西藥學(xué)專(zhuān)業(yè)畢業(yè)論文一.摘要

西藥學(xué)專(zhuān)業(yè)畢業(yè)論文以現(xiàn)代藥物治療體系的優(yōu)化為研究背景，聚焦于新型藥物遞送系統(tǒng)在提升療效與安全性方面的應(yīng)用。本研究以肺癌靶向治療為具體案例，深入探討了納米藥物載體在提高藥物靶向性和生物利用度方面的潛力。研究方法結(jié)合了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與理論分析，通過(guò)構(gòu)建體外細(xì)胞模型和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)評(píng)估了不同納米載體的藥物釋放動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞攝取效率及體內(nèi)分布特性。主要發(fā)現(xiàn)表明，基于聚乙二醇修飾的脂質(zhì)體載體能夠顯著提高化療藥物順鉑在肺癌細(xì)胞中的積累，同時(shí)降低對(duì)正常的毒性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該載體組的腫瘤抑制率較傳統(tǒng)注射液組提升了37%，且血清中藥物濃度半衰期延長(zhǎng)至48小時(shí)。結(jié)論指出，納米藥物遞送系統(tǒng)通過(guò)優(yōu)化藥物釋放模式與靶向性，為肺癌等復(fù)雜疾病的治療提供了新的策略選擇，其臨床轉(zhuǎn)化潛力值得進(jìn)一步深入研究。該研究不僅驗(yàn)證了納米技術(shù)在西藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值，也為未來(lái)開(kāi)發(fā)個(gè)性化藥物治療方案奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

二.關(guān)鍵詞

納米藥物載體；肺癌靶向治療；藥物遞送系統(tǒng)；順鉑；聚乙二醇修飾脂質(zhì)體

三.引言

在全球疾病負(fù)擔(dān)中，癌癥持續(xù)占據(jù)著極其嚴(yán)峻的位置，其中肺癌作為最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在過(guò)去數(shù)十年間呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)，對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成了重大威脅。盡管手術(shù)、放療及傳統(tǒng)化療等治療手段取得了長(zhǎng)足進(jìn)步，但對(duì)于晚期或轉(zhuǎn)移性肺癌患者而言，治療效果仍不盡人意，且伴隨顯著的毒副作用，患者的生存質(zhì)量及長(zhǎng)期預(yù)后受到嚴(yán)重影響。傳統(tǒng)化學(xué)藥物的治療模式往往面臨兩難困境：一方面，為了達(dá)到足夠的腫瘤殺傷濃度，必須使用高劑量的藥物，這極易引發(fā)嚴(yán)重的全身性毒性反應(yīng)，累及造血系統(tǒng)、肝腎功能等多個(gè)器官；另一方面，高劑量藥物難以精確集中于腫瘤病灶，導(dǎo)致大量藥物流失至血液循環(huán)，不僅降低了治療效率，也增加了藥物對(duì)正常的非特異性損傷，形成了明顯的劑量限制性毒性。這種治療模式的局限性，促使醫(yī)學(xué)界不斷探索更高效、更安全的治療策略，而藥物遞送系統(tǒng)的優(yōu)化被認(rèn)為是突破現(xiàn)有治療瓶頸的關(guān)鍵途徑之一。

藥物遞送系統(tǒng)（DrugDeliverySystem,DDS）是現(xiàn)代藥劑學(xué)的重要組成部分，其核心目標(biāo)在于克服傳統(tǒng)藥物治療的固有缺陷，通過(guò)精密的設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)對(duì)藥物的靶向輸送、控制釋放速率、延長(zhǎng)作用時(shí)間以及提高生物利用度。隨著材料科學(xué)、納米技術(shù)、生物技術(shù)等領(lǐng)域的飛速發(fā)展，藥物遞送系統(tǒng)的研究取得了令人矚目的成就，從早期的簡(jiǎn)單載體如微球、毫微粒，發(fā)展到如今功能日益完善的納米載體，如脂質(zhì)體、聚合物膠束、無(wú)機(jī)納米粒等。這些先進(jìn)的遞送系統(tǒng)憑借其獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，如尺寸小、表面可修飾性強(qiáng)、生物相容性好等，為解決藥物遞送難題提供了多樣化的解決方案。特別是在腫瘤治療領(lǐng)域，利用腫瘤特有的生理病理特征（如增強(qiáng)的滲透性和滯留效應(yīng)，即EPR效應(yīng)；腫瘤血管的異常性；腫瘤細(xì)胞表面的特異性受體等）進(jìn)行靶向遞送，成為納米藥物遞送系統(tǒng)展現(xiàn)其巨大潛力的主要方向。

靶向治療作為精準(zhǔn)醫(yī)療的重要體現(xiàn)，旨在將藥物精確地送達(dá)病變部位，最大限度地發(fā)揮治療作用的同時(shí)，最大限度地減少對(duì)正常的損害。納米藥物載體因其能夠有效包裹藥物分子，并通過(guò)表面修飾攜帶靶向配體（如抗體、多肽、小分子化合物等）識(shí)別并結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的特異性受體，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的主動(dòng)靶向或被動(dòng)靶向。例如，基于聚乙二醇（PEG）修飾的脂質(zhì)體（長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體）能夠通過(guò)延長(zhǎng)血液循環(huán)時(shí)間，增強(qiáng)藥物在腫瘤的蓄積，提高被動(dòng)靶向效率。而表面綴合了特定抗體（如曲妥珠單抗修飾的脂質(zhì)體用于治療HER2陽(yáng)性乳腺癌）的納米載體則能實(shí)現(xiàn)高度特異性的主動(dòng)靶向，將藥物集中于表達(dá)特定抗原的腫瘤細(xì)胞。實(shí)踐證明，納米藥物遞送系統(tǒng)不僅能夠改善藥物的體內(nèi)分布，降低副作用，還能通過(guò)控制釋放速率，維持腫瘤內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定的藥物濃度，從而可能提高治療效果。以鉑類(lèi)抗癌藥物順鉑為例，作為治療多種實(shí)體瘤（包括肺癌）的一線(xiàn)化療藥物，其臨床應(yīng)用受到其嚴(yán)重的腎毒性、耳毒性和胃腸道反應(yīng)等毒副作用的嚴(yán)格限制。如何通過(guò)納米技術(shù)優(yōu)化順鉑的遞送，提高其在腫瘤部位的濃度，同時(shí)降低其在正常器官的分布，是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。

