pcr上崗證考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術的中文全稱是（）A.聚合酶鏈式反應B.核酸雜交反應C.基因測序反應D.蛋白質印跡反應答案：A2.Taq酶的特點是（）A.耐高溫B.耐低溫C.耐高壓D.耐高鹽答案：A3.PCR反應體系中不包括以下哪種成分（）A.模板DNAB.引物C.限制性內切酶D.dNTP答案：C4.引物設計時，其長度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.35-50bpD.50-100bp答案：B5.PCR反應的變性溫度一般為（）A.55℃B.72℃C.94-95℃D.4℃答案：C6.PCR技術的發(fā)明人是（）A.克里克B.穆利斯C.沃森D.桑格答案：B7.以下哪種物質可作為PCR反應的模板（）A.蛋白質B.多糖C.DNAD.脂肪答案：C8.PCR反應中延伸時間主要取決于（）A.模板DNA的長度B.引物的長度C.Taq酶的活性D.dNTP的濃度答案：A9.進行PCR實驗時，防止污染的關鍵環(huán)節(jié)不包括（）A.實驗環(huán)境清潔B.試劑質量C.樣本采集D.操作人員規(guī)范答案：C10.實時熒光定量PCR技術不能用于（）A.基因表達水平分析B.病原體核酸定量C.基因序列測定D.腫瘤標志物檢測答案：C二、多項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應的基本步驟包括（）A.變性B.退火C.延伸D.復性答案：ABC2.引物設計的原則包括（）A.避免引物自身互補B.引物之間避免互補C.引物長度合適D.GC含量合理答案：ABCD3.PCR實驗中可能出現(xiàn)的問題有（）A.假陽性B.假陰性C.非特異性擴增D.擴增效率低答案：ABCD4.以下哪些屬于PCR技術的應用領域（）A.疾病診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因克隆D.物種進化研究答案：ABCD5.Taq酶的活性受哪些因素影響（）A.溫度B.pH值C.離子強度D.引物濃度答案：ABC6.實時熒光定量PCR的熒光信號檢測方法有（）A.染料法B.探針法C.化學發(fā)光法D.比色法答案：AB7.用于PCR的模板DNA可以從以下哪些樣本中獲?。ǎ〢.血液B.組織C.唾液D.糞便答案：ABCD8.PCR反應體系中Mg2?的作用有（）A.激活Taq酶B.穩(wěn)定引物與模板結合C.參與dNTP聚合反應D.抑制非特異性擴增答案：ABC9.防止PCR實驗室污染的措施有（）A.分區(qū)操作B.嚴格消毒C.規(guī)范操作流程D.定期更換實驗人員答案：ABC10.巢式PCR的優(yōu)點包括（）A.提高特異性B.提高靈敏度C.減少非特異性擴增D.降低成本答案：ABC三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR技術可以擴增任意長度的DNA片段。（×）2.引物的GC含量越高，其退火溫度越低。（×）3.Taq酶具有3'→5'外切酶活性。（×）4.實時熒光定量PCR能夠對核酸進行絕對定量和相對定量。（√）5.PCR實驗中，模板DNA的濃度越高越好。（×）6.只要引物設計正確，PCR反應就一定能成功。（×）7.紫外燈照射可以有效消除PCR實驗室的核酸污染。（√）8.普通PCR可以對擴增產(chǎn)物進行定量分析。（×）9.不同來源的模板DNA進行PCR時，反應條件可能需要調整。（√）10.PCR技術只能用于檢測已知序列的DNA。（×）四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述PCR技術原理。答案：PCR技術是在體外模擬體內DNA復制過程。通過高溫變性使模板DNA雙鏈解開，低溫退火讓引物與模板結合，適溫延伸由Taq酶催化dNTP合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)實現(xiàn)特定DNA片段的大量擴增。2.引物設計時需要考慮哪些重要因素？答案：需考慮引物長度，一般15-30bp；GC含量，在40%-60%為宜；避免引物自身及引物間互補；引物3'端不能有連續(xù)的G或C；引物與模板結合的特異性等。3.簡述實時熒光定量PCR相對定量的原理。答案：相對定量是通過比較目的基因與內參基因的表達量來分析基因表達變化。以已知內參基因作對照，利用熒光信號在指數(shù)期與模板量的線性關系，計算目的基因相對于內參基因的表達水平。4.如何避免PCR實驗中的假陽性結果？答案：實驗要分區(qū)操作，防止交叉污染；試劑要嚴格保存、定期更換；規(guī)范操作，避免樣本間污染；實驗前對儀器設備充分清潔消毒；合理設計引物，減少非特異性結合。五、討論題（每題5分，共20分）1.討論PCR技術在新冠病毒檢測中的應用及意義。答案：應用是通過RT-PCR檢測病毒核酸。意義重大，能快速準確診斷感染情況，為疫情防控提供關鍵依據(jù)，助力早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，有效控制病毒傳播，對疫情監(jiān)測和防控策略制定有重要作用。2.結合實際，談談PCR實驗室質量控制的要點。答案：要點包括人員培訓，確保熟練操作；儀器定期校準維護；試劑選擇和管理要嚴格；實驗環(huán)境清潔消毒；規(guī)范樣本采集、運輸和處理；嚴格執(zhí)行分區(qū)操作流程；設置陽性、陰性等對照，及時發(fā)現(xiàn)問題并改進。3.討論PCR技術在基因診斷遺傳病方面的優(yōu)勢與局限性。答案：優(yōu)勢是靈敏度高、特異性強、快速，能檢測微量基因變異。局限性在于對未知突變檢測受限，易出現(xiàn)假陽性或假陰性，實驗條件要求高，且檢測范圍受引物設計制約，可能漏檢復雜突變。4.