五年（2021-2025）高考真題分類匯編PAGEPAGE1專題11基因工程考點五年考情（2021-2025）命題趨勢考點1基因工程的基本操作程序（5年6考）2021江蘇卷、2022江蘇卷、2023江蘇卷、2024江蘇卷、2025江蘇卷：基因工程的綜合應用1、基因工程的基本操作程序是考察中的重點內容，主要考察基因工程的基本操作程序包括目的基因的篩選和獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定，要對這部分內容進行分析和理解，結合情境進行分析判斷，主要以非選擇題形式考察。2、基因工程的應用部分主要考察基因工程在農牧業(yè)、制藥及環(huán)境等方面的應用、基因診斷和基因治療、基因芯片相關內容，主要考察對基因工程的理解以及在生活中的應用。考點2基因工程的應用（5年1考）2021江蘇卷：基因工程在農牧業(yè)、制藥及環(huán)境等方面的應用考點01基因工程的基本操作程序1．（2025·江蘇·高考真題）（多選）圖示人體正?；駻突變?yōu)橹虏』騛及HindⅢ切割位點。AluⅠ限制酶識別序列及切割位點為，下列相關敘述正確的有（

）A．基因A突變?yōu)閍是一種堿基增添的突變B．用兩種限制酶分別酶切A基因后，形成的末端類型不同C．用兩種限制酶分別酶切a基因后，產生的片段大小一致D．產前診斷時，該致病基因可選用HindⅢ限制酶開展酶切鑒定2．（2025·江蘇·高考真題）川金絲猴是我國特有的珍稀瀕危物種，為了更好地保護這一物種，研究者開展了以下研究。請回答下列問題：(1)川金絲猴警戒行為具有監(jiān)測捕食者和同種個體的功能，這說明生物之間的關系有。川金絲猴的警戒行為依賴于環(huán)境中獲取的信息，信息類型有。川金絲猴根據(jù)這些信息及時作出反應，一方面可以降低被捕食風險，另一方面為爭奪獲得更多機會。(2)川金絲猴以植食為主，消化道中部分微生物直接參與高纖維食物的消化，這些微生物與川金絲猴構成關系。(3)研究者為了進一步研究川金絲猴的食性，采集其糞便樣本，進行DNA提取、擴增，部分實驗過程如下。請完成下表：實驗目的簡要操作步驟釋放DNA在去雜后的樣本中加入裂解液析出DNA離心后?、伲尤胍掖饥谠诔恋砦镏屑尤爰兯當U增DNA將③、引物、樣本DNA、含有Mg2?緩沖液、超純水等加入PCR管中，進行PCR(4)為分析川金絲猴攝食的植物種類，研究者設計一對引物F和R，能同時擴增出不同種植物葉綠體中的rbeL基因片段，是因為引物F和R的堿基能與rbcL基因的保守序列的堿基。用引物F和R對4種植物樣本甲~丁的葉綠體基因組DNA進行擴增測序，結果如圖所示。若對4個樣本的擴增產物進行DNA電泳條帶分析，能檢出的樣本是。研究者用引物F和R對川金絲猴糞便DNA進行擴增并測序，得到的序列有圖中的3種序列，據(jù)此可確定川金絲猴攝食的植物有。若要更準確鑒定出川金絲猴攝食的植物，參照葉綠體基因庫，還需選用的保守序列設計引物，對川金絲猴糞便DNA進行擴增、測序分析。注：“·”表示與植物甲對應位置上相同的堿基：“……”表示省略200個堿基(5)依據(jù)上述研究，保護川金絲猴可采取的措施有（填字母）。a．建立川金絲猴生態(tài)廊道，促進種群間基因交流

b．保護川金絲猴棲息地的植被和它喜食的植物c．需用標記重捕法定期重捕，以精確監(jiān)測種群數(shù)量

d．主要依賴遷地保護，擴大川金絲猴種群數(shù)量3．（2024·江蘇·高考真題）為了高效純化超氧化物歧化酶（SOD），科研人員將ELP50片段插入pET-SOD構建重組質粒pET-SOD-ELP50，以融合表達SOD-ELP50蛋白，過程如圖1。其中，ELP50是由人工合成的DNA片段，序列為：限制酶a識別序列-（GTTCCTGGTGTTGGC）50-限制酶b識別序列，50為重復次數(shù)。請回答下列問題：

(1)步驟①雙酶切時，需使用的限制酶a和限制酶b分別是。(2)步驟②轉化時，科研人員常用處理大腸桿菌，使細胞處于感受態(tài)；轉化后的大腸桿菌采用含有的培養(yǎng)基進行篩選。用PCR技術篩選成功導入pET-SOD-ELP50的大腸桿菌，應選用的一對引物是。(3)步驟③大腸桿菌中RNA聚合酶與結合，驅動轉錄，翻譯SOD-ELP50蛋白。已知蛋白質中氨基酸殘基的平均相對分子質量約為0.11kDa，將表達的蛋白先進行凝膠電泳，然后用SOD抗體進行雜交，顯示的條帶應是（從圖2的“A~D”中選填）。

(4)步驟④為探尋高效純化SOD-ELP50蛋白的方法，科研人員研究了溫度、NaCl對SOD-ELP50蛋白純化效果的影響，部分結果如圖3。

（?。?0℃時，加入NaCl后實驗結果是。（ⅱ）100℃時，導致各組中所有蛋白都沉淀的原因是。（ⅲ）據(jù)圖分析，融合表達SOD-ELP50蛋白的優(yōu)點有。4．（2023·江蘇·高考真題）為了將某納米抗體和綠色熒光蛋白基因融合表達，運用重組酶技術構建質粒，如圖1所示。請回答下列問題：(1)分別進行PCR擴增片段F1與片段F2時，配制的兩個反應體系中不同的有，擴增程序中最主要的不同是。(2)有關基因序列如圖2，引物F2-F、F1-R應在下列選項中選用______。