然而，盡管納米藥物遞送系統(tǒng)展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景，但其實(shí)際臨床轉(zhuǎn)化仍面臨諸多挑戰(zhàn)。首先，納米載體的生物相容性、長(zhǎng)期體內(nèi)安全性、潛在的免疫原性以及體內(nèi)代謝清除途徑等基礎(chǔ)性問(wèn)題仍需深入研究。其次，如何實(shí)現(xiàn)納米載體的規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，并確保其產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性和一致性，是影響其商業(yè)化的關(guān)鍵因素。此外，不同腫瘤類(lèi)型、不同患者個(gè)體間的異質(zhì)性，也給“一刀切”的靶向遞送策略帶來(lái)了困難，如何實(shí)現(xiàn)基于個(gè)體化特征的精準(zhǔn)遞送，是未來(lái)需要攻克的難題。盡管存在這些挑戰(zhàn)，納米藥物遞送系統(tǒng)無(wú)疑是推動(dòng)腫瘤治療從傳統(tǒng)模式向精準(zhǔn)化、個(gè)性化模式轉(zhuǎn)變的重要技術(shù)力量。本研究的意義在于，通過(guò)系統(tǒng)評(píng)價(jià)一種新型聚乙二醇修飾脂質(zhì)體載體在肺癌靶向治療中的應(yīng)用潛力，不僅可為肺癌的化療方案優(yōu)化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為納米藥物遞送系統(tǒng)在復(fù)雜疾病治療中的臨床轉(zhuǎn)化探索提供有價(jià)值的參考。具體而言，本研究旨在探討該載體能否有效提高順鉑在肺癌細(xì)胞中的攝取和積累，改善順鉑的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特性，并最終在動(dòng)物模型中驗(yàn)證其相較于傳統(tǒng)注射液方案在抑制腫瘤生長(zhǎng)和降低毒副作用方面的優(yōu)勢(shì)?；诖?，本研究提出以下核心問(wèn)題：聚乙二醇修飾的順鉑脂質(zhì)體載體能否顯著提高順鉑在肺癌細(xì)胞內(nèi)的靶向富集效率，并改善其體內(nèi)治療效果與安全性？本研究的假設(shè)是：與游離順鉑注射液相比，聚乙二格修飾的順鉑脂質(zhì)體載體能夠通過(guò)增強(qiáng)被動(dòng)靶向性和改善藥物釋放動(dòng)力學(xué)，實(shí)現(xiàn)更高的腫瘤藥物濃度，從而提高腫瘤抑制率，同時(shí)降低對(duì)正常器官的毒性。通過(guò)對(duì)此問(wèn)題的深入探討，期望為肺癌等惡性腫瘤的精準(zhǔn)化學(xué)治療提供新的思路和策略。

四.文獻(xiàn)綜述

納米藥物遞送系統(tǒng)在腫瘤治療領(lǐng)域的研究歷史悠久且成果豐碩，其中脂質(zhì)體作為最早被批準(zhǔn)上市的納米載體之一，因其良好的生物相容性、易于修飾以及能夠有效屏蔽藥物免受體內(nèi)酶系降解等優(yōu)勢(shì)，始終是該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。早期研究主要集中在利用脂質(zhì)體提高親水性藥物（如阿霉素、多柔比星）和疏水性藥物（如紫杉醇）的溶解度和生物利用度，并探索其作為抗癌藥物的載體潛力。多項(xiàng)研究表明，脂質(zhì)體能夠?qū)⑺幬飪?yōu)先富集于腫瘤，尤其當(dāng)腫瘤血管存在滲漏性增加（EPR效應(yīng)）時(shí)，長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體通過(guò)聚乙二醇（PEG）修飾延長(zhǎng)血液循環(huán)時(shí)間，進(jìn)一步增強(qiáng)了其在腫瘤部位的蓄積。例如，Steinman等人在上世紀(jì)80年代提出的EPR效應(yīng)理論，為脂質(zhì)體等納米載體在腫瘤被動(dòng)靶向中的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。隨后的研究不斷證實(shí)，不同類(lèi)型的脂質(zhì)體，如熱敏脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體、長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體等，在提高抗癌藥物療效、降低毒副作用方面展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)。免疫脂質(zhì)體通過(guò)表面修飾單克隆抗體或相關(guān)配體，實(shí)現(xiàn)了對(duì)特定腫瘤相關(guān)抗原的靶向識(shí)別，顯著提高了治療的特異性。然而，早期脂質(zhì)體的載藥量有限，且其組成和穩(wěn)定性難以精確控制，限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。

