2025江西省病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全遠(yuǎn)程培訓(xùn)答案一、病原微生物分類與實(shí)驗(yàn)室分級(jí)管理1.依據(jù)《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》及《人間傳染的病原微生物名錄》，人間傳染的病原微生物按危害程度分為四類。其中，第一類是指能夠引起人類或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物（如天花病毒、埃博拉病毒等）；第二類是指能夠引起人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物（如高致病性禽流感病毒、HIV1病毒等）；第三類是指能夠引起人類或者動(dòng)物疾病，但一般情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物（如乙型肝炎病毒、結(jié)核分枝桿菌等）；第四類是指在通常情況下不會(huì)引起人類或者動(dòng)物疾病的微生物（如大腸埃希菌K12菌株）。2.實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分為一級(jí)（BSL1）、二級(jí)（BSL2）、三級(jí)（BSL3）和四級(jí)（BSL4）。BSL1適用于操作第四類病原微生物；BSL2適用于操作第三類病原微生物及感染性材料；BSL3適用于操作第二類病原微生物；BSL4適用于操作第一類病原微生物。需特別注意，從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，需經(jīng)省級(jí)以上衛(wèi)生或獸醫(yī)主管部門(mén)批準(zhǔn)，且實(shí)驗(yàn)活動(dòng)需在相應(yīng)等級(jí)的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。例如，江西省內(nèi)開(kāi)展新冠病毒（屬于第二類病原微生物）的分離培養(yǎng)工作，必須在BSL3實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，且需向江西省衛(wèi)生健康委員會(huì)提交實(shí)驗(yàn)活動(dòng)批準(zhǔn)申請(qǐng)，經(jīng)審核通過(guò)后方可實(shí)施。二、實(shí)驗(yàn)室生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制3.風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是實(shí)驗(yàn)室生物安全管理的核心環(huán)節(jié)，需遵循“識(shí)別分析評(píng)價(jià)控制”的基本流程。風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別階段需全面梳理實(shí)驗(yàn)活動(dòng)涉及的病原微生物特性（如致病性、傳播途徑、耐藥性）、操作過(guò)程（如離心、勻漿、接種）、設(shè)備設(shè)施（如生物安全柜性能、高壓滅菌器有效性）、人員資質(zhì)（如培訓(xùn)記錄、健康狀況）及環(huán)境因素（如實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)、應(yīng)急照明）。風(fēng)險(xiǎn)分析需采用定性與定量結(jié)合的方法，例如通過(guò)矩陣法評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生的可能性（低、中、高）與后果嚴(yán)重性（可忽略、中等、嚴(yán)重），確定風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)需對(duì)照國(guó)家及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（如GB194892022《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》），判斷現(xiàn)有控制措施是否充分。4.風(fēng)險(xiǎn)控制措施需根據(jù)評(píng)估結(jié)果制定，遵循“消除替代工程控制管理控制個(gè)體防護(hù)”的優(yōu)先順序。例如，若實(shí)驗(yàn)中需處理高濃度結(jié)核分枝桿菌懸液，首先應(yīng)考慮是否可通過(guò)降低培養(yǎng)濃度（替代）減少風(fēng)險(xiǎn)；若無(wú)法替代，則需在BSL3實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜內(nèi)操作（工程控制），同時(shí)要求操作人員完成結(jié)核菌素試驗(yàn)并接種卡介苗（管理控制），穿戴正壓防護(hù)服（個(gè)體防護(hù)）。此外，需定期（至少每年一次）對(duì)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估進(jìn)行回顧，當(dāng)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)、人員、設(shè)備或法規(guī)發(fā)生變化時(shí)，需及時(shí)重新評(píng)估。三、實(shí)驗(yàn)室生物安全操作規(guī)范5.個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）的選擇與使用需嚴(yán)格符合實(shí)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)。BSL2實(shí)驗(yàn)室操作第三類病原微生物時(shí)，需穿戴一次性防護(hù)服（連體或分體）、手套（雙層，外層為無(wú)粉乳膠或丁腈手套）、護(hù)目鏡（防霧型）、N95口罩或醫(yī)用外科口罩（根據(jù)氣溶膠風(fēng)險(xiǎn)選擇）。穿戴順序?yàn)椋合却┓雷o(hù)服（確保拉鏈閉合），戴口罩（調(diào)整鼻夾貼合），戴護(hù)目鏡（確保無(wú)漏光），最后戴手套（手套需覆蓋防護(hù)服袖口）。脫卸時(shí)需反向操作，避免污染：先摘手套（外層手套外翻脫下，內(nèi)層手套同樣處理），摘護(hù)目鏡（手不觸碰鏡面），脫防護(hù)服（從頸部拉鏈處緩慢向下，避免接觸外部污染面），最后摘口罩（手不觸碰口罩外表面），所有使用后的PPE需放入專用醫(yī)療廢物袋，經(jīng)高壓蒸汽滅菌（121℃，30分鐘）后處理。6.