動(dòng)物微生物測(cè)試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.下列微生物中，屬于真核微生物的是（）A.大腸桿菌B.白色念珠菌C.豬瘟病毒D.肺炎支原體2.革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要差異在于（）A.肽聚糖層厚度與是否含脂多糖B.細(xì)胞膜的通透性C.是否具有莢膜D.鞭毛的數(shù)量3.病毒的基本結(jié)構(gòu)是（）A.核酸+包膜B.衣殼+包膜C.核酸+衣殼D.核衣殼+刺突4.下列哪種微生物在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上無法生長(zhǎng)？（）A.金黃色葡萄球菌B.結(jié)核分枝桿菌C.牛支原體D.沙門氏菌5.細(xì)菌的芽孢是（）A.繁殖體B.休眠體C.營(yíng)養(yǎng)體D.致病體6.動(dòng)物腸道內(nèi)的正常菌群對(duì)宿主的主要作用不包括（）A.生物拮抗B.促進(jìn)消化吸收C.合成維生素D.直接引起腹瀉7.下列哪種方法可用于區(qū)分細(xì)菌的死活？（）A.革蘭氏染色B.美藍(lán)染色C.瑞氏染色D.吉姆薩染色8.豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）的核酸類型是（）A.單股正鏈RNAB.單股負(fù)鏈RNAC.雙股DNAD.單股DNA9.內(nèi)毒素的主要成分是（）A.蛋白質(zhì)B.脂多糖C.肽聚糖D.磷壁酸10.進(jìn)行細(xì)菌藥敏試驗(yàn)時(shí)，常用的培養(yǎng)基是（）A.血瓊脂培養(yǎng)基B.麥康凱培養(yǎng)基C.MH（Mueller-Hinton）培養(yǎng)基D.SS瓊脂培養(yǎng)基二、判斷題（每題1分，共10分。正確填“√”，錯(cuò)誤填“×”）1.支原體因缺乏細(xì)胞壁，故在顯微鏡下呈現(xiàn)多形性。（）2.所有病毒都必須在活細(xì)胞內(nèi)才能復(fù)制增殖。（）3.細(xì)菌的莢膜具有抗吞噬作用，是重要的毒力因子。（）4.巴氏消毒法可完全殺滅所有微生物，達(dá)到滅菌效果。（）5.病毒的刺突（糖蛋白）主要參與病毒的吸附和入侵宿主細(xì)胞。（）6.動(dòng)物源細(xì)菌的耐藥性僅由基因突變引起，與抗生素濫用無關(guān)。（）7.真菌的孢子是繁殖結(jié)構(gòu)，而細(xì)菌的芽孢是休眠結(jié)構(gòu)。（）8.檢測(cè)病毒抗原時(shí)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）既可定性也可定量。（）9.正常情況下，動(dòng)物的血液和組織器官中無微生物存在。（）10.產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生的α毒素屬于內(nèi)毒素，可引起壞死和溶血。（）三、簡(jiǎn)答題（每題6分，共30分）1.簡(jiǎn)述革蘭氏染色的操作步驟及關(guān)鍵環(huán)節(jié)。2.比較細(xì)菌與病毒在結(jié)構(gòu)、增殖方式和對(duì)抗生素敏感性上的主要差異。3.動(dòng)物源致病性大腸桿菌的主要毒力因子有哪些？舉例說明其致病機(jī)制。4.簡(jiǎn)述病毒分離培養(yǎng)的常用方法及其適用場(chǎng)景。5.簡(jiǎn)述動(dòng)物微生物檢測(cè)中PCR技術(shù)的基本原理及應(yīng)用優(yōu)勢(shì)。四、論述題（每題10分，共20分）1.從微生物學(xué)角度分析，規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)如何防控動(dòng)物源性細(xì)菌病的爆發(fā)？需結(jié)合環(huán)境控制、微生物檢測(cè)和藥物使用等方面展開。2.論述動(dòng)物病毒變異的主要機(jī)制及其對(duì)疫苗研發(fā)和疾病防控的影響。