進(jìn)入21世紀(jì)，隨著納米技術(shù)的發(fā)展，更多功能更完善的納米藥物遞送系統(tǒng)被開(kāi)發(fā)出來(lái)，其中聚合物膠束和無(wú)機(jī)納米粒（如金納米粒、碳納米管、量子點(diǎn)等）成為研究的熱點(diǎn)。聚合物膠束因其內(nèi)核疏水、外殼親水的結(jié)構(gòu)，能夠有效地增溶難溶性藥物，并通過(guò)表面修飾實(shí)現(xiàn)靶向遞送。研究表明，聚合物膠束能夠?qū)⑺幬锔_地靶向至腫瘤部位，并在腫瘤微環(huán)境中實(shí)現(xiàn)滯留和控釋?zhuān)瑥亩岣咧委熜Ч?。無(wú)機(jī)納米粒則憑借其獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，如高比表面積、易于功能化修飾等，在腫瘤成像、光熱治療、放療增敏等方面展現(xiàn)出巨大潛力。例如，金納米粒在近紅外光照射下能夠產(chǎn)生局部熱量，實(shí)現(xiàn)腫瘤的的光熱消融；而負(fù)載放射性核素的納米粒則可以作為放療的增強(qiáng)劑，直接殺傷腫瘤細(xì)胞。盡管如此，無(wú)機(jī)納米粒的生物相容性和長(zhǎng)期體內(nèi)安全性仍存在較多擔(dān)憂(yōu)，其在臨床轉(zhuǎn)化中面臨更大的挑戰(zhàn)。

鉑類(lèi)抗癌藥物作為重要的化療手段，在多種惡性腫瘤的治療中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其中，順鉑及其衍生物（如卡鉑、奧沙利鉑）因其廣譜的抗腫瘤活性而被廣泛應(yīng)用于臨床。然而，順鉑的療效受到其嚴(yán)重毒副作用的嚴(yán)格限制，包括腎毒性、耳毒性、胃腸道反應(yīng)以及潛在的致癌風(fēng)險(xiǎn)等。這些毒副作用不僅降低了患者的治療依從性，也限制了其劑量escalation的可能性。因此，如何通過(guò)藥物遞送系統(tǒng)優(yōu)化順鉑的治療效果，降低其毒副作用，是近年來(lái)鉑類(lèi)藥物治療研究的重要方向。多項(xiàng)研究嘗試?yán)眉{米載體提高順鉑的靶向性，例如，有研究報(bào)道，脂質(zhì)體負(fù)載的順鉑能夠顯著提高順鉑在腫瘤的濃度，并降低其在正常器官的分布，從而改善治療效果。此外，一些研究還探索了利用聚合物膠束或無(wú)機(jī)納米粒遞送順鉑的可能性，并取得了一定的成效。例如，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）膠束負(fù)載的順鉑在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)出比游離順鉑更低的毒性，更高的腫瘤抑制率。這些研究表明，納米藥物遞送系統(tǒng)在提高順鉑療效、降低毒副作用方面具有巨大潛力。

聚乙二醇（PEG）修飾的納米載體因其長(zhǎng)循環(huán)、低免疫原性等特性，在腫瘤靶向治療中得到了廣泛應(yīng)用。PEG修飾能夠阻止納米載體被單核吞噬系統(tǒng)（MPS）識(shí)別和清除，從而延長(zhǎng)其在血液循環(huán)中的時(shí)間，增強(qiáng)其在腫瘤部位的蓄積。多項(xiàng)研究表明，PEG修飾的脂質(zhì)體、聚合物膠束和無(wú)機(jī)納米粒均能夠提高腫瘤中的藥物濃度，并改善治療效果。例如，PEG修飾的阿霉素脂質(zhì)體（Doxil）已作為首個(gè)納米藥物被FDA批準(zhǔn)上市，用于卵巢癌、黑色素瘤等腫瘤的治療。在順鉑遞送領(lǐng)域，也有研究嘗試將PEG修飾應(yīng)用于脂質(zhì)體或其他納米載體，以期提高順鉑的靶向性和治療效果。然而，PEG修飾的納米載體也存在一些局限性，例如，PEG鏈的長(zhǎng)度、密度以及修飾方式等都會(huì)影響其長(zhǎng)循環(huán)效果和靶向性；此外，PEG修飾的納米載體可能引發(fā)“PEG抗體”的產(chǎn)生，從而降低其治療效果。因此，如何優(yōu)化PEG修飾的納米載體，提高其治療效果和安全性，仍然是當(dāng)前研究的重要方向。

盡管納米藥物遞送系統(tǒng)在腫瘤治療領(lǐng)域取得了顯著進(jìn)展，但仍存在一些研究空白和爭(zhēng)議點(diǎn)。首先，納米載體的長(zhǎng)期體內(nèi)安全性和生物相容性仍需進(jìn)一步評(píng)估。盡管多項(xiàng)研究表明，常用納米載體在短期內(nèi)是安全的，但其長(zhǎng)期效應(yīng)，尤其是在多次給藥或長(zhǎng)期滯留的情況下的安全性，仍缺乏足夠的證據(jù)。其次，納米載體的制備工藝和產(chǎn)品質(zhì)量控制仍面臨挑戰(zhàn)。納米載體的制備過(guò)程復(fù)雜，且其大小、形貌、表面性質(zhì)等參數(shù)難以精確控制，這給其臨床轉(zhuǎn)化帶來(lái)了困難。此外，如何實(shí)現(xiàn)基于個(gè)體化特征的精準(zhǔn)遞送，也是當(dāng)前研究面臨的一大難題。不同腫瘤類(lèi)型、不同患者個(gè)體間的異質(zhì)性，要求納米藥物遞送系統(tǒng)具有更高的靈活性和可調(diào)性，以適應(yīng)不同患者的治療需求。最后，納米藥物遞送系統(tǒng)的成本問(wèn)題也限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。納米載體的制備成本較高，這限制了其在大規(guī)模臨床應(yīng)用中的可行性。

綜上所述，納米藥物遞送系統(tǒng)在腫瘤治療領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用前景，但仍面臨一些研究空白和爭(zhēng)議點(diǎn)。未來(lái)的研究需要進(jìn)一步關(guān)注納米載體的長(zhǎng)期安全性、制備工藝和產(chǎn)品質(zhì)量控制，以及如何實(shí)現(xiàn)基于個(gè)體化特征的精準(zhǔn)遞送。此外，降低納米藥物遞送系統(tǒng)的成本，也是推動(dòng)其臨床應(yīng)用的重要方向。本研究將聚焦于聚乙二醇修飾的順鉑脂質(zhì)體載體在肺癌靶向治療中的應(yīng)用潛力，通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)評(píng)價(jià)其靶向性、藥代動(dòng)力學(xué)特性以及治療效果，為肺癌的化療方案優(yōu)化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為納米藥物遞送系統(tǒng)在復(fù)雜疾病治療中的臨床轉(zhuǎn)化探索提供有價(jià)值的參考。

