DeterminationofpolycyclicaromatichydrocarbonsintheserumsamplesofoccupationallyexposedpopulationbylT/GAIA030—2025 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14原理 15試劑與材料 16儀器和設(shè)備 27試樣的制備與保存 2 29結(jié)果計(jì)算和表述 310方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度 3附錄A（資料性）化合物中英文名稱、化學(xué)分子式和CAS號(hào) 4附錄B（資料性）多環(huán)芳烴 5T/GAIA030—2025前本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則言第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由廣東省分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：廣州市疾病預(yù)防控制中心、廣東省人民醫(yī)院、廣州市白云區(qū)疾病預(yù)防控制中心、南方醫(yī)科大學(xué)。本文件主要起草人：譚磊、鄧芬芳、安然、周思、彭榮飛、廖佳、朱海燕、黃海蘭、潘加亮、李國(guó)威、朱惠揚(yáng)。1T/GAIA030—2025職業(yè)暴露人群血清中多環(huán)芳烴的測(cè)定液相色譜法本文件規(guī)定了職業(yè)暴露人群血清中15種多環(huán)芳烴的液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于血清中萘、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[a]蒽、?、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、茚并[1,2,3-cd]芘15種多環(huán)芳烴的檢測(cè)，可用于內(nèi)暴露水平監(jiān)測(cè)及職業(yè)暴露人群血清中多環(huán)芳烴檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理血清樣品經(jīng)乙腈萃取冷凍沉淀蛋白，高速離心后取上清液，用液相色譜配熒光檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法定量。5試劑與材料5.1試劑5.1.1水：GB/T6682所規(guī)定的一級(jí)水。5.1.2乙腈（CH3CN）。5.2標(biāo)準(zhǔn)品多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)溶液（含萘、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[a]蒽、?、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、茚并[1,2,3-cd]芘）：濃度1000μg/mL，-18℃下避光保存。標(biāo)準(zhǔn)品信息參見附錄A。警告——多環(huán)芳烴是已知致癌、致畸、致突變的物質(zhì)，并且致癌性隨著苯環(huán)數(shù)的增加而增加。進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)溶液配制等操作時(shí)應(yīng)特別注意安全防護(hù)，應(yīng)在通風(fēng)柜中操作，盡量減少暴露。5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液制備5.3.1多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0μg/mL準(zhǔn)確吸取多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/mL）1.00mL于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混勻，將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃瓶中，-18℃下避光保存，保存期5.3.2多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)使用液（100ng/mL）：準(zhǔn)確吸取多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0μg/mL）0.100mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混勻，將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃瓶中，-18℃下避光保存，保存期5.3.3多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分2T/GAIA030—20250.500mL、1.00mL、1.50mL、2.50mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度線，得到質(zhì)量濃度為1.00ng/mL、2.50ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、25.0ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，臨用現(xiàn)配。6儀器和設(shè)備6.1液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。6.2渦旋混合器：轉(zhuǎn)速不低于3000r/min。6.3低溫離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。6.4移液槍：量程10μL～100μL和100μL～1000μL。7試樣的制備與保存7.1試樣的制備取適量新鮮或解凍的空白或供試血清，混合均勻。a)取混勻后的供試樣品，作為供試試樣；b)取混勻后的空白樣品，作為空白試樣。在處理樣本時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵從對(duì)潛在生物傳染性樣本處理的相關(guān)規(guī)定，使用時(shí)遵循生物安全規(guī)則，并根據(jù)規(guī)定對(duì)廢物進(jìn)行處理。7.2樣本用量一般用量為0.1mL～1.0mL，為保證取樣的準(zhǔn)確性和操作可行性，最小取樣量不宜低于0.1mL。7.3試樣的保存-70℃以下保存，不可反復(fù)凍融。8分析步驟8.1提取血清樣品室溫解凍后，準(zhǔn)確移取試樣100μL置于1.5mL離心管中，加入300μL乙腈，渦旋2min，在-20℃放置2h沉淀蛋白，在4℃下10000r/min離心5min，取上清液，供液相色譜測(cè)定。8.2測(cè)定8.2.1液相色譜參考條件a)色譜柱：PAHC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），或相當(dāng)者。b)檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器。c)流動(dòng)相：A相為水，B相為乙腈，梯度洗脫條件見表1。d)流速：1.2mL/min。e)檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)見表2。f)柱溫：27℃。g)進(jìn)樣量：20μL。表1液相色譜梯度洗脫條件03T/GAIA030—2025表2多環(huán)芳烴的激發(fā)波長(zhǎng)、發(fā)射波長(zhǎng)及切換色譜時(shí)間檢測(cè)參數(shù)8.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜儀中，測(cè)得相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液中被測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖參見附錄B。8.2.3試樣溶液的測(cè)定將試樣待測(cè)液注入液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，測(cè)得相應(yīng)的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣待測(cè)液中多環(huán)芳烴的質(zhì)量濃度。如果試樣待測(cè)液中被測(cè)物質(zhì)的濃度超過方法的線性范圍，應(yīng)將樣品稀釋或降低取樣體積后重新處理測(cè)定。8.3空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按照上述測(cè)定步驟進(jìn)行。9結(jié)果計(jì)算和表述試料中多環(huán)芳烴的含量Xi按式（1）計(jì)算。.............................................................................(1)Xi—試樣中多環(huán)芳烴i的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；Ci—標(biāo)準(zhǔn)曲線求得試樣中多環(huán)芳烴i的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V—加入提取溶劑體積，單位為微升(μL）；V—試樣溶液取樣體積，單位為微升(μL）；注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。測(cè)定結(jié)果用兩次平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。10方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度芘方法檢出限為0.20ng/mL，方法定量限為0.60ng/mL。萘、芴、熒蒽、芘、二苯并[a,h]蒽方法檢出限為0.30ng/mL，方法定量限為1.00ng/mL。本方法中多環(huán)芳烴在1.0ng/mL～25ng/mL的添加濃度水平時(shí)，回收率為60%～120%。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20%。4T/GAIA030—2025化合物中英文名稱、化學(xué)分子式和CAS號(hào)化合物中英文名稱、化學(xué)分子式和CAS號(hào)見表A.1。表A.1多環(huán)芳烴中英文名稱、化學(xué)分子式和CAS號(hào)1萘2苊C12H103芴C13H104菲C14H105蒽C14H106C16H10