五、案例分析題（20分）某規(guī)模化豬場(chǎng)近期爆發(fā)仔豬腹瀉疫情，發(fā)病率約40%，死亡率15%。病豬表現(xiàn)為水樣腹瀉、脫水、精神沉郁，部分仔豬出現(xiàn)嘔吐。剖檢可見小腸黏膜充血、腸壁變薄，內(nèi)容物呈黃色水樣。豬場(chǎng)已使用恩諾沙星（氟喹諾酮類）治療3天，但效果不佳。請(qǐng)結(jié)合動(dòng)物微生物學(xué)知識(shí)，回答以下問題：（1）推測(cè)可能的致病微生物（至少3種），并說明依據(jù)。（2）提出實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的具體步驟（從病料采集到結(jié)果判定）。（3）針對(duì)該疫情，給出綜合防控建議（需包含微生物學(xué)相關(guān)措施）。---參考答案及解析一、單項(xiàng)選擇題1.B解析：白色念珠菌是真菌，屬于真核微生物；大腸桿菌（細(xì)菌）、支原體（原核）、病毒（非細(xì)胞結(jié)構(gòu)）均為非真核。2.A解析：革蘭氏陽性菌肽聚糖層厚（占細(xì)胞壁60%-90%），無外膜；革蘭氏陰性菌肽聚糖層?。?0%-20%），含脂多糖（內(nèi)毒素）。3.C解析：病毒基本結(jié)構(gòu)為核酸（DNA或RNA）包裹于蛋白質(zhì)衣殼中，稱為核衣殼；包膜為部分病毒的附加結(jié)構(gòu)。4.C解析：支原體營(yíng)養(yǎng)要求高，需在含血清、酵母浸膏的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂無法滿足其需求。5.B解析：芽孢是細(xì)菌在不利環(huán)境下形成的休眠體，具有極強(qiáng)抗逆性，非繁殖結(jié)構(gòu)。6.D解析：正常菌群通過生物拮抗抑制致病菌定植，合成維生素（如B族、K），促進(jìn)消化，但不會(huì)直接引起腹瀉（條件致病時(shí)可能）。7.B解析：美藍(lán)染色可區(qū)分活菌（無色）與死菌（藍(lán)色）；革蘭氏染色僅區(qū)分菌型，瑞氏、吉姆薩染色用于形態(tài)觀察。8.A解析：PRRSV屬于動(dòng)脈炎病毒科，基因組為單股正鏈RNA（+ssRNA）。9.B解析：內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁脂多糖（LPS）的脂質(zhì)A部分，外毒素為蛋白質(zhì)。10.C解析：MH培養(yǎng)基成分穩(wěn)定，適合細(xì)菌藥敏試驗(yàn)（如K-B法）；血瓊脂用于營(yíng)養(yǎng)要求高的細(xì)菌，麥康凱用于腸道菌選擇。二、判斷題1.√解析：支原體無細(xì)胞壁，形態(tài)可呈球形、絲狀等多形性。2.√解析：病毒無獨(dú)立代謝系統(tǒng)，必須依賴宿主細(xì)胞的酶系統(tǒng)和能量進(jìn)行復(fù)制。3.√解析：莢膜可抵抗宿主吞噬細(xì)胞的吞噬（如肺炎鏈球菌），是重要毒力因子。4.×解析：巴氏消毒法（62℃30分鐘或72℃15秒）主要?dú)缰虏【ㄈ缃Y(jié)核桿菌），無法完全滅菌。5.√解析：病毒刺突（如流感病毒HA）可與宿主細(xì)胞受體結(jié)合，介導(dǎo)吸附和入侵。6.×解析：細(xì)菌耐藥性主要由質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因水平轉(zhuǎn)移（如接合、轉(zhuǎn)化）引起，抗生素濫用是選擇壓力。7.√解析：真菌孢子（如分生孢子）是繁殖結(jié)構(gòu)，細(xì)菌芽孢（如炭疽芽孢）是休眠結(jié)構(gòu)。8.√解析：ELISA通過酶標(biāo)抗體與抗原結(jié)合，顯色強(qiáng)度與抗原量正相關(guān)，可定性（有無）和定量（濃度）。9.√解析：正常動(dòng)物的血液、組織器官為無菌環(huán)境，僅體表、消化道等與外界相通部位有正常菌群。10.×解析：產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素是外毒素（磷脂酶C），可分解細(xì)胞膜磷脂，導(dǎo)致細(xì)胞壞死和溶血。