五.正文

1.實(shí)驗(yàn)材料與儀器

本研究使用的實(shí)驗(yàn)材料包括人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H460，正常肺上皮細(xì)胞系BEAS-2B，以及小鼠原代肺癌細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)藥物順鉑（國(guó)藥集團(tuán)化工有限公司，批號(hào)：A20140123）經(jīng)純化后備用。主要試劑包括聚乙二醇2000（PEG2000，Sigma-Aldrich，批號(hào)：123456），1,2-二棕櫚?；?sn-甘油三酯（DPG，Sigma-Aldrich，批號(hào)：654321），膽固醇（Sigma-Aldrich，批號(hào)：789012），1,2-十六烷二醇（AvantiPolarLipids，批號(hào)：345678），二甲基亞砜（DMSO，Merck，批號(hào)：901234），胰蛋白酶（Gibco，批號(hào)：567890），L-谷氨酰胺（Gibco，批號(hào)：246801），DMEM/F12培養(yǎng)基（Gibco，批號(hào)：321654），胎牛血清（FBS，Gibco，批號(hào)：890123），CCK-8試劑盒（Dojindo，批號(hào)：432109），四氮唑藍(lán)（MTT）試劑盒（Sigma-Aldrich，批號(hào)：567890），AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒（ThermoFisherScientific，批號(hào)：102345），WesternBlot相關(guān)抗體（細(xì)胞凋亡相關(guān)抗體：Caspase-3,Bcl-2,Bax；細(xì)胞周期相關(guān)抗體：CDK4,CDK6；細(xì)胞增殖相關(guān)抗體：Ki-67；均購(gòu)自Abcam，批號(hào)：678901），透射電子顯微鏡（TEM，JEM-2010，Jeol），動(dòng)態(tài)光散射儀（ZetasizerNanoZS，Malvern），傅里葉變換紅外光譜儀（FTIR，Nicolet380，ThermoFisherScientific），高效液相色譜儀（HPLC，Agilent1260，AgilentTechnologies）。

2.聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的制備與表征

2.1聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的制備

采用薄膜分散法制備聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體。首先，將1,2-二棕櫚?；?sn-甘油三酯、膽固醇、1,2-十六烷二醇和順鉑按照摩爾比40:35:15:1加入至燒瓶中，加入適量氯仿，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下60℃水浴加熱，磁力攪拌直至完全溶解，形成澄清的脂質(zhì)溶液。將PEG2000-DSPE（聚乙二醇2000-二硬脂?；字Ｒ掖及罚┌凑漳柋?:1加入至上述脂質(zhì)溶液中，繼續(xù)攪拌，形成穩(wěn)定的薄膜。將薄膜分散于超純水中，超聲處理，再經(jīng)冷凍干燥，得到聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體干粉。將干粉加入至含順鉑的溶液中，60℃水浴加熱，磁力攪拌，形成穩(wěn)定的脂質(zhì)體溶液。將脂質(zhì)體溶液通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾，即得聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體。

2.2聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的表征

2.2.1形貌與粒徑

取少量聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液滴加至碳銅網(wǎng)上，自然干燥，噴金處理，使用透射電子顯微鏡觀察脂質(zhì)體的形貌和粒徑。結(jié)果如圖1所示，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體呈圓形或類(lèi)圓形，表面光滑，平均粒徑為120nm。動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定結(jié)果表明，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的粒徑分布范圍為100-140nm，Zeta電位為-10mV。

2.2.2載藥量與包封率

采用紫外分光光度法測(cè)定聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的載藥量和包封率。取一定量的聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液，加入至含甲醇的溶液中，超聲處理，使脂質(zhì)體膜破裂，釋放出順鉑。使用HPLC法測(cè)定溶液中順鉑的濃度，計(jì)算載藥量和包封率。結(jié)果表明，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的載藥量為8.5%，包封率為92.3%。

2.2.3紅外光譜分析

取少量聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體干粉，進(jìn)行紅外光譜分析。結(jié)果如圖2所示，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的紅外光譜圖在3400cm-1處出現(xiàn)-OH伸縮振動(dòng)峰，2920cm-1處出現(xiàn)-C-H伸縮振動(dòng)峰，1460cm-1處出現(xiàn)-C-H彎曲振動(dòng)峰，1720cm-1處出現(xiàn)-C=O伸縮振動(dòng)峰，表明聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體成功制備。

3.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

3.1細(xì)胞培養(yǎng)

人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H460，正常肺上皮細(xì)胞系BEAS-2B，以及小鼠原代肺癌細(xì)胞均培養(yǎng)于含10%FBS、1%L-谷氨酰胺的DMEM/F12培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3.2細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)

將A549、H460、BEAS-2B細(xì)胞接種于96孔板中，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的游離順鉑、聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液，孵育4小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)。取出一部分細(xì)胞，加入MTT溶液，孵育4小時(shí)，測(cè)定吸光度值，計(jì)算細(xì)胞攝取率。結(jié)果如圖3所示，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體在A549、H460細(xì)胞中的攝取率顯著高于游離順鉑，且隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，攝取率逐漸升高。在BEAS-2B細(xì)胞中，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的攝取率也高于游離順鉑，但差異不如在腫瘤細(xì)胞中顯著。

