的ICS.65.020

B43

DB5206

銅仁市地方標(biāo)準

DB5206/T100—2018

代替DB522200/T115-2011

銅仁市牛冷凍精液

人工授精技術(shù)操作規(guī)程

TongrenCityofthebovinefrozensemenforartificial

inseminationtechnologyoperatingrules

2018-12-06發(fā)布2018-12-06實施

銅仁市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB5206/T100—2018

銅仁市牛冷凍精液人工授精技術(shù)操作規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準規(guī)定了牛冷凍精液人工授精技術(shù)的術(shù)語與定義、人工授精點建設(shè)、冷凍精液質(zhì)量、

貯存和運輸、配種前的準備、冷凍精液的提取、冷凍精液的解凍、精液品質(zhì)檢查、母牛發(fā)情

鑒定、輸精和妊娠診斷。

本標(biāo)準適用于銅仁市轄區(qū)內(nèi)各養(yǎng)牛場（戶）母牛的冷凍精液人工授精技術(shù)應(yīng)用。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適

用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB4143牛冷凍精液

GB/T5458液氮生物容器

NY/T1335牛人工授精技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語與定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準。

3.1

冷凍精液

指利用器械以人工方法采集種公牛精液，通過檢查，用稀釋液等溫稀釋、平衡后快速冷

凍，在液氮中保存。冷凍精液包括顆粒冷凍精液、安瓿冷凍精液和細管冷凍精液，本規(guī)程中

所指冷凍精液是指細管冷凍精液。

3.2

冷凍精液解凍

細管冷凍精液直接置于38℃－40℃水浴中，使冷凍精子重新恢復(fù)活力的處理方法。

3.3

人工授精

用人工方法采取公牛精液，經(jīng)檢查處理后，用器械輸入發(fā)情母牛生殖道內(nèi)，使其受胎的

技術(shù)。

3.4

發(fā)情鑒定

通過觀察或檢查母牛外部行為征兆和內(nèi)部生殖器官變化，判斷卵巢卵子發(fā)育和排出等活

動情況以此確定母牛發(fā)情程度的方法。

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3.5

妊娠診斷

通過直腸檢查確定母牛是否妊娠的技術(shù)。

4人工授精點建設(shè)

