血液培養(yǎng)采樣與檢測(cè)操作規(guī)范血液培養(yǎng)，作為臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)中至關(guān)重要的項(xiàng)目，其結(jié)果的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到感染性疾病的診斷、治療方案的制定乃至患者的預(yù)后。規(guī)范的血液培養(yǎng)采樣與檢測(cè)操作，是確保結(jié)果可靠的基石。任何一個(gè)環(huán)節(jié)的疏忽，都可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，延誤診治或誤導(dǎo)臨床。本文將從實(shí)際操作角度出發(fā)，系統(tǒng)闡述血液培養(yǎng)從采樣到檢測(cè)的關(guān)鍵步驟與質(zhì)量控制要點(diǎn)，旨在為臨床實(shí)踐提供具有指導(dǎo)性的專業(yè)參考。一、基本原則與前期準(zhǔn)備：細(xì)節(jié)決定成敗在進(jìn)行血液培養(yǎng)操作前，必須牢固樹立無(wú)菌觀念和質(zhì)量意識(shí)。這不僅僅是對(duì)患者負(fù)責(zé)，也是對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果真實(shí)性的保障。1.1把握最佳采樣時(shí)機(jī)理想的血液培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)在患者寒戰(zhàn)、高熱初期，或使用抗菌藥物之前采集。此時(shí)血液中病原菌濃度較高，陽(yáng)性檢出率亦隨之提高。若患者已接受抗菌藥物治療，應(yīng)在下次用藥前采集，或在臨床允許的情況下，盡可能在停用抗菌藥物一段時(shí)間后采集，并在申請(qǐng)單上注明用藥史，以便實(shí)驗(yàn)室采取相應(yīng)的處理措施。對(duì)于持續(xù)性菌血癥患者，如感染性心內(nèi)膜炎，應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)采集2-3套標(biāo)本。1.2嚴(yán)格患者信息核對(duì)采樣前，務(wù)必仔細(xì)核對(duì)患者信息，包括姓名、住院號(hào)（或其他唯一標(biāo)識(shí)）、床號(hào)等，確保與檢驗(yàn)申請(qǐng)單完全一致。同時(shí)，向患者簡(jiǎn)要解釋操作目的和過(guò)程，爭(zhēng)取其配合，緩解緊張情緒。1.3采樣環(huán)境與器材準(zhǔn)備采樣應(yīng)在相對(duì)清潔、安靜的環(huán)境中進(jìn)行。首選治療室或床邊，避免在人員頻繁走動(dòng)、塵埃較多的區(qū)域操作。采樣所需器材主要包括：一次性無(wú)菌注射器（根據(jù)采血量選擇合適規(guī)格）、真空采血系統(tǒng)（如使用）、含適當(dāng)培養(yǎng)基的血培養(yǎng)瓶（需根據(jù)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)及患者情況選擇需氧瓶、厭氧瓶等）、碘伏或氯己定等皮膚消毒劑、75%酒精、無(wú)菌棉簽或紗布、止血帶、標(biāo)簽、生物安全垃圾袋等。所有器材必須確保無(wú)菌、在有效期內(nèi)使用，并檢查包裝是否完好無(wú)損。血培養(yǎng)瓶應(yīng)在室溫下避光保存，避免劇烈震蕩。二、規(guī)范采樣流程：無(wú)菌操作是核心血液培養(yǎng)采樣過(guò)程中的每一個(gè)步驟都必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，最大限度減少污染。2.1皮膚消毒：至關(guān)重要的一環(huán)皮膚消毒是預(yù)防污染的關(guān)鍵步驟，必須嚴(yán)格執(zhí)行。*患者皮膚消毒：首先，用蘸有75%酒精的無(wú)菌棉簽擦拭擬穿刺部位的皮膚，進(jìn)行初步清潔。待酒精揮發(fā)干燥后，再使用碘伏或氯己定等消毒劑。以穿刺點(diǎn)為中心，由內(nèi)向外螺旋式擦拭，消毒范圍直徑應(yīng)不小于5厘米（成人），消毒兩遍或遵循消毒劑說(shuō)明書推薦的方法和時(shí)間。消毒過(guò)程中，避免觸碰已消毒區(qū)域。待消毒劑充分干燥（通常需1-2分鐘，具體參照產(chǎn)品說(shuō)明）后，方可進(jìn)行穿刺。*血培養(yǎng)瓶塞消毒：用75%酒精棉球或?qū)Ｓ孟緷窠聿潦醚囵B(yǎng)瓶橡膠塞，徹底消毒，消毒后待酒精完全揮發(fā)干燥，避免將消毒劑帶入瓶?jī)?nèi)影響培養(yǎng)結(jié)果。2.2靜脈穿刺與血液采集*扎止血帶，囑患者握拳，使靜脈充盈。選擇合適的靜脈，通常為肘前靜脈，避免選擇靠近感染灶、瘢痕、瘀青或有靜脈炎的部位。*再次確認(rèn)皮膚消毒劑已干燥。進(jìn)行靜脈穿刺，成功后，松開止血帶，讓患者松拳。*采集血量：這是影響檢出率的重要因素。成人每次每瓶采血通常為8-10毫升，兒童根據(jù)體重調(diào)整，一般為1-5毫升，新生兒不超過(guò)2毫升。血液量過(guò)少會(huì)降低陽(yáng)性率，過(guò)多則可能因血液中的抗菌物質(zhì)或白細(xì)胞過(guò)多影響病原菌生長(zhǎng)。