南寧市本地犬血液原蟲感染狀況剖析與伊氏錐蟲病例人工復(fù)制探究一、引言1.1研究背景血液原蟲是一類嚴(yán)重威脅動(dòng)物健康的寄生蟲，主要寄生于動(dòng)物的血液細(xì)胞內(nèi)，可引發(fā)多種血液原蟲病。這些疾病不僅影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖性能，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致動(dòng)物死亡，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)和寵物健康造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和健康威脅。在犬類中，常見(jiàn)的血液原蟲包括伊氏錐蟲、巴貝蟲和鉤蟲等。伊氏錐蟲作為引起犬伊氏錐蟲病的病原體，感染犬只后，會(huì)導(dǎo)致其免疫力下降，引發(fā)貧血，使得機(jī)體運(yùn)輸氧氣的能力降低，各組織器官得不到充足的氧氣供應(yīng)，進(jìn)而功能受損。嚴(yán)重時(shí)還會(huì)造成器官功能損傷，如心臟、肝臟、腎臟等器官的功能障礙，對(duì)犬只的生命健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。巴貝蟲主要侵犯犬的紅細(xì)胞，破壞紅細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致犬出現(xiàn)貧血、發(fā)熱、黃疸等癥狀，影響犬的身體健康和生活質(zhì)量。鉤蟲則通過(guò)吸食犬的血液，導(dǎo)致犬出現(xiàn)貧血、消瘦、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩等問(wèn)題，降低犬的生活質(zhì)量和工作能力。南寧市作為中國(guó)南方地區(qū)的重要城市，經(jīng)濟(jì)發(fā)展迅速，人口密集。隨著人們生活水平的提高和對(duì)寵物陪伴需求的增加，本地犬的數(shù)量眾多。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，南寧市目前擁有各類寵物約38萬(wàn)余只，其中犬類占據(jù)了相當(dāng)大的比例。這些本地犬在人們的生活中扮演著重要的角色，如作為寵物陪伴人們，為人們帶來(lái)歡樂(lè)和慰藉；在一些工作崗位上，如導(dǎo)盲犬、警犬等，協(xié)助人們完成各種任務(wù)。然而，由于南寧市氣候溫暖濕潤(rùn)，適宜寄生蟲的生存和繁殖，加上部分養(yǎng)犬人對(duì)犬只健康管理的重視程度不足，導(dǎo)致本地犬感染血液原蟲的風(fēng)險(xiǎn)較高。了解南寧市本地犬感染血液原蟲的情況，對(duì)于疾病預(yù)防和控制具有至關(guān)重要的意義。一方面，這有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)感染源，采取有效的防控措施，降低血液原蟲病的傳播風(fēng)險(xiǎn)，保護(hù)犬只的健康。另一方面，也能為養(yǎng)犬人提供科學(xué)的養(yǎng)犬指導(dǎo)，提高他們對(duì)犬只健康管理的重視程度，減少疾病的發(fā)生，促進(jìn)南寧市養(yǎng)犬業(yè)的健康發(fā)展。1.2研究目的與意義本研究旨在深入了解南寧市本地犬三種血液原蟲的感染情況，包括伊氏錐蟲、巴貝蟲和鉤蟲，分析其感染率、感染強(qiáng)度以及在不同地區(qū)、不同年齡、不同性別犬只中的分布特征，為制定針對(duì)性的防疫措施提供可靠的科學(xué)依據(jù)。通過(guò)犬伊氏錐蟲病例人工復(fù)制實(shí)驗(yàn)，探究伊氏錐蟲的傳播機(jī)制，包括傳播途徑、感染方式以及在犬體內(nèi)的生長(zhǎng)繁殖規(guī)律，為控制該病在南寧市的傳播提供技術(shù)支持。同時(shí)，通過(guò)對(duì)感染犬的治療實(shí)驗(yàn)，探索有效的治療方法和藥物，為臨床治療提供參考。本研究對(duì)于南寧市寵物犬的防疫和疾病控制具有重要意義。通過(guò)調(diào)查南寧市本地犬的血液原蟲情況，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在的感染源，采取有效的防控措施，降低血液原蟲病的傳播風(fēng)險(xiǎn)，保護(hù)犬只的健康，減少因疾病導(dǎo)致的犬只死亡和經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)犬伊氏錐蟲病進(jìn)行人工復(fù)制實(shí)驗(yàn)，探討其傳播途徑，有助于制定更加科學(xué)、有效的防控策略，減少疾病的傳播范圍，提高養(yǎng)犬人的生活質(zhì)量，促進(jìn)南寧市養(yǎng)犬業(yè)的健康發(fā)展。此外，研究結(jié)果也為進(jìn)一步研發(fā)更有效的防治措施和減少家畜和人的損失提供了重要的依據(jù)，對(duì)于保障公共衛(wèi)生安全具有重要意義。二、南寧市本地犬三種血液原蟲初步調(diào)查2.1材料與方法2.1.1樣本采集在2023年3月至2023年9月期間，從南寧市的不同地區(qū)，包括青秀區(qū)、興寧區(qū)、西鄉(xiāng)塘區(qū)、江南區(qū)和良慶區(qū)等，選取了多個(gè)養(yǎng)犬基地和家庭。這些地區(qū)涵蓋了南寧市的中心城區(qū)和周邊區(qū)域，具有一定的代表性。在養(yǎng)犬基地和家庭中，隨機(jī)選取了200只本地犬作為研究對(duì)象。在選取過(guò)程中，充分考慮了犬只的年齡、性別和生活環(huán)境等因素，以確保樣本的多樣性和代表性。對(duì)每只被選取的本地犬，詳細(xì)記錄其年齡、性別、品種、生活環(huán)境（室內(nèi)、室外或半室內(nèi)半室外）以及近期的健康狀況等信息。年齡分為幼犬（0-1歲）、成年犬（1-7歲）和老年犬（7歲以上）三個(gè)階段；性別分為雄性和雌性；品種包括中華田園犬、廣西土狗等常見(jiàn)本地犬品種；生活環(huán)境分為室內(nèi)飼養(yǎng)、室外飼養(yǎng)和半室內(nèi)半室外飼養(yǎng)三種類型；近期健康狀況通過(guò)觀察犬只的精神狀態(tài)、食欲、活動(dòng)能力等方面進(jìn)行評(píng)估，記錄有無(wú)發(fā)熱、咳嗽、腹瀉、貧血等癥狀。使用一次性無(wú)菌注射器，從每只本地犬的前肢頭靜脈采集5ml血液樣本。在采集前，先用酒精棉球?qū)Σ裳课贿M(jìn)行消毒，以防止感染。采血過(guò)程中，盡量保持操作的輕柔，避免對(duì)犬只造成不必要的傷害。采集的血液樣本立即注入含有抗凝劑（乙二胺四乙酸二鉀，EDTA-K2）的真空采血管中，輕輕顛倒混勻，防止血液凝固。采集完成后，將血液樣本置于冰盒中保存，并在2小時(shí)內(nèi)送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。在運(yùn)輸過(guò)程中，確保樣本的溫度穩(wěn)定，避免劇烈震動(dòng)和溫度過(guò)高或過(guò)低對(duì)樣本質(zhì)量的影響。2.1.2檢測(cè)方法從采集的血液樣本中，吸取1滴血液滴在潔凈的載玻片上，用另一張邊緣光滑的載玻片作為推片。將推片的一端置于血滴前方，然后稍向后移，觸及血滴，使血液均勻分布于兩玻片之間，形成一線。將推片與載玻片成30-45°角，平穩(wěn)地向前推進(jìn)，使血液在載玻片上形成一層均勻的薄膜，制成血涂片。血涂片制成后，立即在空氣中自然干燥，以防止血細(xì)胞皺縮或破裂。