浙江pcr上崗證考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中，延伸溫度一般為（）A.55℃B.72℃C.94℃D.4℃2.Taq酶的特點(diǎn)是（）A.耐高溫B.耐低溫C.具有3'-5'外切酶活性D.具有5'-3'外切酶活性3.PCR引物設(shè)計時，引物長度一般為（）A.10-15bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp4.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)體系的成分（）A.dNTPB.模板DNAC.限制性內(nèi)切酶D.引物5.實時熒光定量PCR技術(shù)檢測的是（）A.PCR反應(yīng)的終點(diǎn)產(chǎn)物B.PCR反應(yīng)過程中的熒光信號C.蛋白質(zhì)含量D.核酸的分子量6.進(jìn)行PCR實驗時，實驗操作應(yīng)在（）A.普通實驗室B.潔凈工作臺C.通風(fēng)櫥D.任意地方7.以下哪種樣本不能作為PCR模板（）A.全血B.痰液C.甲醛固定組織D.新鮮組織8.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.連接D.延伸9.引物的Tm值是指（）A.引物與模板完全結(jié)合時的溫度B.引物與模板開始結(jié)合時的溫度C.引物解鏈一半時的溫度D.引物完全解鏈時的溫度10.下列關(guān)于PCR污染的說法錯誤的是（）A.氣溶膠污染是常見的污染方式B.污染主要來自樣本之間的交叉污染C.試劑污染也可能導(dǎo)致PCR假陽性結(jié)果D.污染不會影響實驗結(jié)果答案：1.B2.A3.B4.C5.B6.B7.C8.C9.C10.D二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系中包含（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPE.Mg2?2.引物設(shè)計的基本原則包括（）A.引物長度適宜B.避免引物自身互補(bǔ)C.引物GC含量合適D.引物3'端避免錯配E.引物與模板結(jié)合特異性高3.實時熒光定量PCR的應(yīng)用包括（）A.基因表達(dá)定量分析B.病原體核酸定量檢測C.單核苷酸多態(tài)性分析D.腫瘤標(biāo)志物檢測E.遺傳性疾病診斷4.PCR實驗中可能出現(xiàn)的問題有（）A.假陽性結(jié)果B.假陰性結(jié)果C.擴(kuò)增條帶模糊D.無擴(kuò)增產(chǎn)物E.引物二聚體形成5.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物濃度C.Taq酶活性D.Mg2?濃度E.反應(yīng)溫度和時間6.以下哪些屬于核酸提取的方法（）A.酚氯仿抽提法B.硅膠柱吸附法C.磁珠法D.鹽析法E.離子交換法7.PCR實驗室分區(qū)一般包括（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.樣本處理區(qū)C.核酸擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)E.清洗消毒區(qū)8.進(jìn)行PCR實驗時，需要注意的安全事項有（）A.防止化學(xué)試劑接觸皮膚和眼睛B.避免氣溶膠產(chǎn)生C.正確使用儀器設(shè)備D.防止觸電E.實驗結(jié)束后及時清理實驗臺面9.以下哪些是常用的核酸定量方法（）A.紫外分光光度法B.熒光定量法C.凝膠成像分析法D.比色法E.高效液相色譜法10.關(guān)于PCR技術(shù)的描述正確的是（）A.可用于擴(kuò)增特定DNA片段B.靈敏度高C.特異性強(qiáng)D.操作簡單E.可在短時間內(nèi)獲得大量目標(biāo)DNA答案：1.ABCDE2.ABCDE3.AB4.ABCDE5.ABCDE6.ABC7.ABCD8.ABCDE9.AB10.ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可以擴(kuò)增RNA片段。（）2.引物濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（）3.實時熒光定量PCR不需要引物。（）4.只要實驗操作規(guī)范，PCR實驗不會出現(xiàn)污染。（）5.Mg2?濃度對PCR反應(yīng)沒有影響。（）6.核酸提取過程中，離心速度和時間對提取效果有影響。（）7.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小由引物決定。（）8.進(jìn)行PCR實驗時，實驗人員不需要進(jìn)行防護(hù)。（）9.紫外分光光度法可以準(zhǔn)確檢測核酸的純度和濃度。（）10.不同廠家的Taq酶活性都一樣。（）答案：1.×2.×3.×4.×5.×6.√7.√8.×9.√10.×四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR基于DNA半保留復(fù)制原理。在高溫下模板DNA變性解鏈，低溫時引物與模板退火結(jié)合，適溫下Taq酶以dNTP為原料，沿模板延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)多輪循環(huán)擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。2.引物設(shè)計時需要注意哪些要點(diǎn)？答案：引物長度15-30bp為宜；避免自身互補(bǔ)及形成二聚體；GC含量40%-60%；3'端避免錯配；與模板結(jié)合特異性高，且上下游引物Tm值接近。3.簡述實時熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR擴(kuò)增，熒光信號強(qiáng)度與產(chǎn)物數(shù)量成正比。通過檢測熒光信號積累，實時監(jiān)測PCR進(jìn)程，實現(xiàn)對起始模板的定量分析。4.如何防止PCR實驗中的污染？答案：實驗室合理分區(qū)，嚴(yán)格單向流動；規(guī)范操作，避免氣溶膠產(chǎn)生；定期清潔消毒儀器和實驗臺面；使用一次性耗材；設(shè)置陰性對照，監(jiān)控污染情況。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用及面臨的挑戰(zhàn)。答案：應(yīng)用：用于病原體檢測、遺傳性疾病診斷、腫瘤診斷與監(jiān)測等。挑戰(zhàn)：存在污染導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果；實驗條件要求嚴(yán)格，不同樣本處理有差異；對操作人員技術(shù)要求高，結(jié)果判讀需專業(yè)知識。2.假如你在進(jìn)行PCR實驗時，出現(xiàn)了無擴(kuò)增產(chǎn)物的情況，你會從哪些方面進(jìn)行排查？答案：從模板、引物、酶、反應(yīng)條件排查。檢查模板質(zhì)量與完整性，引物設(shè)計是否合理及濃度是否合適，Taq酶活性是否正常，Mg2?濃度是否恰當(dāng)，還有反應(yīng)溫度、時間設(shè)置是否準(zhǔn)確。3.討論核酸提取質(zhì)量對PCR實驗結(jié)果的影響。答案：核酸提取質(zhì)量不佳影響顯著。純度低，含蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)會抑制Taq酶活性，導(dǎo)致擴(kuò)增失敗或條帶模糊