微生物實(shí)驗(yàn)試題庫(kù)及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.光學(xué)顯微鏡油鏡觀察時(shí)，需在載玻片與物鏡之間滴加香柏油，其主要作用是（）A.增加照明亮度B.減少光線折射C.固定菌體D.提高分辨率答案：B解析：香柏油的折射率（約1.52）與玻璃（約1.51）接近，可減少光線從載玻片進(jìn)入空氣時(shí)的折射損失，提高物鏡的數(shù)值孔徑，從而提升分辨率。2.配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基時(shí)，調(diào)節(jié)pH至7.2-7.4的主要目的是（）A.抑制雜菌生長(zhǎng)B.滿足多數(shù)細(xì)菌的生長(zhǎng)需求C.促進(jìn)產(chǎn)芽孢D.增強(qiáng)培養(yǎng)基凝固性答案：B解析：多數(shù)細(xì)菌適宜在中性偏堿環(huán)境（pH7.0-7.6）中生長(zhǎng)，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為通用培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)此pH范圍可滿足大多數(shù)細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)需求。3.高壓蒸汽滅菌時(shí)，若滅菌鍋內(nèi)冷空氣未排盡，最可能導(dǎo)致的后果是（）A.溫度無(wú)法達(dá)到設(shè)定值B.培養(yǎng)基碳化C.滅菌時(shí)間延長(zhǎng)D.部分微生物存活答案：D解析：冷空氣的存在會(huì)形成“氣團(tuán)”，導(dǎo)致滅菌鍋內(nèi)實(shí)際溫度低于壓力表顯示溫度（因壓力包含空氣分壓），無(wú)法達(dá)到殺滅芽孢所需的121℃，造成滅菌不徹底。4.革蘭氏染色過(guò)程中，關(guān)鍵步驟是（）A.結(jié)晶紫初染B.碘液媒染C.95%乙醇脫色D.沙黃復(fù)染答案：C解析：脫色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁肽聚糖層脫水收縮，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被洗脫，誤染為陰性；時(shí)間過(guò)短則陰性菌未被脫色，誤染為陽(yáng)性，因此脫色是區(qū)分兩類細(xì)菌的關(guān)鍵步驟。5.稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，選擇菌落數(shù)在30-300的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，主要原因是（）A.避免菌落重疊難以計(jì)數(shù)B.符合統(tǒng)計(jì)學(xué)誤差要求C.減少操作誤差D.確保每個(gè)菌落由單個(gè)菌體形成答案：B解析：當(dāng)菌落數(shù)低于30時(shí)，偶然誤差（如取樣不均）影響顯著；高于300時(shí)，菌落重疊導(dǎo)致計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確。30-300的范圍可使計(jì)數(shù)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差控制在可接受范圍內(nèi)（約±10%）。6.觀察酵母菌形態(tài)時(shí)，常用美藍(lán)染液進(jìn)行活體染色，活細(xì)胞呈現(xiàn)（）A.藍(lán)色B.無(wú)色C.紫色D.紅色答案：B解析：美藍(lán)是一種氧化還原指示劑，活細(xì)胞的脫氫酶能將美藍(lán)還原為無(wú)色的還原型美藍(lán)，死細(xì)胞因代謝停止無(wú)法還原，保持藍(lán)色。7.分離土壤中分解纖維素的微生物時(shí)，應(yīng)選用的培養(yǎng)基是（）A.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基B.查氏培養(yǎng)基C.馬丁氏培養(yǎng)基D.以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基答案：D解析：選擇培養(yǎng)基需通過(guò)限制碳源（僅含纖維素）篩選出能分泌纖維素酶的微生物，其他培養(yǎng)基無(wú)法特異性富集目標(biāo)菌。8.斜面接種時(shí)，接種環(huán)在火焰上灼燒的正確順序是（）A.先灼燒環(huán)部，再灼燒桿部B.先灼燒桿部，再灼燒環(huán)部C.僅灼燒環(huán)部D.桿部和環(huán)部同時(shí)灼燒答案：A解析：接種環(huán)使用前需先灼燒環(huán)部（殺滅殘留菌），再緩慢灼燒桿部（避免因驟熱導(dǎo)致環(huán)部金屬變形），冷卻后使用。9.測(cè)定微生物生長(zhǎng)曲線時(shí)，對(duì)數(shù)期的主要特征是（）A.