9.CD47是一種跨膜糖蛋白。它可與巨噬細(xì)胞表面的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，從而抑

制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量比正常

細(xì)胞高L6~5倍，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的清除效果減弱。為證明抗CD47

的單克隆抗體可以解除CD47對(duì)巨噬細(xì)胞的抑制作用，科學(xué)家按照如下流程進(jìn)行

了實(shí)驗(yàn)。下列敘述不正確的是（）

CD47磬WLB/c/J、鼠口脾膨田胞〉^雜為S細(xì)胞—＞單兩詳

骨髓W細(xì)胞③］加油

實(shí)驗(yàn)組：巨噬細(xì)胞+■腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)體系

④忡

巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)

A.多次進(jìn)行步驟①的目的是獲得更多分泌抗CD47抗體的漿細(xì)胞

B.步驟②中可以利用聚乙二醇或滅活的病毒誘導(dǎo)完成細(xì)胞融合

C.經(jīng)篩選可得到既能產(chǎn)生抗CD47抗體又能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞

D.對(duì)照組應(yīng)在巨噬細(xì)胞+正常細(xì)胞共培養(yǎng)體系中加入單克隆抗體

10.下圖表示研究人員利用胚胎工程培育優(yōu)質(zhì)奶牛的過(guò)程，下列相關(guān)說(shuō)法正確的

是（）

A.①代表體外受精，與體內(nèi)受精不同的是體外受精前精子需要獲能

B.②代表早期胚胎培養(yǎng)，該過(guò)程中細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，無(wú)細(xì)胞分化

C.③代表胚胎分割，需均等分割桑根胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，以免影響胚胎發(fā)育

D.為選育出能泌乳的母奶牛，移植前需從胚胎的滋養(yǎng)層部位取樣，做DNA分析

鑒定性別

H.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)，如圖所示，a、b、c表示現(xiàn)代工程技

術(shù)，①、②、③表示其對(duì)應(yīng)的結(jié)果，下列說(shuō)法正確的是（）

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

胚胎移植

①