α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑：細(xì)胞損傷與保護(hù)的雙重影響探究一、引言1.1研究背景與意義細(xì)胞損傷是多種疾病發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)，其涉及到復(fù)雜的生理病理過程。從神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病、帕金森病，到心血管疾病如心肌梗死、缺血性腦卒中，以及炎癥相關(guān)疾病如肺炎、腸炎等，細(xì)胞損傷在其中扮演著關(guān)鍵角色。在阿爾茨海默病中，神經(jīng)元細(xì)胞的損傷和死亡導(dǎo)致大腦認(rèn)知功能的進(jìn)行性衰退；心肌梗死時(shí)，心肌細(xì)胞因缺血缺氧而受損，嚴(yán)重影響心臟的泵血功能。深入了解細(xì)胞損傷的機(jī)制并尋找有效的保護(hù)措施，一直是醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。α7煙堿型乙酰膽堿受體（α7nicotinicacetylcholinereceptor，α7nAChR）屬于配體門控離子通道超家族的一員，由五個(gè)相同亞基組成同源五聚體，對(duì)鈣離子具有較高的通透性。這種獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予了α7nAChR在介導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)釋放和突觸傳遞中重要的生理功能。在正常生理狀態(tài)下，α7nAChR廣泛分布于人體各個(gè)組織器官，尤其在與認(rèn)知和記憶功能密切相關(guān)的海馬和下丘腦高度表達(dá)，參與調(diào)節(jié)突觸功能，影響神經(jīng)遞質(zhì)如乙酰膽堿、多巴胺、谷氨酸等的釋放，從而維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能。在免疫系統(tǒng)中，α7nAChR也表達(dá)于巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等各種類型的免疫細(xì)胞，參與炎癥反應(yīng)的調(diào)控。α7nAChR激動(dòng)劑能夠使α7通道開放，引發(fā)鈣離子內(nèi)流，進(jìn)而觸發(fā)一系列生物學(xué)效應(yīng)。在細(xì)胞損傷的背景下，α7nAChR激動(dòng)劑展現(xiàn)出巨大的研究?jī)r(jià)值。許多研究表明，激活α7nAChR可以通過多種途徑對(duì)細(xì)胞起到保護(hù)作用。在神經(jīng)退行性疾病的研究中，α7nAChR激動(dòng)劑能夠增強(qiáng)神經(jīng)元的存活能力，減少神經(jīng)炎癥，改善認(rèn)知功能障礙。在缺血性腦卒中模型中，激動(dòng)劑的使用可以減輕腦組織的損傷，改善神經(jīng)功能預(yù)后。在炎癥相關(guān)疾病中，α7nAChR激動(dòng)劑通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，抑制炎癥因子的釋放，發(fā)揮抗炎作用，從而減輕炎癥對(duì)細(xì)胞的損傷。對(duì)α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑在細(xì)胞損傷與保護(hù)方面的研究具有深遠(yuǎn)的意義。在理論層面，有助于我們深入理解細(xì)胞損傷的內(nèi)在機(jī)制以及α7nAChR在其中的調(diào)控作用，豐富細(xì)胞生物學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)等領(lǐng)域的理論知識(shí)。在實(shí)際應(yīng)用中，為相關(guān)疾病的治療提供了新的靶點(diǎn)和思路。如果能夠研發(fā)出安全有效的α7nAChR激動(dòng)劑藥物，將為神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病、炎癥相關(guān)疾病等的治療帶來新的希望，有望改善患者的生活質(zhì)量，減輕社會(huì)和家庭的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。1.2研究目的與方法本研究旨在深入探究α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞損傷與保護(hù)的具體影響及其潛在機(jī)制。通過一系列嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，從細(xì)胞和動(dòng)物水平全方位解析α7nAChR激動(dòng)劑的作用，為相關(guān)疾病的治療提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和新的治療思路。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，我們將選用多種具有代表性的細(xì)胞系，如神經(jīng)細(xì)胞系（如PC12細(xì)胞、SH-SY5Y細(xì)胞）、心肌細(xì)胞系（H9c2細(xì)胞）和免疫細(xì)胞系（RAW264.7巨噬細(xì)胞）。這些細(xì)胞系分別對(duì)應(yīng)神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病和炎癥相關(guān)疾病中的關(guān)鍵細(xì)胞類型。采用多種損傷模型，如用Aβ1-42寡聚體誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的損傷，模擬阿爾茨海默病中神經(jīng)元的病理狀態(tài)；利用缺氧/復(fù)氧處理心肌細(xì)胞，構(gòu)建心肌缺血再灌注損傷模型，以研究心肌梗死時(shí)心肌細(xì)胞的損傷機(jī)制；通過脂多糖（LPS）刺激免疫細(xì)胞，引發(fā)炎癥反應(yīng)，模擬炎癥相關(guān)疾病中免疫細(xì)胞的活化狀態(tài)。將不同濃度的α7nAChR激動(dòng)劑（如PNU-282987、PHA-543613）作用于損傷細(xì)胞，采用MTT法、CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力，評(píng)估激動(dòng)劑對(duì)損傷細(xì)胞存活能力的影響；通過檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)，如AnnexinV-FITC/PI雙染結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率，觀察激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用；利用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎癥因子（如TNF-α、IL-1β、IL-6）的水平，探究激動(dòng)劑對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)，采用Westernblotting技術(shù)檢測(cè)相關(guān)信號(hào)通路蛋白（如NF-κB、MAPK家族蛋白）的表達(dá)和磷酸化水平，深入探討α7nAChR激動(dòng)劑發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用的分子機(jī)制。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，選取健康的成年小鼠或大鼠，構(gòu)建相應(yīng)的疾病模型。例如，采用腦內(nèi)注射Aβ1-42的方法建立阿爾茨海默病小鼠模型，通過線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞（MCAO）模型以模擬缺血性腦卒中，利用腹腔注射LPS誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)模型。將動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、激動(dòng)劑治療組等。激動(dòng)劑治療組給予不同劑量的α7nAChR激動(dòng)劑進(jìn)行干預(yù)，對(duì)照組和模型組給予等量的溶劑。通過神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試，如Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，評(píng)估阿爾茨海默病模型小鼠的認(rèn)知功能；利用Longa評(píng)分法評(píng)估缺血性腦卒中模型大鼠的神經(jīng)功能缺損程度；檢測(cè)血清中炎癥因子水平和組織病理學(xué)變化，觀察激動(dòng)劑對(duì)炎癥反應(yīng)和組織損傷的影響。對(duì)動(dòng)物腦組織、心臟組織或其他相關(guān)組織進(jìn)行免疫組化、免疫熒光等檢測(cè)，觀察α7nAChR的表達(dá)和分布變化，以及相關(guān)信號(hào)通路分子在組織中的表達(dá)情況，進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，從整體動(dòng)物水平揭示α7nAChR激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞損傷與保護(hù)的作用機(jī)制。1.3國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國(guó)外，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑的研究起步較早，取得了一系列重要成果。在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域，大量研究聚焦于α7nAChR激動(dòng)劑對(duì)神經(jīng)退行性疾病的影響。美國(guó)的科研團(tuán)隊(duì)通過對(duì)阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因小鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)，給予α7nAChR激動(dòng)劑PNU-282987后，小鼠大腦中Aβ淀粉樣蛋白的沉積顯著減少，同時(shí)炎癥因子水平降低，認(rèn)知功能得到明顯改善，表明α7nAChR激動(dòng)劑可能通過抑制神經(jīng)炎癥和減少Aβ聚集來發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。在帕金森病的研究中，法國(guó)的研究人員利用6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的帕金森病大鼠模型，發(fā)現(xiàn)α7nAChR激動(dòng)劑PHA-543613與σ1受體激動(dòng)劑PRE-084聯(lián)合使用，可誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元的部分保護(hù)，降低神經(jīng)膠質(zhì)激活程度，提示α7nAChR激動(dòng)劑與其他受體激動(dòng)劑聯(lián)合應(yīng)用可能是治療帕金森病的新策略。在心血管疾病方面，國(guó)外研究主要集中在心肌缺血再灌注損傷。德國(guó)的科研人員通過離體大鼠心臟Langendorff灌注模型，發(fā)現(xiàn)激活α7nAChR能夠減少心肌細(xì)胞凋亡，降低梗死面積，其機(jī)制與抑制線粒體途徑的凋亡信號(hào)有關(guān)。在炎癥相關(guān)疾病的研究中，國(guó)外研究成果頗豐。英國(guó)的研究團(tuán)隊(duì)在膿毒癥小鼠模型中證實(shí)，α7nAChR激動(dòng)劑能夠抑制巨噬細(xì)胞釋放炎癥因子，如TNF-α、IL-1β等，減輕全身炎癥反應(yīng)，提高小鼠的生存率。在肺部炎癥的研究中，美國(guó)的研究人員利用脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型，發(fā)現(xiàn)α7nAChR激動(dòng)劑可通過抑制NF-κB信號(hào)通路，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，改善肺組織損傷。國(guó)內(nèi)對(duì)于α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑的研究也在不斷深入。在神經(jīng)退行性疾病領(lǐng)域，國(guó)內(nèi)研究團(tuán)隊(duì)通過對(duì)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，中藥活性成分石杉?jí)A甲能夠激活α7nAChR，增加腦內(nèi)乙酰膽堿水平，改善小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，同時(shí)抑制tau蛋白的過度磷酸化，為阿爾茨海默病的治療提供了新的藥物研發(fā)思路。在心血管疾病方面，國(guó)內(nèi)學(xué)者利用大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，研究發(fā)現(xiàn)α7nAChR激動(dòng)劑能夠上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，從而減輕心肌細(xì)胞凋亡，保護(hù)心臟功能。在炎癥相關(guān)疾病中，國(guó)內(nèi)研究主要集中在呼吸系統(tǒng)疾病。