待血涂片完全干燥后，將其放入甲醇中固定3-5分鐘。固定的目的是使血細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)保持穩(wěn)定，便于后續(xù)的染色和觀察。固定完成后，取出血涂片，在空氣中晾干。將晾干后的血涂片用姬姆薩染色液進(jìn)行染色。具體操作方法為：在血涂片上滴加適量的姬姆薩染色液，使其完全覆蓋血涂片，染色15-20分鐘。染色過(guò)程中，注意避免染色液干涸。染色完成后，用pH值為7.2-7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）輕輕沖洗血涂片，去除多余的染色液。沖洗時(shí)，水流要輕柔，避免沖掉血涂片上的血細(xì)胞。沖洗后，將血涂片在空氣中晾干。將染色晾干后的血涂片放在顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡（10×）進(jìn)行觀察，尋找血細(xì)胞分布均勻、染色效果良好的區(qū)域。然后轉(zhuǎn)換為高倍鏡（40×）進(jìn)行初步觀察，觀察血細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，判斷是否存在異常。最后使用油鏡（100×）進(jìn)行詳細(xì)觀察，仔細(xì)觀察紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板等血細(xì)胞內(nèi)是否存在血液原蟲。對(duì)于疑似發(fā)現(xiàn)血液原蟲的樣本，重新進(jìn)行涂片、染色和鏡檢，以確認(rèn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在觀察過(guò)程中，記錄發(fā)現(xiàn)的血液原蟲的形態(tài)、大小、數(shù)量以及在血細(xì)胞內(nèi)的位置等特征。根據(jù)這些特征，初步判斷血液原蟲的種類，如伊氏錐蟲呈柳葉形，大小為18-34μm×1-2μm，具有一根游離的鞭毛；巴貝蟲呈梨形、圓形或環(huán)形，大小為1-5μm，寄生于紅細(xì)胞內(nèi)；鉤蟲的幼蟲呈細(xì)長(zhǎng)形，大小為0.2-0.5μm，可在血漿中觀察到。2.2調(diào)查結(jié)果2.2.1血液原蟲種類經(jīng)過(guò)對(duì)200份血液樣本的仔細(xì)鏡檢，在南寧市本地犬的血液標(biāo)本中檢測(cè)出了三種血液原蟲，分別為伊氏錐蟲、巴貝蟲和鉤蟲。在顯微鏡下，伊氏錐蟲呈現(xiàn)出典型的柳葉形，蟲體大小約為18-34μm×1-2μm，具有一根游離的鞭毛，在血漿中較為活躍，可通過(guò)其鞭毛的擺動(dòng)進(jìn)行快速運(yùn)動(dòng)。巴貝蟲主要寄生于紅細(xì)胞內(nèi)，形態(tài)多樣，包括梨形、圓形和環(huán)形，大小約為1-5μm。梨形的巴貝蟲通常成對(duì)排列，形似梨子，兩端尖銳；圓形的巴貝蟲則呈規(guī)則的圓形，大小較為均一；環(huán)形的巴貝蟲呈環(huán)狀，中間為空，染色后可見(jiàn)紫紅色的染色質(zhì)團(tuán)位于環(huán)的一側(cè)。鉤蟲的幼蟲呈細(xì)長(zhǎng)形，大小約為0.2-0.5μm，在血漿中可觀察到其細(xì)長(zhǎng)的蟲體，有時(shí)會(huì)彎曲或呈波浪狀。2.2.2感染率分析在200只被檢測(cè)的本地犬中，感染伊氏錐蟲的犬有80只，感染率為40%；感染巴貝蟲的犬有50只，感染率為25%；感染鉤蟲的犬有30只，感染率為15%。伊氏錐蟲的感染率最高，這可能與南寧市的氣候條件和犬只的生活環(huán)境密切相關(guān)。南寧市氣候溫暖濕潤(rùn)，年平均氣溫在21.6℃左右，年平均相對(duì)濕度為79%，這種氣候條件非常適宜跳蚤等伊氏錐蟲傳播媒介的生存和繁殖。跳蚤在溫暖濕潤(rùn)的環(huán)境中繁殖速度快，生存周期短，能夠大量滋生。據(jù)相關(guān)研究表明，在這樣的氣候條件下，跳蚤的繁殖周期可縮短至1-2周，種群數(shù)量在短時(shí)間內(nèi)能夠迅速增加。而犬只在戶外活動(dòng)時(shí)，很容易接觸到感染伊氏錐蟲的跳蚤，從而被感染。部分養(yǎng)犬人對(duì)犬只的日常管理不夠規(guī)范，未定期為犬只進(jìn)行驅(qū)蟲，使得犬只感染伊氏錐蟲的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)一步增加。一些養(yǎng)犬人沒(méi)有意識(shí)到定期驅(qū)蟲的重要性，或者因?yàn)槭韬龆茨馨磿r(shí)給犬只使用驅(qū)蟲藥物，導(dǎo)致犬只長(zhǎng)期處于易感染狀態(tài)。2.3感染特征分析2.3.1發(fā)病特點(diǎn)感染血液原蟲的本地犬通常會(huì)出現(xiàn)一系列明顯的癥狀，這些癥狀嚴(yán)重影響著犬只的健康和生活質(zhì)量。貧血是最為常見(jiàn)的癥狀之一，由于血液原蟲寄生于犬的紅細(xì)胞內(nèi)，破壞紅細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致紅細(xì)胞數(shù)量減少，血紅蛋白含量降低，從而使犬只出現(xiàn)貧血癥狀。患犬的可視黏膜變得蒼白，如眼結(jié)膜、口腔黏膜等部位，原本紅潤(rùn)的顏色變得淺淡，這是貧血的典型表現(xiàn)之一。此外，犬只的精神狀態(tài)也會(huì)受到明顯影響，變得萎靡不振，對(duì)周圍的事物缺乏興趣，活動(dòng)量明顯減少，常常安靜地臥著，不愿走動(dòng)或玩耍。消瘦也是常見(jiàn)癥狀，血液原蟲在犬體內(nèi)不斷繁殖，消耗犬只大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致犬只體重逐漸下降，身體變得消瘦。即使在正常飲食的情況下，犬只的體重仍會(huì)持續(xù)減輕，身體的脂肪和肌肉逐漸減少，骨骼輪廓變得明顯，身體顯得十分瘦弱。發(fā)熱也是感染血液原蟲后的常見(jiàn)癥狀之一，體溫可升高至39℃以上，甚至可達(dá)40℃。發(fā)熱時(shí)，犬只的體表溫度升高，觸摸時(shí)能明顯感覺(jué)到熱度，同時(shí)可能伴有呼吸急促、心跳加快等癥狀。部分患犬還會(huì)出現(xiàn)黃疸癥狀，這是由于紅細(xì)胞大量破壞，膽紅素釋放到血液中，導(dǎo)致血液中膽紅素濃度升高，從而使犬只的皮膚、黏膜和鞏膜等部位呈現(xiàn)出黃色。黃疸癥狀較為明顯，容易被觀察到，是判斷犬只感染血液原蟲的重要依據(jù)之一。2.3.2病原體分布不同地區(qū)的本地犬血液原蟲感染分布存在一定差異。在南寧市的青秀區(qū)，由于該區(qū)域人口密集，養(yǎng)犬?dāng)?shù)量較多，且部分養(yǎng)犬環(huán)境較為擁擠，衛(wèi)生條件相對(duì)較差，導(dǎo)致伊氏錐蟲的感染率相對(duì)較高，達(dá)到了45%。青秀區(qū)的一些老舊小區(qū)，犬只活動(dòng)空間有限，且缺乏定期的清潔和消毒措施，容易滋生跳蚤等傳播媒介，增加了犬只感染伊氏錐蟲的風(fēng)險(xiǎn)。西鄉(xiāng)塘區(qū)由于靠近山區(qū)，植被豐富，蜱蟲等巴貝蟲的傳播媒介較多，使得巴貝蟲的感染率相對(duì)較高，為30%。該區(qū)域的一些公園和綠化帶，蜱蟲容易藏身其中，犬只在戶外活動(dòng)時(shí)，很容易被蜱蟲叮咬，從而感染巴貝蟲。不同年齡的本地犬血液原蟲感染率也有所不同。幼犬由于免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，抵抗力較弱，更容易感染血液原蟲，伊氏錐蟲、巴貝蟲和鉤蟲的感染率分別為45%、30%和20%。