名詞解釋

1.Cassettemutagenesis:盒式突變(cassettemutagenesis),又稱片段取代法(DNAfragment

replacement),利用目標(biāo)基因序列中適當(dāng)限制酶切位點，插入各種合適的突變DNA片段，用

以取代目標(biāo)基因中特定DNA片段

2.DNAshuffling:DNA改組(DNAshuffling)將DNA拆散后重排，一種模仿自然進(jìn)化的體

外DNA重組的新技術(shù).這種方法不僅可以對一種基因人為進(jìn)化，而且可以將具有結(jié)構(gòu)同源

性的兒種基因進(jìn)行重組，共同進(jìn)化出一種新的蛋白質(zhì).在實驗室中把DNA改組與有效的篩

選方法結(jié)合起來可為多領(lǐng)域的應(yīng)用快速進(jìn)化基因.

3.Yeastcentromericplasmid：酵母著絲粒載體，一種在YRp質(zhì)粒結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上增加了?段來

自酵母染色體著絲粒DNA片段的載體

4.yeastartificialchromosome酵母人工染色體型載體，具有酵母染色體的主要構(gòu)件包括酵

母染色體自主復(fù)制序列(ARS)、著絲粒序列(CEN)和端粒序列(TEL)。

5.InclusionBodies

6.Refolding：

7.Interferon：干擾素是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的可

溶性糖蛋白

8.Interleukin:白細(xì)胞介素(interleukin,IL),簡稱白介素:是由多種細(xì)胞分泌的一類具有免

疫調(diào)節(jié)活性的細(xì)胞因子。這類物質(zhì)主要是由白細(xì)胞合成，且主要介導(dǎo)白細(xì)胞間的相互作用。

一類低相對分子量的蛋白多肽，通常由一個或幾個基因表達(dá)合成

9.Antisensetechnology：反義技術(shù)(antisensetechnology)是采用反義核酸分子(人工合成或生

物合成的DNA或RNA,它們能與DNA、RNA互補(bǔ))抑制、封閉或破壞與疾病發(fā)生相關(guān)的

靶基因表達(dá)的一種手段

10.siRNA:RNAi是一個依賴ATP的過程，在此過程中，dsRNA(外源或內(nèi)生)首先被降解為

具3'端有2?3nt突出、長21?23bp的小分子雙鏈RNA,這種RNA稱為小干擾RNA(siRNA)。

siRNA通過堿基互補(bǔ)配對識別具同源序列的mRNA,并介導(dǎo)其降解。

11.RNAi:RNAi,又稱為RNA干擾或RNA干涉；是一種山dsRNA所引起的序列特異性基

因沉默現(xiàn)象Fire等(1998)發(fā)現(xiàn)將dsRNA注入線蟲體內(nèi)后可抑制序列同源基因的表達(dá),并證實

這種抑制主要作用于轉(zhuǎn)錄之后，所以又稱轉(zhuǎn)錄后基因沉默(posttranscriptionalgenesilencing,

PTGS)0將這一現(xiàn)象稱為RNA干擾(RNAinterference,簡稱RNAi)。

12.Subunitvaccine:基因工程亞單位疫苗；只含有病原體的一種或幾種抗原，而不含有病

原體的其他遺傳信息

13.Viruslikeparticles：病毒樣顆粒疫苗(Viruslikeparticles)用于免疫的抗原物質(zhì)模擬了其天

然結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)具有更強(qiáng)的針對性，保護(hù)效果更好。