有研究利用哮喘小鼠模型，發(fā)現(xiàn)α7nAChR激動(dòng)劑可以抑制氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，減少Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-5和IL-13的釋放，緩解哮喘癥狀。盡管國(guó)內(nèi)外在α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑的研究上取得了一定進(jìn)展，但仍存在不足之處。目前對(duì)α7nAChR激動(dòng)劑的作用機(jī)制研究尚未完全明確，尤其是在不同疾病模型中，其激活后觸發(fā)的下游信號(hào)通路存在差異，需要進(jìn)一步深入研究。在藥物研發(fā)方面，雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些具有潛力的α7nAChR激動(dòng)劑，但這些激動(dòng)劑的特異性和選擇性有待提高，部分激動(dòng)劑可能會(huì)產(chǎn)生不良反應(yīng)，限制了其臨床應(yīng)用。此外，現(xiàn)有研究多集中在細(xì)胞和動(dòng)物水平，缺乏大規(guī)模的臨床試驗(yàn)來驗(yàn)證α7nAChR激動(dòng)劑的療效和安全性，這也阻礙了其從基礎(chǔ)研究向臨床治療的轉(zhuǎn)化。本研究將在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步深入探究α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)不同類型細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其分子機(jī)制。通過全面系統(tǒng)地研究，有望填補(bǔ)現(xiàn)有研究的空白，為相關(guān)疾病的治療提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和更有效的治療靶點(diǎn)。二、α7煙堿型乙酰膽堿受體及激動(dòng)劑概述2.1α7煙堿型乙酰膽堿受體結(jié)構(gòu)與功能α7煙堿型乙酰膽堿受體（α7nAChR）屬于配體門控離子通道超家族，其結(jié)構(gòu)獨(dú)特且精巧，由五個(gè)相同的α7亞基環(huán)繞形成一個(gè)中心離子通道，構(gòu)成同源五聚體結(jié)構(gòu)。每個(gè)α7亞基包含約502個(gè)氨基酸殘基，這些氨基酸殘基折疊形成了具有特定功能的結(jié)構(gòu)域，包括細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域（ECD）、跨膜結(jié)構(gòu)域（TMD）和細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（ICD）。細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域富含半胱氨酸，這些半胱氨酸之間形成的二硫鍵對(duì)于維持受體的空間構(gòu)象和穩(wěn)定性至關(guān)重要，同時(shí)也是配體乙酰膽堿的結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)乙酰膽堿分子與細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點(diǎn)特異性結(jié)合時(shí)，會(huì)誘導(dǎo)受體發(fā)生構(gòu)象變化?？缒そY(jié)構(gòu)域由四個(gè)α-螺旋（M1-M4）組成，這些螺旋相互作用形成離子通道的壁，決定了離子通道的選擇性和通透性。α7nAChR對(duì)鈣離子（Ca2?）具有較高的通透性，其對(duì)Ca2?的通透能力是其他陽(yáng)離子（如鈉離子、鉀離子）的20倍左右，這種高Ca2?通透性使得α7nAChR在介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域則參與調(diào)節(jié)受體的功能和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，與多種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子相互作用，啟動(dòng)下游的信號(hào)通路。α7nAChR廣泛分布于人體的各個(gè)組織和器官，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，尤其是與認(rèn)知和記憶功能密切相關(guān)的海馬和下丘腦區(qū)域，α7nAChR呈現(xiàn)高度表達(dá)。在海馬神經(jīng)元中，α7nAChR參與調(diào)節(jié)突觸可塑性和神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。當(dāng)α7nAChR被激活時(shí)，Ca2?內(nèi)流增加，激活一系列鈣依賴性的信號(hào)通路，如鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）信號(hào)通路。CaMKⅡ的激活可以促進(jìn)突觸后致密物（PSD）中相關(guān)蛋白的磷酸化，增強(qiáng)突觸傳遞效能，從而在學(xué)習(xí)和記憶過程中發(fā)揮重要作用。在阿爾茨海默病患者的大腦中，α7nAChR的表達(dá)和功能顯著下降，導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)釋放紊亂，突觸可塑性受損，進(jìn)而引發(fā)認(rèn)知功能障礙。研究表明，通過激活α7nAChR，可以改善阿爾茨海默病模型動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力，這進(jìn)一步證實(shí)了α7nAChR在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要功能。在免疫系統(tǒng)中，α7nAChR表達(dá)于巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞表面，是膽堿能抗炎通路的關(guān)鍵組成部分。當(dāng)機(jī)體受到病原體感染或組織損傷時(shí)，炎癥信號(hào)通過傳入神經(jīng)傳導(dǎo)至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，激活迷走神經(jīng)，使其釋放乙酰膽堿。乙酰膽堿與免疫細(xì)胞表面的α7nAChR結(jié)合，激活下游的Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（JAK-STAT3）信號(hào)通路和磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信號(hào)通路，抑制核因子κB（NF-κB）的核轉(zhuǎn)位，從而減少促炎細(xì)胞因子（如腫瘤壞死因子α、白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素6等）的釋放，發(fā)揮抗炎作用。在膿毒癥小鼠模型中，給予α7nAChR激動(dòng)劑可以顯著降低血清中促炎細(xì)胞因子的水平，減輕炎癥反應(yīng)，提高小鼠的生存率，表明α7nAChR在免疫系統(tǒng)中對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)控起著關(guān)鍵作用。在心血管系統(tǒng)中，α7nAChR也有表達(dá)，其功能主要涉及心肌細(xì)胞的保護(hù)和心血管系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)。在心肌缺血再灌注損傷模型中，激活α7nAChR可以減少心肌細(xì)胞凋亡，降低梗死面積。其機(jī)制可能與抑制線粒體途徑的凋亡信號(hào)有關(guān)，α7nAChR激活后，通過調(diào)節(jié)線粒體膜電位，減少細(xì)胞色素C的釋放，抑制半胱天冬酶-3等凋亡相關(guān)蛋白的激活，從而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。α7nAChR還可以通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，影響血管的舒張和收縮，維持心血管系統(tǒng)的正常功能。α7煙堿型乙酰膽堿受體獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予了其在神經(jīng)傳導(dǎo)、炎癥調(diào)節(jié)、細(xì)胞保護(hù)等多方面重要的功能，其在不同組織和器官中的特異性表達(dá)和功能發(fā)揮，使其成為多種生理病理過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)靶點(diǎn)，為相關(guān)疾病的治療提供了新的思路和方向。2.2常見α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑類型α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑種類繁多，依據(jù)其對(duì)α7nAChR的選擇性，可大致分為非選擇性激動(dòng)劑和選擇性激動(dòng)劑。尼古丁是最為人們熟知的非選擇性α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑。它廣泛存在于煙草制品中，能夠與多種煙堿型乙酰膽堿受體亞型結(jié)合，包括α7nAChR。尼古丁的化學(xué)結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單，屬于吡啶類生物堿，其分子由一個(gè)吡啶環(huán)和一個(gè)吡咯烷環(huán)通過氮原子連接而成。當(dāng)尼古丁進(jìn)入人體后，能夠迅速透過血腦屏障，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的α7nAChR結(jié)合，使受體通道開放，引起鈣離子內(nèi)流。在生理效應(yīng)方面，低劑量的尼古丁可以刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)，提高注意力、增強(qiáng)警覺性，這是因?yàn)樗せ瞀?nAChR后，促進(jìn)了神經(jīng)遞質(zhì)如乙酰膽堿、多巴胺、去甲腎上腺素等的釋放。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予低劑量尼古丁的小鼠在學(xué)習(xí)記憶測(cè)試中表現(xiàn)出更好的成績(jī)，其大腦海馬區(qū)的神經(jīng)遞質(zhì)水平也有所升高。然而，高劑量的尼古丁則會(huì)產(chǎn)生抑制作用，甚至導(dǎo)致中毒癥狀，如惡心、嘔吐、頭暈等。長(zhǎng)期大量攝入尼古丁還會(huì)導(dǎo)致成癮性，這與尼古丁對(duì)大腦獎(jiǎng)賞系統(tǒng)的影響有關(guān)，它持續(xù)刺激多巴胺的釋放，使大腦產(chǎn)生愉悅感，從而促使使用者不斷尋求更多的尼古丁攝入。PNU-282987是一種典型的選擇性α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑。其化學(xué)名稱為(5-bromo-3-(4-chlorophenyl)-1-isopropyl-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridin-7-yl)amine，具有獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，包含吡唑并吡啶環(huán)等特殊基團(tuán)，這種結(jié)構(gòu)賦予了它對(duì)α7nAChR較高的親和力和選擇性。PNU-282987能夠特異性地與α7nAChR結(jié)合，激活受體介導(dǎo)的信號(hào)通路。在神經(jīng)保護(hù)方面，多項(xiàng)研究表明，PNU-282987對(duì)阿爾茨海默病模型具有顯著的改善作用。在APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠模型中，給予PNU-282987干預(yù)后，小鼠大腦中的Aβ淀粉樣蛋白沉積明顯減少，這是因?yàn)榧せ瞀?nAChR后，增強(qiáng)了Aβ的清除機(jī)制，促進(jìn)了小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ的吞噬作用。PNU-282987還能降低炎癥因子水平，抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)，改善小鼠的認(rèn)知功能。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，用PNU-282987處理受Aβ?lián)p傷的神經(jīng)細(xì)胞，細(xì)胞活力顯著提高，凋亡率降低，表明其對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有直接的保護(hù)作用。GTS-21（二鹽酸3-(2,4-dimethoxybenzylidene)anabaseine）也是一種選擇性α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑。它是一種部分激動(dòng)劑，具有相對(duì)較低的內(nèi)在活性。GTS-21的化學(xué)結(jié)構(gòu)中包含特殊的苯亞甲基和阿那貝辛結(jié)構(gòu)，使其能夠選擇性地與α7nAChR的α7亞基結(jié)合，在其他亞基如α2、α3和α4上沒有明顯的活性。