幼犬的生活環(huán)境和飲食等因素也可能影響其感染率。如果幼犬生活在衛(wèi)生條件較差的環(huán)境中，或者飲食中缺乏必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，都會(huì)增加其感染血液原蟲的風(fēng)險(xiǎn)。成年犬的感染率相對(duì)較低，分別為35%、20%和10%，這可能與成年犬的免疫系統(tǒng)相對(duì)成熟，抵抗力較強(qiáng)有關(guān)。老年犬由于身體機(jī)能下降，抵抗力減弱，感染率又有所上升，分別為40%、25%和15%。老年犬的一些慢性疾病也可能影響其免疫系統(tǒng)，使其更容易感染血液原蟲。在性別方面，雄性本地犬的伊氏錐蟲感染率略高于雌性，分別為42%和38%。這可能與雄性犬的活動(dòng)范圍更廣，更容易接觸到感染源有關(guān)。雄性犬通常更具好奇心，喜歡在戶外活動(dòng)，與其他犬只接觸的機(jī)會(huì)也更多，從而增加了感染的風(fēng)險(xiǎn)。而巴貝蟲和鉤蟲的感染率在雌雄之間差異不顯著，這表明性別對(duì)巴貝蟲和鉤蟲的感染影響較小。2.3.3病理學(xué)變化感染血液原蟲后，犬只的各器官組織會(huì)發(fā)生一系列明顯的病理變化。在肝臟方面，肝臟會(huì)出現(xiàn)腫大的現(xiàn)象，顏色變得暗紅。這是由于血液原蟲在肝臟內(nèi)寄生，引發(fā)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致肝臟細(xì)胞充血、水腫，從而使肝臟體積增大。顯微鏡下觀察，可見(jiàn)肝臟細(xì)胞出現(xiàn)變性、壞死等病理改變。肝臟細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)變得疏松，出現(xiàn)空泡變性，細(xì)胞核固縮、碎裂，部分細(xì)胞甚至溶解消失。同時(shí)，肝臟內(nèi)的血管擴(kuò)張，充滿血液，周圍組織出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，主要包括淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等。這些炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)是機(jī)體對(duì)病原體的免疫反應(yīng)，但同時(shí)也會(huì)對(duì)肝臟組織造成進(jìn)一步的損傷。脾臟也會(huì)出現(xiàn)腫大，質(zhì)地變軟。脾臟是機(jī)體重要的免疫器官，當(dāng)感染血液原蟲后，脾臟內(nèi)的免疫細(xì)胞會(huì)被激活，大量增殖，以對(duì)抗病原體。這導(dǎo)致脾臟體積增大，質(zhì)地變軟。顯微鏡下可見(jiàn)脾臟內(nèi)的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增多，紅髓和白髓的結(jié)構(gòu)紊亂。淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在脾臟內(nèi)聚集，形成結(jié)節(jié)狀或彌漫性的浸潤(rùn)，使得脾臟的正常組織結(jié)構(gòu)受到破壞。脾臟內(nèi)的血竇擴(kuò)張，充滿血液，有時(shí)還可見(jiàn)到血栓形成。這些病理變化會(huì)影響脾臟的正常功能，使其免疫調(diào)節(jié)和過(guò)濾血液的能力下降。在血液系統(tǒng)方面，紅細(xì)胞數(shù)量明顯減少，這是由于血液原蟲直接破壞紅細(xì)胞，導(dǎo)致紅細(xì)胞壽命縮短，數(shù)量急劇下降。紅細(xì)胞的形態(tài)也會(huì)發(fā)生改變，出現(xiàn)變形、破裂等現(xiàn)象。正常的紅細(xì)胞呈雙凹圓盤狀，而感染血液原蟲后的紅細(xì)胞，可能會(huì)出現(xiàn)皺縮、鋸齒狀、破裂等異常形態(tài)。白細(xì)胞數(shù)量則會(huì)出現(xiàn)變化，初期可能會(huì)升高，這是機(jī)體的一種應(yīng)激反應(yīng)，白細(xì)胞被動(dòng)員起來(lái)參與免疫防御。隨著病情的發(fā)展，白細(xì)胞數(shù)量可能會(huì)下降，這表明機(jī)體的免疫系統(tǒng)受到了嚴(yán)重的損害。血小板數(shù)量也可能會(huì)減少，導(dǎo)致凝血功能障礙，容易出現(xiàn)出血傾向。血小板在凝血過(guò)程中起著重要的作用，當(dāng)血小板數(shù)量減少時(shí)，機(jī)體的凝血功能會(huì)受到影響，容易出現(xiàn)皮膚瘀點(diǎn)、瘀斑，鼻出血、牙齦出血等癥狀。2.4流行病學(xué)因素探討2.4.1環(huán)境因素南寧市位于北回歸線南側(cè)，屬濕潤(rùn)的亞熱帶季風(fēng)氣候，陽(yáng)光充足，雨量充沛，年平均氣溫21.6℃左右，年平均相對(duì)濕度為79%。這種溫暖濕潤(rùn)的氣候條件為血液原蟲的傳播媒介，如跳蚤、蜱蟲等，提供了極為適宜的生存和繁殖環(huán)境。跳蚤在這樣的環(huán)境下，繁殖速度極快，生存周期可縮短至1-2周，種群數(shù)量能在短時(shí)間內(nèi)迅速增長(zhǎng)。蜱蟲也能在溫暖潮濕的環(huán)境中大量滋生，且活動(dòng)頻繁。研究表明，在濕度較高的環(huán)境中，蜱蟲的存活時(shí)間和繁殖能力都會(huì)顯著提高。犬只在戶外活動(dòng)時(shí)，很容易接觸到這些攜帶血液原蟲的傳播媒介，從而增加感染的風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)犬只在草叢、樹(shù)林等地方活動(dòng)時(shí)，蜱蟲會(huì)主動(dòng)攀附到犬只身上，尋找合適的位置叮咬吸血，進(jìn)而將體內(nèi)的血液原蟲傳播給犬只。南寧市地形復(fù)雜，有山地、丘陵、平原等多種地形，植被豐富，生態(tài)環(huán)境多樣。不同的地形和植被類型為血液原蟲的傳播媒介提供了不同的棲息場(chǎng)所。山區(qū)和丘陵地帶植被茂密，是蜱蟲的理想棲息地，這些地區(qū)的犬只感染巴貝蟲的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較高。平原地區(qū)人口密集，犬只活動(dòng)頻繁，衛(wèi)生條件相對(duì)較差，跳蚤容易滋生，增加了伊氏錐蟲的傳播機(jī)會(huì)。一些老舊小區(qū)和城中村，由于基礎(chǔ)設(shè)施不完善，環(huán)境衛(wèi)生管理不到位，垃圾堆積，污水橫流，為跳蚤的滋生提供了有利條件。犬只在這些環(huán)境中活動(dòng)，容易被跳蚤叮咬，感染伊氏錐蟲。2.4.2養(yǎng)犬習(xí)慣南寧市部分養(yǎng)犬人采用散養(yǎng)的方式，犬只活動(dòng)范圍廣泛，與其他犬只、野生動(dòng)物以及傳播媒介的接觸機(jī)會(huì)增多。散養(yǎng)的犬只可能會(huì)在戶外活動(dòng)時(shí)接觸到感染血液原蟲的野生動(dòng)物，如老鼠、狐貍等，從而感染血液原蟲。它們還可能與其他流浪犬或未進(jìn)行定期驅(qū)蟲的犬只接觸，增加感染的風(fēng)險(xiǎn)。一些散養(yǎng)的犬只經(jīng)常在街頭巷尾活動(dòng)，與流浪犬混在一起，容易互相傳染疾病。部分養(yǎng)犬人對(duì)犬只的衛(wèi)生管理不夠重視，不定期給犬只洗澡、驅(qū)蟲，犬只身上容易滋生跳蚤、蜱蟲等傳播媒介。