A．ATGGTGCAACCAB．TGGTTGCACCATC．GACGAGCTGCAGD．CTGCAGCTCGTC(3)將PCR產物片段與線性質粒載體混合后，在重組酶作用下可形成環(huán)化質粒，直接用于轉化細菌。這一過程與傳統(tǒng)重組質粒構建過程相比，無需使用的酶主要有。(4)轉化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選，下列敘述錯誤的有_______。A．稀釋涂布平板需控制每個平板30~300個菌落B．抗性平板上未長出菌落的原因一般是培養(yǎng)基溫度太高C．抗性平板上常常會出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落D．抗性平板上長出的單菌落無需進一步劃線純化(5)為了驗證平板上菌落中的質粒是否符合設計，用不同菌落的質粒為模板，用引物F1-F和F2-R進行了PCR擴增，質粒P1~P4的擴增產物電泳結果如圖3．根據(jù)圖中結果判斷，可以舍棄的質粒有。

(6)對于PCR產物電泳結果符合預期的質粒，通常需進一步通過基因測序確認，原因是。5．（2022·江蘇·高考真題）纖毛是廣泛存在的細胞表面結構，功能異常可引起多種疾病。因此，研究纖毛形成的作用機制具有重要意義。請回答下列問題。(1)纖毛結構如圖1所示，由細胞膜延伸形成的纖毛膜主要由中心體轉變而來，中心體在有絲分裂中的功能是。(2)某病人腎小管上皮細胞纖毛異常，為了分析纖毛相關基因X是否發(fā)生了變異，對基因X進行了PCR擴增與產物測序。從細胞樣品中分離DNA時，可通過交替調節(jié)鹽濃度將與核蛋白結合的DNA分離出來，溶液中添加NaC1至2．0mol/L的目的是。PCR擴增時，需在催化下，在引物端進行DNA鏈的延伸，獲得擴增產物用于測序。(3)為研究蛋白質X在細胞中的定位，構建綠色熒光蛋白GFP與X的融合蛋白，融合蛋白具有綠色熒光，可示其在細胞內位置。將X-GFP基因融合片段M導入如圖Ⅱ所示載體質粒Y，構建Y-M重組質粒（在EcoRⅤ位點插入片段）。請完成下表。分步實驗目標簡易操作、結果、分析PCR鑒定正向重組質粒Y-M（圖Ⅱ中融合片段M中有白色的箭頭，代表方向）①選擇圖Ⅱ引物；②PCR目的產物約為bp。確保M及連接處序列正確，Y-M的連接處上游含有HindIII+EcoRV的識別序列，下游含有EcoRV+BamHI的識別序列③質粒測序，圖Ⅲ中正確的是（選填序列編號）檢測融合蛋白定位④對照質粒Y-GFP（僅表達GFP）與實驗質粒Y-M分別導入細胞，發(fā)現(xiàn)對照組整個細胞均有綠色熒光，而實驗組熒光集中在纖毛基部，說明。(4)為研究另一纖毛病相關基因Z表達的變化，采用熒光定量PCR法檢測健康人與病人基因Z的轉錄水平。采集樣本、提取總RNA，經(jīng)形成cDNA作為模板，PCR擴增結果顯示，在總cDNA模板量相等的條件下，健康人Ct值為15，而病人Ct值為20（Ct值是產物熒光強度達到設定閾值時的PCR循環(huán)數(shù)）。從理論上估算，在PCR擴增20個循環(huán)的產物中，健康人樣品的目的產物大約是病人的倍。6．（2021·江蘇·高考真題）某小組為研究真菌基因m的功能，構建了融合表達蛋白M和tag標簽的質粒，請結合實驗流程回答下列問題：(1)目的基因的擴增①提取真菌細胞，經(jīng)逆轉錄獲得cDNA，進一步獲得基因m片段。②為了獲得融合tag標簽的蛋白M，設計引物P2時，不能包含基因m終止密碼子的編碼序列，否則將導致。③熱啟動PCR可提高擴增效率，方法之一是：先將除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加熱到80℃以上再混入酶，然后直接從94℃開始PCR擴增，下列敘述正確的有A．Taq酶最適催化溫度范圍為50～60℃B．與常規(guī)PCR相比，熱啟動PCR可減少反應起始時引物錯配形成的產物C．兩條子鏈的合成一定都是從5′端向3′端延伸D．PCR產物DNA堿基序列的特異性體現(xiàn)了Taq酶的特異性(2)重組質粒的構建①將SmaI切開的載體A與添加同源序列的m混合，用特定DNA酶處理形成黏性末端，然后降溫以促進，形成A-m結合體。將A-m結合體導入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的DNA聚合酶及酶等，完成質粒的環(huán)化。②若正確構建的重組質粒A—m仍能被SmaI切開，則SmaI的酶切位點可能在。(3)融合蛋白的表達①用含有尿嘧啶的培養(yǎng)基培養(yǎng)URA3基因缺失型酵母，將其作為受體菌，導入質粒A-m，然后涂布于無尿嘧啶的培養(yǎng)基上，篩選獲得目的菌株，其機理是。②若通過抗原一抗體雜交實驗檢測到酵母蛋白中含tag標簽，說明，后續(xù)實驗可借助tag標簽進行蛋白M的分離純化?？键c02基因工程的應用1．（2021·江蘇·高考真題）下圖是剔除轉基因植物中標記基因的一種策略，下列相關敘述錯誤的是（

）A．分別帶有目的基因和標記基因的兩個質粒，都帶有T-DNA序列B．該方法建立在高轉化頻率基礎上，標記基因和目的基因須轉到不同染色體上C．若要獲得除標記基因的植株，轉化植株必須經(jīng)過有性繁殖階段遺傳重組D．獲得的無篩選標記轉基因植株發(fā)生了染色體結構變異一、單選題1．（2025·江蘇淮安·二模）AI技術通過大數(shù)據(jù)分析、機器學習、深度學習等方法，為生物醫(yī)藥研究、藥物開發(fā)、臨床診斷和治療等帶來革命性的變化。下列關于AI技術在生物醫(yī)藥領域的應用，下列敘述錯誤的是（）A．AI技術對大量的蛋白質數(shù)據(jù)進行分析，能夠預測患者體內某些蛋白質的三維結構以便設計新藥物，該過程屬于蛋白質工程技術B．AI技術通過智能穿戴設備和移動應用程序可實時監(jiān)測患者的生理參數(shù)，預測健康風險，并提供相應的診斷和治療建議C．AI技術對大量的基因組數(shù)據(jù)進行處理和分析，可以識別疾病相關的基因突變，為精準醫(yī)療提供支持D．AI技術設計的某種蛋白質的氨基酸序列推導出的對應基因序列不唯一，且基因序列中不包含啟動子和終止子2．（2025·江蘇南通·二模）南通某生物興趣小組的同學用豬肝進行DNA的粗提取與鑒定實驗，主要實驗流程如下圖。相關敘述正確的是（

