2025年檢驗(yàn)科細(xì)菌組上崗、輪崗考核試題(附答案)一、基礎(chǔ)理論考核（共40分）（一）單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.關(guān)于革蘭染色的關(guān)鍵步驟，正確的是A.結(jié)晶紫染色1分鐘B.95%乙醇脫色30秒C.盧戈碘液媒染30秒D.稀釋石碳酸復(fù)紅復(fù)染10秒2.以下哪種細(xì)菌需采用巧克力瓊脂培養(yǎng)基分離培養(yǎng)？A.大腸埃希菌B.肺炎鏈球菌C.流感嗜血桿菌D.銅綠假單胞菌3.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）的大腸埃希菌對(duì)下列哪種抗生素天然耐藥？A.頭孢他啶B.亞胺培南C.哌拉西林/他唑巴坦D.氨曲南4.血培養(yǎng)瓶的最佳采血量（成人）為A.2-5ml/瓶B.8-10ml/瓶C.15-20ml/瓶D.25-30ml/瓶5.以下哪種細(xì)菌屬于苛養(yǎng)菌？A.金黃色葡萄球菌B.屎腸球菌C.嗜肺軍團(tuán)菌D.陰溝腸桿菌6.結(jié)核分枝桿菌的抗酸染色結(jié)果應(yīng)為A.紅色（抗酸陽(yáng)性）B.藍(lán)色（抗酸陰性）C.紫色（革蘭陽(yáng)性）D.綠色（特殊染色）7.進(jìn)行痰標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，合格標(biāo)本的標(biāo)準(zhǔn)是低倍鏡下鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)/白細(xì)胞數(shù)應(yīng)A.<1:10B.<1:5C.>1:10D.>1:58.以下哪種細(xì)菌的觸酶試驗(yàn)為陰性？A.表皮葡萄球菌B.A群鏈球菌C.銅綠假單胞菌D.肺炎克雷伯菌9.用于鑒定腸桿菌科細(xì)菌的IMViC試驗(yàn)不包括A.吲哚（Indole）B.動(dòng)力（Motility）C.甲基紅（MethylRed）D.枸櫞酸鹽利用（Citrate）10.萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌（VRE）的主要耐藥機(jī)制是A.青霉素結(jié)合蛋白（PBP）改變B.靶位核糖體甲基化C.細(xì)胞壁前體結(jié)構(gòu)修飾D.β-內(nèi)酰胺酶水解（二）簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述厭氧菌標(biāo)本采集的基本原則（至少5項(xiàng)）。2.列舉3種常見(jiàn)的革蘭陰性雙球菌及其主要鑒定依據(jù)。3.解釋“衛(wèi)星現(xiàn)象”的原理及臨床意義。4.試述自動(dòng)化血培養(yǎng)儀的報(bào)陽(yáng)判斷標(biāo)準(zhǔn)（以BacT/ALERT為例）。二、操作技能考核（共30分）（一）實(shí)際操作題（20分）題目：痰標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)處理及接種操作要求：模擬接收一份痰標(biāo)本（已標(biāo)注患者信息），完成以下步驟（操作過(guò)程需口述關(guān)鍵點(diǎn)）：1.標(biāo)本質(zhì)量評(píng)估（鏡檢篩選）；2.前處理（勻漿與稀釋?zhuān)?.分區(qū)接種至血平板、麥康凱平板、巧克力平板；4.培養(yǎng)條件設(shè)置；5.生物安全處理。（二）儀器操作題（10分）題目：VITEK2Compact全自動(dòng)微生物鑒定儀的使用要求：針對(duì)一株純培養(yǎng)的革蘭陰性桿菌，完成以下操作（需口述關(guān)鍵參數(shù)設(shè)置）：1.菌懸液制備（濁度調(diào)整）；2.卡板選擇與裝載；3.儀器參數(shù)設(shè)置（鑒定卡類(lèi)型、孵育時(shí)間）；4.結(jié)果判讀注意事項(xiàng)（如“不可接受”結(jié)果的處理）。三、質(zhì)量控制與安全管理（共20分）（一）案例分析題（10分）背景：某實(shí)驗(yàn)室連續(xù)3天出現(xiàn)血培養(yǎng)瓶假陽(yáng)性（報(bào)陽(yáng)但轉(zhuǎn)種無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)）。