細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共30分）1.下列哪種細胞轉(zhuǎn)染方法屬于物理方法？A.磷酸鈣共沉淀法B.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法C.電穿孔法D.病毒介導(dǎo)法答案：C。解析：電穿孔法是利用高壓脈沖電場在細胞膜上形成暫時性的小孔，使外源DNA進入細胞，屬于物理方法；磷酸鈣共沉淀法和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法屬于化學(xué)方法；病毒介導(dǎo)法是生物方法。2.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法的優(yōu)點不包括以下哪項？A.轉(zhuǎn)染效率高B.對細胞毒性小C.可轉(zhuǎn)染多種類型細胞D.不受血清影響答案：D。解析：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染效率較高，能轉(zhuǎn)染多種類型細胞，對細胞毒性相對較小，但血清會影響脂質(zhì)體與DNA復(fù)合物的形成和細胞攝取，所以通常需要在無血清條件下進行轉(zhuǎn)染。3.以下關(guān)于細胞轉(zhuǎn)染的描述，正確的是？A.轉(zhuǎn)染只能將DNA導(dǎo)入細胞B.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞中，外源基因會隨機整合到宿主基因組中C.瞬時轉(zhuǎn)染細胞中外源基因不會表達D.原代細胞比細胞系更容易轉(zhuǎn)染答案：B。解析：轉(zhuǎn)染可以將DNA、RNA等核酸分子導(dǎo)入細胞；瞬時轉(zhuǎn)染細胞中外源基因能在短時間內(nèi)表達；原代細胞通常比細胞系更難轉(zhuǎn)染；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時，外源基因可隨機整合到宿主基因組中。4.病毒介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)染中，常用于基因治療研究的病毒載體是？A.腺病毒B.痘苗病毒C.逆轉(zhuǎn)錄病毒D.以上都是答案：D。解析：腺病毒、痘苗病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒等都可作為病毒載體用于細胞轉(zhuǎn)染，且在基因治療研究中都有應(yīng)用。5.磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染細胞時，形成的磷酸鈣DNA復(fù)合物的最佳pH范圍是？A.6.56.8B.6.87.2C.7.27.4D.7.47.6答案：C。解析：磷酸鈣共沉淀法中，磷酸鈣DNA復(fù)合物形成的最佳pH范圍是7.27.4，在此pH下能形成合適大小和穩(wěn)定性的復(fù)合物，利于細胞攝取。6.電穿孔法轉(zhuǎn)染細胞時，影響轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵因素不包括？A.電壓大小B.脈沖時間C.細胞密度D.培養(yǎng)基成分答案：D。解析：電穿孔法中轉(zhuǎn)染效率受電壓大小、脈沖時間、細胞密度等因素影響，而培養(yǎng)基成分對電穿孔過程本身影響較小。7.細胞轉(zhuǎn)染后，檢測外源基因是否表達，最常用的分子生物學(xué)方法是？A.Southern印跡B.Northern印跡C.Western印跡D.PCR答案：C。解析：Western印跡用于檢測蛋白質(zhì)表達，可直接檢測外源基因表達的蛋白質(zhì)產(chǎn)物，是檢測外源基因是否表達最常用的方法；Southern印跡用于檢測DNA；Northern印跡檢測RNA；PCR用于擴增核酸。8.以下哪種細胞系對脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法的轉(zhuǎn)染效率通常較高？A.HEK293細胞B.原代神經(jīng)元細胞C.原代肝細胞D.原代成纖維細胞答案：A。解析：HEK293細胞是常用的易于轉(zhuǎn)染的細胞系，對脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法的轉(zhuǎn)染效率通常較高；原代神經(jīng)元細胞、原代肝細胞、原代成纖維細胞等原代細胞轉(zhuǎn)染難度較大。9.為了提高細胞轉(zhuǎn)染效率，在轉(zhuǎn)染前對細胞進行的預(yù)處理措施不包括？A.更換新鮮培養(yǎng)基B.對細胞進行饑餓處理C.降低細胞密度D.去除抗生素答案：C。解析：轉(zhuǎn)染前更換新鮮培養(yǎng)基可提供細胞良好的生長環(huán)境，去除抗生素可避免其對轉(zhuǎn)染過程的影響，對細胞進行饑餓處理有時可增強細胞對轉(zhuǎn)染復(fù)合物的攝?。