菌體數(shù)量穩(wěn)定B.代謝活動(dòng)旺盛，生長(zhǎng)速率恒定C.開(kāi)始產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物D.細(xì)胞死亡數(shù)超過(guò)繁殖數(shù)答案：B解析：對(duì)數(shù)期微生物代謝活躍、個(gè)體形態(tài)和生理特征穩(wěn)定，分裂速率恒定（代時(shí)最短），是研究代謝和遺傳的最佳時(shí)期。10.以下哪種方法不能用于菌種的長(zhǎng)期保藏？（）A.甘油冷凍保藏（-80℃）B.斜面低溫保藏（4℃）C.冷凍干燥保藏D.石蠟油封藏答案：B解析：斜面低溫保藏（4℃）一般僅能保藏3-6個(gè)月，因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)、菌體代謝消耗營(yíng)養(yǎng)，需定期傳代；其他方法可保藏?cái)?shù)年至數(shù)十年。11.觀察細(xì)菌動(dòng)力時(shí)，正確的制片方法是（）A.涂片后干燥固定B.懸滴法或壓滴法C.革蘭氏染色后觀察D.美藍(lán)染色后觀察答案：B解析：觀察細(xì)菌動(dòng)力需保持菌體活性和液體環(huán)境，懸滴法（菌液滴于蓋玻片，倒置在凹玻片上）或壓滴法（菌液滴于載玻片，蓋蓋玻片）可避免因固定或染色導(dǎo)致的運(yùn)動(dòng)能力喪失。12.紫外線滅菌的主要作用機(jī)制是（）A.破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)B.使DNA形成胸腺嘧啶二聚體C.蛋白質(zhì)變性D.干擾酶活性答案：B解析：紫外線（260nm波長(zhǎng)）可誘導(dǎo)DNA鏈中相鄰胸腺嘧啶形成二聚體，導(dǎo)致復(fù)制和轉(zhuǎn)錄錯(cuò)誤，最終引起微生物死亡。13.配制固體培養(yǎng)基時(shí)，瓊脂的添加量一般為（）A.0.5%-1.0%B.1.5%-2.0%C.3.0%-4.0%D.5.0%-6.0%答案：B解析：瓊脂作為凝固劑，濃度過(guò)低（<1.5%）會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基過(guò)軟甚至不凝固；過(guò)高（>2.0%）則質(zhì)地堅(jiān)硬，影響微生物擴(kuò)散，通常選擇1.5%-2.0%。14.血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，壓線菌體的統(tǒng)計(jì)原則是（）A.計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右B.全部計(jì)數(shù)C.計(jì)下不計(jì)上，計(jì)右不計(jì)左D.隨機(jī)計(jì)數(shù)答案：A解析：為避免重復(fù)計(jì)數(shù)，規(guī)定計(jì)數(shù)時(shí)僅統(tǒng)計(jì)壓在方格上邊和左邊線上的菌體，下邊和右邊線上的菌體不統(tǒng)計(jì)（或相反），確保計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。15.以下哪種微生物不能用普通光學(xué)顯微鏡直接觀察到？（）A.大腸桿菌B.金黃色葡萄球菌C.噬菌體D.酵母菌答案：C解析：噬菌體屬于病毒，直徑通常小于0.2μm（普通光學(xué)顯微鏡分辨率約0.2μm），需用電子顯微鏡觀察。二、填空題（每空1分，共20分）1.顯微鏡的分辨率公式為_(kāi)_____，其中關(guān)鍵參數(shù)是______。答案：R=0.61λ/N.A.；數(shù)值孔徑（N.A.）2.高壓蒸汽滅菌的標(biāo)準(zhǔn)條件是______℃、______min、______kPa。答案：121；15-20；103.43.革蘭氏染色的步驟依次為_(kāi)_____、______、______、______。答案：初染（結(jié)晶紫）；媒染（碘液）；脫色（95%乙醇）；復(fù)染（沙黃）4.稀釋涂布平板法中，梯度稀釋的目的是______，最終統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)代表______。答案：將聚集的菌體分散成單個(gè)細(xì)胞；樣品中活菌的數(shù)量5.無(wú)菌操作中，超凈工作臺(tái)的工作原理是通過(guò)______過(guò)濾空氣，形成______環(huán)境。答案：高效空氣過(guò)濾器（HEPA）；無(wú)菌6.細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)包括______、______、______、______（任寫(xiě)四種）。答案：芽孢；鞭毛；莢膜；菌毛7.測(cè)定微生物數(shù)量的方法中，______法可區(qū)分活菌和死菌，______法適用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)性。