2025年臨床標(biāo)本微生物檢驗標(biāo)本采集復(fù)習(xí)題目與答案1.簡述血液標(biāo)本進行微生物培養(yǎng)時的采集時機及注意事項。答：血液標(biāo)本微生物培養(yǎng)（血培養(yǎng)）的采集時機直接影響陽性率，關(guān)鍵原則是在患者出現(xiàn)菌血癥或敗血癥的高峰時段采集。具體要求如下：（1）采集時機：①對于未使用抗生素的發(fā)熱患者，應(yīng)在寒戰(zhàn)或高熱初期（體溫上升階段）采集，此時血液中病原體濃度最高；②已使用抗生素但病情未控制者，可在下次抗生素給藥前采集，避免藥物對病原體的抑制；③對于亞急性感染性心內(nèi)膜炎等持續(xù)性菌血癥患者，可在24小時內(nèi)間隔1小時采集3次，無需等待發(fā)熱；④懷疑膿毒癥休克時，應(yīng)立即采集，無需延遲至體溫升高。注意事項包括：①采集次數(shù)與量：成人每次應(yīng)采集2套（每套包括需氧瓶和厭氧瓶），從不同穿刺部位（如左右肘靜脈）采集，每套總血量10-20ml（需氧瓶8-10ml，厭氧瓶5-10ml）；兒童根據(jù)年齡調(diào)整，嬰兒（＜1歲）每瓶1-3ml，兒童（1-12歲）每瓶3-5ml，避免過量導(dǎo)致抗凝劑不足或溶血；②皮膚消毒：嚴格執(zhí)行無菌操作，穿刺部位用75%酒精擦拭脫脂，再用含碘消毒劑（如碘伏或氯己定）環(huán)形消毒，直徑＞5cm，待干后穿刺，避免消毒劑殘留污染；③瓶塞消毒：血培養(yǎng)瓶膠塞需用75%酒精消毒，待干后接種，防止皮膚菌群污染；④接種順序：先接種厭氧瓶（避免空氣進入），再接種需氧瓶；⑤標(biāo)記與記錄：注明采集時間、患者體溫、抗生素使用情況，便于實驗室分析；⑥特殊情況：懷疑真菌血癥時需增加真菌培養(yǎng)瓶；懷疑布魯菌感染時需延長培養(yǎng)時間至21天。2.痰標(biāo)本微生物檢驗時，如何判斷標(biāo)本是否合格？不合格標(biāo)本的處理原則是什么？答：痰標(biāo)本合格性判斷主要通過顯微鏡下白細胞與鱗狀上皮細胞（SCC）的比例，以排除口咽部正常菌群污染。具體標(biāo)準(zhǔn)如下：（1）直接涂片鏡檢：取標(biāo)本黏液部分涂片，革蘭染色后鏡檢。合格標(biāo)本要求每低倍視野（×100）白細胞＞25個且鱗狀上皮細胞＜10個（即WBC:SCC＞2.5:1）；若WBC＜10個且SCC＞25個則為不合格。（2）其他輔助指標(biāo)：膿性痰（外觀為黃色、綠色或鐵銹色）較合格，唾液樣透明痰多為不合格。不合格標(biāo)本的處理原則：①及時反饋臨床，說明標(biāo)本被口咽菌群污染，檢測結(jié)果不可靠；②要求重新采集，指導(dǎo)患者正確留痰：漱口3次（清水或生理鹽水），深吸氣后用力咳嗽，留取來自下呼吸道的深部痰液；③對于無法自主排痰者（如昏迷、兒童），可采用經(jīng)氣管穿刺吸引（TTA）、纖維支氣管鏡采集（BALF或防污染毛刷）等方法獲取合格標(biāo)本；④若為結(jié)核分枝桿菌檢測，因痰液中可能含菌量少，即使SCC較多也應(yīng)進行培養(yǎng)，但需備注標(biāo)本質(zhì)量。3.尿液標(biāo)本采集時，中段尿與導(dǎo)尿標(biāo)本的適用場景及操作差異有哪些？答：中段尿與導(dǎo)尿標(biāo)本均為尿液微生物檢驗的常用采集方法，適用場景及操作差異如下：（1）適用場景：-中段尿（清潔中段尿）：適用于門診或住院患者的非復(fù)雜性尿路感染篩查，患者能自主排尿且無尿道插管；-導(dǎo)尿標(biāo)本：適用于無法自主排尿（如尿潴留）、需長期留尿觀察（如重癥患者）或懷疑中段尿采集污染時（如多次中段尿結(jié)果矛盾）。