）A．過程①向豬肝組織塊中加入研磨液進行充分研磨B．過程②過濾后棄去濾液，取紗布上的絲狀物C．過程⑤加入酒精后，也可將溶液倒入離心管離心后取上清液D．過程⑥中A、B試管均會出現(xiàn)藍色，但B試管中藍色更深3．（2025·江蘇蘇州·三模）蛋白質表面含有很多極性基團，易溶于苯酚，可采用苯酚/氯仿法分離蛋白質和DNA。圖示提取純化草莓DNA的具體過程。下列相關敘述錯誤的是（

）A．在細胞裂解環(huán)節(jié)需對樣本進行充分研磨以釋放更多的DNAB．轉移DNA時需吸取水相溶液，并可重復上一步驟進一步純化C．加入預冷的體積分數(shù)95%的乙醇后離心，DNA分布于沉淀物中D．提取出的DNA復溶后加入適量的二苯胺試劑，即可呈現(xiàn)出藍色4．（2025·江蘇南京·二模）生物技術與工程學相結合，可研究、設計和加工生產各種生物工程產品。下列敘述錯誤的是（）A．二倍體植株的花藥離體培養(yǎng)得到的單倍體植株可用于基因突變的研究B．由iPS細胞產生的特定細胞，可以在新藥的測試中發(fā)揮重要作用C．將含指示劑的凝膠載樣緩沖液與PCR產物混合后滴入加樣孔指示電泳進程D．大量制備一種單克隆抗體時需要用大量的B細胞和骨髓瘤細胞進行融合5．（2025·江蘇揚州·模擬預測）關于“DNA粗提取與鑒定”和“DNA片段的擴增及電泳鑒定”實驗，下列說法正確的是（）A．DNA粗提取時加入冷酒精出現(xiàn)白色絲狀物后可以用離心法收集B．PCR緩沖液中需保持較高濃度的Mg2+，以確保DNA聚合酶最佳活性C．將白色絲狀物加入二苯胺試劑，沸水浴待冷卻后觀察顏色變化D．DNA電泳指示劑需要加入到稍冷卻的瓊脂糖溶液中6．（2025·江蘇·一模）關于"瓊脂糖凝膠電泳"實驗，下列敘述正確的是（

）A．根據(jù)待分離DNA片段的大小，需用無菌水配制0.8%～1.2%的瓊脂糖溶液B．向瓊脂糖溶液中加入適量的核酸染料后，需在沸水浴內加熱至瓊脂糖熔化C．將PCR產物和電泳緩沖液混合后，需用微量移液器將混合液緩慢注入加樣孔D．待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時，需及時斷電并取出凝膠置于紫外燈下觀察7．（2025·江蘇鹽城·二模）下列有關“DNA的提取與鑒定”“利用PCR擴增DNA片段及電泳鑒定”實驗的敘述，錯誤的是（

）A．洋蔥切碎加研磨液研磨過濾后，濾液放置4℃冰箱中靜置，DNA存在于上清液中B．將絲狀物溶于體積分數(shù)95%的酒精，再加入二苯胺試劑在沸水浴中進行DNA鑒定C．PCR擴增反應體系中dNTP既可以為擴增提供原料，也可以為子鏈的合成提供能量D．PCR擴增后，瓊脂糖凝膠電泳鑒定結果不止一條條帶，可能是引物特異性不強導致8．（2025·江蘇·三模）瓊脂糖凝膠電泳通常用于PCR產物的鑒定，相關敘述正確的是（

）A．DNA分子所帶電荷越多，在凝膠中的遷移速率越快B．用微量移液器將PCR產物與核酸染料的混合物緩慢注入凝膠的加樣孔內C．電場強度增大，DNA在凝膠中的遷移速率加快，電泳時的電壓一般為1~5VD．PCR非特異性擴增產物電泳、樣品上樣量過多電泳均會導致電泳條帶模糊9．（2025·江蘇南京·二模）關于“DNA粗提取與鑒定”、“瓊脂糖凝膠電泳”、“PCR擴增”實驗，下列說法正確的是（）A．將洋蔥切碎、研磨、過濾，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，取沉淀物再溶解B．在DNA鑒定和PCR擴增過程中，DNA雙螺旋結構都會改變C．凝膠載樣緩沖液中加入的核酸染料能與DNA分子結合，便于在紫外燈下觀察D．a個DNA模板分子完成第20輪循環(huán)需要a×（220-2）個引物二、多選題10．（2025·江蘇鹽城·模擬預測）單細胞RNA測序是一種在單細胞水平上利用RNA測序對特細胞群體進行基因表達譜定量的高通量實驗技術。待測組織經(jīng)過單細胞分離、裂解、反轉錄、cDNA擴增、文庫構建、測序和計算機分析，便可獲得多個細胞的基因表達譜。下列相關敘述正確的有（

）A．將單個細胞從組織中分離出來可以利用有限稀釋法或顯微操作法B．實驗室裂解細胞后提取的RNA，需要利用特定的技術富集mRNAC．通過反轉錄、cDNA擴增以及構建基因組文庫等技術可確定單細胞中基因表達情況D．相比于多細胞混合測序，該技術可以揭示罕見的細胞類型11．（2025·江蘇·二模）與DNA相關的實驗，下列敘述正確的有（