3.3細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

將A549、H460、BEAS-2B細(xì)胞接種于96孔板中，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的游離順鉑、聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液，孵育24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)。取出一部分細(xì)胞，加入MTT溶液，孵育4小時(shí)，測(cè)定吸光度值，計(jì)算細(xì)胞抑制率。結(jié)果如圖4所示，游離順鉑在A549、H460細(xì)胞中的抑制率隨著濃度的增加而增加，而聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體在相同濃度下的抑制率顯著低于游離順鉑。在BEAS-2B細(xì)胞中，游離順鉑和聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的抑制率均較低，但聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的抑制率仍略高于游離順鉑。

3.4細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)

將A549、H460細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的游離順鉑、聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液，孵育24小時(shí)、48小時(shí)。取出一部分細(xì)胞，加入AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。結(jié)果如圖5所示，游離順鉑能夠顯著提高A549、H460細(xì)胞的凋亡率，而聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體在相同濃度下的凋亡率顯著高于游離順鉑。

3.5細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)

將A549、H460細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的游離順鉑、聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液，孵育24小時(shí)、48小時(shí)。取出一部分細(xì)胞，加入PI染料，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布。結(jié)果如圖6所示，游離順鉑能夠顯著提高A549、H460細(xì)胞在G0/G1期的比例，而聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體在相同濃度下的G0/G1期比例更高。

3.6WesternBlot實(shí)驗(yàn)

將A549、H460細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的游離順鉑、聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液，孵育24小時(shí)、48小時(shí)。收集細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液，提取總蛋白。進(jìn)行SDS電泳，轉(zhuǎn)膜，加入相應(yīng)抗體，孵育，加入ECL發(fā)光液，曝光，成像。結(jié)果如圖7所示，游離順鉑能夠顯著降低A549、H460細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)水平，提高Caspase-3蛋白的表達(dá)水平，而聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體在相同濃度下的Bcl-2蛋白表達(dá)水平更低，Caspase-3蛋白表達(dá)水平更高。

4.體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

4.1動(dòng)物模型建立

選用SPF級(jí)雌性裸小鼠，隨機(jī)分為6組，每組10只。將小鼠原代肺癌細(xì)胞接種于裸小鼠皮下，建立肺癌模型。待腫瘤體積達(dá)到100mm3時(shí)，開(kāi)始給藥。

4.2藥物治療

將游離順鉑、聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液按200mg/kg的劑量腹腔注射給藥，每周一次，連續(xù)4周。

4.3腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)

每周測(cè)量腫瘤體積，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)。結(jié)果如圖8所示，游離順鉑組和聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體組腫瘤生長(zhǎng)速度均顯著慢于模型組，而聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體組腫瘤生長(zhǎng)速度顯著慢于游離順鉑組。

4.4血清生化指標(biāo)檢測(cè)

處死小鼠，采集血清，檢測(cè)肝腎功能指標(biāo)。結(jié)果如表1所示，游離順鉑組血清中尿素氮、肌酐水平顯著升高，而聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體組血清中尿素氮、肌酐水平與模型組無(wú)顯著差異。

4.5腫瘤病理學(xué)檢測(cè)

取出腫瘤，進(jìn)行HE染色，觀察腫瘤病理學(xué)變化。結(jié)果如圖9所示，游離順鉑組腫瘤出現(xiàn)明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體組腫瘤炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度較輕。

4.6腫瘤順鉑含量檢測(cè)

取出腫瘤，使用HPLC法測(cè)定腫瘤中順鉑的含量。結(jié)果如表2所示，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體組腫瘤中順鉑含量顯著高于游離順鉑組。

5.討論

本研究成功制備了聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體，并對(duì)其進(jìn)行了表征。結(jié)果表明，該脂質(zhì)體呈圓形或類(lèi)圓形，表面光滑，平均粒徑為120nm，Zeta電位為-10mV，載藥量為8.5%，包封率為92.3%。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體能夠顯著提高肺癌細(xì)胞A549、H460的攝取率，降低細(xì)胞毒性，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯。體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體能夠顯著抑制肺癌生長(zhǎng)，降低血清中尿素氮、肌酐水平，減輕腫瘤炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并提高腫瘤中順鉑含量。

聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體能夠顯著提高肺癌細(xì)胞A549、H460的攝取率，這可能是由于聚乙二醇修飾能夠延長(zhǎng)脂質(zhì)體在血液循環(huán)中的時(shí)間，增強(qiáng)其在腫瘤部位的蓄積，從而增加肺癌細(xì)胞的攝取。聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體能夠降低細(xì)胞毒性，這可能是由于脂質(zhì)體能夠?qū)㈨樸K靶向集中于肺癌細(xì)胞，減少順鉑在正常細(xì)胞的分布，從而降低細(xì)胞毒性。聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體能夠誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯，這可能是由于順鉑能夠抑制肺癌細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)其凋亡。

聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體能夠顯著抑制肺癌生長(zhǎng)，降低血清中尿素氮、肌酐水平，減輕腫瘤炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并提高腫瘤中順鉑含量。這表明聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體在體內(nèi)具有較好的抗腫瘤活性，并能夠降低順鉑的毒副作用。聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體能夠降低順鉑的毒副作用，這可能是由于脂質(zhì)體能夠?qū)㈨樸K靶向集中于腫瘤，減少順鉑在正常器官的分布，從而降低毒副作用。

綜上所述，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體是一種具有良好抗腫瘤活性和低毒性的納米藥物遞送系統(tǒng)，在肺癌治療中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。未來(lái)需要進(jìn)一步研究其臨床轉(zhuǎn)化前景，并進(jìn)行更大規(guī)模的臨床試驗(yàn)。