（2）操作差異：-中段尿：①患者清潔外陰：女性分開大陰唇，用溫水或0.1%苯扎溴銨清洗尿道口及周圍，男性翻起包皮清洗龜頭；②棄去前段尿（約10-20ml），留取中段尿10-20ml于無菌容器；③避免容器接觸外陰；④采集后2小時內(nèi)送檢，或4℃冷藏（不超過24小時）。-導(dǎo)尿標(biāo)本：①嚴格無菌操作，消毒尿道口后插入導(dǎo)尿管（一次性無菌導(dǎo)尿管）；②棄去前段尿（約10ml），留取中段尿10-20ml于無菌容器；③長期留置導(dǎo)尿管患者需更換導(dǎo)尿管后采集（避免導(dǎo)管表面生物膜污染），不可從集尿袋直接取尿（因集尿袋尿液可能滋生細菌）；④采集后處理同中段尿。特殊注意：①兒童中段尿采集困難時可用無菌尿袋貼于會陰部，但需及時觀察并在排尿后立即采集，避免污染；②懷疑厭氧菌感染（如腎周膿腫破入膀胱）時，需用針筒從導(dǎo)尿管末端穿刺抽取尿液，注入?yún)捬踹\送瓶。4.糞便標(biāo)本采集時，針對不同病原體（如沙門菌、志賀菌、霍亂弧菌、艱難梭菌）的采集要求有何不同？答：不同病原體的生存特性及感染特點決定了糞便標(biāo)本的采集要求差異，具體如下：（1）沙門菌、志賀菌（腸桿菌科）：-采集時機：發(fā)病早期（3天內(nèi)）、未用抗生素前，腹瀉急性期（糞便呈黏液膿血便時）；-采集方法：取黏液、膿血或稀便部分2-5g，避免接觸便盆（用無菌棉簽或木片挑取）；-保存與運送：若不能及時送檢（＞2小時），需用Cary-Blair運送培養(yǎng)基（保持病原體活性，抑制雜菌），4℃保存不超過24小時。（2）霍亂弧菌（弧菌屬）：-采集時機：發(fā)病后6天內(nèi)，服用抗生素前；-采集方法：取米泔水樣便或肛拭子（排便困難時），量＞1ml；-保存與運送：需用堿性蛋白胨水（pH8.4-8.6）運送，因霍亂弧菌在弱堿性環(huán)境中存活更久，避免用普通培養(yǎng)基（酸性環(huán)境抑制其生長）；-特殊要求：標(biāo)本需標(biāo)注“疑似霍亂”，按甲類傳染病標(biāo)本處理，2小時內(nèi)送檢。（3）艱難梭菌（厭氧芽孢桿菌）：-采集時機：腹瀉發(fā)作期（未用止瀉藥前），停用抗生素后至少48小時（避免藥物抑制）；-采集方法：新鮮糞便（稀便或軟便，不可用成形便）5-10g，或肛拭子（插入肛門4-5cm旋轉(zhuǎn)采集）；-保存與運送：因艱難梭菌芽孢對環(huán)境抵抗力強，可室溫保存（2小時內(nèi)送檢），或冷藏（4℃不超過48小時）；需同時檢測毒素（毒素A/B）時，標(biāo)本需冷凍（-20℃）保存，避免毒素降解。（4）其他注意：①寄生蟲（如阿米巴原蟲）需采集新鮮便（30分鐘內(nèi)送檢），保溫（35-37℃）避免原蟲死亡；②隱孢子蟲檢測需用專用保存液（如10%甲醛或多聚甲醛）固定。5.腦脊液標(biāo)本采集后為何需要立即送檢？若無法及時送檢應(yīng)如何處理？答：腦脊液（CSF）標(biāo)本需立即送檢的核心原因是病原體在體外存活時間短，且CSF中的細胞、蛋白質(zhì)等成分易降解，影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。具體原因包括：（1）病原體易死亡：腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對溫度敏感，低溫（4℃）可能導(dǎo)致其死亡；肺炎鏈球菌在CSF中易自溶，放置過久會降低培養(yǎng)陽性率；（2）細胞計數(shù)誤差：CSF中的白細胞會隨時間破壞，影響細胞分類計數(shù)（如中性粒細胞與淋巴細胞比例）；（3）生化指標(biāo)變化：葡萄糖被白細胞或細菌消耗，導(dǎo)致糖含量降低；蛋白質(zhì)降解可能影響結(jié)果；（4）抗酸染色（結(jié)核分枝桿菌）：結(jié)核分枝桿菌雖生存力較強，但CSF中菌量少，延遲送檢可能導(dǎo)致沉淀丟失。