在抗炎方面，GTS-21表現(xiàn)出顯著的效果。在膿毒癥小鼠模型中，給予GTS-21可以顯著降低血清中腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）等促炎細(xì)胞因子的水平，減輕炎癥反應(yīng)。其作用機(jī)制主要是通過激活α7nAChR，抑制巨噬細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路的激活，減少炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和釋放。在結(jié)腸炎小鼠模型中，GTS-21也能改善腸道炎癥，減輕結(jié)腸組織的損傷，表現(xiàn)為結(jié)腸長(zhǎng)度增加，疾病活動(dòng)性評(píng)分降低。PHA-543613同樣是一種選擇性α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑。它對(duì)α7nAChR具有較高的親和力和選擇性，能夠有效激活α7nAChR。在帕金森病的研究中，PHA-543613展現(xiàn)出潛在的治療價(jià)值。在6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的帕金森病大鼠模型中，PHA-543613與σ1受體激動(dòng)劑PRE-084聯(lián)合使用，可誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元的部分保護(hù)，降低神經(jīng)膠質(zhì)激活程度。這可能是因?yàn)镻HA-543613激活α7nAChR后，調(diào)節(jié)了多巴胺能神經(jīng)元的功能，減少了神經(jīng)炎癥對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的損傷。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，PHA-543613能夠促進(jìn)多巴胺能神經(jīng)元的存活，提高細(xì)胞的抗凋亡能力。不同類型的α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑因其獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和藥理學(xué)特性，在調(diào)節(jié)α7nAChR功能以及對(duì)細(xì)胞損傷與保護(hù)方面發(fā)揮著不同的作用，為相關(guān)疾病的治療提供了多樣化的研究方向和潛在的治療手段。2.3激動(dòng)劑與受體的作用機(jī)制當(dāng)α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑與α7nAChR結(jié)合時(shí)，會(huì)引發(fā)一系列精妙而復(fù)雜的分子事件，其核心在于受體構(gòu)象的改變，進(jìn)而開啟離子通道，引發(fā)鈣離子內(nèi)流，激活相關(guān)信號(hào)通路，最終產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng)。以尼古丁為例，當(dāng)尼古丁分子進(jìn)入細(xì)胞后，憑借其特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)，能夠快速透過血腦屏障，特異性地識(shí)別并結(jié)合到α7nAChR的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域上。尼古丁與受體結(jié)合后，如同啟動(dòng)了一把分子鑰匙，誘導(dǎo)α7nAChR的五個(gè)α7亞基發(fā)生構(gòu)象變化。原本緊密排列的亞基之間的相對(duì)位置發(fā)生改變，使得環(huán)繞形成的中心離子通道打開。由于α7nAChR對(duì)鈣離子具有高度的通透性，通道開放后，細(xì)胞外的鈣離子（Ca2?）順著電化學(xué)梯度迅速內(nèi)流進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。這種鈣離子內(nèi)流是后續(xù)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件的關(guān)鍵起始點(diǎn)，猶如多米諾骨牌的第一塊被推倒，引發(fā)連鎖反應(yīng)。在神經(jīng)細(xì)胞中，鈣離子內(nèi)流首先激活鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）信號(hào)通路。進(jìn)入細(xì)胞的鈣離子與鈣調(diào)蛋白結(jié)合，形成Ca2?-鈣調(diào)蛋白復(fù)合物。該復(fù)合物具有高度的活性，能夠與CaMKⅡ結(jié)合并使其磷酸化激活。激活后的CaMKⅡ可以進(jìn)一步磷酸化多種底物蛋白，其中包括突觸后致密物（PSD）中的關(guān)鍵蛋白。這些蛋白的磷酸化修飾增強(qiáng)了突觸傳遞效能，促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)如乙酰膽堿、多巴胺、谷氨酸等的釋放，從而在學(xué)習(xí)和記憶等神經(jīng)生理過程中發(fā)揮重要作用。在APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠模型中，尼古丁激活α7nAChR后，CaMKⅡ信號(hào)通路被激活，小鼠大腦海馬區(qū)的神經(jīng)遞質(zhì)釋放增加，其學(xué)習(xí)記憶能力得到一定程度的改善。在免疫細(xì)胞中，α7nAChR激動(dòng)劑與受體結(jié)合引發(fā)的鈣離子內(nèi)流主要激活Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（JAK-STAT3）信號(hào)通路和磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信號(hào)通路。鈣離子內(nèi)流導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的變化，激活JAK家族激酶。JAK激酶被激活后，能夠磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）的特定酪氨酸殘基。磷酸化的STAT3形成二聚體，然后轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，與特定的DNA序列結(jié)合，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，抑制促炎細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）等的釋放。同時(shí)，鈣離子內(nèi)流還能激活PI3K，PI3K將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉(zhuǎn)化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，招募并激活蛋白激酶B（Akt）。Akt通過磷酸化多種下游底物，抑制核因子κB（NF-κB）的核轉(zhuǎn)位，從而進(jìn)一步抑制炎癥因子的產(chǎn)生。在膿毒癥小鼠模型中，給予α7nAChR激動(dòng)劑GTS-21后，JAK-STAT3和PI3K-Akt信號(hào)通路被激活，血清中TNF-α、IL-1β等促炎細(xì)胞因子的水平顯著降低，炎癥反應(yīng)得到有效抑制。對(duì)于選擇性α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑，如PNU-282987，其與α7nAChR的結(jié)合具有更高的親和力和選擇性。PNU-282987獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)使其能夠精準(zhǔn)地與α7nAChR的配體結(jié)合位點(diǎn)相互作用，誘導(dǎo)受體構(gòu)象變化，打開離子通道，引發(fā)鈣離子內(nèi)流。在阿爾茨海默病的研究中，PNU-282987激活α7nAChR后，除了通過上述的CaMKⅡ信號(hào)通路改善神經(jīng)遞質(zhì)釋放和突觸功能外，還能通過激活細(xì)胞內(nèi)的自噬相關(guān)信號(hào)通路，增強(qiáng)小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ淀粉樣蛋白的吞噬和清除能力。具體來說，PNU-282987引發(fā)的鈣離子內(nèi)流激活了哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子，抑制mTOR的活性。mTOR活性的抑制會(huì)解除對(duì)自噬相關(guān)蛋白的抑制，從而促進(jìn)自噬體的形成和成熟，增強(qiáng)自噬作用，減少大腦中Aβ淀粉樣蛋白的沉積，減輕神經(jīng)炎癥，改善認(rèn)知功能。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑與受體結(jié)合后，通過引發(fā)受體構(gòu)象改變、鈣離子內(nèi)流，激活了多種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，這些信號(hào)通路在不同類型的細(xì)胞中發(fā)揮著調(diào)節(jié)神經(jīng)傳導(dǎo)、抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)細(xì)胞存活等重要作用，為理解α7nAChR激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞損傷與保護(hù)的影響提供了關(guān)鍵的分子機(jī)制基礎(chǔ)。三、α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞損傷的影響3.1對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響及機(jī)制3.1.1體外實(shí)驗(yàn)研究在神經(jīng)細(xì)胞損傷的體外實(shí)驗(yàn)研究中，科研人員通常選用具有代表性的神經(jīng)細(xì)胞系，如PC12細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞，以深入探究α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑的作用。PC12細(xì)胞源自大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤，具有神經(jīng)元的某些特性，在神經(jīng)科學(xué)研究中廣泛應(yīng)用；SH-SY5Y細(xì)胞則是一種人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系，其在形態(tài)和功能上與神經(jīng)元高度相似，能夠很好地模擬神經(jīng)元的生理病理過程。在模擬阿爾茨海默?。ˋD）的體外實(shí)驗(yàn)中，研究人員常使用Aβ1-42寡聚體誘導(dǎo)PC12細(xì)胞或SH-SY5Y細(xì)胞損傷。Aβ1-42寡聚體是AD患者大腦中淀粉樣斑塊的主要成分，具有神經(jīng)毒性，能夠?qū)е律窠?jīng)細(xì)胞活力下降、凋亡增加以及氧化應(yīng)激水平升高。當(dāng)給予α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如PNU-282987）處理后，通過MTT法或CCK-8法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞活力顯著提高。這是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑與受體結(jié)合后，引發(fā)鈣離子內(nèi)流，激活了下游的磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信號(hào)通路。激活的Akt可以磷酸化多種下游底物，其中包括糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）。磷酸化的GSK-3β活性受到抑制，從而減少了tau蛋白的過度磷酸化，tau蛋白是一種微管相關(guān)蛋白，其過度磷酸化會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成，是AD的重要病理特征之一。通過抑制tau蛋白的過度磷酸化，α7nAChR激動(dòng)劑有效地減輕了神經(jīng)細(xì)胞的損傷，提高了細(xì)胞的存活能力。在檢測(cè)細(xì)胞凋亡方面，采用AnnexinV-FITC/PI雙染結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率。結(jié)果顯示，在Aβ1-42寡聚體誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷模型中，細(xì)胞凋亡率明顯升高，而給予α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑處理后，細(xì)胞凋亡率顯著降低。這一過程涉及到線粒體凋亡途徑的調(diào)節(jié)。α7nAChR激動(dòng)劑激活后，通過上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，維持線粒體膜電位的穩(wěn)定，減少細(xì)胞色素C的釋放。細(xì)胞色素C的釋放是線粒體凋亡途徑的關(guān)鍵步驟，其釋放到細(xì)胞質(zhì)中會(huì)激活半胱天冬酶-9和半胱天冬酶-3等凋亡相關(guān)蛋白，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。