CIK細(xì)胞在腫瘤治療中的應(yīng)用

景源生物主要內(nèi)容CIK免疫細(xì)胞治療簡介

腫瘤免疫治療腫瘤治療現(xiàn)狀景源生物簡介腫瘤治療現(xiàn)狀研究顯示全球惡性腫瘤（癌癥）病例呈迅猛增長態(tài)勢，由2012年的1400萬人，將逐年遞增至2025年的1900萬人。新增病例主要來自發(fā)展中國家，其中以中國最多。中國新增肝癌和食道癌患者約占全球一半，死亡分別占全球的51%和49%。2012年全球新增胃癌病例和相關(guān)死亡人數(shù)中，中國也均超過40%?！度虬┌Y報告2014》

為何腫瘤死亡率居高不下？早期診斷困難，易錯過最佳治療時間

早期癌癥癥狀不明顯，患者不能及時發(fā)現(xiàn)，同時缺乏定期的體檢，導(dǎo)致90%癌癥患者確診時已是中晚期，錯過最佳治療時間，增加了治療的難度。對癌癥產(chǎn)生恐懼心理，影響治療效果

70%~80%的腫瘤病人以為癌癥就是絕癥，不能治療，因此產(chǎn)生抑郁，焦慮，恐懼等。心理因素正成為扼殺腫瘤病人生命的重要因素。治療不徹底，癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)

當(dāng)患有腫瘤后，人們首先想到的是手術(shù)，放化療，雖然這三種方法能在一定程度上緩解患者的疼痛，控制病情，但無法徹底清除患者體內(nèi)的癌細(xì)胞，因此很多患者經(jīng)過治療后癌細(xì)胞還是會出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

腫瘤與綜合治療

腫瘤是一種慢性、消耗性的全身性疾病，抗腫瘤需要局部治療和全身性治療的有機(jī)結(jié)合。局部治療常用手段：手術(shù)、放療、微創(chuàng)與介入、超聲治療等。全身治療常用手段：化療、生物治療、中藥等。腫瘤免疫治療的必要性腫瘤發(fā)?。òl(fā)生、發(fā)展）的兩個必要條件：1.腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)異常

體細(xì)胞突變獲得惡性表型，無限繁殖與抗凋亡生長2.免疫逃逸NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、DC細(xì)胞、T細(xì)胞等起免疫監(jiān)測與免疫清除用。當(dāng)發(fā)生免疫耐受、抗原調(diào)變或免疫細(xì)胞凋亡時，腫瘤細(xì)胞可逃避免疫監(jiān)測或清除作用。腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的原因：

腫瘤形成后進(jìn)一步釋放大量免疫抑制因子（IL-10、IL-4、VEGF等），導(dǎo)致腫瘤局部和機(jī)體全身免疫抑制，失去了抗腫瘤能力。因此，恢復(fù)和增強(qiáng)腫瘤病人的免疫力極為重要。

免疫治療受世界腫瘤醫(yī)學(xué)界追捧美國癌癥學(xué)會（ACS）最好的抗癌藥物是人體的免疫力美國臨床腫瘤學(xué)會（ASCO）生物治療將成為21世紀(jì)人類攻克癌癥具有戰(zhàn)略意義的一個重要方面2009年6月11日，國家衛(wèi)生部將細(xì)胞免疫治療列入首批允許臨床應(yīng)用的第三類醫(yī)療技術(shù)。CIK的衛(wèi)生部醫(yī)療項目號：310800024b免疫治療發(fā)展簡史CIK細(xì)胞簡介CIK(cytokines-inducedkillercell)為細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞，是將人體外周血單個核細(xì)胞(PBMC)在體外模擬人體內(nèi)環(huán)境，用多種細(xì)胞因子(如CD3McAb、IL-2、IFN-γ、IL-1α等)共同培養(yǎng)增殖后獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞。CIK又稱為NK細(xì)胞樣T淋巴細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤特點(diǎn)。CIK細(xì)胞培養(yǎng)四天后顯微圖（1×400）CIK細(xì)胞特性

CIK細(xì)胞為異質(zhì)細(xì)胞群，同時具有T細(xì)胞和NK細(xì)胞的標(biāo)志,表面標(biāo)志為CD3＋CD56＋增殖能力強(qiáng)，可達(dá)1000倍殺瘤譜廣對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感殺瘤活性不受CSA、FK506等免疫抑制劑的影響對正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性很小能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas—FasL凋亡近期療效顯著