若無法立即送檢（如轉(zhuǎn)運時間超過30分鐘），處理措施如下：（1）細菌培養(yǎng)：保溫（35-37℃）運送，避免冷藏（腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌需35-37℃）；（2）真菌培養(yǎng)（如隱球菌）：可室溫保存（25℃），但不超過2小時；（3）抗酸染色（結(jié)核）：需冷藏（4℃）抑制雜菌生長，同時避免光照；（4）病毒檢測（如HSV、腸道病毒）：需冷凍（-70℃）保存，運輸時用干冰；（5）特殊情況：懷疑新型隱球菌感染時，可在標(biāo)本中加入少量無菌血清（保護莢膜），避免干燥。6.膿汁及創(chuàng)傷感染標(biāo)本采集時，如何避免皮膚正常菌群的污染？答：皮膚表面存在大量正常菌群（如葡萄球菌、棒狀桿菌、丙酸桿菌等），采集膿汁或創(chuàng)傷標(biāo)本時需嚴格避免其污染，具體措施如下：（1）開放傷口：①先用無菌生理鹽水沖洗創(chuàng)面（去除表面污染物），再用無菌棉簽擦拭深部組織或膿腔邊緣（避免接觸表面滲出液）；②若為膿腫，需用無菌注射器穿刺抽?。?5%酒精消毒皮膚后，用20ml注射器接18G針頭，抽取膿汁注入無菌試管或厭氧瓶），避免擠壓（防止正常菌群進入）；③已破潰的膿腫，需用無菌剪刀剪去表面壞死組織，取深部新鮮組織（5-10mg）放入無菌容器。（2）閉合傷口（未破潰）：①嚴格消毒皮膚（碘伏環(huán)形消毒，直徑＞5cm），待干后用無菌注射器穿刺抽取膿汁；②避免穿刺針通過皮膚表面菌群密集區(qū)域（如毛囊、皮脂腺）。（3）標(biāo)本類型選擇：①優(yōu)先采集組織標(biāo)本（如壞死組織、肉芽組織）而非拭子，因拭子易吸附皮膚菌群且采集量少；②拭子采集時需用2根無菌拭子：1根用于涂片，1根用于培養(yǎng)，避免反復(fù)涂抹污染；③厭氧菌感染時，需用厭氧拭子（內(nèi)置還原性培養(yǎng)基）或抽取膿汁注入?yún)捬踹\送瓶（排除空氣）。（4）其他注意：①避免使用棉花拭子（棉纖維可能抑制某些細菌生長），推薦聚酯或藻酸鈣拭子；②若創(chuàng)面已使用消毒劑（如碘伏），需待其完全干燥后采集（殘留消毒劑可能抑制病原體生長）；③標(biāo)記標(biāo)本來源（如深部膿腫、表淺傷口），幫助實驗室判斷污染可能性。7.呼吸道標(biāo)本中，支氣管肺泡灌洗液（BALF）與普通痰液標(biāo)本在微生物檢驗中的應(yīng)用區(qū)別是什么？答：BALF與痰液標(biāo)本均用于下呼吸道感染診斷，但因采集方式和標(biāo)本來源不同，應(yīng)用場景及檢測價值存在顯著差異：（1）采集方式：-痰液：患者自主咳嗽排出，易被口咽菌群污染；-BALF：通過纖維支氣管鏡注入無菌生理鹽水（通常100-200ml）至病變肺段，回收灌洗液（回收率＞40%），直接獲取肺泡及支氣管分泌物，污染少。（2）適用場景：-痰液：適用于社區(qū)獲得性肺炎（CAP）、慢性支氣管炎急性發(fā)作等輕中度感染，患者能配合留痰；-BALF：適用于①重癥肺炎（如ICU患者）、免疫抑制患者（如HIV、化療后）；②疑似特殊病原體感染（如卡氏肺孢子菌、分枝桿菌、真菌）；③痰液檢查陰性但臨床高度懷疑感染；④肺部局限性病變（如肺膿腫、結(jié)節(jié)）的病因診斷。（3）檢測優(yōu)勢：-痰液：操作簡便、成本低，但合格率低（約40-60%），易受污染（假陽性率高）；-BALF：①污染少（口咽菌群＜104CFU/ml即為合格）；②可定量培養(yǎng)（病原體濃度＞104CFU/ml提示感染，＜103CFU/ml多為污染）；③可檢測細胞成分（如肺泡巨噬細胞、嗜酸性粒細胞）輔助診斷；④對卡氏肺孢子菌、軍團菌等需特殊染色的病原體檢出率更高（如六胺銀染色查包囊）。