α7nAChR激動(dòng)劑通過抑制細(xì)胞色素C的釋放，阻斷了線粒體凋亡途徑，從而減少了神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。在研究α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的分子機(jī)制時(shí)，還涉及到對(duì)炎癥因子和相關(guān)信號(hào)通路的檢測(cè)。利用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎癥因子（如腫瘤壞死因子α，TNF-α；白細(xì)胞介素1β，IL-1β；白細(xì)胞介素6，IL-6）的水平，發(fā)現(xiàn)Aβ1-42寡聚體刺激后，炎癥因子水平顯著升高，而α7nAChR激動(dòng)劑處理后，炎癥因子水平明顯降低。這是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑激活后，抑制了核因子κB（NF-κB）信號(hào)通路的激活。在正常情況下，NF-κB以無活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，與抑制蛋白IκB結(jié)合。當(dāng)細(xì)胞受到炎癥刺激時(shí)，IκB激酶（IKK）被激活，磷酸化IκB，使其降解，釋放出NF-κB。NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。α7nAChR激動(dòng)劑通過激活Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（JAK-STAT3）信號(hào)通路，使STAT3磷酸化并激活。激活的STAT3可以與NF-κB相互作用，抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位，從而減少炎癥因子的產(chǎn)生，減輕神經(jīng)炎癥對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。3.1.2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證為了進(jìn)一步驗(yàn)證α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響，研究人員利用動(dòng)物模型進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。在阿爾茨海默病的研究中，常用的動(dòng)物模型是APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠，該小鼠模型能夠模擬AD患者大腦中Aβ淀粉樣蛋白的沉積和神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成，以及認(rèn)知功能障礙等病理特征。通過腦內(nèi)注射Aβ1-42的方法，也可以建立AD小鼠模型。在這些模型中，給予α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如PNU-282987）進(jìn)行干預(yù)。通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，這是一種常用的行為學(xué)測(cè)試方法，用于評(píng)估動(dòng)物的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中，小鼠需要在充滿水的圓形水池中找到隱藏在水面下的平臺(tái)，通過記錄小鼠找到平臺(tái)的潛伏期（即從入水到找到平臺(tái)的時(shí)間）和在目標(biāo)象限停留的時(shí)間等指標(biāo)，來評(píng)估其學(xué)習(xí)記憶能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AD模型小鼠的潛伏期明顯延長(zhǎng)，在目標(biāo)象限停留的時(shí)間顯著減少，表明其學(xué)習(xí)記憶能力受損，而給予α7nAChR激動(dòng)劑處理后，小鼠的潛伏期縮短，在目標(biāo)象限停留的時(shí)間增加，說明其學(xué)習(xí)記憶能力得到了改善。利用免疫組化和免疫熒光等技術(shù)，對(duì)小鼠腦組織進(jìn)行檢測(cè)，可以觀察到α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)Aβ淀粉樣蛋白沉積和神經(jīng)炎癥的影響。免疫組化結(jié)果顯示，AD模型小鼠大腦中Aβ淀粉樣蛋白的沉積明顯增多，而給予α7nAChR激動(dòng)劑處理后，Aβ淀粉樣蛋白的沉積顯著減少。這可能是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑激活后，增強(qiáng)了小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ的吞噬和清除能力。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的免疫細(xì)胞，在Aβ的清除過程中發(fā)揮著重要作用。α7nAChR激動(dòng)劑通過激活小膠質(zhì)細(xì)胞表面的α7nAChR，促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和吞噬功能，從而減少了Aβ淀粉樣蛋白的沉積。在檢測(cè)神經(jīng)炎癥方面，免疫熒光結(jié)果顯示，AD模型小鼠大腦中炎癥因子（如TNF-α、IL-1β等）的表達(dá)明顯升高，而給予α7nAChR激動(dòng)劑處理后，炎癥因子的表達(dá)顯著降低。這與體外實(shí)驗(yàn)中α7nAChR激動(dòng)劑抑制炎癥因子產(chǎn)生的結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了α7nAChR激動(dòng)劑通過抑制神經(jīng)炎癥來減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷的作用機(jī)制。通過對(duì)小鼠腦組織中相關(guān)信號(hào)通路蛋白的檢測(cè)，如NF-κB、PI3K-Akt等，也驗(yàn)證了體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的信號(hào)通路調(diào)節(jié)機(jī)制。在AD模型小鼠中，NF-κB信號(hào)通路被激活，而給予α7nAChR激動(dòng)劑處理后，NF-κB的活性受到抑制，同時(shí)PI3K-Akt信號(hào)通路被激活，進(jìn)一步證明了α7nAChR激動(dòng)劑通過調(diào)節(jié)這些信號(hào)通路來保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受損傷。3.2對(duì)心血管細(xì)胞損傷的影響及機(jī)制3.2.1對(duì)心肌細(xì)胞的作用在心肌細(xì)胞層面，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的影響備受關(guān)注?？蒲腥藛T通常采用離體大鼠心肌細(xì)胞模型，通過模擬心肌缺血再灌注過程中的缺氧-復(fù)氧條件，深入探究α7nAChR激動(dòng)劑的作用機(jī)制。在缺氧-復(fù)氧損傷模型中，心肌細(xì)胞會(huì)經(jīng)歷一系列病理變化。缺氧階段，心肌細(xì)胞因缺乏氧氣供應(yīng)，能量代謝受阻，三磷酸腺苷（ATP）生成減少，導(dǎo)致細(xì)胞膜離子泵功能障礙，細(xì)胞內(nèi)鈉離子和鈣離子積聚，細(xì)胞水腫。復(fù)氧階段，雖然氧氣重新供應(yīng)，但會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），如超氧陰離子（O??）、過氧化氫（H?O?）和羥自由基（?OH）等。這些ROS具有強(qiáng)氧化性，能夠攻擊細(xì)胞膜上的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷、蛋白質(zhì)變性和DNA斷裂，進(jìn)一步加重心肌細(xì)胞的損傷。細(xì)胞內(nèi)的炎癥反應(yīng)也會(huì)被激活，核因子κB（NF-κB）等炎癥相關(guān)信號(hào)通路被活化，促使炎癥因子如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）等的釋放，引發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡和壞死增加。當(dāng)給予α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如PNU-282987）處理后，多項(xiàng)研究表明其對(duì)心肌細(xì)胞具有顯著的保護(hù)作用。通過檢測(cè)乳酸脫氫酶（LDH）漏出率可以評(píng)估心肌細(xì)胞的損傷程度，LDH是一種存在于心肌細(xì)胞內(nèi)的酶，當(dāng)細(xì)胞受損時(shí)，LDH會(huì)釋放到細(xì)胞外。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在缺氧-復(fù)氧損傷模型中，給予α7nAChR激動(dòng)劑后，心肌細(xì)胞的LDH漏出率明顯降低，表明心肌細(xì)胞的損傷程度減輕。利用AnnexinV-FITC/PI雙染結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率，發(fā)現(xiàn)α7nAChR激動(dòng)劑能夠顯著降低心肌細(xì)胞的凋亡率，這表明其對(duì)心肌細(xì)胞凋亡具有抑制作用。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)和凋亡的作用機(jī)制涉及多個(gè)信號(hào)通路。從炎癥反應(yīng)角度來看，α7nAChR激動(dòng)劑激活后，會(huì)抑制NF-κB信號(hào)通路的激活。在正常情況下，NF-κB以無活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，與抑制蛋白IκB結(jié)合。當(dāng)心肌細(xì)胞受到缺氧-復(fù)氧損傷等刺激時(shí)，IκB激酶（IKK）被激活，磷酸化IκB，使其降解，釋放出NF-κB。NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)炎癥因子如TNF-α、IL-1β、IL-6等的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。α7nAChR激動(dòng)劑通過激活Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（JAK-STAT3）信號(hào)通路，使STAT3磷酸化并激活。激活的STAT3可以與NF-κB相互作用，抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位，從而減少炎癥因子的產(chǎn)生，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)心肌細(xì)胞的損傷。在細(xì)胞凋亡方面，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑主要通過調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信號(hào)通路和線粒體凋亡途徑來發(fā)揮作用。α7nAChR激動(dòng)劑與受體結(jié)合后，引發(fā)鈣離子內(nèi)流，激活PI3K，PI3K將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉(zhuǎn)化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，招募并激活蛋白激酶B（Akt）。激活的Akt可以磷酸化多種下游底物，其中包括糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）。磷酸化的GSK-3β活性受到抑制，從而抑制了線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP）的開放。mPTP的開放會(huì)導(dǎo)致線粒體膜電位的喪失，細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞色素C與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）、半胱天冬酶-9等結(jié)合形成凋亡小體，激活半胱天冬酶-3等凋亡相關(guān)蛋白，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。α7nAChR激動(dòng)劑通過抑制mPTP的開放，減少細(xì)胞色素C的釋放，阻斷線粒體凋亡途徑，從而減少心肌細(xì)胞的凋亡。α7nAChR激動(dòng)劑還可以通過上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，維持線粒體膜電位的穩(wěn)定，進(jìn)一步抑制細(xì)胞凋亡。3.2.2對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管內(nèi)壁的重要組成部分，在維持心血管系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其功能涵蓋了調(diào)節(jié)血管張力、維持血液的正常流動(dòng)狀態(tài)、調(diào)控炎癥反應(yīng)以及參與血管的新生等多個(gè)方面。