CIK細(xì)胞的作用機(jī)制①直接殺傷腫瘤細(xì)胞②活化后產(chǎn)生大量細(xì)胞因子的抑瘤殺瘤作用③誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡④激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，提高機(jī)體免疫功能CIK細(xì)胞治療策略常規(guī)治療盡可能使腫瘤負(fù)荷降低體外誘導(dǎo)CIK細(xì)胞（1×109個細(xì)胞以上）回輸CIK細(xì)胞給患者（一療程回輸3次，3~4療程/年）殺傷殘留的腫瘤細(xì)胞抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移CIK治療方案選擇CIK免疫治療安全性安全性：細(xì)胞來源安全，體外培養(yǎng)操作均在局部百級，整體萬級的符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的實驗室中完成，是非常成熟的個體化細(xì)胞治療技術(shù)，目前尚無嚴(yán)重副作用的相關(guān)報道。CIK細(xì)胞臨床應(yīng)用時的不良反應(yīng)主要包括：輕度發(fā)熱、畏寒等，偶見關(guān)節(jié)痛、腹痛等，一般表現(xiàn)為類感冒癥狀；不良反應(yīng)原因：通常是由CIK細(xì)胞釋放的大量炎性細(xì)胞因子所引起，屬于一種過敏性反應(yīng)，即個性化的反應(yīng)。不良反應(yīng)處理方法：1.發(fā)熱：停藥后8小時內(nèi)可自行緩解，也可以肌肉注射非那根25mg或苯海拉明20mg。如果高熱應(yīng)按高熱常規(guī)護(hù)理；2.出現(xiàn)乏力、全身肌肉酸痛等癥狀：患者應(yīng)多注意休息，可自行緩解；3.過敏反應(yīng)：可出現(xiàn)皮膚瘙癢、皮疹等在開始輸注前速度宜慢，發(fā)現(xiàn)問題及時報告主管醫(yī)生，以做適當(dāng)護(hù)理；4.回輸后應(yīng)保證充足的睡眠，不能做劇烈的運(yùn)動。CIK治療適應(yīng)人群適應(yīng)癥手術(shù)后患者，可防止腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)；無法進(jìn)行手術(shù)、放化療的中晚期患者；放療、化療失敗的患者；放療或化療后患者的綜合治療；骨髓移植后或化療緩解后的白血病患者；癌性胸、腹腔積液患者；乙型、丙型肝炎。禁忌癥

懷孕或哺乳期婦女；臟器移植者；嚴(yán)重自身免疫性疾病患者；不可控制的感染性疾??；對本治療中所用生物制劑過敏者；

T細(xì)胞淋巴瘤；器官功能衰竭者；心臟：Ⅳ級以上；肝臟：達(dá)到國內(nèi)肝功能分級C級以上；腎臟：腎功能衰竭及尿毒癥；肺：出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸衰竭癥狀，并累及到其他臟器，如肝、腎功能；腦：腦轉(zhuǎn)移并伴意識障礙者。應(yīng)嚴(yán)格遵照CIK細(xì)胞治療的適應(yīng)癥、禁忌癥，并估算患者的預(yù)計生存期應(yīng)不少于3個月，還應(yīng)盡可能選擇術(shù)后或腫瘤負(fù)荷較少的患者CIK細(xì)胞治療流程1.細(xì)胞采集抽取患者外周血2.提取單個核細(xì)胞3.體外誘導(dǎo)培養(yǎng)CIK細(xì)胞4.終產(chǎn)品質(zhì)量檢測5.回輸患者6.隨訪及療效評估CIK臨床應(yīng)用指導(dǎo)入選標(biāo)準(zhǔn)患者預(yù)期生存>3個月，生存質(zhì)量評分(KPS)>60％。重要生命器官功能正常，血膽紅素<68pmol/L冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶<90IU／L，肌酐<353pmol/L，白細(xì)胞計數(shù)>3.5x109/L，血小板計數(shù)>80x109/L，紅細(xì)胞壓積>0.20。無嚴(yán)重的病毒、細(xì)菌感染。非妊娠及哺乳期患者。對生物制品無過敏反應(yīng)者。排除標(biāo)準(zhǔn)顱內(nèi)轉(zhuǎn)移；心、肝、腎功能不全；有精神或心理疾??；正在接受放療、化療或其他全身抗腫瘤治療者；同時存在其他惡性腫瘤及傳染性疾病者；大手術(shù)傷口未完全愈合者；懷孕期或哺乳期婦女；對生物制品過敏反應(yīng)者；T細(xì)胞淋巴瘤患者患者選擇：應(yīng)嚴(yán)格遵守CIK細(xì)胞治療適應(yīng)癥和禁忌癥CIK臨床應(yīng)用指導(dǎo)1.細(xì)胞采集——細(xì)胞來源CIK來源優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)自體“用自己的細(xì)胞治療自己的病”，安全性好，可避免由于交叉感染引發(fā)其他疾病惡性腫瘤患者已存在不同程度的免疫機(jī)能受損，CD3+、CD4+