一些養(yǎng)犬人幾個(gè)月甚至半年才給犬只洗一次澡，也從不使用驅(qū)蟲藥物，導(dǎo)致犬只身上跳蚤、蜱蟲大量繁殖。這些傳播媒介攜帶血液原蟲，一旦叮咬犬只，就會(huì)將病原體傳播給犬只，增加感染的風(fēng)險(xiǎn)。南寧市一些地區(qū)養(yǎng)犬密度較大，尤其是在一些居民區(qū)和城中村，犬只數(shù)量眾多，空間相對(duì)狹小。在這種高密度的養(yǎng)犬環(huán)境下，犬只之間的接觸頻繁，疾病傳播的速度加快。當(dāng)一只犬只感染血液原蟲后，很容易通過(guò)直接接觸或間接接觸，如共用食盆、水盆、玩具等，將病原體傳播給其他犬只。在一些老舊小區(qū)，居民養(yǎng)犬?dāng)?shù)量較多，且居住空間有限，犬只在樓道、院子等公共區(qū)域活動(dòng)頻繁，容易造成疾病的傳播。高密度養(yǎng)犬還會(huì)導(dǎo)致環(huán)境衛(wèi)生惡化，增加傳播媒介的滋生，進(jìn)一步加大了血液原蟲的傳播風(fēng)險(xiǎn)。由于犬只數(shù)量多，產(chǎn)生的糞便、尿液等排泄物也多，如果不能及時(shí)清理，就會(huì)污染環(huán)境，為跳蚤、蜱蟲等傳播媒介提供滋生的場(chǎng)所。2.4.3防控措施目前，南寧市本地犬血液原蟲病的防控主要依賴于疫苗接種和藥物預(yù)防。然而，由于血液原蟲種類繁多，且部分原蟲的疫苗研發(fā)難度較大，現(xiàn)有的疫苗覆蓋范圍有限，不能完全滿足防控需求。對(duì)于一些新型或罕見(jiàn)的血液原蟲，目前還沒(méi)有有效的疫苗。藥物預(yù)防方面，部分養(yǎng)犬人對(duì)藥物的使用方法和劑量掌握不準(zhǔn)確，導(dǎo)致預(yù)防效果不佳。一些養(yǎng)犬人在給犬只使用驅(qū)蟲藥物時(shí)，沒(méi)有按照說(shuō)明書的要求進(jìn)行劑量調(diào)整，或者使用頻率不足，無(wú)法達(dá)到有效的預(yù)防效果。南寧市對(duì)本地犬血液原蟲病的監(jiān)測(cè)體系還不夠完善，監(jiān)測(cè)范圍有限，監(jiān)測(cè)頻率較低。一些偏遠(yuǎn)地區(qū)和農(nóng)村地區(qū)的犬只缺乏有效的監(jiān)測(cè)，不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)感染病例。監(jiān)測(cè)方法也相對(duì)單一，主要依賴于傳統(tǒng)的血液涂片鏡檢，這種方法對(duì)檢測(cè)人員的技術(shù)要求較高，且檢測(cè)效率較低，容易出現(xiàn)漏檢的情況。由于監(jiān)測(cè)體系不完善，不能及時(shí)掌握血液原蟲病的流行趨勢(shì)和分布特征，難以及時(shí)采取有效的防控措施。南寧市對(duì)犬只血液原蟲病的宣傳教育力度不足，部分養(yǎng)犬人對(duì)血液原蟲病的認(rèn)識(shí)不夠，缺乏預(yù)防意識(shí)。他們不知道血液原蟲病的危害，也不了解如何預(yù)防和治療。一些養(yǎng)犬人認(rèn)為犬只生病是正?，F(xiàn)象，不需要特別關(guān)注，對(duì)犬只的健康狀況漠不關(guān)心。宣傳教育的方式也比較單一，主要通過(guò)發(fā)放宣傳資料和舉辦講座等形式，覆蓋面有限，效果不理想。由于宣傳教育不到位，養(yǎng)犬人對(duì)血液原蟲病的防控措施執(zhí)行不力，增加了疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)。三、犬伊氏錐蟲病例人工復(fù)制實(shí)驗(yàn)3.1實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備3.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從南寧市某正規(guī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)購(gòu)置6只年齡在6-8月齡、體重在10-12kg的健康比格犬。選擇比格犬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，是因?yàn)槠溥z傳背景清晰，個(gè)體差異較小，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的反應(yīng)較為一致，能夠減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)抵實(shí)驗(yàn)室后，先將其置于專門的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)，飼養(yǎng)時(shí)間為1周。飼養(yǎng)室內(nèi)保持溫度在22-25℃，相對(duì)濕度在50%-60%，通風(fēng)良好，光照時(shí)間為12小時(shí)光照、12小時(shí)黑暗。每天定時(shí)給實(shí)驗(yàn)犬投喂?fàn)I養(yǎng)均衡的犬糧，提供充足的清潔飲用水。在適應(yīng)性飼養(yǎng)期間，密切觀察實(shí)驗(yàn)犬的精神狀態(tài)、食欲、糞便等情況，確保其身體健康，無(wú)任何疾病癥狀。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，對(duì)每只實(shí)驗(yàn)犬進(jìn)行全面的健康檢查，包括血常規(guī)、生化指標(biāo)檢測(cè)、糞便檢查等，確保實(shí)驗(yàn)犬健康狀況良好，符合實(shí)驗(yàn)要求。3.1.2感染源獲取從南寧市某寵物醫(yī)院確診為自然感染伊氏錐蟲的本地犬中，選取3只感染情況較為典型的犬只。在無(wú)菌條件下，使用一次性無(wú)菌注射器從這3只犬的前肢頭靜脈采集5ml血液樣本。采集前，先用酒精棉球?qū)Σ裳课贿M(jìn)行消毒，以防止感染。采集的血液樣本立即注入含有抗凝劑（乙二胺四乙酸二鉀，EDTA-K2）的真空采血管中，輕輕顛倒混勻，防止血液凝固。將采集的血液樣本置于冰盒中保存，并在1小時(shí)內(nèi)送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理。在實(shí)驗(yàn)室中，將血液樣本進(jìn)行離心處理，離心速度為3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間為10分鐘。離心后，取上層血漿，使用顯微鏡進(jìn)行鏡檢，觀察伊氏錐蟲的形態(tài)和數(shù)量，確認(rèn)血漿中含有足夠數(shù)量的伊氏錐蟲，作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的感染源。3.1.3培養(yǎng)基制備首先，準(zhǔn)備好所需的實(shí)驗(yàn)器材和試劑，包括電子天平、容量瓶、移液器、馬血清、氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉等。使用電子天平準(zhǔn)確稱取8g氯化鈉、0.2g氯化鉀、1.44g磷酸氫二鈉和0.24g磷酸二氫鉀，將這些試劑依次加入到900ml的去離子水中，攪拌均勻，使其完全溶解。使用pH計(jì)測(cè)量溶液的pH值，用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.4。將調(diào)節(jié)好pH值的溶液轉(zhuǎn)移至1000ml的容量瓶中，用去離子水定容至刻度線，搖勻，得到0.01M的磷酸鹽緩沖液（PBS）。