一旦血管內(nèi)皮細(xì)胞功能發(fā)生障礙，便會(huì)引發(fā)一系列的病理生理變化，進(jìn)而成為多種心血管疾病，如動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、冠心病等發(fā)生發(fā)展的重要基礎(chǔ)。α7煙堿型乙酰膽堿受體在血管內(nèi)皮細(xì)胞上有表達(dá)，α7nAChR激動(dòng)劑對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能有著重要影響。在體外實(shí)驗(yàn)中，科研人員常采用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）等細(xì)胞系進(jìn)行研究。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷因素，如氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、炎癥因子（如TNF-α、IL-1β）等刺激時(shí)，會(huì)出現(xiàn)一系列功能障礙。ox-LDL可以被內(nèi)皮細(xì)胞攝取，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化增加，產(chǎn)生大量的ROS，損傷細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)的生物大分子。炎癥因子則可以激活內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的NF-κB等炎癥信號(hào)通路，促使細(xì)胞表達(dá)和釋放黏附分子，如細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）等，促進(jìn)白細(xì)胞的黏附和浸潤(rùn)，引發(fā)炎癥反應(yīng)。內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮（NO）釋放能力也會(huì)下降，NO是一種重要的血管舒張因子，其釋放減少會(huì)導(dǎo)致血管收縮功能增強(qiáng)，血管張力失衡。給予α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如PNU-282987）處理后，能有效改善血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。研究發(fā)現(xiàn)，α7nAChR激動(dòng)劑可以促進(jìn)內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表達(dá)和活性，eNOS是催化L-精氨酸生成NO的關(guān)鍵酶。α7nAChR激動(dòng)劑通過激活PI3K-Akt信號(hào)通路，使Akt磷酸化并激活。激活的Akt可以磷酸化eNOS的絲氨酸殘基（如Ser1177），增強(qiáng)eNOS的活性，促進(jìn)NO的合成和釋放。NO的增加可以舒張血管平滑肌，降低血管阻力，改善血管的舒張功能。NO還具有抗氧化和抗炎作用，能夠抑制血小板的聚集和黏附，減少炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受損傷。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑還可以抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。在受到炎癥刺激時(shí)，α7nAChR激動(dòng)劑通過抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，減少黏附分子（如ICAM-1、VCAM-1）和炎癥因子（如TNF-α、IL-1β）的表達(dá)和釋放。其機(jī)制與在心肌細(xì)胞中類似，α7nAChR激動(dòng)劑激活后，通過激活JAK-STAT3信號(hào)通路，使STAT3磷酸化并激活。激活的STAT3與NF-κB相互作用，抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位，從而阻斷炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，減輕炎癥對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。α7nAChR激動(dòng)劑還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等的活性，增加細(xì)胞的抗氧化能力，減少ROS的產(chǎn)生，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，在維持心血管系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用，其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的改善與心血管疾病的預(yù)防和治療密切相關(guān)，為心血管疾病的治療提供了新的靶點(diǎn)和潛在的治療策略。3.3對(duì)免疫細(xì)胞損傷的影響及機(jī)制3.3.1對(duì)巨噬細(xì)胞的影響巨噬細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的重要成員，在機(jī)體的免疫防御和炎癥反應(yīng)中扮演著核心角色。當(dāng)機(jī)體遭受病原體入侵、組織損傷或炎癥刺激時(shí)，巨噬細(xì)胞能夠迅速做出反應(yīng)，發(fā)揮吞噬病原體、清除損傷組織碎片、分泌細(xì)胞因子等多種免疫功能。在炎癥反應(yīng)過程中，巨噬細(xì)胞可以被激活，釋放出一系列促炎細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）等。這些促炎細(xì)胞因子能夠招募和激活其他免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫應(yīng)答，有助于清除病原體和修復(fù)受損組織。然而，過度或持續(xù)的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致炎癥因子的過度釋放，引發(fā)炎癥風(fēng)暴，對(duì)機(jī)體組織和細(xì)胞造成損傷。α7煙堿型乙酰膽堿受體在巨噬細(xì)胞表面有表達(dá)，α7nAChR激動(dòng)劑對(duì)巨噬細(xì)胞的功能有著重要影響。在體外實(shí)驗(yàn)中，科研人員常采用RAW264.7巨噬細(xì)胞系進(jìn)行研究。當(dāng)RAW264.7巨噬細(xì)胞受到脂多糖（LPS）刺激時(shí)，會(huì)被激活并產(chǎn)生強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)。LPS是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分，具有很強(qiáng)的免疫刺激性。LPS與巨噬細(xì)胞表面的Toll樣受體4（TLR4）結(jié)合，激活下游的髓樣分化因子88（MyD88）依賴的信號(hào)通路。MyD88招募并激活白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶（IRAK）家族成員，進(jìn)而激活腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（TRAF6）。TRAF6激活轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶1（TAK1），TAK1進(jìn)一步激活核因子κB（NF-κB）信號(hào)通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路。NF-κB信號(hào)通路的激活導(dǎo)致p65亞基從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)促炎細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6等的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。MAPK信號(hào)通路包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK，它們的激活也參與了炎癥因子的產(chǎn)生和細(xì)胞凋亡等過程。給予α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如GTS-21）處理后，能有效抑制巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，α7nAChR激動(dòng)劑可以劑量依賴性地減少LPS刺激后巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-1β等促炎細(xì)胞因子的水平。其作用機(jī)制主要是通過抑制NF-κB信號(hào)通路的激活。α7nAChR激動(dòng)劑與巨噬細(xì)胞表面的α7nAChR結(jié)合后，引發(fā)鈣離子內(nèi)流，激活Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（JAK-STAT3）信號(hào)通路。JAK激酶被激活后，能夠磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）的特定酪氨酸殘基。磷酸化的STAT3形成二聚體，然后轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，與NF-κB相互作用，抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位，從而阻斷炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，減少促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。α7nAChR激動(dòng)劑還可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的吞噬功能。在感染模型中，給予α7nAChR激動(dòng)劑后，巨噬細(xì)胞對(duì)病原體的吞噬能力增強(qiáng)，這可能與α7nAChR激動(dòng)劑激活后調(diào)節(jié)了巨噬細(xì)胞表面的吞噬相關(guān)受體和信號(hào)通路有關(guān)。3.3.2對(duì)淋巴細(xì)胞的影響淋巴細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，在機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答中發(fā)揮著核心作用，主要包括T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞在細(xì)胞免疫中扮演重要角色，可分為輔助性T細(xì)胞（Th）、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Tc）和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）等多個(gè)亞群。Th細(xì)胞能夠分泌細(xì)胞因子，輔助其他免疫細(xì)胞的活化和功能發(fā)揮；Tc細(xì)胞可以直接殺傷被病原體感染的細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞；Treg細(xì)胞則具有免疫抑制功能，能夠調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的強(qiáng)度，防止過度免疫反應(yīng)對(duì)機(jī)體造成損傷。B淋巴細(xì)胞主要參與體液免疫，在抗原刺激下，B淋巴細(xì)胞會(huì)分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞分泌抗體，抗體能夠特異性地結(jié)合病原體，從而清除病原體。α7煙堿型乙酰膽堿受體在淋巴細(xì)胞表面也有表達(dá)，α7nAChR激動(dòng)劑對(duì)淋巴細(xì)胞的功能有著重要影響。在體外實(shí)驗(yàn)中，科研人員常采用分離自小鼠或人的原代淋巴細(xì)胞進(jìn)行研究。當(dāng)淋巴細(xì)胞受到抗原刺激時(shí)，會(huì)發(fā)生增殖和活化。以T淋巴細(xì)胞為例，抗原呈遞細(xì)胞（如樹突狀細(xì)胞）將抗原信息呈遞給T淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞表面的T細(xì)胞受體（TCR）與抗原-主要組織相容性復(fù)合體（MHC）復(fù)合物結(jié)合，同時(shí)共刺激分子（如CD28與B7分子）相互作用，激活T淋巴細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。這些信號(hào)通路包括磷脂酶Cγ（PLCγ）活化、鈣離子內(nèi)流、蛋白激酶C（PKC）激活等，最終導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞的增殖和分化，分泌細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素2（IL-2）、干擾素γ（IFN-γ）等。給予α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如PNU-282987）處理后，能調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的增殖和活化。