阿魏菇種質(zhì)資源保藏技術(shù)規(guī)程2021-06-29發(fā)布2021-09-01實(shí)施新疆維吾爾自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提出。本文件由新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口并組織實(shí)施。本文件起草單位：新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所。熱合曼、鐘曉英、肖春燕、?？悼怠１疚募?shí)施應(yīng)用中的疑問(wèn)，請(qǐng)咨詢新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳、新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所。本文件的修改意見(jiàn)建議，請(qǐng)反饋至新疆維吾爾自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局(烏魯木齊市新華南路167號(hào))、新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳(烏魯木齊市勝利路157號(hào))、新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所(烏魯木齊市南昌路403號(hào))。新疆維吾爾自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局聯(lián)系電話傳真郵編：830004新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳聯(lián)系電話郵編：830000新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所聯(lián)系電話傳真郵編：8300911阿魏菇種質(zhì)資源保藏技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了阿魏菇種質(zhì)資源保藏技術(shù)相關(guān)的術(shù)語(yǔ)和定義、種質(zhì)資源收集、保藏和管理的規(guī)范要求。本文件適用于阿魏菇種質(zhì)資源，包括栽培品種資源、野生菌株資源和育種中間材料的保藏與管理。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T12728食用菌術(shù)語(yǔ)NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求3術(shù)語(yǔ)和定義GB/T12728界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。種質(zhì)資源germplasmresource具有特定種質(zhì)或基因，可用于育種栽培或其他生物學(xué)研究的各種類型及品種，包括野生種、地方品種、選育品種、品系、特殊遺傳材料等。栽培菌株cultivatedstrain可進(jìn)行人工栽培的菌株。生長(zhǎng)于自然環(huán)境中，未經(jīng)人工馴化的菌株。育種的中間材料intermediatematerialsforbreeding單孢菌株、原生質(zhì)體單核化菌株、雜交菌株、誘變菌株、多倍體菌株、轉(zhuǎn)基因菌株等。經(jīng)過(guò)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物。菌種culture生長(zhǎng)在適宜基質(zhì)上具結(jié)實(shí)性的菌絲培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽培種。純培養(yǎng)pureculture只讓單一微生物生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)或只有單一微生物的培養(yǎng)物。2菌絲體mycelium注：食用菌中供食用的菇體和耳片都是子實(shí)體。3采用野外采集、合作研究、菌株交換、友情捐贈(zèng)、委托保藏、商務(wù)購(gòu)買等方式收集，及時(shí)填寫菌株收集記錄表，見(jiàn)表1,必要時(shí)簽訂菌株合作保藏或委托保藏協(xié)議，一個(gè)月內(nèi)完成菌種鑒定和提純工作，確保收集的菌株真實(shí)可靠且為純培養(yǎng)，然后正式編入“阿魏菇種質(zhì)資源庫(kù)保種目錄”,并入庫(kù)保藏。表1菌株收集記錄表a菌株號(hào)：收集對(duì)象是生產(chǎn)用種，登記其品種名稱。野生資源或育種中間材料，登記其菌株代b材料：收集對(duì)象是母種、原種、栽培種、栽培基質(zhì)、自然生長(zhǎng)基質(zhì)、栽培采收的子實(shí)體、市場(chǎng)購(gòu)°地點(diǎn)：收集地。d時(shí)間：收集年月日。e方式：野外采集、合作研究、菌株交換、友情捐贈(zèng)、委托保藏、商務(wù)購(gòu)買f提供方：收集材料提供單位或個(gè)人，野外采集則登記為自采。g簽章：收集材料提供方代表的簽名或蓋章，野外采集登記采集者簽h備注：表內(nèi)未登記的其它相關(guān)信息，如野生菌株的生境和地理信息等。5種質(zhì)資源保藏以純培養(yǎng)的菌絲體為保藏形式，即以母種形式保藏，母種制備應(yīng)符合NY/T528和NY/T1742規(guī)定的要求。5.2.1短期保藏采用定期移植保藏法，按附錄A的規(guī)定方法進(jìn)行。5.2.2中期保藏采用液體石蠟保藏法，按附錄B的規(guī)定方法進(jìn)行。5.2.3長(zhǎng)期保藏液氮超低溫保藏法，按附錄C的規(guī)定方法進(jìn)行。6種質(zhì)資源管理6.1.1由專人負(fù)責(zé)種質(zhì)資源管理工作，包括種質(zhì)保存、信息記錄、資料整理歸檔、檔案審查等。