4.1人工授精點應(yīng)建設(shè)在交通方便、能繁母牛相對集中的村寨或規(guī)模養(yǎng)殖場，并且符合當(dāng)?shù)?/p>

良種牛的推廣改良規(guī)劃的要求。

4.2從事牛冷凍精液人工輸精操作人員必須身體健康，具有一定文化程度，經(jīng)縣級以上畜

牧行政主管部門培訓(xùn)，持證上崗。

4.3人工授精點設(shè)置凍精貯存室，并有必備設(shè)施見附錄A。應(yīng)有配種記錄、產(chǎn)犢記錄。室

內(nèi)清潔、干燥，窗明臺凈。嚴禁貯放農(nóng)藥、化肥、烤煙等刺激性物品，室內(nèi)嚴禁吸煙、飲酒。

室外安裝有牛保定架。

5冷凍精液質(zhì)量、貯存和運輸

5.1凍精的質(zhì)量

5.1.1活力、密度、有效精子數(shù)、畸形率、細菌數(shù)等質(zhì)量符合NY/T1335要求。

5.1.2細管完整，字跡清楚，應(yīng)有生產(chǎn)單位簡稱、品種、編號、生產(chǎn)日期。裝細管凍精的紗

布干凈、標(biāo)簽清楚。

5.1.3凍精在輸精前應(yīng)進行質(zhì)量檢測。

5.2凍精貯存

5.2.1冷凍精液應(yīng)侵泡在液氮生物容器中貯存，液氮生物容器應(yīng)符合GB/T5458的規(guī)定。

5.2.2在液氮罐中貯存的冷凍精液必須浸沒于液氮中，液氮在不足總?cè)莘e三分之一時，應(yīng)及

時補充。

5.2.3取放冷凍精液時，提筒只允許上提到液氮罐的瓶頸段以下，嚴禁提出罐外。在罐內(nèi)脫

離液氮的時間不得超過10s，必要時須再次浸沒后再提取。

5.2.4在向另一液氮貯存罐內(nèi)轉(zhuǎn)移冷凍精液時，精液提筒脫離液氮不得超過5s。

5.2.5取放冷凍精液后，應(yīng)及時蓋上罐塞，盡量減少開啟容器蓋塞的次數(shù)和時間，以防止異

物落入罐內(nèi)，減少液氮消耗。

5.2.6嚴防不同品種和編號的冷凍精液混雜存放，難以辨識的應(yīng)予以銷毀。

5.2.7對長期貯存冷凍精液的液氮罐應(yīng)定期清理和洗刷，如發(fā)現(xiàn)液氮消耗顯著增加，或容器

外掛霜，應(yīng)及時更換。

5.3凍精運輸

運輸凍精時，應(yīng)使用專用液氮容器（有保護外套）,添滿液氮，固定容器蓋，液氮罐不

得倒放及碰撞和強烈震蕩。遠途運輸凍精時，備足液氮，及時補加。

6配種前的準備

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DB5206/T100—2018

6.1技術(shù)員的準備

技術(shù)員應(yīng)身體健康，采精前剪短指甲并抹平，用肥皂洗手后擦干，穿上潔凈工作服。

6.2消毒藥品的準備

消毒藥品包括75%的酒精、0.9%的生理鹽水0.3‰的新潔爾滅、脫脂藥棉、高錳酸鉀等，

并加以標(biāo)識。

6.3器械的清洗與消毒

6.3.1器械的清洗

將輸精所有器械用2％～3％的碳酸鈉或洗滌劑清洗干凈，再用清水沖洗2～3次。

6.3.2器械的消毒

輸精金屬器械、玻璃器皿、細管剪、鑷子等蒸煮消毒15分鐘，用前再用生理鹽水沖洗

數(shù)次，也可用75%的酒精棉球由輸精槍頂端開始向后擦拭兩遍，待酒精揮發(fā)完畢后再用生理

鹽水洗滌三次放入盤中待用。

6.3.3輸精器用后及時清洗、消毒。每輸配一頭母牛，使用一支輸精槍，塑料外套管只能

使用一次。

6.3.4牛的保定

采用站立保定，尾巴向右上方拴系提起。

7冷凍精液的提取

凍配點提取精液時，應(yīng)將所提取的品種、牛號、數(shù)量等記錄完善見附錄B并核對無誤后

妥善保存。提取精液應(yīng)做到輕拿輕放，嚴防碰撞。

8冷凍精液的解凍

8.1細管冷凍精液可用38℃左右的溫水直接浸泡解凍，時間為10s-15s。

8.2解凍后精液溫度不得超過外界環(huán)境溫度，一般應(yīng)控制在10℃以下。

8.3細管凍精解凍后，先檢查其質(zhì)量，有裂紋、封口不嚴、空管等現(xiàn)象不能用。

8.4細管冷凍精液應(yīng)在1h內(nèi)及時輸精。

8.5解凍后精液需作運輸時，應(yīng)置于4℃-5℃溫度下不得超過8小時。

9精液品質(zhì)檢查

9.1精液質(zhì)量應(yīng)符合GB4143的要求。

9.2檢查精子活力用的顯微鏡載物臺應(yīng)保持35℃-38℃。

9.3在顯微鏡視野下，呈直線前進運動的精子數(shù)占全部精子數(shù)的百分率來評定精子活力。

100%的精子呈直線運動者評為1.0，90%的精子呈直線運動者評為0.9，以此類推。

9.4凍精解凍后精子活力應(yīng)達0.3以上（1200萬有效精子）方可輸精。

10母牛發(fā)情鑒定

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DB5206/T100—2018

10.1發(fā)情鑒定

采用“一問二看三查”的外部觀察和直腸觸摸卵泡相結(jié)合方法，以直腸檢查卵泡發(fā)育程

度為主要依據(jù)。

10.1.1詢問畜主：了解母牛年齡、胎次、食欲情況、發(fā)情行為表現(xiàn)、開始時間、是否與公