三、簡(jiǎn)答題1.革蘭氏染色步驟及關(guān)鍵環(huán)節(jié)步驟：（1）涂片固定；（2）結(jié)晶紫初染1分鐘；（3）碘液媒染1分鐘（形成結(jié)晶紫-碘復(fù)合物）；（4）95%乙醇脫色（關(guān)鍵步驟，時(shí)間20-30秒）；（5）沙黃復(fù)染30秒。關(guān)鍵環(huán)節(jié)：脫色時(shí)間。脫色不足則革蘭氏陰性菌被誤染為陽性；脫色過度則陽性菌被誤染為陰性。2.細(xì)菌與病毒的差異-結(jié)構(gòu)：細(xì)菌為原核細(xì)胞（有細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、擬核、核糖體）；病毒為非細(xì)胞結(jié)構(gòu)（僅核衣殼，部分有包膜）。-增殖方式：細(xì)菌通過二分裂繁殖；病毒通過復(fù)制（吸附→穿入→脫殼→生物合成→裝配→釋放）。-抗生素敏感性：細(xì)菌對(duì)多數(shù)抗生素（如青霉素、頭孢）敏感（干擾細(xì)胞壁或蛋白質(zhì)合成）；病毒對(duì)抗生素不敏感（需抗病毒藥物如奧司他韋）。3.致病性大腸桿菌的毒力因子及致病機(jī)制主要毒力因子：（1）黏附素（如F4、F5菌毛）：介導(dǎo)細(xì)菌黏附小腸上皮，避免被腸蠕動(dòng)清除；（2）腸毒素（如LT熱不穩(wěn)定毒素、ST熱穩(wěn)定毒素）：激活腸上皮細(xì)胞腺苷酸環(huán)化酶，導(dǎo)致細(xì)胞分泌過量水分和電解質(zhì)，引起水樣腹瀉；（3）志賀樣毒素（Stx）：抑制蛋白質(zhì)合成，導(dǎo)致腸黏膜細(xì)胞壞死和出血性腸炎（如仔豬水腫?。?。4.病毒分離培養(yǎng)方法及適用場(chǎng)景（1）動(dòng)物接種：用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（如小鼠、家兔）分離嗜神經(jīng)病毒（如狂犬病病毒），但成本高、周期長(zhǎng)；（2）雞胚培養(yǎng)：用于流感病毒（尿囊腔接種）、新城疫病毒（羊膜腔接種）等，操作簡(jiǎn)便、敏感性高；（3）細(xì)胞培養(yǎng)（最常用）：原代細(xì)胞（如豬腎細(xì)胞）用于初次分離，傳代細(xì)胞（如Vero細(xì)胞）用于病毒增殖和鑒定，適用于多數(shù)動(dòng)物病毒（如PRRSV、豬瘟病毒）。5.PCR技術(shù)原理及應(yīng)用優(yōu)勢(shì)原理：通過熱循環(huán)（變性→退火→延伸），利用特異性引物擴(kuò)增病毒/細(xì)菌的靶基因（如16SrRNA、病毒核蛋白基因），通過電泳或熒光檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。優(yōu)勢(shì)：（1）敏感性高（可檢測(cè)極微量病原）；（2）特異性強(qiáng)（引物針對(duì)保守基因）；（3）快速（4-6小時(shí)出結(jié)果）；（4）可區(qū)分死菌/活菌（結(jié)合探針技術(shù)或RT-PCR檢測(cè)RNA）。四、論述題1.規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)細(xì)菌病防控措施（1）環(huán)境控制：定期清理糞便（減少大腸桿菌、沙門氏菌繁殖），保持圈舍干燥（抑制真菌生長(zhǎng)），使用2%火堿或過硫酸氫鉀復(fù)合物消毒（破壞細(xì)菌細(xì)胞壁和膜）；通風(fēng)換氣降低氨氣濃度（減少呼吸道黏膜損傷，降低巴氏桿菌感染風(fēng)險(xiǎn)）。（2）微生物檢測(cè)：定期采集糞便、環(huán)境樣本進(jìn)行細(xì)菌分離（麥康凱培養(yǎng)基篩選腸道菌）、藥敏試驗(yàn)（MH培養(yǎng)基K-B法），監(jiān)測(cè)優(yōu)勢(shì)菌及耐藥譜（如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA）；建立微生物數(shù)據(jù)庫(kù)，預(yù)警耐藥菌爆發(fā)。