）A．利用DNA在酒精中溶解度較大的特性提取DNAB．粗提取的DNA中可能含有蛋白質、脂質等雜質C．用二苯胺試劑鑒定DNA時，沸水浴加熱后呈藍色D．PCR擴增產物通常利用瓊脂糖凝膠電泳技術進行鑒定12．（2025·江蘇南通·模擬預測）下列關于“提取”和“分離”的敘述，正確的是（）A．提取葉綠素可以用無水乙醇、丙酮或無水乙醇與丙酮的混合物B．提取DNA需同時兼顧DNA的完整性、純度和含量C．光合色素用不同的層析液可能會得到不同的色素排列順序D．DNA和蛋白質分離常采用瓊脂糖凝膠電泳，但用的標準參照物是統(tǒng)一的13．（2025·江蘇·模擬預測）人鼠嵌合抗體是鼠源抗體的可變區(qū)（V區(qū)）與人源抗體的恒定區(qū)（C區(qū)）結合而成的抗體。下圖1是抗體的示意圖（H代表重鏈，L代表輕鏈），圖2是制備抗腫瘤的人鼠嵌合抗體的部分過程。相關敘述正確的是（）A．過程①從經(jīng)免疫處理的小鼠脾中獲取的B淋巴細胞都能產生特定抗體B．過程③獲得的VL、VH基因堿基序列與B淋巴細胞中的VL、VH基因堿基序列不同C．過程④構建人鼠重組基因，其表達產物在人體內的免疫原性比鼠源性抗體低D．過程⑥常采用農桿菌轉化法將基因嵌合表達載體轉入受體細胞14．（2025·江蘇鹽城·模擬預測）如圖表示花粉管通道法介導植物基因轉移。下列說法正確的是（）A．花粉管通道法可適用獲得轉基因擾蟲棉花B．外源DNA不需要構建基因表達載體，就能借助花粉管通道進入受體細胞并表達C．必須在雌蕊成熟時才能進行圖中所示的處理方法D．相比于農桿菌轉化法，花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一操作15．（2025·江蘇淮安·二模）關于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”實驗，下列說法正確的是（）A．根據(jù)DNA片段大小配置一定質量分數(shù)的瓊脂糖溶液以便分離DNA分子B．瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液中含指示劑，其可以在紫外燈下被檢測出來C．實驗中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌處理D．擴增得到的PCR產物與凝膠載樣緩沖液混勻后需緩慢注入加樣孔以防樣品飄散16．（2025·江蘇常州·三模）如圖表示花粉管通道法介導植物基因轉移。下列說法正確的是（）A．花粉管通道法可適用獲得轉基因抗蟲棉花B．相比于農桿菌轉化法，花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一操作C．必須在雌蕊成熟時才能進行圖中所示的處理方法D．外源DNA不需要構建基因表達載體，就能借助花粉管通道進入受體細胞并表達三、解答題17．（2025·江蘇·三模）病毒誘導的基因沉默技術（VIGS）是利用病毒載體攜帶目的基因侵染植物細胞，在植物細胞中復制產生dsRNA（雙鏈RNA），激活植物自身的基因沉默機制，降解植物目標mRNA的技術。葉用萵苣生長到一定時期極易抽薹（莖迅速生長），從而導致萵苣減質減產。研究表明LsMET1基因（甲基轉移酶1基因）促進葉用萵苣抽薹，研究人員利用VIGS嘗試使LsMET1基因沉默來驗證該觀點，主要操作如圖。請回答下列問題。(1)過程①反應體系中加入的物質除引物、原料、模板外，還有，下列四種引物中用于過程①的是。A．5'GAATTCATGA………3'

B．5'CTTAAGTTAC………3'C．5'CTGCAGTAGA………3'

D．5'GACGTCATCT………3'(2)過程②將環(huán)狀DNA擴增為線性DNA的目的是。(3)在TRV1、TRV2質粒中插入雙啟動子目的是。過程④將TRV1質粒和重組質粒導入農桿菌后，在培養(yǎng)基中應加入進行篩選。(4)導入植物細胞的CP-LsMET1-RZ基因轉錄后在催化下，被剪切為CPRNA、LsMET1RNA、RZRNA。LsMET1RNA誘導內源LsMET1基因沉默的機制如圖2，AGO1蛋白選擇性降解3'端穩(wěn)定性較低的一條鏈。據(jù)圖分析，向農桿菌中導入TRV1質粒的目的是，激活的RISC有的能誘導LsMET1mRNA降解，有的不能誘導LsMET1mRNA降解，其原因是。(5)研究人員測定了LsMET1表達量和抽墓（莖生長）狀況，結果如圖3。該實驗結果與預期是否一致，并說明理由。。18．（2025·江蘇蘇州·三模）我國科學家嘗試構建地衣芽孢桿菌基因編輯系統(tǒng)，并通過將外源vgb基因定向插入19T-pflB質粒中對該系統(tǒng)進行初步驗證，主要過程如圖1。請回答下列問題。(1)步驟①利用已構建的質粒19T-pflB，通過反向PCR獲得左右同源片段，除圖中已有的組分外，還應添加緩沖液（Mg2+）和等。下表為pflB部分基因序列和設計的相關引物，可選用的引物是（填編號）。根據(jù)不同的引物，需要重新設置PCR程序中的。DNA序列（虛線處省略了部分核苷酸序列）pflB基因5′-TCGCACACCTGACTACAATT……TCGCAATGGCAATCGGCAAACT-3′3′-AGCGTGTGGACTGATGTTAA……AGCGTTACCGTTAGCCGTTTGA-5'PCR引物①5'ACGGGATCCTTGTAGTCAGGTGTGCGA3'②5'ACGGGATCCTTTGCCGATTGCCATTGC3'③5'AACTGCAGTCGCACACCTGACTACAA3'④5'AACTGCAGGCAATGGCAATCGGCAAA3'注：下劃線標注的序列為限制酶識別序列。(2)步驟②雙酶切時，需使用的限制酶a和限制酶b分別是和，影響DNA連接酶反應速率的因素有反應體系的溫度、pH、酶濃度和等。(3)圖2是質粒PNZTK-PFTF-vgb轉入地衣芽孢桿菌后，將目的基因插入基因組的過程示意圖。將受體菌接種在含四環(huán)素和（含/不含）卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，因沒有選擇壓力，會導致發(fā)生雙交換的質粒丟失。挑取一定數(shù)量的單菌落，接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上，并一一對應接種到含卡那霉素的培養(yǎng)基上，實驗結果如圖3所示。其中在兩種培養(yǎng)基均能生長的菌株是只發(fā)生單交換或的受體菌。(4)科學家通過分析vgb基因在重組菌株及原始菌株中的表達水平驗證該基因編輯系統(tǒng)。分析時需要以rpsE基因（核糖體S5蛋白基因）為參照，該基因表達的特點是，可采用的方法檢測基因表達的產物量。19．（2025·江蘇·二模）人類血液中的纖維蛋白原是血液凝固的主要蛋白質成分，由Aα、Bβ和γ三條肽鏈組成，重組人纖維蛋白原（rFib）的開發(fā)有望消除血源性感染的風險。某科研團隊欲通過培育轉基因蠶并利用蠶繭高效生產人纖維蛋白原，流程如下圖。請回答下列問題。

