2017-01-30實(shí)施2017-01-30實(shí)施新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》的要求編制。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所(新疆畜牧科學(xué)院動(dòng)物臨床醫(yī)學(xué)研究中心)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所(新疆畜牧科學(xué)院動(dòng)物臨床醫(yī)學(xué)研究中心)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：韓濤、陳世軍、黃炯、王力儉、楊會(huì)國(guó)、秦榮艷、王杰、袁燕、沈辰峰、樊華、黨新生、郭會(huì)玲、薛晶、金映紅。11范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了羔羊白肌病的術(shù)語(yǔ)和定義、診斷和防治要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于羊養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)和動(dòng)物診療單位對(duì)羔羊白肌病的診斷與防治。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY/T5030-2016無(wú)公害食品獸藥使用準(zhǔn)則NY5032-2016無(wú)公害食品畜禽飼料和飼料添加劑使用準(zhǔn)則NY/T5151無(wú)公害食品肉羊飼養(yǎng)管理準(zhǔn)則3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。一種營(yíng)養(yǎng)代謝病，又稱肌營(yíng)養(yǎng)不良癥(Musculardystrophy),是羔羊以骨骼肌、心肌及肝臟發(fā)生變性壞死，出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)障礙及呼吸、消化機(jī)能紊亂，并發(fā)運(yùn)動(dòng)障礙和急性死亡為臨床特征的微量元素硒(Se)及維生素E缺乏癥。羔羊白肌病因發(fā)病羔羊病變部位肌肉色淡、蒼白而得名。4診斷要求4.1發(fā)病原因4.1.1硒的攝入不足原發(fā)性硒缺乏主要是飼料含硒不足，土壤硒低于0.5mg/kg時(shí)，植物(牧草或飼料)含硒量低于0.1mg/kg時(shí)便不能滿足動(dòng)物機(jī)體生長(zhǎng)和代謝的要求。堿性土壤硒易被植物吸收，酸性土壤影響植物對(duì)硒的吸收。銅、鋅等元素影響飼料中硒的吸收利用。維生素E及其他抗氧化物質(zhì)含量不足，尤其是不飽和脂肪酸含量不足也可誘發(fā)硒缺乏癥。4.1.2維生素E缺乏長(zhǎng)期飼喂維生素E含量較少的秸稈、塊莖類植物，或飼喂的餅粕類飼料曾經(jīng)化學(xué)浸油法處理，維生素E含量較少。2維生素E的消耗量增加，如飼料中不飽和脂肪酸(亞油酸、亞麻酸、花生油、豆油、魚脂等)因儲(chǔ)羔羊白肌病多呈地方流行性，主要發(fā)生于6月齡以內(nèi)的羔羊，2～5周齡羔羊、生長(zhǎng)發(fā)育快、膘情青綠飼料時(shí)發(fā)病率、病死率較高。羔羊白肌病死亡率可達(dá)40%～60%,嚴(yán)重缺硒地區(qū)高達(dá)90%。b)急性型：病羊側(cè)臥，呼吸急促(80次/min~100次/min),心跳加快(200次/min以上),心律不齊，心功能不全，體溫正常。通常在出現(xiàn)癥狀后16h～20h左100次/min),心動(dòng)快而弱(脈搏達(dá)180次/min～200次/min),四肢無(wú)力，行走困難，共濟(jì)全血谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性偏低(見(jiàn)附錄A)可確診。3入冬時(shí)肌內(nèi)注射0.1%亞硒酸鈉1次，每只羊4mL～6mL,并補(bǔ)充適當(dāng)精料。應(yīng)保證日糧含硒0.1mg/kg～0.2mg/kg,達(dá)不到這一水平，需添加亞硒酸鈉補(bǔ)齊。飼料中添加亞硒酸鈉維生素E粉或牛羊用含硒微量元素(按產(chǎn)品說(shuō)明使用),或補(bǔ)飼含硒微量元素舔磚。加強(qiáng)懷孕母羊、羔羊的飼養(yǎng)管理，多喂青綠飼料及燕麥芽、麥芽及谷芽(稍出芽即可)。