2025年實驗醫(yī)學PCR技術操作規(guī)范性檢測答案及解析一、單項選擇題1.PCR反應的特異性主要取決于（）A.循環(huán)次數(shù)B.引物序列C.Taq酶活性D.模板量2.下列關于PCR引物的說法，錯誤的是（）A.引物長度一般為15～30bpB.引物自身不應存在互補序列C.引物3′端可以有修飾D.引物應與模板DNA特異性結合3.PCR擴增過程中，延伸的溫度一般為（）A.55℃左右B.72℃左右C.94℃左右D.60℃左右4.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應體系的成分（）A.dNTPB.Mg2+C.限制性內(nèi)切酶D.Taq酶5.PCR產(chǎn)物的鑒定常用的方法是（）A.凝膠電泳B.免疫印跡C.酶聯(lián)免疫吸附試驗D.放射性核素標記6.進行PCR實驗時，以下操作正確的是（）A.加樣時可以不用更換槍頭B.反應管可以不蓋緊C.實驗結束后及時清理實驗臺面D.可以在同一區(qū)域進行模板準備和PCR擴增7.PCR技術的創(chuàng)始人是（）A.KaryMullisB.WatsonC.CrickD.Pasteur8.巢式PCR與普通PCR相比，其優(yōu)點是（）A.特異性更高B.靈敏度更低C.操作更復雜D.擴增片段更長9.實時熒光定量PCR技術不能用于（）A.基因表達分析B.病原體檢測C.基因突變檢測D.蛋白質(zhì)定量10.在PCR反應中，變性的目的是（）A.使引物與模板結合B.使DNA雙鏈解開C.使Taq酶發(fā)揮活性D.使dNTP聚合二、多項選擇題1.影響PCR擴增效率的因素有（）A.引物設計B.模板質(zhì)量C.Taq酶活性D.反應體系組成2.以下屬于PCR技術應用領域的有（）A.基因診斷B.基因克隆C.法醫(yī)鑒定D.疾病預防3.PCR引物設計的原則包括（）A.引物長度適宜B.引物GC含量適中C.避免引物二聚體形成D.引物與模板特異性結合4.實時熒光定量PCR的熒光化學方法有（）A.熒光染料法B.熒光探針法C.雙色熒光能量轉移雜交探針法D.分子信標法5.PCR實驗中可能出現(xiàn)的問題有（）A.非特異性擴增B.擴增效率低C.引物二聚體形成D.假陰性結果6.為了保證PCR實驗的準確性和可靠性，需要注意的事項有（）A.嚴格遵守操作規(guī)程B.定期校準儀器設備C.做好實驗記錄D.對實驗結果進行質(zhì)量控制7.以下關于PCR技術的發(fā)展，正確的有（）A.從普通PCR發(fā)展到實時熒光定量PCRB.出現(xiàn)了多種特殊用途的PCR技術C.自動化程度不斷提高D.應用范圍不斷擴大8.巢式PCR的特點包括（）A.采用兩對引物B.特異性更高C.可提高擴增效率D.可用于檢測低拷貝數(shù)基因三、填空題1.PCR反應的三個基本步驟是_____、_____、_____。2.實時熒光定量PCR技術中，常用的熒光染料是_____。3.引物的Tm值一般在_____℃左右。4.PCR反應體系中，dNTP的濃度一般為_____mmol/L。5.Taq酶具有_____活性和_____活性。6.為了防止PCR產(chǎn)物的污染，可采用的措施有_____、_____等。7.普通PCR的擴增產(chǎn)物一般通過_____進行鑒定。8.巢式PCR的第二對引物位于第一對引物的_____。四、判斷題（√/×）1.PCR技術可以用于擴增任何DNA片段。（）2.引物的長度越長，特異性越高。（）3.Taq酶的最適反應溫度為94℃。（）4.PCR反應體系中，Mg2+濃度越高，擴增效果越好。（）5.實時熒光定量PCR技術可以實現(xiàn)對模板DNA的絕對定量。（）6.非特異性擴增是PCR實驗中最常見的問題之一。（）7.引物二聚體的形成會影響PCR擴增效率。（）8.為了提高PCR擴增效率，可以隨意增加循環(huán)次數(shù)。（）五、簡答題1.簡述PCR技術的基本原理。六、案例分析患者，男，35歲，發(fā)熱、咳嗽、咳痰1周，加重伴呼吸困難2天。體格檢查：體溫39.5℃，脈搏120次/分，呼吸30次/分，血壓120/80mmHg。神志清楚，精神差，口唇發(fā)紺，雙肺可聞及濕啰音。血常規(guī)：白細胞15×109/L，中性粒細胞85%，淋巴細胞10%。