問(wèn)題：分析可能的原因（至少5項(xiàng)），并提出改進(jìn)措施。（二）簡(jiǎn)答題（10分）1.簡(jiǎn)述培養(yǎng)基質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)（包括外觀、無(wú)菌試驗(yàn)、性能測(cè)試）。2.列舉實(shí)驗(yàn)室生物安全二級(jí)（BSL-2）的基本要求（至少5項(xiàng)）。四、綜合案例分析（共10分）患者信息：男性，68歲，COPD急性加重期，發(fā)熱（T38.9℃），咳嗽、咳大量膿痰，WBC18.6×10?/L，中性粒細(xì)胞89%。痰標(biāo)本鏡檢：白細(xì)胞（+++），鱗狀上皮細(xì)胞（+），革蘭染色見(jiàn)大量革蘭陰性桿菌（短桿狀，兩端鈍圓）。實(shí)驗(yàn)室結(jié)果：-血平板：灰白色濕潤(rùn)菌落，有特殊霉味；-麥康凱平板：乳糖發(fā)酵（+），粉紅色菌落；-氧化酶試驗(yàn)（-）；-觸酶試驗(yàn)（+）；-VITEK2鑒定：肺炎克雷伯菌（可信度99%）；-藥敏結(jié)果（S：敏感，I：中介，R：耐藥）：頭孢曲松R，頭孢他啶I，亞胺培南S，哌拉西林/他唑巴坦S，左氧氟沙星S，阿米卡星S。問(wèn)題：1.該患者的可能診斷是什么？2.結(jié)合藥敏結(jié)果，推薦首選治療方案（需說(shuō)明依據(jù)）；3.若患者治療3天后體溫未下降，需考慮哪些實(shí)驗(yàn)室因素？答案一、基礎(chǔ)理論考核（一）單項(xiàng)選擇題1.B（95%乙醇脫色10-30秒為關(guān)鍵步驟，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易脫至假陰性）2.C（流感嗜血桿菌需X、V因子，巧克力瓊脂含裂解紅細(xì)胞釋放的X因子和V因子）3.B（ESBLs菌株對(duì)碳青霉烯類(lèi)天然敏感）4.B（成人每瓶8-10ml，兒童1-3ml）5.C（嗜肺軍團(tuán)菌需L-半胱氨酸和鐵離子，屬于苛養(yǎng)菌）6.A（抗酸染色中結(jié)核分枝桿菌保留紅色，其他菌被亞甲藍(lán)復(fù)染為藍(lán)色）7.A（合格痰標(biāo)本要求鱗狀上皮細(xì)胞<10個(gè)/低倍鏡，白細(xì)胞>25個(gè)，比例<1:10）8.B（鏈球菌屬觸酶陰性，葡萄球菌屬觸酶陽(yáng)性）9.B（IMViC為吲哚、甲基紅、V-P、枸櫞酸鹽，不包含動(dòng)力）10.C（VRE通過(guò)改變細(xì)胞壁前體D-丙氨酰-D-丙氨酸為D-丙氨酰-D-乳酸，降低與萬(wàn)古霉素親和力）（二）簡(jiǎn)答題1.厭氧菌標(biāo)本采集原則：①避免接觸空氣（使用厭氧運(yùn)輸管或注射器排空氣體）；②避免正常菌群污染（如痰液需深部咳出，膿腫需穿刺而非拭子）；③及時(shí)送檢（30分鐘內(nèi)）；④禁止使用含防腐劑的容器；⑤標(biāo)注“厭氧培養(yǎng)”。2.常見(jiàn)革蘭陰性雙球菌：①淋病奈瑟菌（氧化酶+，觸酶+，僅分解葡萄糖）；②腦膜炎奈瑟菌（氧化酶+，觸酶+，分解葡萄糖和麥芽糖）；③卡他莫拉菌（氧化酶+，觸酶+，DNA酶+，可分解丁酸酯）。3.衛(wèi)星現(xiàn)象：流感嗜血桿菌在金黃色葡萄球菌周?chē)L(zhǎng)更旺盛，因金葡菌釋放V因子（NAD），補(bǔ)充嗜血桿菌生長(zhǎng)需求。臨床意義：用于初步鑒定流感嗜血桿菌，提示可能存在混合感染（如金葡菌與流感嗜血桿菌共感染）。4.BacT/ALERT血培養(yǎng)儀報(bào)陽(yáng)標(biāo)準(zhǔn)：通過(guò)監(jiān)測(cè)瓶?jī)?nèi)CO?產(chǎn)生導(dǎo)致的顏色變化（熒光強(qiáng)度），當(dāng)熒光值超過(guò)閾值（通常設(shè)定為1500-2000單位）且持續(xù)上升，儀器判定為陽(yáng)性，同時(shí)需結(jié)合人工鏡檢確認(rèn)。二、操作技能考核（一）痰標(biāo)本處理及接種操作1.