、CD8+

細(xì)胞數(shù)量降低同種異體遺傳背景相對接近且血型相同，相對安全可靠。CIK細(xì)胞活化和擴(kuò)增能力較患者自體明顯優(yōu)越需同型血（RH型相同），培養(yǎng)后CIK細(xì)胞質(zhì)量不等臍血臍血來源廣泛、采取方便、免疫原性弱，臍血CIK細(xì)胞，擴(kuò)增潛力極強(qiáng)，且殺傷活性高暫無骨髓骨髓來源的CIK細(xì)胞在細(xì)胞毒方面與外周血CIK細(xì)胞相比無顯著性差異骨髓來源不便，其CIK細(xì)胞增殖能力較外周血來源的CIK細(xì)胞稍差CIK臨床應(yīng)用指導(dǎo)外周血采集前相關(guān)檢查：（1）患者應(yīng)提供的化驗結(jié)果有：血常規(guī)，感染篩查，病毒拷貝數(shù)檢測和血生化全項（7天內(nèi)有效），腫瘤標(biāo)志物和CT或X光片、B超（30天內(nèi)有效），以進(jìn)行療效評價。（2）患者采血前注意事項：a)患者清晨抽血前可以進(jìn)食，但勿食用油膩食物b)抽血前12小時不能輸液c)進(jìn)行放化療的患者：放化療前或化療后淋巴細(xì)胞計數(shù)正常后取血。已凍存細(xì)1111111胞的情況除外。d)連續(xù)兩個療程治療時，取血和回輸細(xì)胞在時間上會有交叉。取血必須在細(xì)胞1111111回輸之前。CIK臨床應(yīng)用指導(dǎo)

（3）外周血采集血常規(guī)，生化和病毒學(xué)檢查均正常，淋巴細(xì)胞絕對值不低于

0.8×106/ml

一般成年患者采集80~100ml外周血CIK臨床應(yīng)用指導(dǎo)2.細(xì)胞培養(yǎng)—提取單個核細(xì)胞利用密度梯度離心法進(jìn)行單個核細(xì)胞的分離。3.體外誘導(dǎo)CIK細(xì)胞在細(xì)胞懸液中添加一定濃度的細(xì)胞因子（CD3單克隆抗體、TNF、IL-2等），培養(yǎng)14~20天。細(xì)胞回輸數(shù)量：＞1~2×109/次CIK臨床應(yīng)用指導(dǎo)4.終產(chǎn)品檢測回輸前進(jìn)行微生物和各種傳染病病毒檢測，自檢和第三方檢測同時進(jìn)行，確保細(xì)胞制劑符合臨床要求。細(xì)胞活力和細(xì)胞計數(shù)流式細(xì)胞儀（FCM,美國）檢測細(xì)胞膜標(biāo)志，CD3+CD56+效應(yīng)細(xì)胞比例同位素釋放試驗檢測細(xì)胞殺傷性CIK臨床應(yīng)用指導(dǎo)5.回輸患者——回輸途徑全身治療：通過靜脈進(jìn)行滴注（使用輸血器回輸）局部治療：是將收獲的CIK細(xì)胞直接注入病灶部位(胸、腹腔積液患者直接注入胸、腹腔內(nèi))回輸時間間隔

第14~20天輸注CIK細(xì)胞，可每天1次，連續(xù)3d為1個療程；也可2d1次，3次為1個療程。單次回輸時間：一般為0.5~1h，如果遠(yuǎn)程運(yùn)送應(yīng)低溫冷藏，控制在12小時內(nèi)回輸。CIK臨床應(yīng)用指導(dǎo)回輸前注意事項：（1）接受本治療前2周內(nèi)應(yīng)終止放療或化療；（2）患者的血常規(guī)、血生化指標(biāo)在正常值范圍內(nèi)，乙肝兩對半、丙肝抗體等檢查正