(1)纖維蛋白原的Aα、Bβ和γ鏈首先在上合成，然后Aα和γ鏈在內質網(wǎng)中與Bβ鏈結合形成的六聚體Aα2Bβ2γ2，最后在中加工修飾并分泌到細胞外。(2)選取從人類肝臟的cDNA文庫擴增目的基因的原因是；步驟①PCR條件如下：94℃，5min→25個循環(huán)（變性、退火、延伸）→72℃，7min，其中退火溫度設置需參考引物中堿基的，延伸階段使用ExTaqDNA聚合酶，該酶的作用有和在擴增產物的3'端額外添加上一個堿基“A”。(3)步驟②中，將Fib-Bβ插入到（填“3'”或“5'”）端含有堿基T的克隆載體中，將克隆后的Fib-Bβ用限制酶處理后通過DNA連接酶連接到表達載體上完成載體1的構建。載體2采用類似方法構建。(4)步驟③分別將載體1和載體2注入胚盤期蠶卵中，在熒光體視顯微鏡下觀察在眼部的表達，顯示陽性表達的即為轉基因Bβ-蠶和轉基因Aα/γ-蠶。對轉基因蠶進行DNA雜交分析表明，Bβ-蠶和Aα/γ-蠶均存在多個轉基因品系，這可能與插入的目的基因數(shù)量和有關。(5)絲膠蛋白啟動子將重組纖維蛋白原鏈的cDNA定向表達在絲腺細胞中，然后依靠吐絲分泌到蠶繭中。科研人員對絲腺細胞中的mRNA進行檢測并對蠶繭中的蛋白質進行分析，結果如下表。組別mRNA蛋白質電泳條帶Aα鏈mRNABβ鏈mRNAγ鏈mRNAAαBβγ非轉基因蠶（對照組）轉基因Bβ-蠶-+轉基因Aα/γ-蠶+-++-+轉基因Aα/Bβ/γ-蠶++++++注：“+”表示有，“-”表示無根據(jù)實驗結果推測，可能是Bβ鏈分泌到蠶繭中的必要條件之一。專題11基因工程考點五年考情（2021-2025）命題趨勢考點1基因工程的基本操作程序（5年6考）2021江蘇卷、2022江蘇卷、2023江蘇卷、2024江蘇卷、2025江蘇卷：基因工程的綜合應用1、基因工程的基本操作程序是考察中的重點內容，主要考察基因工程的基本操作程序包括目的基因的篩選和獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定，要對這部分內容進行分析和理解，結合情境進行分析判斷，主要以非選擇題形式考察。2、基因工程的應用部分主要考察基因工程在農牧業(yè)、制藥及環(huán)境等方面的應用、基因診斷和基因治療、基因芯片相關內容，主要考察對基因工程的理解以及在生活中的應用?？键c2基因工程的應用（5年1考）2021江蘇卷：基因工程在農牧業(yè)、制藥及環(huán)境等方面的應用考點01基因工程的基本操作程序1．（2025·江蘇·高考真題）（多選）圖示人體正?；駻突變?yōu)橹虏』騛及HindⅢ切割位點。AluⅠ限制酶識別序列及切割位點為，下列相關敘述正確的有（

）A．基因A突變?yōu)閍是一種堿基增添的突變B．用兩種限制酶分別酶切A基因后，形成的末端類型不同C．用兩種限制酶分別酶切a基因后，產生的片段大小一致D．產前診斷時，該致病基因可選用HindⅢ限制酶開展酶切鑒定2．（2025·江蘇·高考真題）川金絲猴是我國特有的珍稀瀕危物種，為了更好地保護這一物種，研究者開展了以下研究。請回答下列問題：(1)川金絲猴警戒行為具有監(jiān)測捕食者和同種個體的功能，這說明生物之間的關系有。川金絲猴的警戒行為依賴于環(huán)境中獲取的信息，信息類型有。川金絲猴根據(jù)這些信息及時作出反應，一方面可以降低被捕食風險，另一方面為爭奪獲得更多機會。(2)川金絲猴以植食為主，消化道中部分微生物直接參與高纖維食物的消化，這些微生物與川金絲猴構成關系。(3)研究者為了進一步研究川金絲猴的食性，采集其糞便樣本，進行DNA提取、擴增，部分實驗過程如下。請完成下表：實驗目的簡要操作步驟釋放DNA在去雜后的樣本中加入裂解液析出DNA離心后取①，加入乙醇②在沉淀物中加入純水擴增DNA將③、引物、樣本DNA、含有Mg2?緩沖液、超純水等加入PCR管中，進行PCR(4)為分析川金絲猴攝食的植物種類，研究者設計一對引物F和R，能同時擴增出不同種植物葉綠體中的rbeL基因片段，是因為引物F和R的堿基能與rbcL基因的保守序列的堿基。用引物F和R對4種植物樣本甲~丁的葉綠體基因組DNA進行擴增測序，結果如圖所示。若對4個樣本的擴增產物進行DNA電泳條帶分析，能檢出的樣本是。研究者用引物F和R對川金絲猴糞便DNA進行擴增并測序，得到的序列有圖中的3種序列，據(jù)此可確定川金絲猴攝食的植物有。若要更準確鑒定出川金絲猴攝食的植物，參照葉綠體基因庫，還需選用的保守序列設計引物，對川金絲猴糞便DNA進行擴增、測序分析。注：“·”表示與植物甲對應位置上相同的堿基：“……”表示省略200個堿基(5)依據(jù)上述研究，保護川金絲猴可采取的措施有（填字母）。a．建立川金絲猴生態(tài)廊道，促進種群間基因交流

b．保護川金絲猴棲息地的植被和它喜食的植物c．需用標記重捕法定期重捕，以精確監(jiān)測種群數(shù)量

d．主要依賴遷地保護，擴大川金絲猴種群數(shù)量3．（2024·江蘇·高考真題）為了高效純化超氧化物歧化酶（SOD），科研人員將ELP50片段插入pET-SOD構建重組質粒pET-SOD-ELP50，以融合表達SOD-ELP50蛋白，過程如圖1。其中，ELP50是由人工合成的DNA片段，序列為：限制酶a識別序列-（GTTCCTGGTGTTGGC）50-限制酶b識別序列，50為重復次數(shù)。請回答下列問題：