研究發(fā)現(xiàn)，α7nAChR激動(dòng)劑可以抑制T淋巴細(xì)胞在抗原刺激下的過度增殖。通過MTT法或CCK-8法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在給予α7nAChR激動(dòng)劑后，T淋巴細(xì)胞的增殖活性降低。這可能是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑激活后，抑制了T淋巴細(xì)胞內(nèi)的鈣信號(hào)通路和MAPK信號(hào)通路。α7nAChR激動(dòng)劑與T淋巴細(xì)胞表面的α7nAChR結(jié)合后，引發(fā)鈣離子內(nèi)流，但這種鈣離子內(nèi)流的模式與抗原刺激引發(fā)的鈣離子內(nèi)流不同，它可能干擾了抗原刺激下的鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而抑制了T淋巴細(xì)胞的增殖。α7nAChR激動(dòng)劑還可以調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的分化方向。在Th1/Th2細(xì)胞分化的研究中，發(fā)現(xiàn)α7nAChR激動(dòng)劑能夠抑制Th1細(xì)胞的分化，減少IFN-γ等Th1型細(xì)胞因子的分泌，同時(shí)促進(jìn)Th2細(xì)胞的分化，增加IL-4等Th2型細(xì)胞因子的分泌。這表明α7nAChR激動(dòng)劑可以調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的類型，使其向Th2型免疫應(yīng)答偏移。在B淋巴細(xì)胞的研究中，發(fā)現(xiàn)α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑可以影響B(tài)淋巴細(xì)胞的抗體分泌。在體外培養(yǎng)的B淋巴細(xì)胞中加入α7nAChR激動(dòng)劑后，用抗原刺激B淋巴細(xì)胞，通過ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，抗體的分泌量發(fā)生改變。具體來說，α7nAChR激動(dòng)劑可以抑制某些類型抗體（如IgM）的分泌，而對(duì)其他類型抗體（如IgG）的分泌影響較小。其機(jī)制可能與α7nAChR激動(dòng)劑調(diào)節(jié)了B淋巴細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子的活性有關(guān)。α7nAChR激動(dòng)劑激活后，可能影響了B淋巴細(xì)胞中與抗體分泌相關(guān)的信號(hào)通路，如B細(xì)胞受體（BCR）信號(hào)通路和核因子κB（NF-κB）信號(hào)通路，從而改變了抗體的分泌水平。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑通過調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的增殖、活化和分化，以及抗體分泌等功能，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，其對(duì)淋巴細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)與機(jī)體的免疫平衡和疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，為免疫相關(guān)疾病的治療提供了新的靶點(diǎn)和潛在的治療策略。四、α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞保護(hù)的影響4.1對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)的影響及機(jī)制4.1.1抗氧化應(yīng)激作用在神經(jīng)細(xì)胞中，氧化應(yīng)激是導(dǎo)致細(xì)胞損傷的重要因素之一。當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞受到各種損傷因素，如缺血、缺氧、炎癥、Aβ淀粉樣蛋白等刺激時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡會(huì)被打破，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），如超氧陰離子（O??）、過氧化氫（H?O?）和羥自由基（?OH）等。這些ROS具有強(qiáng)氧化性，能夠攻擊細(xì)胞膜上的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷、蛋白質(zhì)變性和DNA斷裂，進(jìn)而引發(fā)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和壞死。在阿爾茨海默病患者的大腦中，由于Aβ淀粉樣蛋白的沉積和聚集，會(huì)誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生大量的ROS，導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平升高，損傷神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，引發(fā)認(rèn)知功能障礙。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑在神經(jīng)細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。以PNU-282987為例，多項(xiàng)研究表明，其能夠顯著減輕神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。在體外實(shí)驗(yàn)中，用Aβ1-42寡聚體處理PC12細(xì)胞或SH-SY5Y細(xì)胞，構(gòu)建神經(jīng)細(xì)胞損傷模型。給予PNU-282987處理后，通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平，發(fā)現(xiàn)其能夠顯著降低細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生。這主要是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑激活后，能夠上調(diào)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的活性，如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）等。SOD能夠催化超氧陰離子歧化生成過氧化氫和氧氣，GSH-Px可以利用還原型谷胱甘肽將過氧化氫還原為水，CAT則能直接將過氧化氫分解為水和氧氣。通過上調(diào)這些抗氧化酶的活性，α7nAChR激動(dòng)劑增強(qiáng)了神經(jīng)細(xì)胞清除ROS的能力，從而減輕氧化應(yīng)激對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧化還原信號(hào)通路，進(jìn)一步減輕氧化應(yīng)激損傷。研究發(fā)現(xiàn)，α7nAChR激動(dòng)劑激活后，能夠激活磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信號(hào)通路。激活的Akt可以磷酸化多種下游底物，其中包括核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）。磷酸化的Nrf2從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，與抗氧化反應(yīng)元件（ARE）結(jié)合，啟動(dòng)一系列抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，如血紅素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化還原酶1（NQO1）等。HO-1能夠催化血紅素分解產(chǎn)生一氧化碳、鐵離子和膽綠素，其中一氧化碳具有抗炎和抗氧化作用，膽綠素進(jìn)一步被還原為膽紅素，膽紅素也是一種有效的抗氧化劑。NQO1則參與多種抗氧化物質(zhì)的代謝和再生，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。通過激活PI3K-Akt-Nrf2信號(hào)通路，α7nAChR激動(dòng)劑促進(jìn)了神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)抗氧化基因的表達(dá)，增強(qiáng)了細(xì)胞的抗氧化防御系統(tǒng)，從而有效減輕氧化應(yīng)激對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。4.1.2抑制炎癥反應(yīng)神經(jīng)炎癥是神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病、帕金森病等發(fā)生發(fā)展的重要病理過程，在這個(gè)過程中，炎癥因子的過度釋放會(huì)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞造成嚴(yán)重?fù)p傷。當(dāng)大腦中出現(xiàn)損傷或病原體入侵時(shí)，小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)被激活，轉(zhuǎn)化為具有吞噬和免疫活性的狀態(tài)。激活的小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)釋放大量的促炎細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）等。這些促炎細(xì)胞因子可以激活其他免疫細(xì)胞，引發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和壞死。在阿爾茨海默病患者的大腦中，神經(jīng)炎癥反應(yīng)異?；钴S，大量的炎癥因子會(huì)破壞神經(jīng)細(xì)胞之間的突觸連接，影響神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞，進(jìn)而導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)神經(jīng)炎癥反應(yīng)具有顯著的抑制作用。在體外實(shí)驗(yàn)中，用LPS刺激小膠質(zhì)細(xì)胞，構(gòu)建神經(jīng)炎癥模型。給予α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如GTS-21）處理后，通過ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-1β等促炎細(xì)胞因子的水平明顯降低。其作用機(jī)制主要是通過調(diào)節(jié)核因子κB（NF-κB）信號(hào)通路。在正常情況下，NF-κB以無活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，與抑制蛋白IκB結(jié)合。當(dāng)小膠質(zhì)細(xì)胞受到LPS等炎癥刺激時(shí)，IκB激酶（IKK）被激活，磷酸化IκB，使其降解，釋放出NF-κB。NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)促炎細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑與小膠質(zhì)細(xì)胞表面的α7nAChR結(jié)合后，引發(fā)鈣離子內(nèi)流，激活Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（JAK-STAT3）信號(hào)通路。JAK激酶被激活后，能夠磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）的特定酪氨酸殘基。磷酸化的STAT3形成二聚體，然后轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，與NF-κB相互作用，抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位，從而阻斷炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，減少促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑還可以調(diào)節(jié)絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，進(jìn)一步抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)。MAPK信號(hào)通路包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK。在神經(jīng)炎癥過程中，LPS等炎癥刺激可以激活MAPK信號(hào)通路，導(dǎo)致炎癥因子的產(chǎn)生和細(xì)胞凋亡。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑激活后，能夠抑制MAPK信號(hào)通路的激活。研究發(fā)現(xiàn)，α7nAChR激動(dòng)劑可以減少ERK、JNK和p38MAPK的磷酸化水平，從而抑制炎癥因子的產(chǎn)生和細(xì)胞凋亡。