常，患者心肺功能應(yīng)在正常狀況。同時應(yīng)了解患者是否是過敏體質(zhì)等；（3）細(xì)胞輸注前先測量體溫，如體溫超過38.5℃，及時通知GMP實驗室暫不輸注；（4）告知患者具體的回輸時間，確保病人每次回輸能順利進(jìn)行?；剌斨械淖o(hù)理（1）嚴(yán)格無菌操作，用一次性輸血器回輸，以過濾抱團(tuán)的細(xì)胞；（2）輸注前輕輕搖勻，防止細(xì)胞凝集。開始輸注時速度為20d/min，觀察10min后無

不良反應(yīng)，可將滴數(shù)調(diào)為60～80d/min；（3）為了防止細(xì)胞堵管或粘附管壁，輸注過程應(yīng)輕彈輸血管道保持輸注通暢，若發(fā)現(xiàn)輸血器過濾網(wǎng)中有成團(tuán)細(xì)胞，可予生理鹽水沖洗后再輸入；CIK臨床應(yīng)用指導(dǎo)6.隨訪及療效判定療效判定指標(biāo)具

體

內(nèi)

容免疫學(xué)指標(biāo)應(yīng)用熒光活化細(xì)胞分選法（FACS）檢測患者CD3/CD4/CD8/CD16/CD56等膜標(biāo)志表達(dá)變化情況，以了解患者免疫功能上升狀態(tài)腫瘤標(biāo)志物根據(jù)患者病情，檢查相應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物，檢測其含量變化形態(tài)學(xué)檢查B超或CT,MRI等影像學(xué)手段檢測瘤體變化臨床指標(biāo)評估生活質(zhì)量評分行為狀況評分標(biāo)準(zhǔn)(Karnofsky計分制)WHO制定的腫瘤緩解評定標(biāo)準(zhǔn)分為:完全緩解(CR),部分緩解(PR),穩(wěn)定(SD)和進(jìn)展(PD)毒

副

作

用回輸中或回輸后3~5天是否有發(fā)熱，關(guān)節(jié)酸疼或過敏現(xiàn)象國內(nèi)外臨床應(yīng)用報告SangioloD．Cytokineinducedkillercellsaspromisingimmunother-apyforsolidtumors[J].Cancer，2011，2：363-368．王志華，等．CIK細(xì)胞治療癌癥：國際臨床試驗的現(xiàn)狀及展望中國腫瘤生物治療雜志.2013年4月，20(2)CIK細(xì)胞過繼免疫治療技術(shù)在臨床得到廣泛應(yīng)用，通過結(jié)合手術(shù)，放化療等治療方案，均取得較好的臨床治療療效國內(nèi)外臨床應(yīng)用報告1.CIK細(xì)胞治療肝癌

檢測30例健康志愿者和98例晚期肝癌患者經(jīng)導(dǎo)管肝動脈栓塞（TACE）術(shù)前、術(shù)后第7天、CIK回輸后第7天的外周血T細(xì)胞亞群變化，并觀察CIK細(xì)胞治療的毒副反應(yīng)。陳敬華等.CIK細(xì)胞治療晚期肝癌患者免疫功能變化及安全性評價.JournalofbasicandclinicaloncologyVol.26No.4Aug.2013結(jié)論：1.肝癌患者外周血中具有免疫效應(yīng)的T淋巴細(xì)胞比例明顯低于健康志愿者；2.TACE術(shù)后序貫CIK治療，外周血中效應(yīng)T淋巴細(xì)胞比值升高，可提高晚期肝癌患者的細(xì)胞免疫功能，有助于降低患者術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。國內(nèi)外臨床應(yīng)用報告2.CIK細(xì)胞聯(lián)合手術(shù)和放療治療胃癌

天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院195例胃癌患者行手術(shù)后分：

聯(lián)合治療組：65例化療聯(lián)合CIK治療（1個周期分2次回輸，13.07×109個細(xì)胞/次，中間間隔1d，每月一療程，1~25個療程不等）；