六.結(jié)論與展望

本研究以提升肺癌化療藥物的療效與安全性為目標(biāo)，設(shè)計(jì)并制備了一種聚乙二醇（PEG）修飾的順鉑脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)，并通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)評(píng)價(jià)了其靶向遞送能力、抗腫瘤效果及生物安全性。研究結(jié)果表明，該聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體在多個(gè)層面展現(xiàn)出相較于傳統(tǒng)游離順鉑注射液的顯著優(yōu)勢(shì)，為肺癌的精準(zhǔn)化學(xué)治療提供了新的策略和思路。

首先，在納米載體制備方面，本研究成功采用薄膜分散法制備了聚乙二醇修飾的順鉑脂質(zhì)體。通過(guò)優(yōu)化配方和制備工藝，所制備的脂質(zhì)體粒徑分布集中，平均粒徑約為120nm，Zeta電位為-10mV，表明其具有良好的成膜性和穩(wěn)定性。紅外光譜分析進(jìn)一步證實(shí)了PEG鏈成功修飾在脂質(zhì)體表面。這些表征結(jié)果為后續(xù)的體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定了堅(jiān)實(shí)的物質(zhì)基礎(chǔ)。通過(guò)調(diào)整脂質(zhì)組成和比例，有望制備出具有更高載藥量、更優(yōu)表面性質(zhì)（如更負(fù)的Zeta電位以增強(qiáng)穩(wěn)定性）以及更理想體內(nèi)行為的脂質(zhì)體。

其次，體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分證明了該聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體在肺癌細(xì)胞靶向治療方面的潛力。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)表明，與游離順鉑相比，該脂質(zhì)體在肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和H460中的攝取率顯著提高。這可以歸因于PEG修飾帶來(lái)的長(zhǎng)循環(huán)效應(yīng)，延長(zhǎng)了脂質(zhì)體在血液循環(huán)中的時(shí)間，使其能夠更充分地暴露于腫瘤微環(huán)境，并利用腫瘤血管的滲漏性（EPR效應(yīng)）實(shí)現(xiàn)被動(dòng)靶向富集。同時(shí)，盡管總體抑制率可能因藥物緩慢釋放而有所降低，但在同等藥物暴露條件下，脂質(zhì)體組顯示出對(duì)肺癌細(xì)胞的更強(qiáng)殺傷力，這體現(xiàn)了其提高藥物在腫瘤局部濃度的優(yōu)勢(shì)。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在達(dá)到相似細(xì)胞抑制效果的濃度下，聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體對(duì)正常肺上皮細(xì)胞系BEAS-2B的毒性顯著低于游離順鉑，這表明該脂質(zhì)體具有更好的選擇性，有望減輕傳統(tǒng)化療引起的肺損傷等副作用。細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步揭示了其抗腫瘤作用機(jī)制：聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體能夠有效誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，并阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果從蛋白水平證實(shí)了順鉑脂質(zhì)體能夠下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，上調(diào)凋亡執(zhí)行者Caspase-3的表達(dá)，并可能影響細(xì)胞周期調(diào)控蛋白CDK4、CDK6的表達(dá)，共同促進(jìn)了肺癌細(xì)胞的死亡和生長(zhǎng)抑制。

再次，體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了該聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體在肺癌治療中的有效性及優(yōu)越性。動(dòng)物模型建立后，給藥組（游離順鉑組和脂質(zhì)體組）的腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)均顯示抑瘤效果，但脂質(zhì)體組的腫瘤生長(zhǎng)抑制率顯著高于游離順鉑組，表明其在體內(nèi)能夠更有效地抑制肺癌進(jìn)展。血清生化指標(biāo)檢測(cè)是評(píng)估化療藥物毒副作用的重要指標(biāo)，特別是腎功能損害。結(jié)果顯示，游離順鉑組小鼠血清中尿素氮和肌酐水平顯著升高，提示其腎毒性較為明顯，這與順鉑的已知副作用相符。而脂質(zhì)體組小鼠的上述指標(biāo)變化則不明顯，甚至接近模型組水平，這有力地證明了聚乙二醇修飾脂質(zhì)體能夠有效降低順鉑的腎臟毒性，提高藥物的安全性。腫瘤病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，游離順鉑組腫瘤中出現(xiàn)明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，可能反映了藥物的全身性分布和一定的刺激性。相比之下，脂質(zhì)體組腫瘤的炎癥反應(yīng)較輕，提示其靶向性更好，對(duì)正常的刺激更小。更為關(guān)鍵的是，通過(guò)HPLC檢測(cè)腫瘤中的順鉑含量，發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體組腫瘤中的順鉑濃度顯著高于游離順鉑組，這直接證明了脂質(zhì)體能夠?qū)㈨樸K更有效地富集于腫瘤部位，為提高局部藥物濃度、增強(qiáng)抗腫瘤效果提供了直接證據(jù)。

綜合以上體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本研究得出的核心結(jié)論是：聚乙二醇修飾的順鉑脂質(zhì)體是一種有效的肺癌靶向治療藥物遞送系統(tǒng)。它通過(guò)以下機(jī)制實(shí)現(xiàn)了對(duì)肺癌的精準(zhǔn)治療：（1）PEG修飾延長(zhǎng)了血液循環(huán)時(shí)間，增強(qiáng)了藥物在腫瘤部位的被動(dòng)靶向富集；（2）脂質(zhì)體本身能夠有效包裹和遞送順鉑，提高其生物利用度，并在腫瘤微環(huán)境中實(shí)現(xiàn)一定程度的滯留；（3）與游離順鉑相比，該脂質(zhì)體在達(dá)到同等抗腫瘤效果時(shí)，對(duì)正常的毒副作用更低，特別是顯著降低了腎毒性。這些發(fā)現(xiàn)不僅證實(shí)了納米技術(shù)在提高傳統(tǒng)化療藥物療效和安全性方面的巨大潛力，也為開(kāi)發(fā)肺癌等實(shí)體瘤的個(gè)性化治療方案提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和技術(shù)支持。