欢档图毎芏瓤赡軙绊懠毎纳L狀態(tài)和轉(zhuǎn)染效率，一般需保持合適的細胞密度。10.病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染時，病毒載體的滴度是指？A.每毫升病毒溶液中病毒顆粒的數(shù)量B.每毫升病毒溶液中感染性病毒顆粒的數(shù)量C.每微克病毒DNA中病毒基因的拷貝數(shù)D.每毫升病毒溶液中病毒蛋白的含量答案：B。解析：病毒載體的滴度是指每毫升病毒溶液中感染性病毒顆粒的數(shù)量，反映了病毒的感染能力。11.下列關(guān)于細胞轉(zhuǎn)染的用途，錯誤的是？A.基因功能研究B.蛋白質(zhì)表達與純化C.細胞免疫治療D.細胞癌變答案：D。解析：細胞轉(zhuǎn)染可用于基因功能研究，通過導(dǎo)入外源基因觀察其對細胞功能的影響；也可用于蛋白質(zhì)表達與純化，使細胞表達特定蛋白質(zhì)；還應(yīng)用于細胞免疫治療，如導(dǎo)入免疫相關(guān)基因來增強細胞免疫功能。而細胞癌變不是細胞轉(zhuǎn)染的正常用途。12.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑與DNA的最佳比例通常需要通過以下哪種方式確定？A.文獻查詢B.經(jīng)驗估計C.預(yù)實驗摸索D.固定比例答案：C。解析：不同的細胞類型、DNA種類和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，其最佳比例可能不同，通常需要通過預(yù)實驗摸索來確定合適的比例。13.轉(zhuǎn)染后的細胞培養(yǎng)過程中，為了篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞，通常使用的方法是？A.熒光顯微鏡觀察B.抗生素篩選C.流式細胞術(shù)分選D.密度梯度離心答案：B。解析：在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染中，常通過構(gòu)建帶有抗性基因的載體，轉(zhuǎn)染后用相應(yīng)的抗生素篩選，能在含抗生素培養(yǎng)基中存活的細胞即為穩(wěn)定整合外源基因的細胞。熒光顯微鏡觀察主要用于觀察轉(zhuǎn)染細胞的熒光標(biāo)記；流式細胞術(shù)分選可根據(jù)細胞的熒光或其他特性分選細胞，但不是篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的常用方法；密度梯度離心主要用于細胞或生物大分子的分離。14.下列哪種物質(zhì)可用于增強磷酸鈣共沉淀法的轉(zhuǎn)染效率？A.甘油B.乙醇C.甲醇D.丙酮答案：A。解析：在磷酸鈣共沉淀法中，甘油休克處理可增強細胞對磷酸鈣DNA復(fù)合物的攝取，提高轉(zhuǎn)染效率；乙醇、甲醇、丙酮一般不用于此目的。15.細胞轉(zhuǎn)染實驗中，陽性對照的作用是？A.驗證實驗操作的有效性B.排除實驗污染C.確定轉(zhuǎn)染的最佳條件D.檢測細胞的活性答案：A。解析：陽性對照使用已知能有效轉(zhuǎn)染的體系，可驗證整個實驗操作過程是否有效，保證實驗方法的可靠性；排除實驗污染通常用陰性對照；確定轉(zhuǎn)染最佳條件需要進行一系列條件優(yōu)化實驗；檢測細胞活性有專門的細胞活性檢測方法。二、多項選擇題（每題3分，共30分）1.細胞轉(zhuǎn)染的化學(xué)方法包括以下哪些？A.磷酸鈣共沉淀法B.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法C.DEAE葡聚糖轉(zhuǎn)染法D.電穿孔法答案：ABC。解析：磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、DEAE葡聚糖轉(zhuǎn)染法都屬于化學(xué)轉(zhuǎn)染方法，利用化學(xué)試劑幫助核酸進入細胞；電穿孔法是物理方法。2.影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有？A.細胞類型B.核酸質(zhì)量和濃度C.轉(zhuǎn)染方法D.培養(yǎng)條件答案：ABCD。解析：不同細胞類型的轉(zhuǎn)染難易程度不同；核酸的質(zhì)量和濃度會影響轉(zhuǎn)染效果；不同轉(zhuǎn)染方法的效率有差異；培養(yǎng)條件如培養(yǎng)基成分、溫度、pH等也會影響細胞狀態(tài)和轉(zhuǎn)染效率。3.病毒介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)染的優(yōu)點有？A.轉(zhuǎn)染效率高B.可感染多種類型細胞C.可將外源基因整合到宿主基因組D.安全性高答案：ABC。解析：病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染效率較高，能感染多種類型細胞，部分病毒載體可將外源基因整合到宿主基因組。