實(shí)驗(yàn)操作中需重點(diǎn)防范氣溶膠產(chǎn)生。離心操作時(shí)，需使用密封離心管及帶安全蓋的轉(zhuǎn)頭，離心前檢查離心管是否有裂縫，平衡誤差不超過(guò)0.1g；離心結(jié)束后需等待轉(zhuǎn)頭完全停止，緩慢打開(kāi)離心機(jī)蓋，靜置5分鐘待氣溶膠沉降后再取出樣本。勻漿、振蕩操作需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，勻漿器需預(yù)先消毒，振蕩速度不宜過(guò)高（≤2000rpm）。接種動(dòng)物時(shí)，需使用麻醉劑（如異氟醚）降低動(dòng)物應(yīng)激反應(yīng)，操作后立即對(duì)動(dòng)物籠具及操作區(qū)域進(jìn)行消毒（0.5%過(guò)氧乙酸擦拭）。7.實(shí)驗(yàn)室廢棄物分為感染性廢物、病理性廢物、化學(xué)性廢物和放射性廢物。感染性廢物（如培養(yǎng)物、被污染的吸管）需裝入黃色醫(yī)療廢物袋（帶有生物危害標(biāo)識(shí)），置于專用防漏容器中，日產(chǎn)日清。高壓蒸汽滅菌時(shí)需確保裝載量不超過(guò)容器的3/4，溫度、時(shí)間達(dá)標(biāo)（121℃，30分鐘或134℃，18分鐘），滅菌后需檢查指示卡是否變色以確認(rèn)效果?；瘜W(xué)性廢物（如廢棄的甲醛固定液）需分類收集于耐酸堿容器，標(biāo)簽注明成分、日期，委托有資質(zhì)的危險(xiǎn)廢物處理公司處置。四、實(shí)驗(yàn)室生物安全應(yīng)急處置8.實(shí)驗(yàn)室暴露事件包括銳器傷（如針刺傷）、黏膜接觸（如樣本濺入眼、鼻）、皮膚污染（如樣本滲透手套）及氣溶膠吸入。發(fā)生銳器傷時(shí)，立即在流動(dòng)水下從近心端向遠(yuǎn)心端擠壓傷口，擠出污血，用肥皂水和清水沖洗，再用0.5%碘伏或75%乙醇消毒，覆蓋無(wú)菌敷料；同時(shí)記錄暴露時(shí)間、地點(diǎn)、病原微生物種類（如HBV、HIV），2小時(shí)內(nèi)向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人報(bào)告，48小時(shí)內(nèi)完成暴露后預(yù)防（如HBV暴露者注射乙肝免疫球蛋白）。黏膜接觸時(shí)，立即用生理鹽水或洗眼液沖洗15分鐘，避免揉擦；皮膚污染時(shí)，用大量清水沖洗后，用0.5%碘伏擦拭，范圍大于污染區(qū)域2cm。9.實(shí)驗(yàn)室感染事件報(bào)告需遵循“分級(jí)報(bào)告、快速響應(yīng)”原則。發(fā)生疑似實(shí)驗(yàn)室感染（如操作人員出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽等與實(shí)驗(yàn)病原相關(guān)癥狀）時(shí)，當(dāng)事人需立即停止工作，佩戴口罩，前往指定隔離區(qū)域；實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人需在1小時(shí)內(nèi)向單位生物安全委員會(huì)報(bào)告，同時(shí)聯(lián)系定點(diǎn)醫(yī)院（如江西省疾病預(yù)防控制中心附屬醫(yī)院）進(jìn)行病原檢測(cè)（如核酸檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)）。確認(rèn)感染后，24小時(shí)內(nèi)向江西省衛(wèi)生健康委員會(huì)提交書(shū)面報(bào)告，內(nèi)容包括感染病原、暴露途徑、處理措施及潛在影響評(píng)估。10.應(yīng)急預(yù)案演練需每年至少開(kāi)展一次，模擬場(chǎng)景包括生物安全柜故障、高壓滅菌器失效、樣本泄漏等。例如，模擬生物安全柜突然停風(fēng)時(shí)，操作人員需立即停止操作，關(guān)閉安全柜玻璃門(mén)，記錄停風(fēng)時(shí)間，30分鐘內(nèi)使用便攜式氣溶膠采樣器檢測(cè)柜內(nèi)空氣，若檢測(cè)到病原微生物（如結(jié)核分枝桿菌DNA陽(yáng)性），則啟動(dòng)環(huán)境消毒程序（用3%過(guò)氧化氫汽化消毒，作用時(shí)間60分鐘），消毒后再次檢測(cè)，達(dá)標(biāo)（≤10CFU/m3）方可恢復(fù)使用。演練結(jié)束后需形成總結(jié)報(bào)告，分析演練中存在的問(wèn)題（如人員反應(yīng)遲緩、消毒設(shè)備不足），制定改進(jìn)計(jì)劃（如增加應(yīng)急培訓(xùn)頻次、補(bǔ)充消毒物資儲(chǔ)備）。五、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系11.實(shí)驗(yàn)室需建立三級(jí)管理體系：第一級(jí)為生物安全委員會(huì)（由單位負(fù)責(zé)人、微生物專家、法律專家組成），負(fù)責(zé)審批實(shí)驗(yàn)活動(dòng)、審議風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告、監(jiān)督安全事件處理；第二級(jí)為生物安全辦公室（由專職管理人員組成），負(fù)責(zé)日常檢查（如每月一次的設(shè)備巡檢、每季度一次的檔案抽查）、培訓(xùn)組織（如新員工上崗前72學(xué)時(shí)培訓(xùn)、年度復(fù)訓(xùn)24學(xué)時(shí)）、記錄管理（實(shí)驗(yàn)活動(dòng)記錄保存至少20年，培訓(xùn)記錄保存至少10年）；第三級(jí)為實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人（具備高級(jí)專業(yè)技術(shù)職稱，5年以上相關(guān)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)），負(fù)責(zé)制定本實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程、監(jiān)督人員操作、報(bào)告安全事件。12.文檔管理是體系運(yùn)行的關(guān)鍵支撐，需包括法規(guī)文件（如《生物安全法》《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》）、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)（如GB194892022）、內(nèi)部規(guī)程（如《BSL3實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入制度》《廢棄物處理流