水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法2019-02-15實(shí)施2019-02-15實(shí)施天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由天津市漁業(yè)發(fā)展服務(wù)中心提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心(天津)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳永平、李春青、時(shí)文博、高麗娜、李寶華。1水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水質(zhì)及沉積物中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留量測定的試劑、儀器設(shè)備、測定步驟、本標(biāo)準(zhǔn)適用于水和沉積物中孔雀石綠和無色孔雀石綠2規(guī)范性引用文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法沉積物中孔雀石綠(MalachiteGreenMG)及其代謝物無色孔雀石綠(LeucomalachiteGreenLMG)殘留提取，利用N,N,N,N'-四甲基對苯二胺(2,3,5,6-tetramethy1-1,4-phenylenediami4.1孔雀石綠及無色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品：孔雀石綠純度>98%,無色孔雀石綠純度>98%。4.2乙腈：色譜純。4.5實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T6682一級水指標(biāo)4.62.0mmoLL1乙酸銨緩沖溶液：稱取0.077g無水乙酸銨溶解于適量水中，再加入0.5mL甲酸，再加水定容至500mL。4.7TMPD溶液(1.0mgmL1):稱取50mgN,N,N,N'-四甲基對苯二胺(TMPD)溶于50mL甲醇4.8孔雀石綠(MG)、無色孔雀石綠(LMG)標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100μg'mL?1):準(zhǔn)確稱取適量的孔雀石綠、無色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品，分別用乙腈溶解并定容，于-18℃避光保存，可使用1年。4.9氘代孔雀石綠(MG-D5)和氘代無色孔雀石綠(LMG-D6)內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100μg-mL):準(zhǔn)確稱4.10混合外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液(1.0μgmL1):分別準(zhǔn)確吸取1.0mL孔雀石綠和無色孔雀石綠的標(biāo)準(zhǔn)儲備液(4.7)于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18℃避光保存，可使用6個(gè)月。24.11混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液(1.0μgmL1):分別準(zhǔn)確吸取1.0mL氘代孔雀石綠和氘代無色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)儲備液(4.8)于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18℃避光保存，可使用6個(gè)月。4.12混合外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.10μgmL?1);準(zhǔn)確吸取1.00mL混合外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液(4.9)于10.0mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18℃避光保存，可使用1個(gè)月。4.13混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.10μgmL1):準(zhǔn)確吸取1.00mL混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液(4.10)于10.0mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18℃避光保存，可使用1個(gè)月。4.14混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：臨用時(shí)準(zhǔn)確吸取相應(yīng)體積的混合外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液(4.11),再加入混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液(4.12)20μ,用乙腈和2.0mmoL·L1乙酸銨緩沖溶液(1:1,V/)稀釋定容至1mL,標(biāo)準(zhǔn)曲線系列濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10、20ngmL1,現(xiàn)用現(xiàn)配。5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧(ESI)離子源。5.2電子天平：感量1.0mg和0.01mg。5.3高速冷凍離心機(jī)：可制冷到4℃(最大轉(zhuǎn)速高于10000r/min)。5.6移液器(10μL,20μL,50μ,100μL,6測定步驟6.1.1水：將采集水樣過0.45μm濾膜，收集水樣體積1L,于4℃冰箱保存，6d內(nèi)測定。6.1.2沉積物：將沉積物置于陰涼處風(fēng)干，研磨過篩(150目),收集沉積物質(zhì)量20g,于4℃冰箱6.2.1水：量取水樣500mL,置于分液漏斗中，加入40μL混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液(4.12),再加入30mL的二氯甲烷，振搖5min,靜置30min,取下層二氯甲烷于錐形瓶中，再加入30mL二氯甲烷重復(fù)一次，若分層不明顯，取其下層液于50mL離心管中，冷凍離心機(jī)6000r/min離心3min,再取下層液，合并于錐形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度30℃,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，殘留物加入2.0mL的乙腈-2mmoL·L1乙酸銨溶液(1:1,V/)(4.5),渦旋振蕩1min,超聲波振蕩2min,過0.22μm有機(jī)相濾溶液(4.6),再加入40μL混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液(4.12),加入20mL二氯甲烷，渦旋2min,超聲波震蕩25min,6000r/min離心5min,取上層液于錐形瓶中，再向離心管中加入20mL二氯甲烷，重復(fù)上述操作，合并上清液錐形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度30℃,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，殘留物加入2.0mL3的乙腈-2mmoLL乙酸銨溶液(1:1,V/D)(4.5),渦旋振蕩1min,超聲波振蕩2min,過0.22μm分別準(zhǔn)確移取100ngmL1混合外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液(4.11),乙腈稀釋至0.50ng-mL?1、1.0ngmL1、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。色譜柱：C柱，2.2μm,75mm×2.1mm(內(nèi)徑),或相當(dāng)。柱溫：35℃。樣品室溫度：15℃。流速：0.25mLmin1。時(shí)間(min)27292離子化模式：電噴霧離子源(ESI),正離子模式。離子源溫度：600℃。氣簾氣：25;碰撞氣：中；噴霧電壓：5000v;輔氣1:60;輔氣2:40。目標(biāo)化合物母離子(m/z)子離子(m/z)去簇電壓(V)碰撞能量(ev)46.5定性依據(jù)表3基峰與次強(qiáng)碎片離子豐度比要求次強(qiáng)碎片離子相對豐度(%)允許相對偏差(%)6.6定量測定6.7空白試驗(yàn)7計(jì)算7.1用儀器自帶工作站按內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行自動(dòng)計(jì)算，以化合物上機(jī)響應(yīng)的峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值為縱7.2水樣品中孔雀石綠及其代謝物殘留量按式(1)計(jì)算。計(jì)算結(jié)果須扣除空白值。X——試樣中目標(biāo)物含量，單位為微克每升(μg·L1);V——試樣體積，單位為毫升(mL);7.3沉積物樣品中孔雀石綠及其代謝物殘留量按式(2)計(jì)算。計(jì)算結(jié)果須扣除空白值。X——試樣中目標(biāo)物含量，單位為微克每千克(μg-kg1);C——試樣溶液中目標(biāo)物含量，單位為納克每毫升(ngmL?);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);59.1水質(zhì)中添加濃度為4ng-L～100ng·L1時(shí)回收率為70%～16(資料性附錄)空白沉積物特征離子色譜圖7(資料性附錄)孔雀石綠及其代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)特征離子色譜圖(10ngmL1)04+MRM(6pairs):331.3DaIDLMG-316fromSample7(10)ofDataSET1wif0008(資料性附錄)9(資料性附錄)空白水質(zhì)特征離子色譜圖005.69