標(biāo)本質(zhì)量評(píng)估：取1滴痰標(biāo)本涂片，革蘭染色后低倍鏡觀察，鱗狀上皮細(xì)胞<10個(gè)/視野、白細(xì)胞>25個(gè)/視野為合格；若不合格需聯(lián)系臨床重新留取。2.前處理：加入等量1%胰酶溶液（或N-乙酰半胱氨酸），37℃孵育15分鐘勻漿，稀釋至適當(dāng)濃度（避免過(guò)度濃稠）。3.分區(qū)接種：用接種環(huán)取1μl標(biāo)本，先在血平板中央劃線，再分區(qū)稀釋?zhuān)畸溈祫P平板（選擇性培養(yǎng)基）和巧克力平板（需5%CO?）同理，注意接種量均勻，避免交叉污染。4.培養(yǎng)條件：血平板和麥康凱平板置35℃需氧培養(yǎng)18-24小時(shí)；巧克力平板置35℃、5%CO?培養(yǎng)。5.生物安全處理：使用后的接種環(huán)需火焰滅菌，標(biāo)本管高壓蒸汽滅菌（121℃，30分鐘），廢棄標(biāo)本按醫(yī)療廢物分類(lèi)處理。（二）VITEK2操作1.菌懸液制備：挑取3-5個(gè)純菌落，用0.45%生理鹽水混懸，調(diào)整濁度至0.5麥?zhǔn)蠁挝唬ū葷醿x校準(zhǔn)），確保無(wú)自凝或沉淀。2.卡板選擇：革蘭陰性桿菌選用GN鑒定卡（含47項(xiàng)生化反應(yīng)）；若為腸桿菌科，也可選擇AST-N387藥敏卡。3.儀器參數(shù)：設(shè)置鑒定卡類(lèi)型為“GN”，孵育時(shí)間默認(rèn)18-24小時(shí)（快速卡可縮短至6-8小時(shí)）。4.結(jié)果判讀：若顯示“不可接受”（如反應(yīng)孔異常、濁度不符合），需重新制備菌懸液或檢查純培養(yǎng)狀態(tài)；若為“低可信度”，需結(jié)合手工生化試驗(yàn)（如氧化酶、動(dòng)力）確認(rèn)。三、質(zhì)量控制與安全管理（一）血培養(yǎng)假陽(yáng)性案例分析可能原因：①采血時(shí)皮膚消毒不徹底（如酒精未完全揮發(fā)）；②培養(yǎng)瓶膠塞污染（如消毒不規(guī)范）；③培養(yǎng)儀溫度波動(dòng)（導(dǎo)致非生物性CO?釋放）；④試劑污染（如培養(yǎng)介質(zhì)含細(xì)菌代謝產(chǎn)物）；⑤操作時(shí)空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi)（如接種后未密封）。改進(jìn)措施：①?lài)?yán)格執(zhí)行皮膚消毒（碘伏3遍，待干30秒）；②培養(yǎng)瓶膠塞用75%酒精消毒后待干；③每日監(jiān)測(cè)培養(yǎng)儀溫度（35±1℃）；④定期做培養(yǎng)基無(wú)菌試驗(yàn)（每批隨機(jī)抽3瓶培養(yǎng)48小時(shí)）；⑤規(guī)范接種操作（使用無(wú)菌穿刺針，避免空氣注入）。（二）簡(jiǎn)答題1.培養(yǎng)基質(zhì)量控制：①外觀：檢查顏色、透明度、有無(wú)沉淀或裂隙；②無(wú)菌試驗(yàn)：隨機(jī)抽取5%（至少1瓶）置35℃培養(yǎng)48小時(shí)，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)；③性能測(cè)試：用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如大腸埃希菌ATCC25922測(cè)試麥康凱平板乳糖發(fā)酵，金黃色葡萄球菌ATCC25923測(cè)試血平板溶血），確保生長(zhǎng)特性符合預(yù)期。2.BSL-2基本要求：①實(shí)驗(yàn)室入口標(biāo)識(shí)生物危害；②操作時(shí)穿工作服、戴手套，可能產(chǎn)生氣溶膠時(shí)戴護(hù)目鏡；③配備生物安全柜（BSC-Ⅱ級(jí)）；④每日紫外線消毒臺(tái)面，每周消毒地面；⑤銳器放入專(zhuān)用防刺容器，廢棄標(biāo)本高壓滅菌后處理。四、綜合案例分析1.可能診斷：COPD急性加重期合并肺炎克雷伯菌肺炎（依據(jù)：膿痰、中性粒細(xì)胞升高，痰培養(yǎng)為肺炎克雷伯菌，且為優(yōu)勢(shì)菌）。2.首選治療方案：哌拉西林/他唑巴坦（或亞胺培南）聯(lián)合左氧氟沙星（或阿米卡星）。依據(jù)：藥敏顯示頭孢曲松耐藥（ESBLs可能），頭