具體來說，α7nAChR激動(dòng)劑可能通過調(diào)節(jié)上游的信號(hào)分子，如Ras、Raf等，抑制MAPK信號(hào)通路的激活，進(jìn)而減輕神經(jīng)炎癥對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。4.2對(duì)心血管細(xì)胞保護(hù)的影響及機(jī)制4.2.1抗心肌缺血-再灌注損傷在心肌缺血-再灌注損傷中，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑展現(xiàn)出顯著的保護(hù)作用，其作用機(jī)制涉及多個(gè)關(guān)鍵生理過程的調(diào)節(jié)，對(duì)心肌細(xì)胞的能量代謝和離子平衡產(chǎn)生重要影響。心肌缺血-再灌注損傷是一個(gè)復(fù)雜的病理過程，在缺血階段，心肌細(xì)胞因血液供應(yīng)中斷，氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)無法正常輸送，導(dǎo)致能量代謝障礙。細(xì)胞內(nèi)的三磷酸腺苷（ATP）迅速消耗，而無氧代謝產(chǎn)生的大量乳酸堆積，使得細(xì)胞內(nèi)pH值降低，這不僅影響了細(xì)胞內(nèi)酶的活性，還導(dǎo)致細(xì)胞酸中毒。隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞膜上的離子泵功能受損，如鈉-鉀ATP酶、鈣ATP酶等，使得細(xì)胞內(nèi)鈉離子和鈣離子濃度逐漸升高，細(xì)胞發(fā)生水腫。當(dāng)恢復(fù)血液灌注后，大量的氧氣重新進(jìn)入細(xì)胞，卻引發(fā)了一系列新的問題。氧自由基的大量產(chǎn)生，如超氧陰離子（O??）、過氧化氫（H?O?）和羥自由基（?OH）等，這些自由基具有極強(qiáng)的氧化性，能夠攻擊細(xì)胞膜上的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，導(dǎo)致細(xì)胞膜的完整性受損，離子通道功能異常，進(jìn)一步破壞細(xì)胞的離子平衡。炎癥反應(yīng)也被激活，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，炎癥因子如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）等釋放，引發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，加劇心肌細(xì)胞的損傷。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如PNU-282987）能夠有效減輕心肌缺血-再灌注損傷。從能量代謝角度來看，多項(xiàng)研究表明，α7nAChR激動(dòng)劑可以改善心肌細(xì)胞的能量代謝。在離體大鼠心臟Langendorff灌注模型中，給予α7nAChR激動(dòng)劑處理后，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞內(nèi)的ATP含量明顯增加，而乳酸含量顯著降低。這是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑激活后，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的代謝酶活性，促進(jìn)了有氧代謝途徑。具體來說，它可以上調(diào)磷酸果糖激酶1（PFK1）和丙酮酸脫氫酶（PDH）的活性，PFK1是糖酵解過程中的關(guān)鍵限速酶，其活性增強(qiáng)可以加速葡萄糖的分解代謝，為細(xì)胞提供更多的丙酮酸。而PDH則是連接糖酵解和三羧酸循環(huán)的關(guān)鍵酶，其活性上調(diào)促進(jìn)了丙酮酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行三羧酸循環(huán)，從而增加了ATP的生成。α7nAChR激動(dòng)劑還可以增強(qiáng)線粒體的功能，提高線粒體的呼吸鏈活性，增加ATP的合成效率。通過改善能量代謝，α7nAChR激動(dòng)劑為心肌細(xì)胞提供了充足的能量，增強(qiáng)了心肌細(xì)胞對(duì)抗缺血-再灌注損傷的能力。在離子平衡方面，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑也發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)，α7nAChR激動(dòng)劑可以調(diào)節(jié)細(xì)胞膜上的離子通道，維持細(xì)胞內(nèi)的離子穩(wěn)態(tài)。在心肌缺血-再灌注損傷模型中，α7nAChR激動(dòng)劑能夠抑制鈉離子和鈣離子的內(nèi)流，減少細(xì)胞內(nèi)的離子超載。這主要是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑激活后，通過激活磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信號(hào)通路，使Akt磷酸化并激活。激活的Akt可以磷酸化細(xì)胞膜上的離子通道蛋白，如鈉-鈣交換體（NCX）和L型鈣通道，調(diào)節(jié)它們的活性。對(duì)于NCX，Akt的磷酸化使其逆向轉(zhuǎn)運(yùn)模式增強(qiáng)，即更多地將細(xì)胞內(nèi)的鈣離子排出細(xì)胞外，同時(shí)攝入鈉離子，從而減少細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度。對(duì)于L型鈣通道，Akt的磷酸化降低了其開放概率，減少了鈣離子的內(nèi)流。α7nAChR激動(dòng)劑還可以調(diào)節(jié)鉀離子通道，如內(nèi)向整流鉀通道（Kir）和ATP敏感性鉀通道（KATP）。通過調(diào)節(jié)這些鉀離子通道的活性，α7nAChR激動(dòng)劑維持了細(xì)胞膜的電位穩(wěn)定，減少了心律失常的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。4.2.2維持血管內(nèi)皮細(xì)胞完整性血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管內(nèi)壁的單層細(xì)胞，猶如一層精密的“屏障”，在維持心血管系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)中扮演著無可替代的角色。它不僅是血液與血管平滑肌之間的物理分隔，還積極參與調(diào)節(jié)血管張力、維持血液的正常流動(dòng)狀態(tài)、調(diào)控炎癥反應(yīng)以及參與血管的新生等多個(gè)重要生理過程。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞通過釋放多種生物活性物質(zhì)，如一氧化氮（NO）、前列環(huán)素（PGI?）等，來調(diào)節(jié)血管的收縮和舒張。NO是一種重要的血管舒張因子，它能夠激活血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的鳥苷酸環(huán)化酶，使三磷酸鳥苷（GTP）轉(zhuǎn)化為環(huán)磷酸鳥苷（cGMP），導(dǎo)致血管平滑肌舒張，降低血管阻力。血管內(nèi)皮細(xì)胞還能表達(dá)和釋放多種抗血栓物質(zhì)，如血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）、組織型纖溶酶原激活物（t-PA）等，抑制血小板的聚集和血栓的形成，維持血液的正常流動(dòng)。α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑在維持血管內(nèi)皮細(xì)胞完整性方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在體外實(shí)驗(yàn)中，用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷因素，如氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、炎癥因子（如TNF-α、IL-1β）等刺激時(shí)，會(huì)出現(xiàn)一系列功能障礙。ox-LDL可以被內(nèi)皮細(xì)胞攝取，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化增加，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），如超氧陰離子（O??）、過氧化氫（H?O?）和羥自由基（?OH）等。這些ROS具有強(qiáng)氧化性，能夠攻擊細(xì)胞膜上的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷、蛋白質(zhì)變性和DNA斷裂，破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞的完整性。炎癥因子則可以激活內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的核因子κB（NF-κB）等炎癥信號(hào)通路，促使細(xì)胞表達(dá)和釋放黏附分子，如細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）等，促進(jìn)白細(xì)胞的黏附和浸潤(rùn)，引發(fā)炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。給予α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如PNU-282987）處理后，能有效維持血管內(nèi)皮細(xì)胞的完整性。研究表明，α7nAChR激動(dòng)劑可以促進(jìn)內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表達(dá)和活性。α7nAChR激動(dòng)劑與內(nèi)皮細(xì)胞表面的α7nAChR結(jié)合后，引發(fā)鈣離子內(nèi)流，激活磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信號(hào)通路。激活的Akt可以磷酸化eNOS的絲氨酸殘基（如Ser1177），增強(qiáng)eNOS的活性，促進(jìn)NO的合成和釋放。NO的增加可以舒張血管平滑肌，降低血管阻力，改善血管的舒張功能。NO還具有抗氧化和抗炎作用，能夠抑制血小板的聚集和黏附，減少炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受損傷。α7nAChR激動(dòng)劑還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等的活性。這些抗氧化酶能夠清除細(xì)胞內(nèi)的ROS，減少氧化應(yīng)激對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，維持細(xì)胞膜的完整性。α7nAChR激動(dòng)劑通過抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，減少黏附分子（如ICAM-1、VCAM-1）和炎癥因子（如TNF-α、IL-1β）的表達(dá)和釋放，減輕炎癥對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。4.3對(duì)免疫細(xì)胞保護(hù)的影響及機(jī)制4.3.1調(diào)節(jié)免疫平衡在免疫細(xì)胞的研究中，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)免疫平衡的調(diào)節(jié)作用備受關(guān)注。免疫平衡是維持機(jī)體正常免疫功能的關(guān)鍵，一旦失衡，便容易引發(fā)各種免疫相關(guān)疾病，如自身免疫性疾病、過敏反應(yīng)等。在自身免疫性疾病的研究中，以系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）為例，其發(fā)病機(jī)制涉及免疫系統(tǒng)的過度激活和免疫調(diào)節(jié)功能的紊亂。在SLE患者體內(nèi)，T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的功能異常，產(chǎn)生大量自身抗體，攻擊自身組織和器官。研究發(fā)現(xiàn)，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如PNU-282987）可以調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的功能，從而恢復(fù)免疫平衡。在體外實(shí)驗(yàn)中，從SLE患者外周血中分離出T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，給予α7nAChR激動(dòng)劑處理后，通過MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，T淋巴細(xì)胞的過度增殖得到抑制，這可能是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑激活后，抑制了T淋巴細(xì)胞內(nèi)的鈣信號(hào)通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路。α7nAChR激動(dòng)劑還可以調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的抗體分泌，減少自身抗體的產(chǎn)生。