答案：稀釋涂布平板（或美藍(lán)染色）；懸滴（或壓滴）8.菌種保藏的核心原理是______，常用方法有______、______（任寫(xiě)兩種）。答案：降低微生物的代謝活動(dòng)；冷凍干燥保藏；甘油冷凍保藏三、判斷題（每題1分，共10分，正確打“√”，錯(cuò)誤打“×”）1.光學(xué)顯微鏡的放大倍數(shù)越大，觀察到的視野越亮。（）答案：×解析：放大倍數(shù)越大，物鏡通光孔徑越小，進(jìn)入目鏡的光線越少，視野越暗。2.所有培養(yǎng)基在使用前都需要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。（）答案：×解析：如血清、抗生素等不耐熱成分需用過(guò)濾滅菌，不能高壓蒸汽滅菌。3.革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁較厚，含大量脂多糖。（）答案：×解析：革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁主要成分為肽聚糖（厚），脂多糖是革蘭氏陰性菌外膜的主要成分。4.倒平板時(shí)，培養(yǎng)基溫度需冷卻至50℃左右，避免燙死接種的菌體。（）答案：√解析：50℃接近瓊脂凝固溫度（45℃左右），過(guò)高會(huì)導(dǎo)致冷凝水過(guò)多，過(guò)低則培養(yǎng)基提前凝固無(wú)法倒平。5.血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)結(jié)果包含活菌和死菌，而稀釋涂布平板法僅統(tǒng)計(jì)活菌。（）答案：√解析：血球計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)所有可見(jiàn)菌體（無(wú)論死活），稀釋涂布平板法通過(guò)菌落形成統(tǒng)計(jì)活菌。6.紫外線滅菌適用于空氣、物體表面和液體培養(yǎng)基的滅菌。（）答案：×解析：紫外線穿透力弱，不能穿透液體（如培養(yǎng)基），僅適用于空氣和物體表面消毒。7.觀察放線菌形態(tài)時(shí)，常用插片法培養(yǎng)，目的是保持菌絲自然生長(zhǎng)狀態(tài)。（）答案：√解析：插片法（將蓋玻片斜插入培養(yǎng)基）可使放線菌菌絲沿玻片生長(zhǎng)，便于直接觀察氣生菌絲和孢子絲的形態(tài)。8.微生物生長(zhǎng)曲線中的穩(wěn)定期，菌體數(shù)量達(dá)到最大值，代謝活動(dòng)停止。（）答案：×解析：穩(wěn)定期菌體繁殖數(shù)與死亡數(shù)趨于平衡，數(shù)量穩(wěn)定，但代謝活動(dòng)仍在進(jìn)行（如產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物）。9.分離純化微生物時(shí)，平板劃線法的關(guān)鍵是保證每一區(qū)的接種量逐漸減少。（）答案：√解析：通過(guò)灼燒接種環(huán)后從上次劃線末端取菌，使每一區(qū)的菌體密度降低，最終獲得單菌落。10.保藏的菌種復(fù)蘇時(shí)，需直接轉(zhuǎn)接至新鮮培養(yǎng)基中，無(wú)需活化。（）答案：×解析：長(zhǎng)期保藏的菌種代謝活性低，復(fù)蘇時(shí)需先在適宜條件下活化（如37℃培養(yǎng)數(shù)小時(shí)），再轉(zhuǎn)接至目標(biāo)培養(yǎng)基。四、簡(jiǎn)答題（每題6分，共30分）1.簡(jiǎn)述革蘭氏染色的原理，并說(shuō)明為何革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌會(huì)呈現(xiàn)不同顏色。答案：革蘭氏染色的原理基于兩類細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成的差異。革蘭氏陽(yáng)性菌（G+）細(xì)胞壁較厚（20-80nm），肽聚糖層占比高（約90%），交聯(lián)緊密，脂類含量低（約1%）；革蘭氏陰性菌（G-）細(xì)胞壁較?。?0-15nm），肽聚糖層僅占10%左右，外層有較厚的脂多糖層（約80%）。染色過(guò)程中，結(jié)晶紫與碘形成的復(fù)合物可滲入兩類細(xì)菌細(xì)胞壁；但脫色時(shí)，95%乙醇能溶解G-菌的脂多糖層，破壞外膜，使復(fù)合物被洗脫，經(jīng)沙黃復(fù)染呈紅色；而G+菌的肽聚糖層因乙醇脫水收縮，復(fù)合物被保留，仍呈紫色。2.簡(jiǎn)述無(wú)菌操作的主要要點(diǎn)及其在微生物實(shí)驗(yàn)中的意義。答案：無(wú)菌操作的主要要點(diǎn)包括：（1）操作環(huán)境無(wú)菌：使用前用75%酒精擦拭超凈臺(tái)或接種箱，紫外線照射30min；（2）工具滅菌：接種環(huán)、鑷子等使用前后灼燒滅菌，培養(yǎng)基、試劑需高壓蒸汽滅菌；（3）操作規(guī)范：避免說(shuō)話、走動(dòng)，試管/平皿口靠近火焰（利用上升氣流防止雜菌落入），接種時(shí)動(dòng)作快速準(zhǔn)確；（4）人員防護(hù)：穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套，頭發(fā)扎起。