14.Liverecombinantvaccine:用基因工程的方法對細(xì)菌和病毒進(jìn)行改造，使之成為重組活

疫苗(liverecombinantvaccine)?這種重組活疫苗可以是非致病性微生物通過基因工程的方法

使之?dāng)y帶并表達(dá)某種特定病原體的抗原決定簇基因，產(chǎn)生免疫原性;也可以是致病性微生物通

過基因工程的方法修飾或去掉毒性基因以后，仍保持免疫原性

15.ScFv：ScFv是將抗體重鏈、輕鏈V區(qū)通過一段連接肽連接而成的抗體V區(qū)單鏈片段。

其連接肽一般為15個氨基酸,序列為(Gly4Ser)3

16.DsFv:DsFv是在輕鏈、重鏈V區(qū)適當(dāng)部位各引入1個半胱氨酸,形成以二硫鍵固定的

Fv段。其結(jié)合能力及穩(wěn)定性均優(yōu)于ScFv,用DsFv構(gòu)建的免疫制劑已進(jìn)入臨床試用前期

階段。

17.PNAs：肽核酸(peptidenucleicacids,PNAs)：是一種以肽為骨架的DNA類似物，它是

在將反義寡核甘酸的磷酸一糖骨架以肽鍵取代后得到的一類新型化合物

18.Prodrug:前藥轉(zhuǎn)換體外無或較小活性體內(nèi)經(jīng)酶或非酶的作用轉(zhuǎn)化為具有藥理作用

的化合物

19.Expressioncassette:表達(dá)盒(expressioncassette)是酵母基因表達(dá)載體最重要的構(gòu)件，

主要由轉(zhuǎn)錄啟動子和終止子組成。如果需要外源基因的表達(dá)產(chǎn)物分泌，在表達(dá)盒的啟動子下

游還應(yīng)該包括分泌信號序列

20.Signalsequence：信號序列(signalsequence),是前體蛋白N端一段17-30個氨基酸殘基

的分泌信號肽的編碼區(qū)；作用：引導(dǎo)分泌蛋白在細(xì)胞內(nèi)沿著正確的途徑轉(zhuǎn)移到胞外，對于分

泌蛋白翻譯后加工和生物活性有重要意義

闡述題

1.生物技術(shù)新藥設(shè)計的基本策略包括那些？

仿真、類似、結(jié)構(gòu)簡化、激活、拮抗、拼合、前藥轉(zhuǎn)換、軟藥代謝、老藥新用、化害為利

等。

2、簡述基因工程藥物研發(fā)的基本程序。

構(gòu)建目的基因DNA重組體

將DNA重組體轉(zhuǎn)入宿主菌構(gòu)建工程菌

工程菌的發(fā)酵

外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化

產(chǎn)品的檢驗

3、表達(dá)載體需要具備哪些條件？

能夠獨立復(fù)制.復(fù)制能力強(qiáng)，多用松弛型；

具有靈活、便于操作的多克隆位點；

具有方便的篩選標(biāo)記；

具有強(qiáng)啟動子，能為大腸桿菌的RNA聚合酶識別；

具有強(qiáng)終止子；

所產(chǎn)生的mRNA必須具有翻譯的起始信號，即起始密碼AUG和SD序列；

一般具有阻遏子，使啟動子受到控制

4、什么是反義技術(shù)？反義藥物包括哪些？

>反義技術(shù)(antisensetechnology)是采用反義核酸分子(人工合成或生物合成的DNA或

RNA,它們能與DNA、RNA互補(bǔ))抑制、封閉或破壞與疾病發(fā)生相關(guān)的靶基因表達(dá)

的一種手段

>反義藥物分為6類：反義RNA(antisenseRNA)

反義寡核甘酸(antisenseoligodeoxynucleotides,ODNs)

肽核酸(peptidenucleicacids,PNAS)