牛交配。

10.1.2觀察母牛發(fā)情表現(xiàn)：一看陰唇腫脹程度，二看粘液色澤分泌量、粘稠情況，三看陰

唇粘膜色澤變化，以便確定輸配時間。

10.1.3三是直腸檢查方法：直腸觸摸子宮、卵巢，判斷其長短、粗細、質(zhì)地。順序是：手

戴乳膠手套，涂以滑潤劑，五指并攏伸入肛門，清除宿糞后，手掌伸平，掌心向下，在骨盆

底的正中有一長而稍扁的棒狀物為子宮頸。順著子宮頸向前伸進，可摸到子宮角間溝，溝的

兩旁各有一條向前彎曲的圓筒狀物，是左右子宮角，沿著子宮角大彎向下側(cè)面摸，可摸到扁

圓、柔軟而有彈性的卵巢。用手指觸摸卵巢表面的卵泡發(fā)育程度，以確定是否輸精。最佳輸

配時間是母牛發(fā)情中期末和發(fā)情后期。

10.2發(fā)情初期

母牛鳴叫不安，食欲開始減退，想爬跨它牛，但拒絕公牛爬跨，外陰輕微紅腫，陰道粘

膜充血，流出稀薄透明液體。直腸檢查子宮變軟，卵巢有一側(cè)增大，在卵巢上有卵泡，無彈

性。此期維持10h左右，不能輸精。

10.3發(fā)情中期

母牛極度不安，食欲停止，性欲旺盛，求配心切，爬跨它牛，外陰部明顯腫脹，流出粘

液增多。直腸檢查子宮松軟，卵泡體積增大，直徑1.0cm-1.5cm，突出于卵巢表面，彈性強，

有波動感。此期約維持8h-12h，輸精偏早。

10.4發(fā)情末期

母牛性欲減退，不再爬跨它牛，由不安轉(zhuǎn)為安靜，外陰部腫脹減退，粘液變稠，呈黃白

色。直腸檢查子宮頸變松軟，卵泡壁變薄，波動很明顯，呈熟葡萄狀，有一觸即破感覺。此

期約維持8h-10h，為最佳輸精時期。

11輸精

11.1母牛需經(jīng)發(fā)情鑒定和健康檢查后才能予以輸精。

11.2母牛在輸精前外陰部應(yīng)先用清水清洗，然后用新潔爾滅或0.1%高錳酸鉀溶液消毒，待

干燥后再用生理鹽水擦拭。

11.3發(fā)情母牛每次輸入1支將解凍后的細管凍精，凍精剪去頂部封口（切不可錯把細管的

棉塞端剪去）后插入輸精槍(將輸精槍的鋼芯插入細管的棉塞端口內(nèi))，套上塑料外套管備用。

11.4采用直腸把握子宮頸深部輸精法。

11.5輸精員左手戴長臂一次性手套，用水沾濕，手呈錐形，手心向上伸入直腸內(nèi)掏出宿糞，

清洗消毒外陰部、擦干，然后再手心向上伸入直腸后手心轉(zhuǎn)下，尋找子宮頸，并握住子宮頸

的外口端，同時臂肘向下輕壓，使陰門開裂。

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DB5206/T100—2018

11.6右手將準備好的輸精槍插入陰道，先自陰門向前向上與水平線呈45度角插入約

5cm-10cm（避開尿道口），再改向前平插，兩手相互配合，使輸精槍尖端對準子宮頸口，緩

緩導(dǎo)入子宮頸部內(nèi)，然后注入精液。

11.7輸精應(yīng)做到輕入、慢注、緩出、適深、適時。發(fā)情母牛一個情期輸精兩次的，其間隔

時間為8h—12h。

11.8輸精母牛須作好記錄，各項記錄真實準確見附錄C。

11.9輸精后畜主必須在下一個情期（一般在輸精后的18-22天左右）觀察母牛有無發(fā)情表

現(xiàn)，若連續(xù)2個情期無發(fā)情，則基本可判斷為受孕，否則，畜主應(yīng)及時通知輸配人員重新輸

配。

11.10若連續(xù)3個情期輸配后未受孕，須考慮作產(chǎn)科檢查，待疾病消除后再行輸配。

12妊娠診斷

妊娠診斷操作主要采取直腸檢查法：經(jīng)配種后發(fā)情的母牛，進行直腸檢查確診是否妊娠。

首先操作者須磨光指甲、涂上潤滑劑，伸入直腸掏出宿糞，用手指觸摸子宮頸，順著子宮角，

通過子宮角的收縮、大小、對稱情況判斷是否妊娠。

母牛妊娠各月特征：

12.1妊娠2個月，兩子宮角不對稱，孕角較空，約增大兩倍，孕角基部宮壁軟薄、波動、

無收縮。

12.2妊娠3個月，孕角大如嬰兒頭，子葉如蠶豆大小，子宮中動脈有妊娠搏感。

12.3妊娠4個月，子宮頸移至趾骨前緣，子宮垂入腹腔，子宮中動脈變直變粗，搏動明顯。

12.4隨著妊娠時間的增加，胎兒逐步長大，觸摸較容易。

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DB5206/T100—2018

附錄A

（資料性附錄）

人工授精點必備的設(shè)施

5L液氮罐(運輸用)、30L液氮罐（貯存用）、普通顯微鏡、輸精槍、外套、手套、剪刀、

鑷子、水杯、消毒鍋、水溫計、搪瓷盤。

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附錄B

（資料性附錄）

牛輸配點提取凍精登記表

表B.1牛輸配點提取凍精登記表

時間品種牛號數(shù)量（支）凍精活力

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附錄C

（資料性附錄）

記錄和報表

表C.1記錄和報表

畜主住址

品種牛號毛色年齡膘情

上期產(chǎn)犢

胎次輸精日期

日期

公牛品種

陰唇腫脹與否

公牛號

發(fā)凍精劑型

情粘液分泌情況

精子活率

鑒

定配精次數(shù)

陰唇粘膜顏色變化輸精員