2025遼寧省pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的主要發(fā)明人是（）A.KaryMullisB.JamesWatsonC.FrancisCrickD.RosalindFranklin答案：A2.在PCR反應(yīng)中，起引物作用的是（）A.dNTPB.Taq酶C.寡核苷酸D.Mg2?答案：C3.PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A4.以下哪種不是PCR常見的產(chǎn)物檢測方法（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.熒光定量檢測C.酶聯(lián)免疫吸附測定D.聚丙烯酰胺凝膠電泳答案：C5.Taq酶的最適反應(yīng)溫度是（）A.37℃B.55℃C.72℃D.95℃答案：C6.PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.合成DNA的原料C.維持pH值D.激活酶答案：B7.以下哪種情況可能導(dǎo)致PCR假陽性（）A.引物設(shè)計(jì)不合理B.模板量過少C.實(shí)驗(yàn)室污染D.退火溫度過高答案：C8.在熒光定量PCR中，用于檢測信號的是（）A.熒光染料B.放射性同位素C.化學(xué)發(fā)光物質(zhì)D.電子傳遞體答案：A9.PCR技術(shù)可用于（）A.基因克隆B.疾病診斷C.法醫(yī)鑒定D.以上都是答案：D10.以下關(guān)于PCR循環(huán)次數(shù)的說法正確的是（）A.循環(huán)次數(shù)越多越好B.循環(huán)次數(shù)一般為20-30次C.循環(huán)次數(shù)與模板量無關(guān)D.循環(huán)次數(shù)只影響特異性答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本要素包括（）A.模板B.引物C.Taq酶D.dNTPE.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR特異性的因素有（）A.引物特異性B.退火溫度C.模板純度D.Taq酶質(zhì)量E.循環(huán)次數(shù)答案：ABCDE3.以下哪些是PCR的應(yīng)用領(lǐng)域（）A.遺傳疾病檢測B.腫瘤診斷C.病原體檢測D.基因表達(dá)分析E.生物進(jìn)化研究答案：ABCDE4.在PCR實(shí)驗(yàn)中，防止污染的措施包括（）A.分區(qū)操作B.定期清潔儀器設(shè)備C.使用一次性耗材D.嚴(yán)格的人員操作規(guī)范E.紫外線照射實(shí)驗(yàn)室答案：ABCDE5.引物設(shè)計(jì)的原則包括（）A.特異性B.長度合適C.避免二級結(jié)構(gòu)D.引物間不能互補(bǔ)E.合適的GC含量答案：ABCDE6.以下關(guān)于Taq酶的描述正確的是（）A.是一種熱穩(wěn)定的DNA聚合酶B.具有5'-3'聚合酶活性C.可能有一定的3'-5'外切酶活性D.反應(yīng)需要鎂離子參與E.可用于PCR反應(yīng)答案：ABDE7.PCR產(chǎn)物的純化方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳后切膠回收B.柱層析法C.磁珠法D.乙醇沉淀法E.超濾法答案：ABCDE8.在熒光定量PCR中，相對定量的方法有（）A.標(biāo)準(zhǔn)曲線法B.比較Ct法C.絕對定量法D.差值法E.比率法答案：AB9.以下哪些情況會影響PCR結(jié)果（）A.儀器故障B.試劑質(zhì)量C.樣本采集和保存不當(dāng)D.操作環(huán)境溫度E.操作人員技術(shù)水平答案：ABCDE10.PCR反應(yīng)中緩沖液的作用包括（）A.提供合適的pH環(huán)境B.提供離子強(qiáng)度C.穩(wěn)定酶的活性D.促進(jìn)引物與模板結(jié)合E.有助于產(chǎn)物的合成答案：ABC三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中，引物的長度越長越好。（）答案：錯誤2.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯誤3.熒光定量PCR只能進(jìn)行絕對定量。（）答案：錯誤4.只要模板量足夠，PCR就可以無限循環(huán)。（）答案：錯誤5.瓊脂糖凝膠電泳可以區(qū)分不同大小的PCR產(chǎn)物。（）答案：正確6.實(shí)驗(yàn)室中PCR反應(yīng)體系的配置可以不遵循嚴(yán)格的無菌操作。（）答案：錯誤7.引物與模板的退火溫度越高，特異性越好。（）答案：正確8.在PCR反應(yīng)中，dNTP的濃度越高越好。（）答案：錯誤9.利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增RNA。（）答案：正確10.只要有PCR儀，任何實(shí)驗(yàn)室都可以開展PCR檢測。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR技術(shù)的基本原理。答案：PCR技術(shù)是一種體外擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。以DNA為模板，在引物、Taq酶、dNTP和緩沖液存在的情況下，經(jīng)過變性（使模板DNA雙鏈解開）、退火（引物與模板結(jié)合）、延伸（在Taq酶作用下合成新的DNA鏈）三個步驟的多次循環(huán)，使目的DNA片段得到大量擴(kuò)增。2.說明PCR實(shí)驗(yàn)中防止污染的重要性及一種防止污染的具體方法。答案：防止污染很重要，因?yàn)槲廴緯?dǎo)致假陽性結(jié)果。分區(qū)操作是一種防止污染的方法，將實(shí)驗(yàn)室分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)等不同區(qū)域，不同區(qū)域的物品和操作分開，防止產(chǎn)物等污染樣本或試劑。3.簡述引物設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮的GC含量的要求及原因。答案：引物的GC含量一般在40%-60%為宜。GC含量過高，引物易形成二級結(jié)構(gòu)，影響與模板的結(jié)合；GC含量過低，引物與模板結(jié)合的穩(wěn)定性差，影響PCR反應(yīng)的特異性和效率。4.簡述熒光定量PCR中標(biāo)準(zhǔn)曲線法的基本步驟。答案：首先構(gòu)建已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品系列，進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，得到各標(biāo)準(zhǔn)品的Ct值，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，Ct值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后對未知樣品進(jìn)行同樣的PCR反應(yīng)，得到其Ct值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出未知樣品的濃度。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測中的應(yīng)用及優(yōu)缺點(diǎn)。答案：應(yīng)用：可快速檢測病毒核酸，用于診斷感染。優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、特異性較強(qiáng)、檢測速度相對較快。缺點(diǎn)是可能存在假陰性，對樣本采集和運(yùn)輸要求較高，儀器設(shè)備和試劑成本較高，需要專業(yè)人員操作。2.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：可從引物設(shè)計(jì)方面保證特異性，如合適的長度、避免二級結(jié)構(gòu)等；優(yōu)化退火溫度，選擇合適的Taq酶，提高模板純度，控制循環(huán)次數(shù)等。3.闡述PCR產(chǎn)物的分析方法及其特點(diǎn)。答案：分析方法有瓊脂糖凝膠電泳（簡單、直觀，可區(qū)分不同大小產(chǎn)物）、熒光