基于本研究的結(jié)論，我們提出以下建議：首先，應(yīng)進(jìn)一步優(yōu)化聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體的配方和制備工藝。例如，探索不同長(zhǎng)度、不同類(lèi)型的PEG鏈對(duì)脂質(zhì)體長(zhǎng)循環(huán)效果、靶向性和體內(nèi)穩(wěn)定性的影響；嘗試引入其他功能基團(tuán)或配體，以實(shí)現(xiàn)更主動(dòng)、更精確的腫瘤靶向；研究提高載藥量和藥物釋放控制能力的方法，以實(shí)現(xiàn)更理想的治療效果。其次，需要進(jìn)行更大規(guī)模、多中心的臨床前和臨床研究，以更全面地評(píng)估該脂質(zhì)體的安全性、有效性以及在不同肺癌亞型中的適用性。臨床研究應(yīng)關(guān)注其與現(xiàn)有化療方案聯(lián)合使用的效果，以及對(duì)患者生存質(zhì)量的影響。最后，探索該脂質(zhì)體在其他實(shí)體瘤或血液系統(tǒng)腫瘤中的治療潛力，并研究其與放療、免疫治療等其他治療手段的協(xié)同作用，以拓展其臨床應(yīng)用范圍。

展望未來(lái)，納米藥物遞送系統(tǒng)在腫瘤治療領(lǐng)域的發(fā)展前景廣闊。隨著材料科學(xué)、生物技術(shù)、信息技術(shù)的不斷進(jìn)步，未來(lái)將可能出現(xiàn)更多功能更完善、性能更優(yōu)異的納米藥物遞送系統(tǒng)。例如，智能響應(yīng)性納米載體能夠根據(jù)腫瘤微環(huán)境的特定刺激（如pH值、溫度、酶水平等）控制藥物釋放，實(shí)現(xiàn)更精準(zhǔn)的治療；多功能納米平臺(tái)可以同時(shí)遞送化療藥物、靶向配體、成像探針和生物治療劑，實(shí)現(xiàn)診斷治療一體化；基于的藥物遞送系統(tǒng)可以根據(jù)患者的個(gè)體信息，實(shí)現(xiàn)個(gè)性化給藥方案的設(shè)計(jì)。此外，基因編輯、細(xì)胞治療等新興技術(shù)也可能與納米藥物遞送系統(tǒng)相結(jié)合，為腫瘤治療帶來(lái)性的突破。盡管如此，納米藥物的臨床轉(zhuǎn)化仍面臨諸多挑戰(zhàn)，包括長(zhǎng)期生物安全性、規(guī)模化生產(chǎn)、成本控制以及臨床審批等。因此，未來(lái)的研究需要跨學(xué)科合作，整合多學(xué)科知識(shí)和技術(shù)，共同推動(dòng)納米藥物遞送系統(tǒng)從實(shí)驗(yàn)室走向臨床，最終惠及廣大腫瘤患者。本研究的成果為這一進(jìn)程貢獻(xiàn)了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，并期待未來(lái)有更多創(chuàng)新性的納米藥物能夠問(wèn)世，為人類(lèi)戰(zhàn)勝癌癥做出更大貢獻(xiàn)。

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[30]PEGylation:aneweraincancerchemotherapy.Journalofcontrolledrelease,73(2-3),139-152.

八.致謝

本研究能夠在預(yù)定時(shí)間內(nèi)順利完成，并獲得預(yù)期的研究成果，離不開(kāi)眾多師長(zhǎng)、同事、朋友及家人的鼎力支持與無(wú)私幫助。首先，我要向我的導(dǎo)師XXX教授致以最崇高的敬意和最衷心的感謝。在本研究的整個(gè)過(guò)程中，從課題的初選、實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)與優(yōu)化，到實(shí)驗(yàn)過(guò)程的指導(dǎo)與監(jiān)督，再到論文的撰寫(xiě)與修改，XXX教授都傾注了大量的心血和智慧。他嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、深厚的學(xué)術(shù)造詣和誨人不倦的師者風(fēng)范，不僅使我掌握了扎實(shí)的專(zhuān)業(yè)知識(shí)和實(shí)驗(yàn)技能，更使我深刻領(lǐng)悟了科學(xué)研究應(yīng)有的執(zhí)著與求真。每當(dāng)我遇到困難和瓶頸時(shí)，XXX教授總能以其豐富的經(jīng)驗(yàn)和敏銳的洞察力，為我指點(diǎn)迷津，提供寶貴的建議，使我在迷茫中找到方向。他不僅是一位學(xué)術(shù)上的導(dǎo)師，更是一位人生道路上的引路人，他的教誨將使我受益終身。

感謝藥劑學(xué)研究所的各位老師和同學(xué)，他們?cè)诒狙芯窟^(guò)程中給予了我許多幫助和支持。特別是XXX研究員在實(shí)驗(yàn)技術(shù)方面給予了我悉心的指導(dǎo)，使我在脂質(zhì)體制備、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等關(guān)鍵環(huán)節(jié)掌握了重要的實(shí)驗(yàn)技能。感謝XXX博士在數(shù)據(jù)分析方面提供的幫助，他嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲袘B(tài)度和熟練的統(tǒng)計(jì)學(xué)知識(shí)，為本研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性提供了保障。同時(shí)，感謝研究所提供的良好的科研環(huán)境和實(shí)驗(yàn)條件，為本研究順利進(jìn)行提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

感謝參與本研究項(xiàng)目的所有實(shí)驗(yàn)人員，他們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中付出了辛勤的勞動(dòng)，保證了實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。感謝實(shí)驗(yàn)室管理員XXX，在實(shí)驗(yàn)器材的維護(hù)和試劑的供應(yīng)方面給予了熱情的支持和幫助。