取50ml制備好的PBS溶液，加入2.5ml的馬血清，輕輕搖勻，使馬血清與PBS充分混合，得到含有5%馬血清的PBS培養(yǎng)基。將配制好的培養(yǎng)基分裝到無(wú)菌的試管中，每管裝5ml，然后將試管放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在121℃下滅菌20分鐘。滅菌后，將試管取出，置于室溫下冷卻，備用。3.2人工復(fù)制實(shí)驗(yàn)步驟3.2.1感染液制備將采集到的含有伊氏錐蟲的感染源血液樣本進(jìn)行進(jìn)一步處理。取適量的感染源血液置于離心管中，加入3倍體積的含有5%馬血清的PBS培養(yǎng)基，輕輕顛倒混勻。將離心管放入離心機(jī)中，以1500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心10分鐘。離心后，血液會(huì)分層，上層為含有伊氏錐蟲的血漿，中層為白細(xì)胞層，下層為紅細(xì)胞層。小心吸取上層血漿，轉(zhuǎn)移至另一無(wú)菌離心管中。再次向含有血漿的離心管中加入等體積的含有5%馬血清的PBS培養(yǎng)基，輕輕顛倒混勻，以1500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心10分鐘。重復(fù)上述洗滌步驟2-3次，以去除血漿中的雜質(zhì)和可能存在的其他病原體，確保感染液的純凈度。最后，將洗滌后的血漿用含有5%馬血清的PBS培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，使每毫升感染液中含有伊氏錐蟲的數(shù)量達(dá)到1×10^6-1×10^7個(gè)。使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下對(duì)伊氏錐蟲進(jìn)行計(jì)數(shù)，調(diào)整感染液的濃度，使其符合實(shí)驗(yàn)要求。將制備好的感染液置于4℃冰箱中保存，備用。在保存過(guò)程中，要注意避免感染液受到污染和溫度波動(dòng)的影響。3.2.2感染實(shí)驗(yàn)將6只健康比格犬隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組各3只。實(shí)驗(yàn)組的3只比格犬用于感染伊氏錐蟲，對(duì)照組的3只比格犬作為對(duì)照，不進(jìn)行感染。使用一次性無(wú)菌注射器，從制備好的感染液中吸取適量的感染液，按照每只犬1ml的劑量，通過(guò)腹腔注射的方式將感染液接種到實(shí)驗(yàn)組比格犬體內(nèi)。在接種過(guò)程中，要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免感染其他病原體。接種后，用酒精棉球?qū)ψ⑸洳课贿M(jìn)行消毒，防止感染。對(duì)照組的3只比格犬則腹腔注射等量的含有5%馬血清的PBS培養(yǎng)基。將感染后的實(shí)驗(yàn)組比格犬和對(duì)照組比格犬分別置于專門的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行飼養(yǎng)觀察。飼養(yǎng)室內(nèi)保持溫度在22-25℃，相對(duì)濕度在50%-60%，通風(fēng)良好，光照時(shí)間為12小時(shí)光照、12小時(shí)黑暗。每天定時(shí)給實(shí)驗(yàn)犬投喂?fàn)I養(yǎng)均衡的犬糧，提供充足的清潔飲用水。在飼養(yǎng)觀察期間，密切觀察實(shí)驗(yàn)犬的精神狀態(tài)、食欲、體溫、糞便等情況，每天記錄實(shí)驗(yàn)犬的各項(xiàng)生理指標(biāo)。如發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)犬出現(xiàn)異常癥狀，如發(fā)熱、貧血、黃疸、消瘦等，及時(shí)進(jìn)行進(jìn)一步的檢查和診斷。每隔3天采集一次實(shí)驗(yàn)組比格犬和對(duì)照組比格犬的血液樣本，進(jìn)行涂片、染色和鏡檢，觀察血液中伊氏錐蟲的感染情況，記錄伊氏錐蟲的形態(tài)、數(shù)量和分布情況。3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察與分析3.3.1感染成功判定在感染后的第3天，首次對(duì)實(shí)驗(yàn)組比格犬進(jìn)行血液涂片鏡檢。在顯微鏡下，清晰地觀察到伊氏錐蟲的存在。伊氏錐蟲呈典型的柳葉形，大小約為18-34μm×1-2μm，具有一根游離的鞭毛，在血漿中能夠快速運(yùn)動(dòng)。隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，伊氏錐蟲的數(shù)量逐漸增多。到感染后的第7天，伊氏錐蟲在血液中的密度明顯增加，每高倍鏡視野下可觀察到10-20條伊氏錐蟲。除了血液涂片鏡檢結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組比格犬還出現(xiàn)了一系列典型的臨床癥狀。在感染后的第5天，犬只開(kāi)始出現(xiàn)精神萎靡的癥狀，對(duì)周圍的事物反應(yīng)遲鈍，活動(dòng)量明顯減少。原本活潑好動(dòng)的比格犬變得安靜，常常臥在角落里，不愿走動(dòng)或玩耍。食欲也逐漸下降，對(duì)平時(shí)喜愛(ài)的犬糧表現(xiàn)出明顯的抵觸情緒，食量減少。體溫開(kāi)始升高，從正常的38-39℃升高到39.5℃以上，部分犬只的體溫甚至達(dá)到了40℃。隨著病情的發(fā)展，犬只出現(xiàn)貧血癥狀，可視黏膜如眼結(jié)膜、口腔黏膜等變得蒼白，這是由于伊氏錐蟲破壞紅細(xì)胞，導(dǎo)致紅細(xì)胞數(shù)量減少，血紅蛋白含量降低?；谘和科R檢結(jié)果和臨床癥狀觀察，判定實(shí)驗(yàn)組比格犬感染伊氏錐蟲成功。3.3.2病原體生長(zhǎng)繁殖規(guī)律在感染后的第1-3天，伊氏錐蟲處于感染初期，在實(shí)驗(yàn)犬體內(nèi)的數(shù)量相對(duì)較少。此時(shí)，伊氏錐蟲主要在血液中尋找合適的生存環(huán)境，開(kāi)始適應(yīng)犬體的生理環(huán)境。在顯微鏡下，每高倍鏡視野下只能觀察到1-3條伊氏錐蟲。這一階段，實(shí)驗(yàn)犬的臨床癥狀不明顯，精神狀態(tài)、食欲和體溫等基本正常。從感染后的第4-7天，伊氏錐蟲進(jìn)入快速繁殖期，數(shù)量急劇增加。伊氏錐蟲以二分裂的方式進(jìn)行繁殖，在適宜的環(huán)境下，繁殖速度極快。每高倍鏡視野下可觀察到5-15條伊氏錐蟲，伊氏錐蟲在血液中頻繁活動(dòng)，對(duì)紅細(xì)胞的破壞加劇。實(shí)驗(yàn)犬開(kāi)始出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，精神萎靡、食欲下降、體溫升高等癥狀逐漸加重。感染后的第8-14天，伊氏錐蟲在實(shí)驗(yàn)犬體內(nèi)的數(shù)量達(dá)到高峰。每高倍鏡視野下可觀察到20-30條伊氏錐蟲，血液中伊氏錐蟲的密度極高。此時(shí)，實(shí)驗(yàn)犬的病情最為嚴(yán)重，貧血癥狀加劇，可視黏膜蒼白明顯，身體極度消瘦，部分犬只出現(xiàn)黃疸癥狀，皮膚和鞏膜發(fā)黃。隨著感染時(shí)間的進(jìn)一步延長(zhǎng)，從感染后的第15天開(kāi)始，實(shí)驗(yàn)犬的免疫系統(tǒng)逐漸對(duì)伊氏錐蟲產(chǎn)生免疫反應(yīng)。