核酶(ribozyme)和DNAzyme

Aptamer

小干涉RNA(siRNA

5.什么是肽核酸？有何特點和結(jié)構(gòu)特征？

肽核酸(peptidenucleicacids,PNAs)：是一種以肽為骨架的DNA類似物，它是在將反義寡

核甘酸的磷酸一糖骨架以肽鍵取代后得到的一類新型化合物

A其特點：L與核酸的雜交能力強(qiáng)于核酸間的雜交能力；2.熱穩(wěn)定性高于核酸間的雜

交體；3.抗酶解能了極強(qiáng)。由于其非肽和非核酸的結(jié)構(gòu)特點，蛋白酶和核酸酶均不

能降解PNA

6、何謂基因治療？有哪幾類？

＞基于修飾活細(xì)胞遺傳物質(zhì)而進(jìn)行的醫(yī)學(xué)干預(yù)。細(xì)胞可以體外修飾，隨后再注入患者

體內(nèi)；或?qū)⒒蛑委煯a(chǎn)品直接注入患者體內(nèi),使細(xì)胞內(nèi)發(fā)生遺傳學(xué)改變。這種遺傳

學(xué)操縱的目的：預(yù)防、治療、治愈、診斷或緩解人類疾病”

＞1、體細(xì)胞基因治療(somaticgenetherapy)

治療基因轉(zhuǎn)移到體細(xì)胞內(nèi)使之表達(dá)基因產(chǎn)物,以達(dá)到治療目的

2、生殖細(xì)胞基因治療(germlinegenetherapy)

將治療基因轉(zhuǎn)移到患者的生殖細(xì)胞或早期胚胎內(nèi)的一種基因療法

7、細(xì)胞因子主要包括哪些種類？何謂干擾素？包括哪些類型？如何提高基因工

程干擾素IFN-P的生物學(xué)活性？

①干擾素(Interferon,IFN)

白細(xì)胞介素(Interleukin,IL)

集落刺激因子(Colonystimulatingfactor,CSF)

腫瘤壞死因子(Tumornecrosisfactor,TNF)

生長因子(Growthfactor,GF)

趨化因子(ChemokineCK)

造血細(xì)胞因子(Hematopoieticcytokine)

神經(jīng)營養(yǎng)因子(Neurotrophicfactor)

A干擾素是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的可溶性糖

蛋白。

＞根據(jù)干擾素的產(chǎn)生細(xì)胞、受體和活性等綜合因素將其分為2種類型：【型(a,B)

和n型(y)

＞用Serl7替代Cysl7,稱為絲氨酸B干擾素(IFN-BSer),使大腸桿菌的表達(dá)產(chǎn)物能

夠正確折疊成高活性的IFN-B

8、基因工程重組激素類藥物有哪些主要類型？各自的結(jié)構(gòu)特征如何？如何通

過基因工程技術(shù)開發(fā)速、常效和高效胰島素制劑？

①胰島素生長激素心素鈉及利鈉多肽促性腺激素

＞②胰島素：胰島素是胰島B細(xì)胞合成和分泌、由A、B兩條多肽鏈借二硫

鍵連接而成、含51個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)激素。A鏈有21個氨基酸殘基,

B鏈有30個；兩條肽鏈有A7-B7和A20-B19的Cys之間形成的兩對二硫

鍵相連，A鏈內(nèi)部還有一對由A6-A11的Cys殘基形成的鏈內(nèi)二硫鍵

＞生長激素：人生長激素(hGH)的主要形式：191個氨基酸的單一多肽鏈構(gòu)

成的球形蛋白。在55-165位和182-189位氨基酸之間有兩個分子內(nèi)二硫

鍵，不含糖基

＞人心鈉素(hANP)是由28個氨基酸殘基組成的活性多肽，含鏈內(nèi)二硫鍵

（Cys7-Cys23）,使ANP分子呈環(huán)狀結(jié)構(gòu)，除第12位的氨基酸（人為Met,

其它為Ue）外，哺乳動物的ANP高度保守

＞促性腺激素：a亞基由92個氨基酸殘基組成，寡糖鏈連接在Asn52和

Asn78位上；B亞基由111個氨基酸組成，寡糖鏈連接在Asn7和Asn24

上

9、抗體藥物包括哪幾個層次？比較細(xì)胞工程抗體與基因工程抗體的特點

＞多克隆抗體：指由不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對抗原物質(zhì)中多種抗原決定

簇的多種抗體混合物如:免疫血清

單克隆抗體：由單一克隆的雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體

基因工程抗體：利用重組DNA和蛋白質(zhì)工程技術(shù),對抗體基因進(jìn)行加工

改造和重新裝配,經(jīng)轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞所表達(dá)的抗體分子