6.1.2種質(zhì)資源保存信息要及時(shí)更新，及時(shí)收集、記錄、分析和整理當(dāng)年的各項(xiàng)技術(shù)資料，建立系統(tǒng)的技術(shù)檔案。6.1.3所有檔案資料應(yīng)同時(shí)保存紙質(zhì)文檔和電子文檔，紙質(zhì)文檔內(nèi)容應(yīng)清晰明確，電子文檔應(yīng)有備份。6.1.4每年分類整理，編號(hào)目錄，裝訂成冊(cè)，歸檔保存。4(二級(jí)來(lái)源)短期庫(kù)短期庫(kù)編碼e短期庫(kù)b原編菌號(hào)：在保種目錄中記錄菌株提供方提供的原始菌名菌號(hào)。到后第幾行?？梢愿鶕?jù)菌株的某個(gè)信息通過(guò)電腦查詢方便地查找其他相關(guān)信息；便于管理f長(zhǎng)期庫(kù)編碼：11個(gè)數(shù)字組成，標(biāo)明凍藏的時(shí)間和保藏位置。第杯；第11個(gè)數(shù)字表示保藏杯中凍藏管編號(hào)，每個(gè)保藏杯內(nèi)取1塊5mm×5mm大小的菌塊接種至馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)平板，于25℃培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)活化5d～7d,在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)接入新的PDA斜面培5d～7d,在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)接入新的PDA斜面培養(yǎng)基中，于25℃培養(yǎng)箱黑暗培35℃恒溫水浴鍋中解凍，在無(wú)菌條件下挑取1塊5至PDA培養(yǎng)基平板，于25℃培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)5d~7d,在無(wú)菌條件下再轉(zhuǎn)接入新的PDA培養(yǎng)基平板，于525℃培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)5d～7d,如此反復(fù)活化培養(yǎng)2次～3次，再重新切取瓊脂菌塊，裝入凍藏管中，注入甘油防凍劑，浸入液氮罐保藏。6.3.4異常情況處理更新時(shí)若短期庫(kù)中菌株出現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)不良，失活等問(wèn)題，則棄之不用；從中期庫(kù)中提取相同編號(hào)菌株活化、轉(zhuǎn)接更新；中期庫(kù)更新若還有問(wèn)題，則從長(zhǎng)期庫(kù)中提取相同編號(hào)菌株活化、轉(zhuǎn)接更新。三重保險(xiǎn)，以確保種性不變，并在種質(zhì)資源庫(kù)更新與維護(hù)管理登記表中做好記錄，特殊6(規(guī)范性)A.2.2使用前檢查確認(rèn)菌種是否有去皮馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂粉20g,蒸餾水1000mL。A.3.1.1.2加富PDA培養(yǎng)基去皮馬鈴薯200g,葡萄糖20g,酵母膏2g,磷酸二氫鉀1g,硫酸鎂0.5g,瓊脂粉20g,蒸餾水1000A.3.1.3分裝將配置好的培養(yǎng)基分裝至規(guī)格為18mm×180mm的玻璃試管中，每管8mL～12mL,試管口應(yīng)保持將配置分裝和包扎好的試管直立放在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌，滅菌壓力為0.11MPa,溫度121℃,將滅菌后的PDA斜面培養(yǎng)基置于(30±2)℃條件下1d～2d,檢查是否有細(xì)菌或霉菌的菌斑滋生。A.3.2接種7在無(wú)菌條件或超凈工作臺(tái)上，用接種針(或接種鏟)挑取5mm×5mm大小的阿魏菇菌絲體，接種培養(yǎng)好的菌種于溫度4℃,相對(duì)濕度50%～60%環(huán)境下保藏。也可以將培在(25±1)℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)7d～10d,當(dāng)菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基斜面時(shí)結(jié)束培養(yǎng)，再保藏。用固體石蠟8(規(guī)范性)B.1原理B.2要求將阿魏菇菌種直立存放于4℃醫(yī)用保藏箱，于干燥處黑暗保存，保藏時(shí)間1年。保藏期間應(yīng)定期檢挑取5mm×5mm大小的菌種塊轉(zhuǎn)接到新鮮PDA培養(yǎng)基平板上，置于(25±1)℃培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)，9(規(guī)范性)將菌種先置于有冷凍保護(hù)劑的容器內(nèi)，再保存于-150℃氣相液氮或-196℃的液條件下高壓蒸汽滅菌15min～30min,安瓿管也可在160℃宜采用無(wú)菌的10%～20%甘油作為保護(hù)劑。在甘油中加入蒸餾水，配置濃度為10%(體積分?jǐn)?shù))或20%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))的甘油，再于0.11MPa,121℃條件下高壓蒸汽滅菌15min～30min。將阿魏菇培養(yǎng)物接種至PDA培養(yǎng)基平板上，于(25±1)℃培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)7d～10d。預(yù)凍時(shí)，溫度宜控制在每分鐘下降1℃,至-35℃~-40℃。常用降溫方法有：b)冷凍干燥機(jī)自行冷凍：在不開啟真空泵的情況下，利用冷凍干燥機(jī)的制冷作用，將菌種冷凍至-35℃~-40℃