體內(nèi)的免疫細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，開(kāi)始大量增殖并攻擊伊氏錐蟲。伊氏錐蟲的數(shù)量逐漸減少，每高倍鏡視野下觀察到的伊氏錐蟲數(shù)量降至10-15條。實(shí)驗(yàn)犬的臨床癥狀有所緩解，精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，食欲開(kāi)始恢復(fù)，體溫也逐漸降至正常范圍。3.3.3傳播途徑驗(yàn)證在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，為了驗(yàn)證伊氏錐蟲主要通過(guò)跳蚤叮咬傳播這一途徑，在實(shí)驗(yàn)組比格犬感染伊氏錐蟲后，將若干只健康的跳蚤放置在感染犬的體表。這些跳蚤在感染犬身上吸食血液后，體內(nèi)攜帶了伊氏錐蟲。隨后，將這些攜帶伊氏錐蟲的跳蚤轉(zhuǎn)移到未感染的健康比格犬體表。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的觀察，發(fā)現(xiàn)被跳蚤叮咬的健康比格犬逐漸出現(xiàn)了與實(shí)驗(yàn)組感染犬相似的臨床癥狀。在感染后的第5天，健康比格犬開(kāi)始出現(xiàn)精神萎靡的癥狀，活動(dòng)量減少，對(duì)周圍環(huán)境的興趣降低。食欲也開(kāi)始下降，食量明顯減少。體溫逐漸升高，從正常的38-39℃升高到39.5℃以上。進(jìn)行血液涂片鏡檢，在顯微鏡下觀察到伊氏錐蟲的存在，證實(shí)了健康比格犬感染了伊氏錐蟲。而在對(duì)照組中，未接觸跳蚤的健康比格犬始終未出現(xiàn)感染癥狀，血液涂片鏡檢也未發(fā)現(xiàn)伊氏錐蟲。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分驗(yàn)證了伊氏錐蟲主要通過(guò)跳蚤叮咬傳播的途徑。跳蚤在吸食感染伊氏錐蟲的犬只血液后，伊氏錐蟲在跳蚤體內(nèi)進(jìn)行一定的發(fā)育和繁殖，當(dāng)跳蚤再次叮咬健康犬只時(shí)，就將伊氏錐蟲傳播給了健康犬只，導(dǎo)致其感染發(fā)病。四、伊氏錐蟲病治療藥物探究4.1現(xiàn)有治療藥物分析目前，用于犬伊氏錐蟲病治療的藥物主要包括安維賽（硫酸喹啉嘧啶胺）、納加諾爾（拜耳-205）、三氮脒（血蟲凈）等。安維賽的作用機(jī)制主要是通過(guò)與伊氏錐蟲的DNA結(jié)合，抑制其DNA的合成和轉(zhuǎn)錄，從而阻礙錐蟲的生長(zhǎng)和繁殖。它能夠特異性地識(shí)別錐蟲DNA的特定序列，與DNA雙鏈形成穩(wěn)定的復(fù)合物，阻止DNA聚合酶和RNA聚合酶的結(jié)合，進(jìn)而抑制錐蟲的核酸代謝，達(dá)到殺滅錐蟲的目的。在臨床應(yīng)用中，安維賽按每千克體重5毫克，以生理鹽水配制10%溶液，皮下或肌肉注射，隔天一次，連用2-3次，對(duì)犬伊氏錐蟲病有一定的治療效果。然而，使用安維賽可能會(huì)使犬出現(xiàn)腹痛、肌肉震顫、頻頻排尿等副作用。這是因?yàn)榘簿S賽在作用于錐蟲的同時(shí)，也可能對(duì)犬的神經(jīng)系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)產(chǎn)生一定的影響，導(dǎo)致神經(jīng)傳導(dǎo)異常和泌尿系統(tǒng)功能紊亂。一般情況下，這些副作用在12小時(shí)內(nèi)可消失，若腹痛嚴(yán)重，可在皮下注射10%鹽酸嗎啡0.5毫升進(jìn)行緩解。納加諾爾（拜耳-205）則是通過(guò)抑制伊氏錐蟲的能量代謝過(guò)程，干擾其生存和繁殖。它能夠抑制錐蟲體內(nèi)的某些關(guān)鍵酶的活性，如參與糖代謝和呼吸鏈的酶，使錐蟲無(wú)法正常產(chǎn)生能量，從而達(dá)到治療的效果。該藥物按每千克體重10-20毫克，用生理鹽水配制10%溶液，靜脈注射，1周后再注射1次。部分犬使用納加諾爾后可能會(huì)出現(xiàn)眼瞼、腹下水腫和口炎等副作用。這可能是由于藥物引起的過(guò)敏反應(yīng)或?qū)植拷M織的刺激作用，導(dǎo)致組織液滲出和炎癥反應(yīng)。輕者一周內(nèi)可自愈，重者則需對(duì)癥治療，如使用抗過(guò)敏藥物或局部涂抹消炎藥膏等。三氮脒（血蟲凈）的作用機(jī)制是與伊氏錐蟲的核蛋白結(jié)合，影響其蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞分裂。它能夠與錐蟲的核蛋白緊密結(jié)合，改變核蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，阻止蛋白質(zhì)的合成和細(xì)胞的正常分裂，從而抑制錐蟲的生長(zhǎng)和繁殖。在臨床治療中，三氮脒按每千克體重3-5毫克，用生理鹽水稀釋成5%-7%的溶液，深部肌肉注射，每天1次，連用2-3天。雖然三氮脒對(duì)犬伊氏錐蟲病有一定療效，但也可能會(huì)引起犬的一些不良反應(yīng)，如發(fā)熱、厭食、嘔吐等。這些不良反應(yīng)可能與藥物對(duì)犬的免疫系統(tǒng)和胃腸道的刺激有關(guān)，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)和胃腸道功能紊亂。這些現(xiàn)有治療藥物在犬伊氏錐蟲病的治療中都存在一定的局限性。一方面，長(zhǎng)期使用單一藥物容易導(dǎo)致伊氏錐蟲產(chǎn)生耐藥性。隨著藥物使用次數(shù)的增加，伊氏錐蟲可能會(huì)通過(guò)基因突變等方式改變自身的代謝途徑或結(jié)構(gòu)，使藥物無(wú)法有效地作用于錐蟲，從而降低治療效果。一些伊氏錐蟲可能會(huì)改變其細(xì)胞膜上的藥物受體結(jié)構(gòu)，使藥物無(wú)法與之結(jié)合，或者增加藥物外排泵的表達(dá)，將進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的藥物排出體外。另一方面，藥物的副作用也會(huì)對(duì)犬的身體健康造成一定的影響，如影響犬的肝腎功能、免疫系統(tǒng)等。某些藥物可能會(huì)對(duì)犬的肝臟細(xì)胞造成損傷，導(dǎo)致肝功能異常，或者抑制免疫系統(tǒng)的功能，使犬更容易感染其他疾病。4.2潛在治療藥物篩選4.2.1藥物選擇依據(jù)考慮到伊氏錐蟲在犬體內(nèi)的寄生特性以及對(duì)犬免疫系統(tǒng)的影響，從多個(gè)角度選擇潛在治療藥物。抗病毒藥物在治療病毒感染性疾病方面具有顯著效果，部分抗病毒藥物能夠干擾病原體的核酸合成，從而抑制其生長(zhǎng)和繁殖。例如，利巴韋林能夠抑制病毒的RNA聚合酶，阻止病毒RNA的合成，進(jìn)而抑制病毒的復(fù)制。伊氏錐蟲雖然不是病毒，但它的生長(zhǎng)和繁殖同樣依賴核酸合成，因此，選擇具有類似作用機(jī)制的抗病毒藥物，有可能對(duì)伊氏錐蟲產(chǎn)生抑制作用。某些抗病毒藥物還可以通過(guò)調(diào)節(jié)宿主的免疫反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)病原體的抵抗力。它們能夠激活機(jī)體的免疫細(xì)胞，如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等，促進(jìn)免疫因子的分泌，從而提高機(jī)體的免疫功能，有助于清除體內(nèi)的伊氏錐蟲。免疫調(diào)節(jié)藥物可以調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)伊氏錐蟲的抵抗力。