2025年分子生物學(xué)科PCR技術(shù)操作規(guī)范測試題答案及解析一、單項(xiàng)選擇題1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)C.聚合酶鏈反應(yīng)D.多聚酶鏈反應(yīng)2.PCR反應(yīng)中需要的酶是（）A.限制性內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.TaqDNA聚合酶D.反轉(zhuǎn)錄酶3.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)錄4.PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.90～95℃B.55～65℃C.70～75℃D.37℃5.PCR反應(yīng)中，退火溫度一般比引物的Tm值低（）A.1～2℃B.3～5℃C.5～10℃D.10～15℃6.PCR反應(yīng)中，延伸溫度一般為（）A.90～95℃B.55～65℃C.70～75℃D.37℃7.PCR反應(yīng)中，引物的長度一般為（）A.10～15bpB.15～20bpC.20～30bpD.30～40bp8.PCR反應(yīng)中，引物的濃度一般為（）A.0.1～0.5μmol/LB.0.5～1μmol/LC.1～2μmol/LD.2～5μmol/L9.PCR反應(yīng)中，dNTP的濃度一般為（）A.0.1～0.2mmol/LB.0.2～0.4mmol/LC.0.4～0.6mmol/LD.0.6～0.8mmol/L10.PCR反應(yīng)中，Mg2+的濃度一般為（）A.0.5～1mmol/LB.1～2mmol/LC.2～3mmol/LD.3～4mmol/L11.PCR反應(yīng)的特異性主要取決于（）A.引物B.TaqDNA聚合酶C.dNTPD.Mg2+12.PCR反應(yīng)中，引物設(shè)計(jì)的原則不包括（）A.引物長度適中B.引物的GC含量適宜C.引物自身不能有互補(bǔ)序列D.引物的3′端可以有多個(gè)連續(xù)的相同堿基13.PCR反應(yīng)中，可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增的原因不包括（）A.引物濃度過高B.退火溫度過低C.TaqDNA聚合酶活性過高D.Mg2+濃度過低14.PCR產(chǎn)物的分析方法不包括（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.免疫印跡15.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的原理是（）A.在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程B.通過比較Ct值來定量分析起始模板的量C.以上都是D.以上都不是二、多項(xiàng)選擇題1.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.基因克隆B.基因表達(dá)分析C.基因突變檢測D.遺傳病診斷E.法醫(yī)鑒定2.PCR反應(yīng)體系中包含的成分有（）A.模板DNAB.引物C.TaqDNA聚合酶D.dNTPE.Mg2+3.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板DNA的質(zhì)量和濃度B.引物的設(shè)計(jì)和濃度C.TaqDNA聚合酶的活性和用量D.dNTP的濃度E.Mg2+的濃度4.引物設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮的因素有（）A.引物的長度B.引物的GC含量C.引物的Tm值D.引物與模板的特異性結(jié)合E.引物自身的二級(jí)結(jié)構(gòu)5.PCR反應(yīng)中，避免非特異性擴(kuò)增的方法有（）A.優(yōu)化引物設(shè)計(jì)B.調(diào)整反應(yīng)條件，如退火溫度、Mg2+濃度等C.減少引物濃度D.增加模板DNA的量E.使用熱啟動(dòng)TaqDNA聚合酶三、填空題1.PCR反應(yīng)的三個(gè)基本步驟是_____、_____、_____。2.PCR反應(yīng)中，引物的作用是_____。3.PCR反應(yīng)中，dNTP的作用是_____。4.PCR反應(yīng)中，Mg2+的作用是_____。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)中，常用的熒光化學(xué)物質(zhì)有_____和_____。四、判斷題（√/×）1.PCR技術(shù)可以用于擴(kuò)增任何DNA片段。（）2.PCR反應(yīng)中，引物的序列可以與模板DNA完全不互補(bǔ)。（）3.PCR反應(yīng)中，退火溫度越高，特異性越強(qiáng)。（）4.PCR反應(yīng)中，延伸時(shí)間越長，擴(kuò)增產(chǎn)物越多。（）5.PCR反應(yīng)中，Mg2+濃度過高會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。（）6.引物設(shè)計(jì)時(shí)，引物的3′端不能有連續(xù)的3個(gè)以上的相同堿基。（）7.PCR反應(yīng)中，TaqDNA聚合酶具有5′→3′外切酶活性和3′→5′外切酶活性。（）8.PCR產(chǎn)物的大小取決于引物的長度。（）9.瓊脂糖凝膠電泳可以用于分析PCR產(chǎn)物的大小和純度。（）10.