(1)步驟①雙酶切時，需使用的限制酶a和限制酶b分別是。(2)步驟②轉化時，科研人員常用處理大腸桿菌，使細胞處于感受態(tài)；轉化后的大腸桿菌采用含有的培養(yǎng)基進行篩選。用PCR技術篩選成功導入pET-SOD-ELP50的大腸桿菌，應選用的一對引物是。(3)步驟③大腸桿菌中RNA聚合酶與結合，驅動轉錄，翻譯SOD-ELP50蛋白。已知蛋白質中氨基酸殘基的平均相對分子質量約為0.11kDa，將表達的蛋白先進行凝膠電泳，然后用SOD抗體進行雜交，顯示的條帶應是（從圖2的“A~D”中選填）。

(4)步驟④為探尋高效純化SOD-ELP50蛋白的方法，科研人員研究了溫度、NaCl對SOD-ELP50蛋白純化效果的影響，部分結果如圖3。

（?。?0℃時，加入NaCl后實驗結果是。（ⅱ）100℃時，導致各組中所有蛋白都沉淀的原因是。（ⅲ）據(jù)圖分析，融合表達SOD-ELP50蛋白的優(yōu)點有。4．（2023·江蘇·高考真題）為了將某納米抗體和綠色熒光蛋白基因融合表達，運用重組酶技術構建質粒，如圖1所示。請回答下列問題：(1)分別進行PCR擴增片段F1與片段F2時，配制的兩個反應體系中不同的有，擴增程序中最主要的不同是。(2)有關基因序列如圖2，引物F2-F、F1-R應在下列選項中選用______。

A．ATGGTGCAACCAB．TGGTTGCACCATC．GACGAGCTGCAGD．CTGCAGCTCGTC(3)將PCR產物片段與線性質粒載體混合后，在重組酶作用下可形成環(huán)化質粒，直接用于轉化細菌。這一過程與傳統(tǒng)重組質粒構建過程相比，無需使用的酶主要有。(4)轉化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選，下列敘述錯誤的有_______。A．稀釋涂布平板需控制每個平板30~300個菌落B．抗性平板上未長出菌落的原因一般是培養(yǎng)基溫度太高C．抗性平板上常常會出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落D．抗性平板上長出的單菌落無需進一步劃線純化(5)為了驗證平板上菌落中的質粒是否符合設計，用不同菌落的質粒為模板，用引物F1-F和F2-R進行了PCR擴增，質粒P1~P4的擴增產物電泳結果如圖3．根據(jù)圖中結果判斷，可以舍棄的質粒有。

(6)對于PCR產物電泳結果符合預期的質粒，通常需進一步通過基因測序確認，原因是。5．（2022·江蘇·高考真題）纖毛是廣泛存在的細胞表面結構，功能異常可引起多種疾病。因此，研究纖毛形成的作用機制具有重要意義。請回答下列問題。(1)纖毛結構如圖1所示，由細胞膜延伸形成的纖毛膜主要由中心體轉變而來，中心體在有絲分裂中的功能是。(2)某病人腎小管上皮細胞纖毛異常，為了分析纖毛相關基因X是否發(fā)生了變異，對基因X進行了PCR擴增與產物測序。從細胞樣品中分離DNA時，可通過交替調節(jié)鹽濃度將與核蛋白結合的DNA分離出來，溶液中添加NaC1至2．0mol/L的目的是。PCR擴增時，需在催化下，在引物端進行DNA鏈的延伸，獲得擴增產物用于測序。(3)為研究蛋白質X在細胞中的定位，構建綠色熒光蛋白GFP與X的融合蛋白，融合蛋白具有綠色熒光，可示其在細胞內位置。將X-GFP基因融合片段M導入如圖Ⅱ所示載體質粒Y，構建Y-M重組質粒（在EcoRⅤ位點插入片段）。請完成下表。分步實驗目標簡易操作、結果、分析PCR鑒定正向重組質粒Y-M（圖Ⅱ中融合片段M中有白色的箭頭，代表方向）①選擇圖Ⅱ引物；②PCR目的產物約為bp。確保M及連接處序列正確，Y-M的連接處上游含有HindIII+EcoRV的識別序列，下游含有EcoRV+BamHI的識別序列③質粒測序，圖Ⅲ中正確的是（選填序列編號）檢測融合蛋白定位④對照質粒Y-GFP（僅表達GFP）與實驗質粒Y-M分別導入細胞，發(fā)現(xiàn)對照組整個細胞均有綠色熒光，而實驗組熒光集中在纖毛基部，說明。(4)為研究另一纖毛病相關基因Z表達的變化，采用熒光定量PCR法檢測健康人與病人基因Z的轉錄水平。采集樣本、提取總RNA，經(jīng)形成cDNA作為模板，PCR擴增結果顯示，在總cDNA模板量相等的條件下，健康人Ct值為15，而病人Ct值為20（Ct值是產物熒光強度達到設定閾值時的PCR循環(huán)數(shù)）。從理論上估算，在PCR擴增20個循環(huán)的產物中，健康人樣品的目的產物大約是病人的倍。6．（2021·江蘇·高考真題）某小組為研究真菌基因m的功能，構建了融合表達蛋白M和tag標簽的質粒，請結合實驗流程回答下列問題：(1)目的基因的擴增①提取真菌細胞，經(jīng)逆轉錄獲得cDNA，進一步獲得基因m片段。②為了獲得融合tag標簽的蛋白M，設計引物P2時，不能包含基因m終止密碼子的編碼序列，否則將導致。③熱啟動PCR可提高擴增效率，方法之一是：先將除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加熱到80℃以上再混入酶，然后直接從94℃開始PCR擴增，下列敘述正確的有A．Taq酶最適催化溫度范圍為50～60℃B．與常規(guī)PCR相比，熱啟動PCR可減少反應起始時引物錯配形成的產物C．兩條子鏈的合成一定都是從5′端向3′端延伸D．PCR產物DNA堿基序列的特異性體現(xiàn)了Taq酶的特異性(2)重組質粒的構建①將SmaI切開的載體A與添加同源序列的m混合，用特定DNA酶處理形成黏性末端，然后降溫以促進，形成A-m結合體。將A-m結合體導入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的DNA聚合酶及酶等，完成質粒的環(huán)化。②若正確構建的重組質粒A—m仍能被SmaI切開，則SmaI的酶切位點可能在。(3)融合蛋白的表達①用含有尿嘧啶的培養(yǎng)基培養(yǎng)URA3基因缺失型酵母，將其作為受體菌，導入質粒A-m，然后涂布于無尿嘧啶的培養(yǎng)基上，篩選獲得目的菌株，其機理是。②若通過抗原一抗體雜交實驗檢測到酵母蛋白中含tag標簽，說明，后續(xù)實驗可借助tag標簽進行蛋白M的分離純化?？键c02基因工程的應用1．（2021·江蘇·高考真題）下圖是剔除轉基因植物中標記基因的一種策略，下列相關敘述錯誤的是（

