ICS65.100

G25

DB37

山東省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB37/T4177—2020

蔬菜中4-羥基百菌清殘留量的快速測(cè)定

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

Determinationof4-hydroxychlorothalonilresiduesinvegetables—Liquid

chromatography-tandemmassspectrometrymethod

2020-09-30發(fā)布2020-10-30實(shí)施

山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB37/T4177—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由山東省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并組織實(shí)施。

本標(biāo)準(zhǔn)由山東省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)種植業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化分技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)和農(nóng)村能源總站。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：吳成、王蕾、趙志強(qiáng)、于富昌。

I

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蔬菜中4-羥基百菌清殘留量的快速測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蔬菜中4-羥基百菌清（參見附錄A）殘留量液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于蔬菜中4-羥基百菌清殘留量的快速測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB2763食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3原理

試樣用乙腈勻漿提取，鹽析離心后，取上清液，過(guò)濾后用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

4試劑和材料

除另有規(guī)定外，所有試劑均為色譜純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。

4.1試劑

4.1.1乙腈（CH3CN，75-05-8）。

4.1.2甲醇（CH3OH，67-56-1）。

4.1.3甲酸（CH2O2，64-18-6）。

4.1.4醋酸銨（C2H7NO2，631-61-8）。

4.1.5氯化鈉（NaCl，7647-14-5），分析純，140℃烘烤4h。

4.2溶液配制

0.1%甲酸+5mmol/L醋酸銨水溶液：稱取0.385g醋酸銨于500mL燒杯中，用水充分溶解后，準(zhǔn)確加

入1mL甲酸，將上述溶液轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，用水定容，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4.3標(biāo)準(zhǔn)品

4-羥基百菌清標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品信息參照附錄A。

4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

4.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液

1

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準(zhǔn)確稱取適量（精確至0.1mg）4-羥基百菌清標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，

配制成1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（或購(gòu)買有證標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液），0℃～4℃保存，保存期為6個(gè)月。

4.4.2中間標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（4.4.1），用甲醇稀釋配制成10mg/L的4-羥基百菌清中間標(biāo)準(zhǔn)溶液，

0℃～4℃保存，保存期為2周。

4.4.3標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

準(zhǔn)確吸取適量的中間標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.4.2），用空白樣品基質(zhì)溶液稀釋配制成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶

液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4.5材料

微孔濾膜：有機(jī)系，0.22μm。

5儀器和設(shè)備

5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧負(fù)離子源（ESI-）。

5.2分析天平：感量分別為0.00001g和0.01g。

5.3組織搗碎機(jī)。

5.4旋渦混合器。

5.5均質(zhì)器：轉(zhuǎn)速不低于15000r/min。

5.6離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min。

6試樣制備

蔬菜樣品取樣部位按GB2763的規(guī)定執(zhí)行。對(duì)于個(gè)體較小的樣品，取樣后全部處理；對(duì)于個(gè)體較大

的基本均勻樣品，可在對(duì)稱軸或?qū)ΨQ面上分割或切成小塊后處理；對(duì)于細(xì)長(zhǎng)、扁平或組分含量在各部分

有差異的樣品，可在不同部位切取小片或截成小段后處理；取后的樣品將其切碎，充分混勻，用四分法

取樣或直接放入組織搗碎機(jī)中搗碎成勻漿，放入潔凈的樣品盒內(nèi)，密封并做好標(biāo)記。將樣品于-18℃以

下冷凍保存。

7分析步驟

7.1提取

稱取15.0g試樣（精確至0.1g）于100mL離心管中，加入30mL乙腈，用均質(zhì)器在12000r/min勻漿

提取2min，加入6g氯化鈉，再振蕩提取1min，4200r/min離心5min，取上清液約2mL，用0.22μm濾膜

過(guò)濾，待測(cè)。

7.2測(cè)定

7.2.1液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜參考條件

參考條件如下：

a)色譜柱：Shim-packXR-ODSⅢ色譜柱，50mm×2.0mm(i.d.)，1.6μm，或相當(dāng)者；

2

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b)流動(dòng)相：A為0.1%甲酸+5mmol/L醋酸銨水溶液（4.2），B為甲醇，梯度洗脫程序見表1；流

速：0.35mL/min；

c)柱溫：40℃；

d)進(jìn)樣體積：10.0μL；

e)掃描方式：負(fù)離子模式；

f)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件參照附錄B；

g)加熱塊溫度：400℃；

h)脫溶劑管(DL)溫度：250℃；

i)干燥氣（N2）流速：15.0L/min，純度≥99.999%；

j)霧化氣（N2）流速：3.0L/min，純度≥99.999%；

k)電噴霧負(fù)離子源（ESI-）接口電壓：-3.5kV；

l)檢測(cè)器電壓：1.74kV；

m)碰撞氣（Ar）壓力：0.23MPa。

表1梯度洗脫程序

時(shí)間

A/%B/%

min

0.59010

2.05050

5.05050

9.0595

11.5595

13.09010

注：以上質(zhì)譜條件是在SHIMADZULCMS-8040質(zhì)譜儀上完成的，列出試驗(yàn)用儀器型號(hào)僅是為了提供參考，并不涉及商

業(yè)目的，鼓勵(lì)標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試采用不同廠家或型號(hào)的儀器。