單純化療組：130例單純化療。結(jié)果表明：CIK可明顯延長患者3~5年無進(jìn)展生存率，而且隨著CIK

治療次數(shù)增加，療效更顯著。

樊永麗等.胃癌患者術(shù)后化療聯(lián)合CIK免疫治療的臨床療效.[J]中國腫瘤生物治療雜志.2012,19(2)中位存活時間聯(lián)合組：96月化療組：32月P=0.001中位無疾病進(jìn)展時間聯(lián)合組：36月化療組：23月P=0.011國內(nèi)外臨床應(yīng)用報告3.CIK細(xì)胞治療肺癌

云南省腫瘤醫(yī)院選取310例非小細(xì)胞肺癌患者，均行手術(shù)＋化療，系統(tǒng)治療后按是否給予CIK細(xì)胞治療分為CIK細(xì)胞治療組（210例，每年4次治療,單次回輸細(xì)胞量為1~2×109個細(xì)胞）和常規(guī)治療組（100例）復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中位時間患者生存期CIK細(xì)胞治療組4143常規(guī)治療組3236p值0.0080.023金從國，等肺癌患者外周血CIK細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量與療效相關(guān)性的分析.中華腫瘤防治雜志，2013,20(10):778~781結(jié)論：1.CIK細(xì)胞治療組患者轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率低于常規(guī)組，出現(xiàn)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的時間延長2.CIK細(xì)胞治療組患者總生存率高于常規(guī)治療組，總生存期明顯延長國內(nèi)外臨床應(yīng)用報告4.CIK治療消化系統(tǒng)腫瘤

合肥鳳凰腫瘤醫(yī)院生物免疫治療中心收治的中晚期（Ⅲ~Ⅳ期）消化道惡性腫瘤患者118例，患者接受1~4個療程,回輸細(xì)胞量為2×109個細(xì)胞/次。王志華等.自體CIK細(xì)胞治療中晚期消化道惡性腫瘤臨床療效評估.[J]臨床研究2013,10（21）結(jié)論：CIK治療惡性消化道腫瘤安全可靠，副作用小，療效確切，并能有效改

善患者細(xì)胞免疫狀態(tài)，提高患者生存質(zhì)量，抑制腫瘤增長，提高治療效果?？偨Y(jié)CIK屬于體細(xì)胞免疫療法范疇，在細(xì)胞治療上具有殺瘤譜廣，殺傷性強(qiáng)等特性；CIK臨床上常用于手術(shù)、放化療后或無法接受常規(guī)治療的腫瘤患者，可有效清除殘留微小病灶和轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞；CIK逐步成為腫瘤治療中重要的綜合治療方法，可有效提高腫瘤患者生存質(zhì)量和延長生存時間，實現(xiàn)長期帶瘤生存。景源生物專家團(tuán)隊技術(shù)總監(jiān)：魏光偉山東大學(xué)教授，博士研究生導(dǎo)師“泰山學(xué)者”，“985工程”海外引進(jìn)學(xué)術(shù)骨干美國加州大學(xué)舊金山分校（UniversityofCaliforniaSanFrancisco）客座教授美國勞倫斯-伯克利國家實驗室（Lawrence-BerkeleyNationalLaboratory）客座研究員主要研究方向：

1.癌基因在上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化、腫瘤干細(xì)胞形成中的分子機(jī)制及干預(yù)措施2.基于生物信息學(xué)分析，研究癌基因、抑癌基因在腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移中的作用、分

子機(jī)制和臨床意義

3.以動物模型為基礎(chǔ)，結(jié)合臨床數(shù)據(jù)，研究惡性腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、治療等的生物標(biāo)志物

4.應(yīng)用shRNA文庫篩選技術(shù)，尋找、分析組織干細(xì)胞分化、惡性轉(zhuǎn)化的功能基因及相關(guān)機(jī)制景源生物專家團(tuán)隊技術(shù)顧問：徐國彤同濟(jì)大學(xué)教授，博士研究生導(dǎo)師，醫(yī)學(xué)院院長曾任美國北德克薩斯大學(xué)健康科學(xué)中心解剖與細(xì)胞生物學(xué)系助理研究員臨床視覺科學(xué)實驗室課題組長(PI)和中科院干細(xì)胞生物學(xué)重點(diǎn)實驗室課題組長2007年擔(dān)任科技部重大科學(xué)計劃（干細(xì)胞資源庫與關(guān)鍵技術(shù)平臺建設(shè)項目）首席科學(xué)家，中國第一屆干細(xì)胞學(xué)會會長。景源生物專家團(tuán)隊技術(shù)顧問