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)可以用于定量分析基因的表達(dá)水平。（）五、簡答題1.簡述PCR技術(shù)的基本原理。六、案例分析題患者，男，35歲，因發(fā)熱、咳嗽、咳痰1周入院。體格檢查：體溫38.5℃，脈搏90次/分，呼吸20次/分，血壓120/80mmHg。神志清楚，精神尚可，雙側(cè)扁桃體無腫大，雙肺呼吸音粗，可聞及散在濕啰音。血常規(guī)：白細(xì)胞計(jì)數(shù)12×109/L，中性粒細(xì)胞比例80%，淋巴細(xì)胞比例20%。胸部X線片示雙肺紋理增多、增粗，可見散在斑片狀陰影。初步診斷為肺炎。為明確病原體，擬進(jìn)行PCR檢測。問題1：請(qǐng)簡述PCR檢測在肺炎病原體診斷中的應(yīng)用價(jià)值。問題2：在進(jìn)行PCR檢測時(shí)，需要注意哪些事項(xiàng)？試卷答案一、單項(xiàng)選擇題（答案）1.答案：A解析：PCR技術(shù)的中文全稱是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。2.答案：C解析：PCR反應(yīng)中需要的酶是TaqDNA聚合酶。3.答案：D解析：PCR反應(yīng)的基本步驟包括變性、退火、延伸，不包括轉(zhuǎn)錄。4.答案：A解析：PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為90～95℃。5.答案：B解析：PCR反應(yīng)中，退火溫度一般比引物的Tm值低3～5℃。6.答案：C解析：PCR反應(yīng)中，延伸溫度一般為70～75℃。7.答案：C解析：PCR反應(yīng)中，引物的長度一般為20～30bp。8.答案：B解析：PCR反應(yīng)中，引物的濃度一般為0.5～1μmol/L。9.答案：B解析：PCR反應(yīng)中，dNTP的濃度一般為0.2～0.4mmol/L。10.答案：C解析：PCR反應(yīng)中，Mg2+的濃度一般為2～3mmol/L。11.答案：A解析：PCR反應(yīng)的特異性主要取決于引物。12.答案：D解析：引物設(shè)計(jì)的原則包括引物長度適中、GC含量適宜、自身不能有互補(bǔ)序列等，3′端不能有多個(gè)連續(xù)的相同堿基。13.答案：D解析：Mg2+濃度過低會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率降低，而不是非特異性擴(kuò)增。14.答案：D解析：免疫印跡主要用于檢測蛋白質(zhì)，不是PCR產(chǎn)物的分析方法。15.答案：C解析：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的原理是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過比較Ct值來定量分析起始模板的量。二、多項(xiàng)選擇題（答案）1.答案：ABCDE解析：PCR技術(shù)可用于基因克隆、表達(dá)分析、突變檢測、遺傳病診斷、法醫(yī)鑒定等多個(gè)領(lǐng)域。2.答案：ABCDE解析：PCR反應(yīng)體系中包含模板DNA、引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、Mg2+等成分。3.答案：ABCDE解析：模板DNA質(zhì)量濃度、引物設(shè)計(jì)濃度、Taq酶活性用量、dNTP濃度、Mg2+濃度等都會(huì)影響PCR反應(yīng)。4.答案：ABCDE解析：引物設(shè)計(jì)要考慮長度、GC含量、Tm值、與模板特異性結(jié)合、自身二級(jí)結(jié)構(gòu)等因素。5.答案：ABCE解析：優(yōu)化引物設(shè)計(jì)、調(diào)整反應(yīng)條件、減少引物濃度、使用熱啟動(dòng)Taq酶等可避免非特異性擴(kuò)增，增加模板量可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。三、填空題（答案）1.答案：變性、退火、延伸解析：這是PCR反應(yīng)的三個(gè)基本步驟。2.答案：引導(dǎo)DNA合成解析：引物可與模板結(jié)合，引導(dǎo)Taq酶合成DNA。3.答案：提供合成DNA的原料解析：dNTP是合成DNA的原料。4.答案：激活TaqDNA聚合酶解析：Mg2+可激活Taq酶，影響PCR反應(yīng)。5.答案：SYBRGreenI、TaqMan探針解析：這是實(shí)時(shí)熒光定量PCR常用的熒光化學(xué)物質(zhì)。四、判斷題（答案）1.答案：×解析：PCR技術(shù)有一定適用范圍，并非能擴(kuò)增任何DNA片段。2.答案：×解析：引物需與模板DNA特異性互補(bǔ)。3.答案：√解析：退火溫度高可提高特異性。4.答案：×解析：延伸時(shí)間過長可能導(dǎo)致非特異性產(chǎn)物增加。5.答案：√解析：Mg2+濃度過高易引發(fā)非特異性擴(kuò)增。6.答案：√解析：這是引物設(shè)計(jì)的重要原則。7.答案：×解析：TaqDNA聚合酶具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性，無3′→5′外切酶活性。8.答案：×解析：PCR產(chǎn)物大小取決于引物與模板結(jié)合位點(diǎn)間的距離。9.答案：√解析：瓊脂糖凝膠電泳可用于分析PCR產(chǎn)物大小和純度。10.答案：√解析：實(shí)時(shí)熒光定量PCR可定量分析基因表達(dá)水平。五、簡答題（答案）