通過ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在給予α7nAChR激動(dòng)劑后，SLE患者B淋巴細(xì)胞分泌的抗雙鏈DNA抗體、抗Sm抗體等自身抗體水平明顯降低。其機(jī)制可能與α7nAChR激動(dòng)劑調(diào)節(jié)了B淋巴細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子的活性有關(guān)，如抑制了B細(xì)胞受體（BCR）信號(hào)通路和核因子κB（NF-κB）信號(hào)通路，從而減少了自身抗體的分泌。在過敏反應(yīng)的研究中，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑同樣可以調(diào)節(jié)免疫平衡。過敏反應(yīng)是由Th2型免疫應(yīng)答過度活化引起的，Th2細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素4（IL-4）、白細(xì)胞介素5（IL-5）和白細(xì)胞介素13（IL-13）等細(xì)胞因子會(huì)促進(jìn)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體，IgE抗體與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的受體結(jié)合，導(dǎo)致這些細(xì)胞釋放組胺、白三烯等炎癥介質(zhì)，引發(fā)過敏癥狀。研究發(fā)現(xiàn)，α7nAChR激動(dòng)劑（如GTS-21）可以調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞的平衡，抑制Th2細(xì)胞的分化，減少IL-4、IL-5和IL-13等Th2型細(xì)胞因子的分泌。在體外實(shí)驗(yàn)中，用卵清蛋白（OVA）誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生Th2型免疫應(yīng)答，給予α7nAChR激動(dòng)劑處理后，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Th2細(xì)胞的比例明顯降低，而Th1細(xì)胞的比例有所升高。α7nAChR激動(dòng)劑還可以抑制B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體，通過ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，給予α7nAChR激動(dòng)劑后，小鼠血清中IgE抗體的水平顯著降低。其機(jī)制可能與α7nAChR激動(dòng)劑調(diào)節(jié)了T淋巴細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子的活性有關(guān)，如抑制了GATA-3轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而抑制了Th2細(xì)胞的分化。4.3.2增強(qiáng)免疫細(xì)胞功能α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)免疫細(xì)胞抗病毒、抗菌等功能的影響，在感染性疾病的治療中具有重要的應(yīng)用前景。在抗病毒方面，以流感病毒感染為例，流感病毒是一種常見的呼吸道病毒，可引起季節(jié)性流感，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肺炎等并發(fā)癥。巨噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）在抗病毒免疫中發(fā)揮著重要作用。巨噬細(xì)胞可以吞噬和清除病毒，同時(shí)分泌細(xì)胞因子激活其他免疫細(xì)胞；NK細(xì)胞則可以直接殺傷被病毒感染的細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如PNU-282987）可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞的抗病毒功能。在體外實(shí)驗(yàn)中，用流感病毒感染巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，給予α7nAChR激動(dòng)劑處理后，通過檢測(cè)病毒滴度發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞對(duì)流感病毒的吞噬和清除能力增強(qiáng)，這可能是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑激活后，上調(diào)了巨噬細(xì)胞表面的Toll樣受體3（TLR3）和Toll樣受體7（TLR7）的表達(dá)，增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞對(duì)病毒的識(shí)別和吞噬能力。α7nAChR激動(dòng)劑還可以增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性，通過乳酸脫氫酶（LDH）釋放法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，給予α7nAChR激動(dòng)劑后，NK細(xì)胞對(duì)被流感病毒感染細(xì)胞的殺傷活性顯著提高。其機(jī)制可能與α7nAChR激動(dòng)劑激活后，促進(jìn)了NK細(xì)胞內(nèi)的顆粒酶和穿孔素的釋放，增強(qiáng)了NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷能力。在抗菌方面，以大腸桿菌感染為例，大腸桿菌是一種常見的腸道細(xì)菌，可引起腸道感染、尿路感染等疾病。中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在抗菌免疫中發(fā)揮著重要作用。中性粒細(xì)胞可以通過吞噬和殺滅細(xì)菌來清除病原體；巨噬細(xì)胞則可以分泌細(xì)胞因子激活其他免疫細(xì)胞，增強(qiáng)抗菌免疫。研究發(fā)現(xiàn)，α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑（如GTS-21）可以增強(qiáng)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的抗菌功能。在體外實(shí)驗(yàn)中，用大腸桿菌感染中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，給予α7nAChR激動(dòng)劑處理后，通過檢測(cè)細(xì)菌數(shù)量發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞對(duì)大腸桿菌的吞噬和殺滅能力增強(qiáng)，這可能是因?yàn)棣?nAChR激動(dòng)劑激活后，上調(diào)了中性粒細(xì)胞表面的模式識(shí)別受體（PRR）的表達(dá)，增強(qiáng)了中性粒細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的識(shí)別和吞噬能力。α7nAChR激動(dòng)劑還可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞分泌抗菌肽和炎癥因子的能力，通過ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，給予α7nAChR激動(dòng)劑后，巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中抗菌肽（如防御素）和炎癥因子（如腫瘤壞死因子α，TNF-α）的水平顯著升高。其機(jī)制可能與α7nAChR激動(dòng)劑激活后，促進(jìn)了巨噬細(xì)胞內(nèi)的核因子κB（NF-κB）信號(hào)通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路的激活，增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞的抗菌免疫功能。五、影響α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑作用效果的因素5.1激動(dòng)劑濃度與作用時(shí)間α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑的濃度與作用時(shí)間對(duì)其細(xì)胞損傷與保護(hù)效果有著顯著影響，在不同的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭谐尸F(xiàn)出復(fù)雜而多樣的變化規(guī)律。在神經(jīng)細(xì)胞研究中，以Aβ1-42寡聚體誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷模型為例，當(dāng)給予不同濃度的α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑PNU-282987處理時(shí)，結(jié)果顯示出明顯的濃度依賴性。低濃度的PNU-282987（如10nM）在短時(shí)間（24小時(shí)）內(nèi)對(duì)細(xì)胞活力的提升效果不明顯，細(xì)胞活力僅從損傷模型組的40%左右提升至45%左右。隨著濃度增加到50nM，作用24小時(shí)后，細(xì)胞活力可提高到55%左右。當(dāng)濃度進(jìn)一步升高至100nM時(shí)，細(xì)胞活力顯著提升至70%左右。這表明在一定范圍內(nèi)，隨著激動(dòng)劑濃度的增加，其對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用逐漸增強(qiáng)。然而，當(dāng)濃度過高（如500nM）時(shí)，細(xì)胞活力反而下降至60%左右，可能是因?yàn)檫^高濃度的激動(dòng)劑引發(fā)了細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的過度激活，導(dǎo)致細(xì)胞代謝紊亂，產(chǎn)生了毒性作用。作用時(shí)間方面，以100nM的PNU-282987處理PC12細(xì)胞，在作用12小時(shí)時(shí)，細(xì)胞活力提升至50%左右；作用24小時(shí)后，細(xì)胞活力顯著提升至70%左右；但當(dāng)作用時(shí)間延長(zhǎng)至48小時(shí)，細(xì)胞活力并無明顯進(jìn)一步提升，維持在70%左右，且細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)部分異常，可能是長(zhǎng)時(shí)間的激動(dòng)劑作用導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)其產(chǎn)生了適應(yīng)性變化，或者引發(fā)了其他負(fù)面效應(yīng)。在心血管細(xì)胞研究中，以心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷模型為例，對(duì)于α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑GTS-21，不同濃度對(duì)心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用也存在差異。低濃度的GTS-21（如5nM）在缺氧-復(fù)氧處理后，對(duì)心肌細(xì)胞的乳酸脫氫酶（LDH）漏出率降低效果不顯著，LDH漏出率僅從模型組的40%左右降低至38%左右。當(dāng)濃度增加到20nM時(shí)，LDH漏出率明顯降低至30%左右。濃度升高至50nM時(shí)，LDH漏出率進(jìn)一步降低至25%左右。但當(dāng)濃度達(dá)到100nM時(shí)，LDH漏出率反而略有升高至28%左右，可能是高濃度的激動(dòng)劑對(duì)心肌細(xì)胞的正常生理功能產(chǎn)生了一定干擾。在作用時(shí)間上，以30nM的GTS-21處理心肌細(xì)胞，在缺氧-復(fù)氧后作用6小時(shí)，LDH漏出率降低至35%左右；作用12小時(shí)后，LDH漏出率進(jìn)一步降低至30%左右；作用24小時(shí)時(shí)，LDH漏出率維持在30%左右，無明顯變化。這表明在一定時(shí)間范圍內(nèi)，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，激動(dòng)劑對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用逐漸顯現(xiàn)，但超過一定時(shí)間后，作用效果趨于穩(wěn)定。在免疫細(xì)胞研究中，以脂多糖（LPS）刺激的RAW264.7巨噬細(xì)胞炎癥模型為例，不同濃度的α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑PHA-543613對(duì)炎癥因子釋放的抑制作用不同。低濃度的PHA-543613（如1nM）對(duì)腫瘤壞死因子α（TNF-α）的抑制效果較弱，TNF-α的釋放量?jī)H從模型組的100pg/mL左右降低至90pg/mL左右。當(dāng)濃度增加到5nM時(shí)，TNF-α的釋放量明顯降低至70pg/mL左右。濃度升高至10nM時(shí)，TNF-α的釋放量進(jìn)一步降低至50pg/mL左右。但當(dāng)濃度達(dá)到20nM時(shí)，TNF-α的釋放量降低趨勢(shì)變緩，為45pg/mL左右，可能是激動(dòng)劑對(duì)炎癥因子釋放的