ICS67.120.30

CCSB50

37

山東省地方標準

DB37/T4686—2023

海洋生物體中金剛烷胺的測定液相色譜-

串聯(lián)質譜法

Determinationofamantadineinmarineorganisms—Liquidchromatographytandem

massspectrometry

2023-12-28發(fā)布2024-01-28實施

山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB37/T4686—2023

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術語和定義.........................................................................1

4原理...............................................................................1

5試劑及配制.........................................................................1

6儀器和設備.........................................................................2

7樣品...............................................................................2

8分析步驟...........................................................................3

9結果計算與表示.....................................................................4

10準確度............................................................................5

11質量控制和質量保證................................................................5

12廢物處置..........................................................................5

附錄A（資料性）色譜圖...............................................................6

附錄B（資料性）方法的準確度.........................................................8

I

DB37/T4686—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。

本文件由山東省海洋局提出并組織實施。

本文件由山東省海洋標準化技術委員會歸口。

II

DB37/T4686—2023

海洋生物體中金剛烷胺的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法

警告：實驗中使用的標準溶液、有機溶劑等均具有一定的毒性和揮發(fā)性，實驗人員應避免與其直接

接觸，樣品前處理過程應在通風櫥中進行。

1范圍

本文件描述了海洋生物體中金剛烷胺液的液相色譜-串聯(lián)質譜測定方法，包括原理、試劑及配制、

儀器和設備、樣品、分析步驟、結果計算與表示、準確度、質量控制和質量保證、廢物處置等。

本文件適用于海洋生物體魚、蝦、海參、海帶和貝類中金剛烷胺的測定。當稱樣量為3.00g時，金

剛烷胺檢出限為0.5μg/kg，測定下限為1.0μg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3術語和定義

本文件沒有需要界定的術語和定義。

4原理

海洋生物體樣品用1%乙酸乙腈提取后，經固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質譜儀測定，內標法定