紫云英含5.2.1補(bǔ)硒和維生素Ea)0.1%亞硒酸鈉注射液，皮下或肌內(nèi)注射，每只羔羊2mL/次～3mL/次，1次/(1d～3d),連用2～4次；b)醋酸維生素E注射液，肌內(nèi)注射，每只羔羊100mg/次～500mg/次，1次/(1d～3d),連用2～4次；d)亞硒酸鈉維生素E預(yù)混劑(成分：亞硒酸鈉0.4g,維生素E5g,碳酸鈣加至1000g),每e)維生素E軟膠囊，口服，每只羔羊50mg/次～100mg/次，1次/d,連用5d～10d;a)青霉素鈉，肌內(nèi)注射，4萬(wàn)U/kg,2次/d,連用2d～3d;b)硫酸慶大霉素注射液，肌內(nèi)注射，4mg/kg,1次/d,連用2d～3d;c)頭孢噻呋鈉，肌內(nèi)注射，2mg/kg,1次/d,連用2d～3d;d)氨芐西林鈉，肌內(nèi)注射，15mg/kg,2次/d,連用2d～3d。如抗炎可選用地塞米松磷酸鈉，皮下或肌內(nèi)注射，每只羔羊每次1mg～2mg,1次/d,連用3d。以上各條中藥物使用應(yīng)符合NY/T5030-2016中第5.3、5.4、5.5、6.6條的規(guī)定。4(規(guī)范性附錄)谷胱甘肽(GSSG),GSH-Px的活性可用其酶促反應(yīng)的速度來(lái)表示，測(cè)定酶促反應(yīng)中GSH的消耗，則可硝基苯甲酸陰離子，于423nm波長(zhǎng)有最大吸收峰，測(cè)定該離子濃度，即可計(jì)算出GSH減少的量，由于稱量(mg)終濃度(mmol/L)注：加蒸餾水至100mL,用少量HCL、NaOH調(diào)pH7.0,4℃保存。GSH30.7mg加疊氮鈉磷酸緩沖液至100mL,臨用前配制，冰凍保存1d～2d。A.2.2.31.25mmol/L取30%H?O?0.15mL～0.17mL,用雙蒸水稀釋至100mL,作為貯備液，4℃避光保存，臨用前將貯備液用雙蒸水稀釋10倍即可。5表A.2偏磷酸沉淀液各成分稱量稱量(g)16.7(先用蒸餾水溶解)注：加蒸餾水至1000mL,用普通濾紙過(guò)濾A.2.2.50.32mol/LNa?HPO?溶液Na?HPO?22.7g加蒸餾水至500mL,室溫保存。表A.3DTNB顯色液各成分稱量質(zhì)量(mg)A.2.2.70.2mol磷酸緩沖液pH7.4A.2.2.80.9%生理鹽水A.3實(shí)驗(yàn)步驟A.3.1樣品制備取全血10μL加入到1mL雙蒸水中，充分振搖，使之全部溶血1:100待測(cè)，4h內(nèi)測(cè)定酶活力。若當(dāng)天來(lái)不及測(cè)定，將肝素抗凝全血置-20℃凍存，3d內(nèi)測(cè)定，若4℃存放，28h內(nèi)必須測(cè)完。測(cè)前取出樣品室溫自然解凍。A.3.2GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作中，各加入偏磷酸沉淀劑8mL,用雙蒸水稀釋至10mL刻度，即得到濃度為0μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、取上述不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液各2mL,放入試管中，加入0.32mol/LNa?HPO?2.5mL,比色前加入DTNB顯色液0.5mL用光徑1cm杯，5min內(nèi)在可見(jiàn)光423nm波長(zhǎng)測(cè)OD值，以雙蒸水調(diào)零點(diǎn)。以GSH含量(μmol/L)為橫坐標(biāo)，OD423值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。A.3.3測(cè)定步驟GSH含量測(cè)定步驟見(jiàn)表A.4。6表A.4GSH含量測(cè)定步驟樣品管(mL)非酶管(mL)空白管(mL)1一23H?O?(37℃預(yù)熱)437℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)3min(嚴(yán)格控制時(shí)間)54467228一一9一一注1:顯色反應(yīng)1min后于423nm波長(zhǎng)(1cm光徑),讀OD值，5min之內(nèi)讀A.3.4計(jì)算全血GSH-Px活力單位規(guī)定每1mL全血，每分鐘，扣除非酶反應(yīng)的log[GSH]降低后，使log[GSH]降低1為一個(gè)酶活力單位。全血GSH-Px活力單位計(jì)算見(jiàn)式A.1。log[GSH]——谷胱甘肽含量(μmol/L)的自然對(duì)數(shù)；OD——被檢物吸收光密度。A.4注意事項(xiàng)A.4.1由于H?O?易分解導(dǎo)致濃度改變，臨用時(shí)取貯備液用分光光度計(jì)測(cè)其濃度，取貯備液3mL,測(cè)定1cm光徑的240nm處OD值。H?O?濃度計(jì)算見(jiàn)式A.2。7若OD值為0.45,則表明H?O?濃度