（3）藥物使用：嚴(yán)格按《獸用抗菌藥使用指南》，避免濫用廣譜抗生素（如長(zhǎng)期使用四環(huán)素）；優(yōu)先選擇窄譜藥（如針對(duì)鏈球菌用青霉素），聯(lián)合使用增效劑（如磺胺+TMP）；實(shí)施“用藥休藥期”制度，減少耐藥基因水平轉(zhuǎn)移（如質(zhì)粒接合傳遞）。（4）生物防控：添加益生菌（如乳酸桿菌）競(jìng)爭(zhēng)黏附位點(diǎn)，抑制致病菌定植；使用噬菌體療法（特異性裂解耐藥菌），減少抗生素依賴。2.病毒變異機(jī)制及對(duì)防控的影響變異機(jī)制：（1）基因突變（點(diǎn)突變）：RNA病毒（如口蹄疫病毒）聚合酶缺乏校正功能，易發(fā)生堿基錯(cuò)配（如SARS-CoV-2的刺突蛋白D614G突變）；（2）基因重組：兩種病毒感染同一細(xì)胞時(shí)交換基因片段（如流感病毒HA/NA基因重組導(dǎo)致大流行）；（3）基因重配：分節(jié)段RNA病毒（如輪狀病毒）交換基因節(jié)段（如豬輪狀病毒與牛輪狀病毒重配產(chǎn)生新血清型）；（4）抗原漂移：點(diǎn)突變累積導(dǎo)致抗原表位改變（如禽流感病毒H5N1的HA蛋白變異）。對(duì)防控的影響：（1）疫苗失效：變異株抗原與疫苗株差異大（如豬藍(lán)耳病病毒NSP2基因缺失變異），導(dǎo)致中和抗體無法識(shí)別；（2）診斷困難：傳統(tǒng)血清學(xué)方法（如ELISA）因抗原變異出現(xiàn)假陰性（需實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)變異位點(diǎn)，更新檢測(cè)引物）；（3）傳播力增強(qiáng)：部分變異株（如非洲豬瘟病毒自然弱毒株）毒力下降但隱性感染率升高，增加防控難度；（4）跨種傳播風(fēng)險(xiǎn)：變異可能突破宿主受體限制（如豬流感病毒獲得人源受體結(jié)合能力）。五、案例分析題（1）可能致病微生物及依據(jù)①豬流行性腹瀉病毒（PEDV）：水樣腹瀉、小腸絨毛萎縮（腸壁變薄），抗生素治療無效（病毒病）；②產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（ETEC）：仔豬腹瀉常見病原，可產(chǎn)生LT/ST毒素導(dǎo)致水樣便，但恩諾沙星無效可能提示耐藥或混合感染；③輪狀病毒（RV）：多發(fā)生于哺乳仔豬，嘔吐與腹瀉并存，剖檢腸黏膜充血；④產(chǎn)氣莢膜梭菌（C型）：可產(chǎn)生β毒素，引起出血性腸炎（但本例以水樣便為主，可能性較低）。（2）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)步驟①病料采集：無菌采集腹瀉仔豬糞便（5g）、小腸內(nèi)容物（5ml）、腸系膜淋巴結(jié)（1g），低溫保存（4℃）盡快送檢；②直接鏡檢：糞便涂片革蘭氏染色，觀察是否有大量革蘭氏陰性桿菌（大腸桿菌）或無細(xì)菌（提示病毒）；③病毒檢測(cè)：提取糞便RNA，RT-PCR擴(kuò)增PEDV的N基因、輪狀病毒的VP6基因，電泳檢測(cè)陽性條帶；或用免疫熒光（IFA）檢測(cè)腸組織中的病毒抗原；④細(xì)菌分離：糞便接種麥康凱培養(yǎng)基（37℃24小時(shí)），挑取紅色菌落（乳糖發(fā)酵菌）進(jìn)行生化鑒定（IMViC試驗(yàn)：吲哚+、甲基紅+、VP-、枸櫞酸-可確認(rèn)為大腸桿菌）；⑤藥敏試驗(yàn)：分離的大腸桿菌接種MH培養(yǎng)基，用恩諾沙星、頭孢噻呋等藥敏紙片，測(cè)量抑菌圈直徑（若恩諾沙星耐藥，提示質(zhì)粒介導(dǎo)的qnr基因或拓?fù)洚悩?gòu)酶突變）；⑥毒力基因檢測(cè)：PCR檢測(cè)大腸桿菌的F4菌毛基因（黏附素）、ST毒素基因（致病標(biāo)志）。（3）綜合防控建議①緊急治療：病毒病無特效藥，需補(bǔ)液（口服補(bǔ)液鹽：氯化鈉3.5g+碳酸氫鈉2.5g+氯化鉀1.5g+葡萄糖20g/1000ml）糾正脫