＞細(xì)胞工程抗體：①骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合

②雜交瘤細(xì)胞的篩選

③抗體的檢測

優(yōu)點：高度專一；高度存一缺點：

基因工程抗體：模擬全套天然抗體庫；避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)；可

獲得高親和力的人源化抗體

10、比較大腸桿菌、酵母菌和哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的異同？

＞基于T7噬菌體RNA聚合酶/啟動子的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)

＞載體pET-28a的主要構(gòu)成元件：有T7噬菌體啟動子、乳糖操縱子、核糖

體結(jié)合位點、6XHis標(biāo)簽序列、凝血酶切割位點、多克隆位點、T7噬菌體

終止子以及乳糖阻遏子序列（lacl）、pBR322復(fù)制子、fl噬菌體復(fù)制子、

卡那霉素篩選標(biāo)記序列等

11、影響蛋白質(zhì)藥物在大腸桿菌和酵母菌中表達(dá)的因素各是什么？

＞mRNA中是否有不為其二級結(jié)構(gòu)封阻的RBS；確定轉(zhuǎn)錄終止子的存在與

否；檢查克隆基因序列的密碼子是否為大腸桿菌不常用者

＞①外源基因在表達(dá)系統(tǒng)中的遺傳穩(wěn)定性。②不同生物在蛋白質(zhì)合成、加工

和修飾功能上的差別。③產(chǎn)物在短時間的過量表達(dá)等。

12、重組溶栓類藥物有哪幾類?

＞第一代：尿激酶和鏈激酶

＞第二代：組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)、單鏈尿激酶型纖溶酶原激活劑

(scu-PA),

＞第三代溶栓藥物。主要是對第一、二代溶栓藥物進(jìn)行改造

13、如何設(shè)計和構(gòu)建DNA疫苗？與傳統(tǒng)疫苗相比，DNA疫苗有何優(yōu)點和不足？

＞是將一?種或多種抗原編碼基因克隆到真核表達(dá)載體上構(gòu)建成重組DNA質(zhì)

粒(plasmid),將其直接注入到體內(nèi)，抗原基因在機(jī)體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，進(jìn)而激

活機(jī)體免疫系統(tǒng)，因此也稱為DNA免疫。

＞DNA疫苗的優(yōu)點：抗原合成和遞呈過程與病原的自然感染相似，通過

MHCI類和n類分子直接呈遞給免疫系統(tǒng)。編碼正確折疊的糖基化抗原

分子；易于構(gòu)建和制備；化學(xué)穩(wěn)定性：DNA比蛋白質(zhì)穩(wěn)定得多,便于保

存和運輸，成本低廉，適于規(guī)?；a(chǎn)

14、生物技術(shù)新藥臨床前研究包括哪些主要內(nèi)容？有什么特點？

①安全性問題：免疫毒性，雜質(zhì)引起的毒性，藥理作用放大引起的毒性.

②受試物的質(zhì)量：要與臨床用藥有可比性.

③給藥劑量與動物的全選擇：劑量與臨床一致.動物的選擇因藥而不同.

④免疫原性：檢定產(chǎn)生的抗體，是否有意義，以抗體產(chǎn)生不影響治療作用為準(zhǔn).

⑤三致試驗(致癌、致殘、致畸形)：不同新藥，要求不同.

15、簡述酵母載體的基本結(jié)構(gòu)

①DNA復(fù)制起始區(qū)：一小段具有DNA復(fù)制起始功能的DNA序列

②選擇標(biāo)記：是載體轉(zhuǎn)化酵母篩選轉(zhuǎn)化子時必須的構(gòu)件，它們和宿主的基因型

相互配合

③整合介導(dǎo)區(qū):是與受體菌株基因組有某種程度同源性的一段DNA序列，能有