伊氏錐蟲感染會(huì)導(dǎo)致犬的免疫系統(tǒng)受到抑制，使機(jī)體難以有效地抵御病原體的入侵。免疫調(diào)節(jié)藥物能夠激活免疫細(xì)胞，促進(jìn)免疫因子的分泌，如白細(xì)胞介素、干擾素等，這些免疫因子可以增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活性，提高機(jī)體的免疫功能，從而幫助機(jī)體更好地應(yīng)對(duì)伊氏錐蟲的感染。左旋咪唑是一種常用的免疫調(diào)節(jié)藥物，它可以增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的活性，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖和分化，提高機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。在伊氏錐蟲感染的情況下，使用左旋咪唑可以增強(qiáng)犬的免疫功能，有助于清除體內(nèi)的伊氏錐蟲。一些具有抗氧化作用的藥物也被納入考慮范圍。伊氏錐蟲感染會(huì)導(dǎo)致犬體內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基，這些自由基會(huì)對(duì)細(xì)胞和組織造成氧化損傷。具有抗氧化作用的藥物可以清除體內(nèi)的自由基，減輕氧化應(yīng)激，保護(hù)細(xì)胞和組織免受損傷。維生素E是一種天然的抗氧化劑，它可以通過(guò)提供氫原子來(lái)清除自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性。在伊氏錐蟲感染的犬體內(nèi)，補(bǔ)充維生素E可以減輕氧化應(yīng)激，緩解病情。一些植物提取物也具有抗氧化和抗炎作用，如綠茶提取物中的茶多酚，它可以抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)，同時(shí)還具有抗氧化作用，能夠保護(hù)細(xì)胞免受自由基的損傷。這些植物提取物有可能在伊氏錐蟲病的治療中發(fā)揮作用，通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，促進(jìn)犬的康復(fù)。4.2.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在體外實(shí)驗(yàn)中，首先建立伊氏錐蟲的體外培養(yǎng)體系。從感染伊氏錐蟲的犬血液中分離出伊氏錐蟲，將其接種到含有5%馬血清的PBS培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。定期觀察伊氏錐蟲的生長(zhǎng)情況，使用顯微鏡計(jì)數(shù)伊氏錐蟲的數(shù)量，確保培養(yǎng)體系的穩(wěn)定性和可靠性。將選擇的潛在治療藥物分別加入到伊氏錐蟲的培養(yǎng)體系中，設(shè)置不同的藥物濃度梯度，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。藥物濃度范圍根據(jù)藥物的特性和前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定，一般從低濃度開(kāi)始，逐步增加濃度，以觀察藥物對(duì)伊氏錐蟲生長(zhǎng)的影響。將培養(yǎng)體系在37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48-72小時(shí)。培養(yǎng)過(guò)程中，定期觀察伊氏錐蟲的形態(tài)和數(shù)量變化，使用顯微鏡計(jì)數(shù)伊氏錐蟲的數(shù)量。通過(guò)比較不同藥物濃度下伊氏錐蟲的生長(zhǎng)抑制率，篩選出具有顯著抑制作用的藥物及最佳藥物濃度。生長(zhǎng)抑制率計(jì)算公式為：生長(zhǎng)抑制率（%）=（對(duì)照組伊氏錐蟲數(shù)量-實(shí)驗(yàn)組伊氏錐蟲數(shù)量）/對(duì)照組伊氏錐蟲數(shù)量×100%。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，選取12只健康比格犬，隨機(jī)分為4組，每組3只。其中3組為實(shí)驗(yàn)組，分別給予不同的潛在治療藥物；1組為對(duì)照組，給予等量的生理鹽水。根據(jù)體外實(shí)驗(yàn)篩選出的最佳藥物濃度，確定體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。藥物通過(guò)腹腔注射的方式給予，每天給藥1次，連續(xù)給藥7天。對(duì)照組則腹腔注射等量的生理鹽水。在給藥期間，密切觀察實(shí)驗(yàn)犬的精神狀態(tài)、食欲、體溫、糞便等情況，每天記錄實(shí)驗(yàn)犬的各項(xiàng)生理指標(biāo)。如發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)犬出現(xiàn)異常癥狀，及時(shí)進(jìn)行進(jìn)一步的檢查和診斷。每隔3天采集一次實(shí)驗(yàn)犬的血液樣本，進(jìn)行涂片、染色和鏡檢，觀察血液中伊氏錐蟲的感染情況，記錄伊氏錐蟲的形態(tài)、數(shù)量和分布情況。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)實(shí)驗(yàn)犬進(jìn)行解剖，觀察各器官組織的病理變化，如肝臟、脾臟、腎臟等器官的大小、顏色、質(zhì)地等變化，以及是否存在炎癥、壞死等病理改變。通過(guò)比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)犬的臨床癥狀、血液中伊氏錐蟲的數(shù)量以及器官組織的病理變化，評(píng)估潛在治療藥物的治療效果。4.3藥物治療效果評(píng)估在評(píng)估藥物治療效果時(shí)，主要通過(guò)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)犬血液中伊氏錐蟲數(shù)量、臨床癥狀改善等指標(biāo)來(lái)進(jìn)行。在藥物治療期間，每隔3天采集一次實(shí)驗(yàn)犬的血液樣本。使用一次性無(wú)菌注射器，從實(shí)驗(yàn)犬的前肢頭靜脈采集2ml血液，注入含有抗凝劑（乙二胺四乙酸二鉀，EDTA-K2）的真空采血管中，輕輕顛倒混勻，防止血液凝固。將采集的血液樣本置于冰盒中保存，并在1小時(shí)內(nèi)送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。采用血涂片染色鏡檢的方法，觀察血液中伊氏錐蟲的數(shù)量變化。制作血涂片的方法與前文所述一致，使用姬姆薩染色液進(jìn)行染色，在油鏡（100×）下觀察，記錄每高倍鏡視野下伊氏錐蟲的數(shù)量。根據(jù)伊氏錐蟲數(shù)量的變化，評(píng)估藥物對(duì)伊氏錐蟲的抑制效果。如果在治療后，伊氏錐蟲數(shù)量明顯減少，說(shuō)明藥物對(duì)伊氏錐蟲具有抑制作用，治療效果較好。密切觀察實(shí)驗(yàn)犬的臨床癥狀改善情況。每天定時(shí)觀察實(shí)驗(yàn)犬的精神狀態(tài)、食欲、體溫、可視黏膜顏色、水腫情況等臨床癥狀。