*采集套數(shù)與組合：為提高檢出率并區(qū)分污染菌，通常建議采集2-3套血液培養(yǎng)標(biāo)本，每套包括至少一個(gè)需氧瓶和一個(gè)厭氧瓶（除非有明確指征無(wú)需厭氧培養(yǎng)）。每套標(biāo)本應(yīng)從不同穿刺點(diǎn)采集，或在同一穿刺點(diǎn)但先采一套，更換新的針頭和培養(yǎng)瓶后采集第二套（不推薦，易污染）。多套采集不僅能提高陽(yáng)性檢出率，還有助于實(shí)驗(yàn)室判斷結(jié)果的臨床意義。*注入培養(yǎng)瓶：若使用注射器采血，采夠血量后，卸下針頭（或使用安全型針頭，避免刺傷），將血液沿培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)壁緩緩注入，避免產(chǎn)生氣泡。需氧瓶和厭氧瓶的注入順序應(yīng)遵循“先需氧后厭氧”或“先厭氧后需氧”的實(shí)驗(yàn)室既定標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），并嚴(yán)格執(zhí)行，以避免不同瓶間的交叉污染。若使用真空采血系統(tǒng)，則將采血針另一端刺入相應(yīng)的血培養(yǎng)瓶，利用瓶?jī)?nèi)負(fù)壓采血。2.3采樣后處理血液注入培養(yǎng)瓶后，應(yīng)立即輕輕顛倒混勻數(shù)次（通常5-10次），使血液與培養(yǎng)基充分接觸，防止血液凝固，并促進(jìn)細(xì)菌分散。隨后，立即在培養(yǎng)瓶上貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽信息應(yīng)清晰完整，包括患者姓名、標(biāo)本采集日期和時(shí)間、采集部位、采集者等。穿刺點(diǎn)用無(wú)菌棉簽或紗布按壓止血，囑患者按壓片刻直至不出血。所有用過(guò)的一次性耗材、污染敷料等，均應(yīng)放入指定的生物安全垃圾袋內(nèi)，按醫(yī)療廢物處理。三、標(biāo)本運(yùn)送與接收：無(wú)縫銜接，確保時(shí)效采集后的血液培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)盡快送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，延遲送檢可能導(dǎo)致某些苛養(yǎng)菌或?qū)囟让舾械募?xì)菌死亡，或因正常菌群過(guò)度生長(zhǎng)而影響結(jié)果判讀。3.1標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本運(yùn)送過(guò)程中，應(yīng)保持直立，避免劇烈震蕩、陽(yáng)光直射和極端溫度（過(guò)高或過(guò)低）。理想情況下，應(yīng)在采集后1小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。如遇特殊情況無(wú)法立即送檢，可將標(biāo)本置于室溫（18-25℃）保存，但保存時(shí)間不宜超過(guò)2小時(shí)。切勿冷藏或冷凍血液培養(yǎng)標(biāo)本。運(yùn)送過(guò)程中，需確保標(biāo)本安全，防止泄漏和污染。3.2實(shí)驗(yàn)室接收與登記實(shí)驗(yàn)室接收人員應(yīng)核對(duì)標(biāo)本信息與檢驗(yàn)申請(qǐng)單是否一致，檢查培養(yǎng)瓶有無(wú)破損、泄漏，標(biāo)簽是否清晰完整，采集時(shí)間與接收時(shí)間是否符合要求。對(duì)不合格標(biāo)本，如信息不符、嚴(yán)重污染、血量不足、容器破損等，應(yīng)及時(shí)與臨床溝通，決定是否重新采集。合格標(biāo)本應(yīng)及時(shí)登記，錄入實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)（LIS），并盡快放入血液培養(yǎng)儀進(jìn)行孵育和監(jiān)測(cè)。四、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與質(zhì)量控制：科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)，結(jié)果可靠實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范操作是保證血液培養(yǎng)結(jié)果準(zhǔn)確性的另一重要環(huán)節(jié)。4.1儀器操作與培養(yǎng)監(jiān)測(cè)血液培養(yǎng)儀的操作應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書和實(shí)驗(yàn)室SOP進(jìn)行。將處理好的血培養(yǎng)瓶正確裝載入儀器，確保儀器運(yùn)行參數(shù)（溫度、振蕩頻率等）設(shè)置正確。儀器會(huì)自動(dòng)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的微生物生長(zhǎng)情況（如CO2產(chǎn)生、壓力變化等）。