）A．分別帶有目的基因和標記基因的兩個質粒，都帶有T-DNA序列B．該方法建立在高轉化頻率基礎上，標記基因和目的基因須轉到不同染色體上C．若要獲得除標記基因的植株，轉化植株必須經(jīng)過有性繁殖階段遺傳重組D．獲得的無篩選標記轉基因植株發(fā)生了染色體結構變異一、單選題1．（2025·江蘇淮安·二模）AI技術通過大數(shù)據(jù)分析、機器學習、深度學習等方法，為生物醫(yī)藥研究、藥物開發(fā)、臨床診斷和治療等帶來革命性的變化。下列關于AI技術在生物醫(yī)藥領域的應用，下列敘述錯誤的是（）A．AI技術對大量的蛋白質數(shù)據(jù)進行分析，能夠預測患者體內某些蛋白質的三維結構以便設計新藥物，該過程屬于蛋白質工程技術B．AI技術通過智能穿戴設備和移動應用程序可實時監(jiān)測患者的生理參數(shù)，預測健康風險，并提供相應的診斷和治療建議C．AI技術對大量的基因組數(shù)據(jù)進行處理和分析，可以識別疾病相關的基因突變，為精準醫(yī)療提供支持D．AI技術設計的某種蛋白質的氨基酸序列推導出的對應基因序列不唯一，且基因序列中不包含啟動子和終止子2．（2025·江蘇南通·二模）南通某生物興趣小組的同學用豬肝進行DNA的粗提取與鑒定實驗，主要實驗流程如下圖。相關敘述正確的是（

）A．過程①向豬肝組織塊中加入研磨液進行充分研磨B．過程②過濾后棄去濾液，取紗布上的絲狀物C．過程⑤加入酒精后，也可將溶液倒入離心管離心后取上清液D．過程⑥中A、B試管均會出現(xiàn)藍色，但B試管中藍色更深3．（2025·江蘇蘇州·三模）蛋白質表面含有很多極性基團，易溶于苯酚，可采用苯酚/氯仿法分離蛋白質和DNA。圖示提取純化草莓DNA的具體過程。下列相關敘述錯誤的是（

）A．在細胞裂解環(huán)節(jié)需對樣本進行充分研磨以釋放更多的DNAB．轉移DNA時需吸取水相溶液，并可重復上一步驟進一步純化C．加入預冷的體積分數(shù)95%的乙醇后離心，DNA分布于沉淀物中D．提取出的DNA復溶后加入適量的二苯胺試劑，即可呈現(xiàn)出藍色4．（2025·江蘇南京·二模）生物技術與工程學相結合，可研究、設計和加工生產各種生物工程產品。下列敘述錯誤的是（）A．二倍體植株的花藥離體培養(yǎng)得到的單倍體植株可用于基因突變的研究B．由iPS細胞產生的特定細胞，可以在新藥的測試中發(fā)揮重要作用C．將含指示劑的凝膠載樣緩沖液與PCR產物混合后滴入加樣孔指示電泳進程D．大量制備一種單克隆抗體時需要用大量的B細胞和骨髓瘤細胞進行融合5．（2025·江蘇揚州·模擬預測）關于“DNA粗提取與鑒定”和“DNA片段的擴增及電泳鑒定”實驗，下列說法正確的是（）A．DNA粗提取時加入冷酒精出現(xiàn)白色絲狀物后可以用離心法收集B．PCR緩沖液中需保持較高濃度的Mg2+，以確保DNA聚合酶最佳活性C．將白色絲狀物加入二苯胺試劑，沸水浴待冷卻后觀察顏色變化D．DNA電泳指示劑需要加入到稍冷卻的瓊脂糖溶液中6．（2025·江蘇·一模）關于"瓊脂糖凝膠電泳"實驗，下列敘述正確的是（

）A．根據(jù)待分離DNA片段的大小，需用無菌水配制0.8%～1.2%的瓊脂糖溶液B．向瓊脂糖溶液中加入適量的核酸染料后，需在沸水浴內加熱至瓊脂糖熔化C．將PCR產物和電泳緩沖液混合后，需用微量移液器將混合液緩慢注入加樣孔D．待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時，需及時斷電并取出凝膠置于紫外燈下觀察7．（2025·江蘇鹽城·二模）下列有關“DNA的提取與鑒定”“利用PCR擴增DNA片段及電泳鑒定”實驗的敘述，錯誤的是（