但病毒載體存在一定的安全隱患，如可能引發(fā)免疫反應(yīng)、有潛在的致癌風(fēng)險等，安全性并非其優(yōu)點。4.以下哪些是細胞轉(zhuǎn)染后可能出現(xiàn)的結(jié)果？A.外源基因瞬時表達B.外源基因穩(wěn)定整合到宿主基因組C.細胞死亡D.細胞表型改變答案：ABCD。解析：細胞轉(zhuǎn)染后可能出現(xiàn)外源基因的瞬時表達，也可能穩(wěn)定整合到宿主基因組；轉(zhuǎn)染過程可能對細胞造成損傷導(dǎo)致細胞死亡；外源基因的表達可能會引起細胞表型的改變。5.用于檢測細胞轉(zhuǎn)染后外源基因表達水平的方法有？A.RTPCRB.實時熒光定量PCRC.免疫熒光D.酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）答案：ABCD。解析：RTPCR和實時熒光定量PCR可檢測外源基因的mRNA水平；免疫熒光可通過熒光標(biāo)記抗體檢測外源基因表達的蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)的定位和表達情況；ELISA可定量檢測細胞培養(yǎng)上清或細胞裂解液中表達的蛋白質(zhì)。6.細胞轉(zhuǎn)染實驗中，需要注意的事項包括？A.嚴(yán)格無菌操作B.準(zhǔn)確控制轉(zhuǎn)染試劑和核酸的用量C.選擇合適的細胞培養(yǎng)條件D.對轉(zhuǎn)染后的細胞進行適當(dāng)?shù)挠^察和檢測答案：ABCD。解析：細胞轉(zhuǎn)染實驗需嚴(yán)格無菌操作，防止污染；準(zhǔn)確控制轉(zhuǎn)染試劑和核酸用量可保證轉(zhuǎn)染效果；合適的細胞培養(yǎng)條件利于細胞生長和轉(zhuǎn)染；對轉(zhuǎn)染后的細胞進行觀察和檢測可評估轉(zhuǎn)染效果。7.關(guān)于電穿孔法轉(zhuǎn)染細胞，以下說法正確的是？A.可用于原代細胞和懸浮細胞的轉(zhuǎn)染B.能快速將核酸導(dǎo)入細胞C.對細胞的損傷較小D.轉(zhuǎn)染效率與電場強度和脈沖時間有關(guān)答案：ABD。解析：電穿孔法可用于原代細胞和懸浮細胞的轉(zhuǎn)染，能快速將核酸導(dǎo)入細胞，轉(zhuǎn)染效率受電場強度和脈沖時間等因素影響。但電穿孔法對細胞有一定的損傷，可能導(dǎo)致部分細胞死亡。8.以下哪些病毒可作為細胞轉(zhuǎn)染的載體？A.腺相關(guān)病毒B.慢病毒C.單純皰疹病毒D.流感病毒答案：ABC。解析：腺相關(guān)病毒、慢病毒、單純皰疹病毒都可經(jīng)過改造作為細胞轉(zhuǎn)染的病毒載體；流感病毒通常不用于細胞轉(zhuǎn)染載體，因其感染具有較強的宿主特異性和致病性。9.提高細胞轉(zhuǎn)染效率的策略有？A.優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件B.選擇合適的轉(zhuǎn)染方法C.對細胞進行預(yù)處理D.增加核酸的濃度答案：ABC。解析：優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件如調(diào)整電壓、時間、比例等，選擇合適的轉(zhuǎn)染方法，對細胞進行預(yù)處理如更換培養(yǎng)基、去除抗生素等都可提高轉(zhuǎn)染效率。而增加核酸濃度不一定能提高轉(zhuǎn)染效率，過高的核酸濃度可能會對細胞造成毒性，反而降低轉(zhuǎn)染效率。10.細胞轉(zhuǎn)染在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用有？A.基因治療研究B.藥物篩選C.疫苗研發(fā)D.細胞信號通路研究答案：ABCD。解析：細胞轉(zhuǎn)染在基因治療研究中可導(dǎo)入治療性基因；在藥物篩選中可通過轉(zhuǎn)染特定基因構(gòu)建細胞模型來篩選藥物；在疫苗研發(fā)中可用于表達抗原蛋白；在細胞信號通路研究中可導(dǎo)入相關(guān)基因觀察信號通路的變化。三、判斷題（每題2分，共20分）1.細胞轉(zhuǎn)染只能將外源基因?qū)胝婧思毎?。（×）解析：細胞轉(zhuǎn)染不僅可以將外源基因?qū)胝婧思毎?，也可用于原核細胞，如細菌的轉(zhuǎn)化也可看作一種轉(zhuǎn)染形式。2.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對所有細胞類型的轉(zhuǎn)染效率都一樣高。（×）解析：不同細胞類型對脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法的轉(zhuǎn)染效率不同，如HEK293細胞轉(zhuǎn)染效率較高，而原代細胞通常轉(zhuǎn)染效率較低。3.病毒介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)染不會觸發(fā)細胞的免疫反應(yīng)。