實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)定時(shí)查看儀器報(bào)警信息，對(duì)陽(yáng)性報(bào)警瓶及時(shí)進(jìn)行涂片、革蘭染色、鏡檢，并根據(jù)鏡檢結(jié)果進(jìn)行初步報(bào)告，同時(shí)盡快轉(zhuǎn)種培養(yǎng)。對(duì)儀器報(bào)告的陰性瓶，應(yīng)按規(guī)定培養(yǎng)足夠時(shí)間（通常為5天，特殊情況可延長(zhǎng)）后方可報(bào)告陰性結(jié)果。4.2陽(yáng)性標(biāo)本處理與鑒定藥敏對(duì)于陽(yáng)性血培養(yǎng)瓶，應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作抽取瓶?jī)?nèi)液體，進(jìn)行涂片革蘭染色，鏡檢結(jié)果應(yīng)盡快（通常1小時(shí)內(nèi)）電話或書面報(bào)告給臨床，為早期經(jīng)驗(yàn)性治療提供依據(jù)。同時(shí)，將標(biāo)本轉(zhuǎn)種至合適的固體培養(yǎng)基（如血平板、巧克力平板、麥康凱平板等）進(jìn)行分離培養(yǎng)，必要時(shí)進(jìn)行厭氧培養(yǎng)。待菌落生長(zhǎng)后，進(jìn)行細(xì)菌或真菌的鑒定和藥敏試驗(yàn)。鑒定和藥敏方法應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果判讀需嚴(yán)格遵循最新的臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）或其他權(quán)威機(jī)構(gòu)的指南。4.3質(zhì)量控制與持續(xù)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的質(zhì)量控制體系，包括：*培養(yǎng)基質(zhì)量控制：每批次血培養(yǎng)瓶在使用前需進(jìn)行無(wú)菌性、促生長(zhǎng)能力和抑制能力驗(yàn)證。*儀器性能驗(yàn)證與維護(hù)：定期對(duì)血液培養(yǎng)儀進(jìn)行校準(zhǔn)、維護(hù)和性能驗(yàn)證，確保儀器正常運(yùn)行。*室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC）：定期進(jìn)行模擬標(biāo)本（如已知標(biāo)準(zhǔn)菌株）的檢測(cè)，監(jiān)控整個(gè)檢測(cè)過(guò)程的穩(wěn)定性。*室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）：積極參加國(guó)家或地區(qū)組織的室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)，與其他實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)不足并加以改進(jìn)。*人員培訓(xùn)與考核：定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行操作技能培訓(xùn)和理論知識(shí)考核，確保其具備勝任能力。*不良事件報(bào)告與分析：建立標(biāo)本采集、運(yùn)送、檢測(cè)各環(huán)節(jié)的不良事件報(bào)告和分析機(jī)制，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，采取糾正和預(yù)防措施，持續(xù)改進(jìn)工作質(zhì)量。五、注意事項(xiàng)與持續(xù)改進(jìn)：經(jīng)驗(yàn)積累，精益求精除上述規(guī)范操作外，還有一些細(xì)節(jié)和經(jīng)驗(yàn)值得關(guān)注：*避免污染是永恒主題：從采樣到檢測(cè)的每一個(gè)環(huán)節(jié)，都要將“無(wú)菌”二字刻在心中。污染是導(dǎo)致假陽(yáng)性的主要原因，不僅浪費(fèi)醫(yī)療資源，更會(huì)誤導(dǎo)臨床決策。*特殊患者的考量：對(duì)于長(zhǎng)期留置導(dǎo)管、粒細(xì)胞缺乏、接受免疫抑制劑治療等特殊患者，其血液培養(yǎng)的采樣和結(jié)果解讀需更加謹(jǐn)慎，可能需要特殊的培養(yǎng)方法或多次采樣。*臨床溝通的重要性：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與臨床保持密切溝通，了解患者病情，對(duì)可疑結(jié)果或復(fù)雜結(jié)果進(jìn)行合理解釋，共同為患者提供最佳診療方案。檢驗(yàn)報(bào)告除了提供病原菌鑒定和藥敏結(jié)果外，還可附上簡(jiǎn)要的臨床意義解讀。*持續(xù)學(xué)習(xí)與更新知識(shí)：微生物學(xué)領(lǐng)域發(fā)展迅速，新的病原菌、新的檢測(cè)技術(shù)、新的耐藥機(jī)制不斷涌現(xiàn)。檢驗(yàn)人員和臨床醫(yī)生都應(yīng)