量。

5試劑及配制

5.1實驗室用水：GB/T6682，一級。

5.2甲醇（CH3OH）：色譜純。

5.3甲酸（HCOOH）：色譜純。

5.4乙腈（CH3CN）：色譜純。

5.5氨水（NH4OH）：優(yōu)級純。

5.6乙酸（CH3COOH）：優(yōu)級純。

5.71%乙酸乙腈溶液（體積分數(shù)）。

取1mL乙酸，用乙腈定容至100mL。

5.85%氨水甲醇溶液（體積分數(shù)）。

取5mL氨水，用甲醇定容至100mL。

1

DB37/T4686—2023

5.90.1%甲酸溶液（體積分數(shù)）。

取0.10mL甲酸，用水定容至100mL。

5.100.1%甲酸乙腈定容液（體積分數(shù)）。

將1mL甲酸與300mL乙腈，加入到700mL水中。

5.11金剛烷胺標準品：CAS號768-94-5，純度大于99.0%。

5.12D15-金剛烷胺內標溶液：CAS號33830-10-3，1mg/mL。

5.13金剛烷胺標準貯備液。

稱取金剛烷胺0.0100g，用乙腈溶解，并定容至10mL，配制成1.0mg/mL標準貯備液，-20℃下避

光保存，有效期為90d。

5.14金剛烷胺標準工作液。

移取100μL金剛烷胺標準貯備液（5.13），用乙腈溶解，并定容至100mL，配制成1.0μg/mL標準工

作液，4℃下避光保存，有效期為30d。

5.15D15-金剛烷胺內標標準中間液。

移取100μLD15-金剛烷胺內標溶液（5.12），用乙腈溶解，并定容至100mL，配制成1.0μg/mL內

標標準中間液，4℃下避光保存，有效期為30d。

5.16D15-金剛烷胺內標標準工作液。

移取1mLD15-金剛烷胺內標標準中間液（5.15），用乙腈定容至10mL，配制成100μg/L內標標準

工作液，4℃下避光保存，有效期為7d。

6儀器和設備

6.1液相色譜-串聯(lián)質譜儀：配電噴霧電離源（ESI源）。

6.2天平：感量分別為0.01g和0.0001g。

6.3均質機。

6.4高速離心機：10000r/min。

6.5超聲波清洗器。

6.6渦旋混合器。

6.7固相萃取裝置。

6.8固相萃取柱：MCX（混合型陽離子固相萃取柱），60mg/3mL，或相當者。

6.9氮吹儀。

6.10聚丙烯離心管：50mL。

6.11濾膜：聚偏氟乙烯濾膜，孔徑為0.22μm。

7樣品

7.1制備

魚，去鱗、去皮，沿脊背取肌肉，將鱗、皮單獨收集；蝦，去頭、去殼、去腸腺，取肌肉部分；海

參、海帶、貝等取可食部分，樣品充分攪碎、混勻。如不能及時檢測，-18℃以下冷凍保存?zhèn)溆?。取適

量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎，并使均質。

7.2提取

2

DB37/T4686—2023

稱取3.00（±0.01）g樣品至50mL離心管中，加入100μL內標標準工作液（5.16）和15mL1%乙酸

乙腈溶液（5.7），渦旋30s，超聲提取15min，8000r/min離心10min，待凈化。

7.3凈化

MCX固相萃取柱經6mL甲醇（5.2）和6mL水（5.1）活化后，取5mL上清液移入固相萃取柱，3mL水

（5.1）淋洗，6mL5%氨水甲醇溶液（5.8）洗脫，全程控制流速為2mL/min～3mL/min。收集洗脫液，

用氮吹儀于40℃下吹至近干，用定容液（5.10）定容至1mL，過濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質譜儀分析。

7.4空白試樣的制備

除不加試料外，均按上述測定步驟進行。

8分析步驟

8.1液相色譜質譜條件

8.1.1液相色譜條件：

a)色譜柱：C18(100mm×2.1mm，1.8μm)，或相當者；

b)色譜柱溫度：40℃；

c)流速：0.25mL/min；

d)進樣量：10μL；

e)流動相：A為乙腈（5.4）；B為0.1%甲酸溶液（5.9）；流動相梯度洗脫程序見表1。

表1流動相梯度洗脫程序表

時間流速流動相A流動相B

minmL/min%%

0.000.25595

0.500.25595

0.600.25955

5.000.25955

5.100.25595

7.000.25595

8.1.2質譜條件：

a)離子化模式：ESI+；

b)電離電壓：2.50kV；

c)錐孔電壓：25V；

d)離子源溫度：140℃；

e)錐孔反吹氣流速：50L/h；

f)脫溶劑氣溫度：400℃；

g)脫溶劑氣流速：700L/h；

h)氬氣流速：0.12mL/min；

i)測定方式：選擇反應監(jiān)測模式（SRM），定量離子和定性離子參數(shù)見表2。

3

DB37/T4686—2023

表2待測物定量離子和定性離子參數(shù)

母離子子離子錐孔電壓碰撞能量

化合物

m/zm/zVeV

932530

金剛烷胺152

135a2517

金剛烷胺內標167141a2517

a表示定量離子

8.2標準曲線的建立

移取金剛烷胺標準工作液（5.14）10μL、20μL、40μL、50μL、100μL于進樣瓶中，分別加入100μL

內標標準工作液（5.16），用定容液（5.10）定容至1mL，使金剛烷胺濃度分別為10.0μg/L、20.0μg/L、

40.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。以各標準工作液金剛烷胺峰面積與內標峰面積的比值為

縱坐標，以各標準工作液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

8.3試樣測定

按照儀器條件（8.1），分別測定金剛烷胺標準工作液（8.2）、試樣（7.3）、空白試樣（7.4），

金剛烷胺標準溶液、空白樣品和加標樣品的色譜圖參見附錄A。

9結果計算與表示

9.1定性分析

在同樣測試條件下，陽性樣品的保留時間與標準工作液中待測物的保留時間偏差在±2.5%以內，在

扣除背景后的樣品質譜圖中，所選擇的特征離子均應出現(xiàn)，且檢測到的離子的相對豐度，應與濃度相當

的校正標準溶液相對豐度一致。定性確證時相對離子豐度的允許偏差應符合表3的要求。

表3定性確證時相對離子豐度的允許偏差

相對離子豐度允許偏差

%%

＞50±20

＞20～50±25

＞10～20±30

≤10±50

9.2定量分析

按8.1設定儀器條件，待儀器穩(wěn)定后，根據(jù)表2中的定量離子分別對金剛烷胺和內標進行測定，記錄

保留時間和峰面積，以峰面積比按內標法進行單點或多點校準定量，標準工作液和試樣溶液中待測物的

響應值均應在儀器檢測線性范圍內。

9.3結果計算

樣品中金剛烷胺的含量按公式（1）計算：

（???）?