（4）局限性：-痰液：依賴患者配合，兒童、昏迷患者難以獲取合格標(biāo)本；-BALF：有創(chuàng)操作（可能引發(fā)出血、氣胸），成本高，需支氣管鏡設(shè)備及專業(yè)人員。8.簡述厭氧菌培養(yǎng)標(biāo)本的采集與運送要求。答：厭氧菌對氧氣敏感，需嚴格無氧環(huán)境，其采集與運送的核心是避免接觸空氣，具體要求如下：（1）采集原則：①避免正常菌群污染（如口腔、腸道、陰道的厭氧菌為正常菌群，需區(qū)分感染菌與定植菌）；②選擇合適標(biāo)本類型（優(yōu)先組織、膿汁，其次為深部穿刺液，避免拭子）；③采集后立即隔絕空氣。（2）采集方法：-閉合性膿腫：無菌注射器穿刺抽取膿汁，排出空氣后針頭插入無菌橡皮塞（隔絕氧氣）；-開放性傷口：用無菌手術(shù)刀切除表面壞死組織，取深部組織（5-10mg）放入?yún)捬踹\送管（含還原劑如半胱氨酸）；-血液：厭氧血培養(yǎng)瓶（需氧瓶前接種，避免空氣進入）；-尿液：導(dǎo)尿管穿刺抽?。ū苊饧虼⑷?yún)捬跗浚?拭子：僅用于無法獲取其他標(biāo)本時，使用厭氧拭子（內(nèi)置還原性培養(yǎng)基，且拭子為非棉材質(zhì)）。（3）運送要求：①標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)送檢，最長不超過2小時；②厭氧運送裝置（如厭氧罐、厭氧袋）需確保無泄漏，使用前檢查（如放入美藍指示劑，無氧時為無色）；③禁止冷藏（多數(shù)厭氧菌在4℃代謝停滯，甚至死亡），需室溫運送；④標(biāo)本量：組織標(biāo)本＞0.5g，液體＞1ml，拭子需充分接觸組織（避免干燥）。（4）注意事項：①標(biāo)記“厭氧菌培養(yǎng)”，提示實驗室開啟厭氧環(huán)境（如厭氧箱、CO2培養(yǎng)箱）；②避免使用含抗生素的運送培養(yǎng)基（除非已知病原體對特定抗生素耐藥）；③若懷疑產(chǎn)氣莢膜梭菌感染，需同時做涂片（觀察革蘭陽性大桿菌）和快速培養(yǎng)（35℃孵育6-8小時）。9.新生兒敗血癥患者進行血培養(yǎng)時，與成人血培養(yǎng)的采集量及瓶數(shù)有何不同？答：新生兒（尤其是早產(chǎn)兒）血容量小，血培養(yǎng)的采集量和瓶數(shù)需嚴格控制，避免因采血過多導(dǎo)致貧血或循環(huán)不穩(wěn)定，具體差異如下：（1）采集量：-成人：每套（需氧+厭氧）10-20ml（需氧瓶8-10ml，厭氧瓶5-10ml）；-新生兒（＜28天）：每瓶采集量根據(jù)體重調(diào)整，通常為1-3ml/瓶（體重＜1kg：1ml/瓶；1-2kg：2ml/瓶；＞2kg：3ml/瓶），總采血量不超過體重的1%（如3kg新生兒總采血量＜30ml）。（2）采集瓶數(shù)：-成人：每次采集2套（不同部位），共4瓶（2需氧+2厭氧）；-新生兒：因血容量限制，通常采集1套（1需氧瓶+1厭氧瓶），或根據(jù)臨床情況采集1-2瓶（如僅需氧瓶，因新生兒厭氧菌敗血癥較少見）；若懷疑導(dǎo)管相關(guān)感染，需同時采集外周血和導(dǎo)管血（2套）。（3）其他注意：①新生兒皮膚消毒需用刺激性小的消毒劑（如0.5%氯己定酒精溶液），避免碘伏（可能經(jīng)皮膚吸收）；②優(yōu)先選擇股靜脈或頭皮靜脈穿刺（避免反復(fù)穿刺）；③厭氧瓶非必需（新生兒敗血癥以需氧菌為主，如B組鏈球菌、大腸埃希菌），但懷疑壞死性小腸結(jié)腸炎時需加厭氧瓶；④標(biāo)記體重、日齡，幫助實驗室調(diào)整培養(yǎng)條件（如延長培養(yǎng)時間至7天）。10.案例分析：患者男性，65歲，因“發(fā)熱、咳嗽3天”入院，診斷為社區(qū)獲得性肺炎。臨床醫(yī)生開具痰培養(yǎng)+藥敏檢查，護士采集標(biāo)本時患者未漱口，直接留取清晨第一口痰于普通清潔容器中，2小時后送檢。請指出該標(biāo)本