（×）解析：病毒載體具有抗原性，病毒介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)染可能會觸發(fā)細胞的免疫反應(yīng)，這也是病毒載體應(yīng)用中需要解決的問題之一。4.磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染細胞時，形成的復(fù)合物越大，轉(zhuǎn)染效率越高。（×）解析：磷酸鈣DNA復(fù)合物過大不利于細胞攝取，存在一個合適大小的復(fù)合物才能有較高的轉(zhuǎn)染效率。5.轉(zhuǎn)染后的細胞只要存活就一定有外源基因表達。（×）解析：轉(zhuǎn)染后的細胞存活并不意味著外源基因一定表達，可能存在轉(zhuǎn)染失敗或外源基因沉默等情況。6.電穿孔法轉(zhuǎn)染細胞時，電壓越高，轉(zhuǎn)染效率越高。（×）解析：電壓過高會對細胞造成嚴(yán)重損傷，導(dǎo)致細胞死亡增加，轉(zhuǎn)染效率反而降低，需要選擇合適的電壓。7.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系可以長期傳代并保持外源基因的表達。（√）解析：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞中外源基因整合到宿主基因組中，在合適的培養(yǎng)條件下可以長期傳代并保持外源基因的表達。8.細胞轉(zhuǎn)染實驗中，陰性對照應(yīng)不添加任何核酸。（√）解析：陰性對照不添加核酸，用于排除實驗過程中的污染等因素對結(jié)果的影響。9.免疫熒光法只能檢測細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)，不能檢測細胞外分泌的蛋白質(zhì)。（×）解析：免疫熒光法可通過不同的操作方式檢測細胞內(nèi)和細胞外分泌的蛋白質(zhì)，如對細胞進行固定染色可檢測細胞內(nèi)蛋白，對培養(yǎng)上清中的蛋白質(zhì)進行包被等處理后也可進行檢測。10.細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)只能用于基因表達研究，不能用于基因編輯。（×）解析：細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)可用于將基因編輯工具（如CRISPR/Cas9系統(tǒng)）導(dǎo)入細胞，實現(xiàn)基因編輯的目的，并非只能用于基因表達研究。四、簡答題（每題10分，共20分）1.簡述脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法的原理和操作步驟。答：原理：脂質(zhì)體是一種人工合成的磷脂雙分子層膜結(jié)構(gòu)，它可以與核酸結(jié)合形成脂質(zhì)體核酸復(fù)合物。這種復(fù)合物能夠與細胞膜相互作用，通過膜融合或內(nèi)吞作用將核酸導(dǎo)入細胞內(nèi)。操作步驟：（1）細胞準(zhǔn)備：將細胞接種于合適的培養(yǎng)器皿中，培養(yǎng)至適當(dāng)?shù)募毎芏龋ㄒ话銥?0%80%匯合度）。（2）復(fù)合物制備：分別將脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑和核酸用無血清培養(yǎng)基稀釋，然后將兩者混合，輕輕混勻，室溫孵育一定時間（通常1530分鐘），使脂質(zhì)體與核酸充分結(jié)合形成復(fù)合物。（3）轉(zhuǎn)染：將細胞培養(yǎng)上清吸出，用無血清培養(yǎng)基洗滌細胞，然后加入含有脂質(zhì)體核酸復(fù)合物的無血清培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一定時間（一般46小時）。（4）更換培養(yǎng)基：轉(zhuǎn)染一定時間后，吸出含有復(fù)合物的培養(yǎng)基，更換為含血清的正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。（5）檢測：在轉(zhuǎn)染后的適當(dāng)時間（根據(jù)實驗?zāi)康亩ǎ?，檢測外源基因的表達情況。2.比較病毒介導(dǎo)法和化學(xué)轉(zhuǎn)染法在細胞轉(zhuǎn)染中的優(yōu)缺點。答：病毒介導(dǎo)法：優(yōu)點：（1）轉(zhuǎn)染效率高：能夠高效地將外源基因?qū)爰毎?，尤其是對于一些難以轉(zhuǎn)染的細胞類型，如原代細胞。（2）可感染多種細胞類型：可以感染不同組織來源和分化狀態(tài)的細胞。（3）可將外源基因整合到宿主基因組：實現(xiàn)外源基因的穩(wěn)定表達，適合長期研究。缺點：（1）安全性問題：病毒載體可能引發(fā)免疫反應(yīng)，有潛在的致癌風(fēng)險，需要嚴(yán)格的安全控制措施。（2）制備和操作復(fù)雜：病毒載體的制備需要特殊的技術(shù)和設(shè)備，操作過程要求嚴(yán)格的無菌條件和生物安全