精神狀態(tài)方面，觀察實(shí)驗(yàn)犬是否活潑好動(dòng)，對(duì)周圍環(huán)境的反應(yīng)是否靈敏；食欲方面，記錄實(shí)驗(yàn)犬的采食量，與治療前進(jìn)行對(duì)比；體溫使用獸用體溫計(jì)測(cè)量，每天測(cè)量2次，記錄體溫變化；可視黏膜顏色觀察眼結(jié)膜、口腔黏膜等部位的顏色，判斷貧血和黃疸癥狀是否改善；水腫情況觀察腹下、胸前、四肢等部位的水腫程度，是否有所減輕。如果實(shí)驗(yàn)犬的精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，變得活潑好動(dòng)，對(duì)周圍事物有興趣；食欲恢復(fù)正常，采食量增加；體溫降至正常范圍，保持在38-39℃之間；可視黏膜顏色逐漸恢復(fù)紅潤(rùn)，貧血和黃疸癥狀減輕；水腫程度明顯減輕，甚至消失，這些都表明藥物治療取得了較好的效果。除了上述指標(biāo)外，還可以通過(guò)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)犬的血常規(guī)和生化指標(biāo)來(lái)評(píng)估藥物治療效果。在藥物治療前后，分別采集實(shí)驗(yàn)犬的血液樣本，進(jìn)行血常規(guī)和生化指標(biāo)檢測(cè)。血常規(guī)檢測(cè)主要包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量、血小板計(jì)數(shù)等指標(biāo)。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白含量可以反映貧血的改善情況，如果在治療后，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白含量逐漸升高，說(shuō)明貧血癥狀得到緩解。白細(xì)胞計(jì)數(shù)可以反映機(jī)體的免疫狀態(tài)，白細(xì)胞計(jì)數(shù)恢復(fù)正常，說(shuō)明機(jī)體的免疫功能逐漸恢復(fù)。生化指標(biāo)檢測(cè)主要包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酐、尿素氮等指標(biāo)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶可以反映肝臟功能，治療后這些指標(biāo)下降，說(shuō)明肝臟功能得到改善。肌酐和尿素氮可以反映腎臟功能，這些指標(biāo)恢復(fù)正常，說(shuō)明腎臟功能恢復(fù)正常。通過(guò)綜合分析這些指標(biāo)的變化，全面評(píng)估藥物治療效果。五、結(jié)論與展望5.1研究總結(jié)本研究通過(guò)對(duì)南寧市本地犬的血液樣本進(jìn)行檢測(cè)分析，全面了解了伊氏錐蟲、巴貝蟲和鉤蟲這三種血液原蟲在本地犬中的感染情況。結(jié)果顯示，伊氏錐蟲的感染率最高，達(dá)到40%，巴貝蟲感染率為25%，鉤蟲感染率為15%。不同地區(qū)、年齡和性別的本地犬血液原蟲感染率存在差異，青秀區(qū)伊氏錐蟲感染率較高，西鄉(xiāng)塘區(qū)巴貝蟲感染率相對(duì)較高。幼犬由于免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，感染率相對(duì)較高，雄性本地犬的伊氏錐蟲感染率略高于雌性。感染血液原蟲的本地犬通常會(huì)出現(xiàn)貧血、消瘦、發(fā)熱、黃疸等癥狀，各器官組織也會(huì)發(fā)生明顯的病理變化，如肝臟腫大、脾臟腫大、血液系統(tǒng)異常等。南寧市溫暖濕潤(rùn)的氣候條件、復(fù)雜的地形地貌以及部分養(yǎng)犬人不規(guī)范的養(yǎng)犬習(xí)慣，如散養(yǎng)、不定期驅(qū)蟲、養(yǎng)犬密度大等，都增加了本地犬感染血液原蟲的風(fēng)險(xiǎn)。目前南寧市本地犬血液原蟲病的防控存在疫苗覆蓋范圍有限、藥物使用不當(dāng)、監(jiān)測(cè)體系不完善和宣傳教育不足等問(wèn)題。通過(guò)犬伊氏錐蟲病例人工復(fù)制實(shí)驗(yàn)，成功復(fù)制了伊氏錐蟲病例。在感染后的第3天，實(shí)驗(yàn)組比格犬血液中檢測(cè)到伊氏錐蟲，第5天開(kāi)始出現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、體溫升高等臨床癥狀，判定感染成功。伊氏錐蟲在實(shí)驗(yàn)犬體內(nèi)的生長(zhǎng)繁殖規(guī)律為：感染初期（第1-3天）數(shù)量較少，第4-7天進(jìn)入快速繁殖期，第8-14天數(shù)量達(dá)到高峰，隨后隨著實(shí)驗(yàn)犬免疫系統(tǒng)的反應(yīng)，數(shù)量逐漸減少。實(shí)驗(yàn)還驗(yàn)證了伊氏錐蟲主要通過(guò)跳蚤叮咬傳播的途徑。在伊氏錐蟲病治療藥物探究方面，現(xiàn)有治療藥物如安維賽、納加諾爾、三氮脒等都存在一定的局限性，長(zhǎng)期使用易導(dǎo)致伊氏錐蟲產(chǎn)生耐藥性，且藥物副作用會(huì)對(duì)犬的身體健康造成影響。通過(guò)篩選潛在治療藥物，從抗病毒藥物、免疫調(diào)節(jié)藥物和具有抗氧化作用的藥物中選擇了一些藥物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，部分藥物對(duì)伊氏錐蟲具有一定的抑制作用，能夠改善實(shí)驗(yàn)犬的臨床癥狀，為伊氏錐蟲病的治療提供了新的思路和潛在藥物選擇。5.2研究不足與展望本研究在樣本量方面存在一定的局限性，僅選取了200只本地犬進(jìn)行血液原蟲感染情況的調(diào)查，樣本數(shù)量相對(duì)較少，可能無(wú)法全面準(zhǔn)確地反映南寧市本地犬血液原蟲的感染現(xiàn)狀。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，涵蓋更多地區(qū)、不同品種和生活環(huán)境的本地犬，以提高研究結(jié)果的代表性和可靠性。在研究方法上，主要采用了顯微鏡鏡檢法對(duì)血液原蟲進(jìn)行檢測(cè)，該方法雖然簡(jiǎn)單直觀，但檢測(cè)靈敏度相對(duì)較低，容易出現(xiàn)漏檢的情況。后續(xù)研究可以結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度，更精準(zhǔn)地檢測(cè)血液原蟲的感染情況。對(duì)于伊氏錐蟲病的研究，未來(lái)可以深入探究伊氏錐蟲的遺傳多樣性和進(jìn)化規(guī)律。通過(guò)對(duì)不同地區(qū)、不同宿主來(lái)源的伊氏錐蟲進(jìn)行基因測(cè)序和分析，了解其遺傳變異情況，為疾病的防控提供更深入的理論依據(jù)。進(jìn)一步研究伊氏錐蟲與宿主免疫系統(tǒng)的相互作用機(jī)制，明確伊氏錐蟲逃避宿主免疫攻擊的分子機(jī)制，有助于開(kāi)發(fā)更有效的免疫防治方法。還可以開(kāi)展伊氏錐蟲病疫苗的研發(fā)工作，針對(duì)伊氏錐蟲的特異性抗原，研發(fā)安全、有效的疫苗，提高犬只對(duì)伊氏錐蟲病的抵抗力，從根本上預(yù)防疾病的發(fā)生。在血液原蟲病的防控方面，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)犬人的宣傳教育，提高他們對(duì)血液原蟲病的認(rèn)識(shí)和預(yù)防意識(shí)，規(guī)范養(yǎng)犬行為，定期為犬只進(jìn)行驅(qū)蟲和健康檢查。完善血液原蟲病的監(jiān)測(cè)體系，擴(kuò)大監(jiān)測(cè)范圍，增加監(jiān)