胸部X線片示雙肺多發(fā)斑片狀陰影。問題1：該患者最可能的診斷是什么？問題2：為明確診斷，還需要進行哪些檢查？試卷答案一、單項選擇題（答案）1.答案：B解析：引物與模板的特異性結合決定了PCR反應的特異性。2.答案：C解析：引物3′端不應有修飾，以免影響引物與模板的結合。3.答案：B解析：延伸溫度一般為72℃左右，此時Taq酶活性最高。4.答案：C解析：限制性內(nèi)切酶用于DNA的切割，不是PCR反應體系的成分。5.答案：A解析：凝膠電泳是PCR產(chǎn)物鑒定最常用的方法。6.答案：C解析：加樣時應更換槍頭，反應管要蓋緊，模板準備和PCR擴增應在不同區(qū)域進行。7.答案：A解析：PCR技術的創(chuàng)始人是KaryMullis。8.答案：A解析：巢式PCR采用兩對引物，特異性更高。9.答案：D解析：實時熒光定量PCR技術主要用于基因表達分析、病原體檢測和基因突變檢測等，不能用于蛋白質(zhì)定量。10.答案：B解析：變性的目的是使DNA雙鏈解開，為引物與模板結合提供單鏈模板。二、多項選擇題（答案）1.答案：ABCD解析：引物設計、模板質(zhì)量、Taq酶活性和反應體系組成都會影響PCR擴增效率。2.答案：ABC解析：PCR技術主要應用于基因診斷、基因克隆和法醫(yī)鑒定等領域，對疾病預防有一定幫助，但不是主要應用領域。3.答案：ABCD解析：引物設計的原則包括長度適宜、GC含量適中、避免引物二聚體形成和與模板特異性結合等。4.答案：ABCD解析：實時熒光定量PCR的熒光化學方法包括熒光染料法、熒光探針法、雙色熒光能量轉移雜交探針法和分子信標法等。5.答案：ABCD解析：PCR實驗中可能出現(xiàn)非特異性擴增、擴增效率低、引物二聚體形成和假陰性結果等問題。6.答案：ABCD解析：為保證PCR實驗的準確性和可靠性，需嚴格遵守操作規(guī)程、定期校準儀器設備、做好實驗記錄和對實驗結果進行質(zhì)量控制。7.答案：ABCD解析：PCR技術從普通PCR發(fā)展到實時熒光定量PCR，出現(xiàn)多種特殊用途的PCR技術，自動化程度不斷提高，應用范圍也不斷擴大。8.答案：ABCD解析：巢式PCR采用兩對引物，特異性更高，可提高擴增效率，用于檢測低拷貝數(shù)基因。三、填空題（答案）1.答案：變性、退火、延伸解析：這是PCR反應的三個基本步驟。2.答案：SYBRGreenI解析：SYBRGreenI是實時熒光定量PCR技術中常用的熒光染料。3.答案：55～65解析：引物的Tm值一般在55～65℃左右。4.答案：0.2～2.0解析：dNTP的濃度一般為0.2～2.0mmol/L。5.答案：5′→3′聚合酶、5′→3′外切酶解析：Taq酶具有這兩種活性。6.答案：使用UNG酶、嚴格分區(qū)操作解析：可采用這些措施防止PCR產(chǎn)物污染。7.答案：瓊脂糖凝膠電泳解析：普通PCR的擴增產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳進行鑒定。8.答案：內(nèi)側解析：巢式PCR的第二對引物位于第一對引物的內(nèi)側。四、判斷題（答案）1.答案：×解析：PCR技術有一定的適用范圍，并非能擴增任何DNA片段。2.答案：×解析：引物長度過長可能會降低特異性。3.答案：×解析：Taq酶的最適反應溫度為72℃左右。4.答案：×解析：Mg2+濃度過高可能會影響擴增效果。5.答案：√解析：實時熒光定量PCR技術可以實現(xiàn)對模板DNA的絕對定量。6.答案：√解析：非特異性擴增是PCR實驗中常見問題。7.答案：√解析：引物二聚體形成會影響擴增效率。8.答案：×解析：循環(huán)次數(shù)過多可能會導致非特異性擴增增加。五、簡答題（答案）1.答：PCR技術的基本原理是在體外模擬體內(nèi)DNA復制的過程，通過高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟的循環(huán)，使目的DNA片段得到大量擴增。在變性步驟，雙鏈DNA在高溫下解鏈成為單鏈；在退火步驟，引物與單鏈DNA模板特異性結合；在延伸步驟，Taq酶以引物為起點，以dNTP為原料，按照堿基互補