其意義在于防止雜菌污染實(shí)驗(yàn)材料（如培養(yǎng)基、菌種），確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性（如純種分離、計(jì)數(shù)），同時(shí)避免實(shí)驗(yàn)菌（尤其是病原微生物）擴(kuò)散到環(huán)境中，保障人員安全。3.比較稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：稀釋涂布平板法的優(yōu)點(diǎn)：（1）僅統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)量，結(jié)果反映樣品實(shí)際存活微生物數(shù)；（2）可結(jié)合分離純化，獲得單菌落用于后續(xù)研究。缺點(diǎn)：（1）操作繁瑣，需梯度稀釋和培養(yǎng)（1-2天）；（2）不適用于嚴(yán)格厭氧菌或難培養(yǎng)微生物；（3）可能因菌落重疊導(dǎo)致計(jì)數(shù)誤差。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)：（1）操作快速（約10-15min）；（2）可觀察菌體形態(tài)；（3）適用于所有可染色的微生物。缺點(diǎn)：（1）無(wú)法區(qū)分活菌和死菌；（2）不適用于運(yùn)動(dòng)性強(qiáng)的微生物（需固定）；（3）低濃度樣品需濃縮，高濃度樣品需稀釋，操作誤差較大。4.簡(jiǎn)述培養(yǎng)基配制的基本步驟，并說(shuō)明各步驟的注意事項(xiàng)。答案：基本步驟及注意事項(xiàng)：（1）計(jì)算稱量：根據(jù)配方計(jì)算各成分用量，用精密天平稱量（注意藥品純度，如牛肉膏需用稱量紙）；（2）溶解：將成分加入蒸餾水，加熱攪拌溶解（避免局部過(guò)熱導(dǎo)致焦糊，難溶成分可先溶解于少量水）；（3）調(diào)節(jié)pH：用pH試紙或酸度計(jì)檢測(cè)，用1mol/LNaOH或HCl調(diào)節(jié)（注意高溫滅菌后pH會(huì)下降0.1-0.3，可適當(dāng)調(diào)高0.2）；（4）分裝：根據(jù)需求分裝至試管或三角瓶（液體培養(yǎng)基不超過(guò)容器2/3，固體培養(yǎng)基不超過(guò)1/2，避免滅菌時(shí)溢出）；（5）加塞包扎：試管用棉塞（松緊適度，深入試管1/3），三角瓶用8層紗布或?qū)Ｓ猛笟馍w，外裹牛皮紙；（6）滅菌：高壓蒸汽滅菌（121℃，15-20min），含糖培養(yǎng)基需降低溫度（115℃，20min）防止碳化；（7）倒平板（固體培養(yǎng)基）：冷卻至50℃左右，在超凈臺(tái)中操作，培養(yǎng)基厚度約3-5mm，冷凝后倒置（防止冷凝水落入培養(yǎng)基）。5.分析在分離土壤中產(chǎn)淀粉酶微生物時(shí)，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的原因（至少列舉4點(diǎn)）。答案：可能的失敗原因：（1）土壤樣品采集不當(dāng)：如采集深度過(guò)淺（表層雜菌多）或過(guò)深（目標(biāo)菌數(shù)量少），或采集后未及時(shí)處理（菌體死亡）；（2）培養(yǎng)基配制錯(cuò)誤：未以淀粉為唯一碳源（導(dǎo)致雜菌生長(zhǎng)），瓊脂濃度過(guò)低（培養(yǎng)基不凝固），pH調(diào)節(jié)錯(cuò)誤（抑制目標(biāo)菌生長(zhǎng)）；（3）滅菌不徹底：培養(yǎng)基或玻璃器皿未完全滅菌（雜菌污染平板）；（4）稀釋梯度不當(dāng)：稀釋倍數(shù)過(guò)高（平板無(wú)菌落）或過(guò)低（菌落重疊無(wú)法分離）；（5）接種操作污染：超凈臺(tái)未消毒，接種環(huán)未灼燒徹底，導(dǎo)致雜菌混入；（6）顯色方法錯(cuò)誤：未在平板上滴加碘液（無(wú)法判斷是否產(chǎn)淀粉酶）或顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（碘液揮發(fā)，水解圈不明顯）。五、綜合分析題（共10分）某實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行大腸桿菌的革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)，部分學(xué)生的實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)以下異常：（1）陽(yáng)性對(duì)照菌（金黃色葡萄球菌）被染成紅色；（2）陰性對(duì)照菌（大腸桿菌）被染成紫色；（3）同一視野中部分菌體呈紫色，部分呈紅色。請(qǐng)分析可能的原因，