?=0·········································································(1)

?

4

DB37/T4686—2023

式中：

x——樣品中金剛烷胺的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

c——試樣溶液中金剛烷胺的濃度，單位為微克每升（μg/L）；

c0——空白試樣溶液中金剛烷胺的濃度，單位為微克每升（μg/L）；

V——試樣溶液的定容體積，單位為毫升（mL）；

m——樣品的濕重，單位為克（g）。

9.4結果表示

計算結果扣除空白值，測定結果用兩次平行測定的算術平均值表示，保留三位有效數(shù)字。

10準確度

10.1精密度

本方法批內相對標準偏差和批間相對標準偏差均小于15%。詳見表B.1。

10.2正確度

金剛烷胺在添加濃度1.0μg/kg～100μg/kg時，回收率為70%～120%。詳見表B.2。

11質量控制和質量保證

11.1空白試驗

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應至少分析1個空白試驗，空白中金剛烷胺的濃度應低于

方法檢出限。

11.2校準

標準曲線建立應與批樣測定同時進行；每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應至少分析1個中

間點濃度的標準溶液，測定值與該點初始濃度的相對誤差應≤30%；金剛烷胺標準曲線的相關系數(shù)r一般

應大于0.99。

11.3平行樣

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應至少測定一個平行樣。平行樣測定結果的相對偏差應

在±10以內。

11.4基體加標

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應至少測定一個基體加標樣品，金剛烷胺回收率應在70%～

120%之間，見附錄B。

12廢物處置

實驗過程中產生的廢液和廢物應分類收集，集中保管，委托有資質的單位進行處理。

5

DB37/T4686—2023

附錄A

（資料性）

色譜圖

圖A.1、圖A.2、圖A.3給出了金剛烷胺標準溶液色譜圖、空白樣品色譜圖和加標樣品色譜圖。

RT:0.00-7.02

2.93NL:1.88E4

100

TICF:+cESISRM

ms2152.000

90[92.999-93.001,

134.999-135.001]

80MS20201216-13

70

60

50

40

RelativeAbundance

30

20

104.945.09

4.664.845.395.605.926.236.59

4.486.78

0.060.410.710.871.181.281.491.792.122.242.342.733.113.303.503.934.11

0

2.91NL:2.11E4

100

TICF:+cESISRM

ms2167.000

90[140.999-141.001,

149.999-150.001]

80MS20201216-13

70

60

50

40

RelativeAbundance

30

20

5.07

4.734.855.255.425.785.89

104.626.196.506.66

3.004.44

0.230.430.660.861.161.591.692.002.302.613.163.673.934.20

0

0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.0

Time(min)

圖A.1金剛烷胺標準溶液色譜圖（10.0μg/L）

RT:0.00-7.02

4.745.33NL:1.33E3

1005.195.57

4.84TICF:+cESISRM

6.53ms2152.000

90

5.666.026.29[92.999-93.001,

6.63134.999-135.001]

80MS20201216-38

70

60

504.566.75

40

RelativeAbundance

304.39

20

4.25

100.350.670.943.764.05

0.061.001.461.712.052.322.522.773.153.72

0

2.91NL:4.57E4

100

TICF:+cESISRM

ms2167.000

90[140.999-141.001,

149.999-150.001]

80MS20201216-38

70

60

50

40

RelativeAbundance

30

20

101.922.63

2.062.494.664.774.875.195.365.605.726.056.376.54

0.290.600.741.251.433.163.323.734.054.36

0

0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.0

Time(min)

圖A.2空白樣品色譜圖

6

DB37/T4686—2023

RT:0.00-7.02

2.91NL:1.63E4

100

TICF:+cESISRM

ms2152.000

90[92.999-93.001,

134.999-135.001]

80MS20201216-31

70

60

50

40

RelativeAbundance

30

20

104.825.135.315.605.765.98

4.606.276.376.59

2.994.446.73

0.310.410.670.791.121.321.441.732.052.402.522.833.153.583.784.19

0

2.91NL:2.25E4

100

TICF:+cESISRM

ms2167.000

90[140.999-141.001,

149.99