7.2.2定性測(cè)定

被測(cè)試樣中4-羥基百菌清色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較，相對(duì)誤差應(yīng)在

±2.5%之內(nèi)。

在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相一致，并

且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，4-羥基百菌清的質(zhì)譜定量和定性離子均出現(xiàn)，而且同一檢測(cè)批次，樣

品中4-羥基百菌清的定性離子和定量離子的相對(duì)豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相比，其允

許偏差不超過(guò)表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在4-羥基百菌清。

表2定性時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度＞50%＞20%至50%＞10%至20%≤10%

允許相對(duì)偏差±20%±25%±30%±50%

7.2.3定量測(cè)定

本方法采用外標(biāo)法單定量離子對(duì)定量測(cè)定,定量用標(biāo)準(zhǔn)溶液采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。在儀器最佳工

作條件下，對(duì)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液

3

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中4-羥基百菌清響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍。本方法的4-羥基百菌清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖

參照附錄A，質(zhì)譜圖參照附錄C。

7.3空白試驗(yàn)

除不稱取試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。

7.4平行試驗(yàn)

按以上步驟對(duì)同一試樣進(jìn)行平行測(cè)定。

8結(jié)果計(jì)算和表述

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定結(jié)果可由計(jì)算機(jī)按外標(biāo)法自動(dòng)計(jì)算，也可按式(1)計(jì)算：

V

.......................................(1)

m

式中：

ω——質(zhì)量分?jǐn)?shù)，指試樣中4-羥基百菌清殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

ρ——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到的試樣中4-羥基百菌清的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）；

V——提取溶劑總體積，單位為毫升（mL）；

m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；

計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保

留兩位有效數(shù)字，含量超過(guò)1mg/kg時(shí)保留三位有效數(shù)字。

9精密度

9.1在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合

附錄E的要求。

9.2在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合

附錄F的要求。

10定量限和回收率

10.1定量限

本方法的定量限（LOQ）參照附錄A。

10.2回收率

當(dāng)添加水平為L(zhǎng)OQ、5×LOQ、10×LOQ時(shí),添加回收率參照附錄D。

4

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AA

附錄A

（資料性附錄）

4-羥基百菌清中英文名稱、分子式、CAS號(hào)、保留時(shí)間、定量限和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖

4-羥基百菌清中英文名稱、分子式、CAS號(hào)、保留時(shí)間和定量限，參照表A.1。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖，參

照?qǐng)DA.1。

表A.14-羥基百菌清中英文名稱、分子式、CAS號(hào)、保留時(shí)間和定量限

序保留時(shí)間定量限

中文名稱英文名稱分子式CAS號(hào)

號(hào)minmg/kg

14-羥基百菌清4-hydroxychlorothalonilC8HCl3N2O28343-61-56.910.01

圖A.14-羥基百菌清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖

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BB

附錄B

（資料性附錄）

4-羥基百菌清監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞能量和碎裂電壓

4-羥基百菌清監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞氣能量和碎裂電壓，參照表B.1。

表B.14-羥基百菌清監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞能量和碎裂電壓

相對(duì)離子

序號(hào)化合物名稱電離模式母離子子離子Q1/VCE/VQ3/V

強(qiáng)度/%

175*272529

14-羥基百菌清-24571.8

210112512

注：“-”代表負(fù)離子模式，“*”指定量離子，“Q1”和“Q3”分別指質(zhì)譜儀碰撞池前端和后端四極桿預(yù)桿偏置電

壓，“CE”指碰撞池電壓，“相對(duì)離子強(qiáng)度”指定性參考離子與定量離子強(qiáng)度比。

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CC

附錄C

（資料性附錄）

4-羥基百菌清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）質(zhì)譜圖

4-羥基百菌清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）質(zhì)譜圖，參照?qǐng)DC.1。

圖C.14-羥基百菌清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）質(zhì)譜圖

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DD

附錄D

（資料性附錄）

4-羥基百菌清在6種蔬菜中的添加回收率

4-羥基百菌清在6種蔬菜中的添加回收率，參照表D.1。

表D.14-羥基百菌清在6種蔬菜中的添加回收率

添加水平菠菜豇豆番茄甘藍(lán)黃瓜韭菜

化合物名稱

mg/kg%%%%%%

0.0170～8673～9186～9373～8680～9171～91

4-羥基百菌清0.0580～9680～9276～9676～8880～9280～92

0.188～9882～9878～9678～10078～9179～87

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EE

附錄E

（規(guī)范性附錄）

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求如表E.1所示。

表E.1實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求

被測(cè)組分含量精密度

mg/kg%

≤0.00136

＞0.001≤0.0132

＞