）A．洋蔥切碎加研磨液研磨過濾后，濾液放置4℃冰箱中靜置，DNA存在于上清液中B．將絲狀物溶于體積分數(shù)95%的酒精，再加入二苯胺試劑在沸水浴中進行DNA鑒定C．PCR擴增反應體系中dNTP既可以為擴增提供原料，也可以為子鏈的合成提供能量D．PCR擴增后，瓊脂糖凝膠電泳鑒定結果不止一條條帶，可能是引物特異性不強導致8．（2025·江蘇·三模）瓊脂糖凝膠電泳通常用于PCR產物的鑒定，相關敘述正確的是（

）A．DNA分子所帶電荷越多，在凝膠中的遷移速率越快B．用微量移液器將PCR產物與核酸染料的混合物緩慢注入凝膠的加樣孔內C．電場強度增大，DNA在凝膠中的遷移速率加快，電泳時的電壓一般為1~5VD．PCR非特異性擴增產物電泳、樣品上樣量過多電泳均會導致電泳條帶模糊9．（2025·江蘇南京·二模）關于“DNA粗提取與鑒定”、“瓊脂糖凝膠電泳”、“PCR擴增”實驗，下列說法正確的是（）A．將洋蔥切碎、研磨、過濾，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，取沉淀物再溶解B．在DNA鑒定和PCR擴增過程中，DNA雙螺旋結構都會改變C．凝膠載樣緩沖液中加入的核酸染料能與DNA分子結合，便于在紫外燈下觀察D．a個DNA模板分子完成第20輪循環(huán)需要a×（220-2）個引物二、多選題10．（2025·江蘇鹽城·模擬預測）單細胞RNA測序是一種在單細胞水平上利用RNA測序對特細胞群體進行基因表達譜定量的高通量實驗技術。待測組織經(jīng)過單細胞分離、裂解、反轉錄、cDNA擴增、文庫構建、測序和計算機分析，便可獲得多個細胞的基因表達譜。下列相關敘述正確的有（

）A．將單個細胞從組織中分離出來可以利用有限稀釋法或顯微操作法B．實驗室裂解細胞后提取的RNA，需要利用特定的技術富集mRNAC．通過反轉錄、cDNA擴增以及構建基因組文庫等技術可確定單細胞中基因表達情況D．相比于多細胞混合測序，該技術可以揭示罕見的細胞類型11．（2025·江蘇·二模）與DNA相關的實驗，下列敘述正確的有（

）A．利用DNA在酒精中溶解度較大的特性提取DNAB．粗提取的DNA中可能含有蛋白質、脂質等雜質C．用二苯胺試劑鑒定DNA時，沸水浴加熱后呈藍色D．PCR擴增產物通常利用瓊脂糖凝膠電泳技術進行鑒定12．（2025·江蘇南通·模擬預測）下列關于“提取”和“分離”的敘述，正確的是（）A．提取葉綠素可以用無水乙醇、丙酮或無水乙醇與丙酮的混合物B．提取DNA需同時兼顧DNA的完整性、純度和含量C．光合色素用不同的層析液可能會得到不同的色素排列順序D．DNA和蛋白質分離常采用瓊脂糖凝膠電泳，但用的標準參照物是統(tǒng)一的13．（2025·江蘇·模擬預測）人鼠嵌合抗體是鼠源抗體的可變區(qū)（V區(qū)）與人源抗體的恒定區(qū)（C區(qū)）結合而成的抗體。下圖1是抗體的示意圖（H代表重鏈，L代表輕鏈），圖2是制備抗腫瘤的人鼠嵌合抗體的部分過程。相關敘述正確的是（）A．過程①從經(jīng)免疫處理的小鼠脾中獲取的B淋巴細胞都能產生特定抗體B．過程③獲得的VL、VH基因堿基序列與B淋巴細胞中的VL、VH基因堿基序列不同C．過程④構建人鼠重組基因，其表達產物在人體內的免疫原性比鼠源性抗體低D．過程⑥常采用農桿菌轉化法將基因嵌合表達載體轉入受體細胞14．（2025·江蘇鹽城·模擬預測）如圖表示花粉管通道法介導植物基因轉移。下列說法正確的是（）A．花粉管通道法可適用獲得轉基因擾蟲棉花B．外源DNA不需要構建基因表達載體，就能借助花粉管通道進入受體細胞并表達C．必須在雌蕊成熟時才能進行圖中所示的處理方法D．相比于農桿菌轉化法，花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一操作15．（2025·江蘇淮安·二模）關于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”實驗，下列說法正確的是（）A．根據(jù)DNA片段大小配置一定質量分數(shù)的瓊脂糖溶液以便分離DNA分子B．瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液中含指示劑，其可以在紫外燈下被檢測出來C．實驗中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌處理D．擴增得到的PCR產物與凝膠載樣緩沖液混勻后需緩慢注入加樣孔以防樣品飄散16．（2025·江蘇常州·三模）如圖表示花粉管通道法介導植物基因轉移。下列說法正確的是（）A．花粉管通道法可適用獲得轉基因抗蟲棉花B．相比于農桿菌轉化法，花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一操作C．必須在雌蕊成熟時才能進行圖中所示的處理方法D．外源DNA不需要構建基因表達載體，就能借助花粉管通道進入受體細胞并表達三、解答題17．（2025·江蘇·三模）病毒誘導的基因沉默技術（VIGS）是利用病毒載體攜帶目的基因侵染植物細胞，在植物細胞中復制產生dsRNA（雙鏈RNA），激活植物自身的基因沉默機制，降解植物目標mRNA的技術。葉用萵苣生長到一定時期極易抽薹（莖迅速生長），從而導致萵苣減質減產。研究表明LsMET1基因（甲基轉移酶1基因）促進葉用萵苣抽薹，研究人員利用VIGS嘗試使LsMET1基因沉默來驗證該觀點，主要操作如圖。請回答下列問題。(1)過程①反應體系中加入的物質除引物、原料、模板外，還有，下列四種引物中用于過程①的是。A．5'GAATTCATGA………3'

B．5'CTTAAGTTAC………3'C．5'CTGCAGTAGA………3'

D．5'GACGTCATCT………3'(2)過程②將環(huán)狀DNA擴增為線性DNA的目的是。(3)在TRV1、TRV2質粒中插入雙啟動子目的是。過程④將TRV1質粒和重組質粒導入農桿菌后，在培養(yǎng)基中應加入