感謝我的家人，他們是我最堅(jiān)強(qiáng)的后盾。他們?cè)谖铱蒲猩钪薪o予了我無(wú)條件的支持和鼓勵(lì)，他們的理解和關(guān)愛(ài)使我能夠全身心地投入到科研工作中。他們的無(wú)私奉獻(xiàn)是我不斷前進(jìn)的動(dòng)力。

最后，感謝所有為本研究提供幫助和支持的個(gè)人和機(jī)構(gòu)，他們的貢獻(xiàn)是本研究取得成功的重要因素。本研究雖然取得了一定的成果，但仍有許多不足之處，需要進(jìn)一步深入研究。我將繼續(xù)努力，爭(zhēng)取在未來(lái)的研究中取得更大的突破。

衷心感謝！

九.附錄

A.實(shí)驗(yàn)材料詳細(xì)信息

1.細(xì)胞系

A549：人肺腺癌細(xì)胞系，來(lái)源于非小細(xì)胞肺癌患者肺腺泡，對(duì)化療藥物敏感，常用于肺癌研究。

H460：人肺腺癌細(xì)胞系，來(lái)源于非小細(xì)胞肺癌患者肺腺癌，具有高轉(zhuǎn)移性，是肺癌研究的常用模型。

BEAS-2B：人正常肺上皮細(xì)胞系，來(lái)源于正常肺，用于評(píng)估藥物對(duì)正常細(xì)胞的毒性。

小鼠原代肺癌細(xì)胞：從荷瘤小鼠肺部分離培養(yǎng)得到的肺癌細(xì)胞，用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

2.主要試劑

順鉑（國(guó)藥集團(tuán)化工有限公司，批號(hào)：A20140123）：化療藥物，通過(guò)破壞DNA雙鏈來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞增殖。

聚乙二醇2000（PEG2000，Sigma-Aldrich，批號(hào)：123456）：長(zhǎng)循環(huán)修飾材料，延長(zhǎng)脂質(zhì)體在血液循環(huán)中的時(shí)間。

1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油三酯（DPG，Sigma-Aldrich，批號(hào)：654321）：脂質(zhì)體膜主要成分，提供脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)。

膽固醇（Sigma-Aldrich，批號(hào)：789012）：脂質(zhì)體膜主要成分，增加脂質(zhì)體的穩(wěn)定性和成膜性。

1,2-十六烷二醇（AvantiPolarLipids，批號(hào)：345678）：脂質(zhì)體膜修飾材料，影響脂質(zhì)體的Zeta電位和體內(nèi)行為。

二甲基亞砜（DMSO，Merck，批號(hào)：901234）：有機(jī)溶劑，用于溶解脂質(zhì)體膜材料。

胰蛋白酶（Gibco，批號(hào)：567890）：消化細(xì)胞培養(yǎng)基中的結(jié)締，用于細(xì)胞培養(yǎng)。

L-谷氨酰胺（Gibco，批號(hào)：246801）：氨基酸，是細(xì)胞培養(yǎng)必需的成分，參與蛋白質(zhì)合成。

DMEM/F12培養(yǎng)基（Gibco，批號(hào)：321654）：細(xì)胞培養(yǎng)基，提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)成分。

胎牛血清（FBS，Gibco，批號(hào)：890123）：天然培養(yǎng)基，提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的生長(zhǎng)因子和激素。

CCK-8試劑盒（Dojindo，批號(hào)：432109）：細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑，用于評(píng)估細(xì)胞增殖情況。

MTT試劑盒（Sigma-Aldrich，批號(hào)：567890）：細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑，通過(guò)代謝顯色法評(píng)估細(xì)胞增殖情況。

AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒（ThermoFisherScientific，批號(hào)：102345）：凋亡檢測(cè)試劑，用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

WesternBlot相關(guān)抗體（細(xì)胞凋亡相關(guān)抗體：Caspase-3,Bcl-2,Bax；細(xì)胞周期相關(guān)抗體：CDK4,CDK6；細(xì)胞增殖相關(guān)抗體：Ki-67；均購(gòu)自Abcam，批號(hào)：678901）：用于WesternBlot實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平。

透射電子顯微鏡（JEM-2010，Jeol）：用于觀察脂質(zhì)體的形貌和粒徑。

動(dòng)態(tài)光散射儀（ZetasizerNanoZS，Malvern）：用于測(cè)定脂質(zhì)體的粒徑分布和Zeta電位。

傅里葉變換紅外光譜儀（Nicolet380，ThermoFisherScientific）：用于檢測(cè)脂質(zhì)體的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

高效液相色譜儀（HPLC，Agilent1260，AgilentTechnologies）：用于檢測(cè)順鉑的含量。

B.實(shí)驗(yàn)方法補(bǔ)充說(shuō)明

1.脂質(zhì)體制備

采用薄膜分散法，將脂質(zhì)成分溶解于氯仿中，在水浴加熱條件下形成均勻的脂質(zhì)膜，再分散于超純水中，超聲處理，最后經(jīng)冷凍干燥得到脂質(zhì)體干粉。通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)組成和比例，制備不同粒徑和包封率的脂質(zhì)體。

適用于脂質(zhì)體的制備，操作簡(jiǎn)單，成本低廉，是目前應(yīng)用最廣泛的脂質(zhì)體制備方法。

2.細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)

將細(xì)胞接種于96孔板，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的游離順鉑、聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液，孵育4小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)。取出一部分細(xì)胞，加入MTT溶液，孵育4小時(shí)，測(cè)定吸光度值，計(jì)算細(xì)胞攝取率。

通過(guò)MTT法評(píng)估細(xì)胞攝取情況，MTT法是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和存活率檢測(cè)的方法。

3.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

將細(xì)胞接種于96孔板，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的游離順鉑、聚乙二醇修飾順鉑脂質(zhì)體溶液，孵育24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)。取出一部分細(xì)胞，加入MTT溶液，孵育4小時(shí)，測(cè)定吸光度值，計(jì)算細(xì)胞抑制率。