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文檔簡介
Ⅰ紅藻多糖降解菌廣泛存在于自然界中的一些微生物,它們通過產(chǎn)生特定的酶類分子,如紅藻多糖酶,能夠有效地降解紅藻多糖,可將多糖降解成不同聚合度的功能性寡糖,被認(rèn)為具有巨大的應(yīng)用潛力。本實(shí)驗(yàn)從br菌群(細(xì)基江蘺分離出來的菌群)和zh菌群(瓊枝分離出來的菌群)中分別分離出2個(gè)單菌株(YD1、TD2),對2個(gè)單菌株進(jìn)行了鑒定,驗(yàn)證了兩單菌株具有多糖降解能力,研究了多糖降解菌的生長并探究了多糖降解菌酶活性優(yōu)化條件。主要研究結(jié)果如下:本實(shí)驗(yàn)從br菌群和zh菌群中分別分離出2個(gè)單菌株(YD1、TD2),然后對2個(gè)單菌株進(jìn)行總DNA提取,并通過對16SrRNA序列進(jìn)行特異性擴(kuò)增,利用NCBI網(wǎng)站上的BLAST對得到的序列進(jìn)行了比較,鑒定YD1、YD2分別為哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)和對蝦鹽單胞菌(Halomonaslitopenaei)。本研究按照DNS法測定多糖酶活力等方法,驗(yàn)證了YD1菌株和YD2菌株具有多糖降解能力。本實(shí)驗(yàn)研究多糖降解菌的生長情況,結(jié)果表明:在D培養(yǎng)基、30℃、100r/min的搖床振蕩培養(yǎng)條件下,接種后6-24h為哈維氏弧菌和對蝦鹽單胞菌的快速生長期為了提高多糖降解菌產(chǎn)多糖酶量,本實(shí)驗(yàn)對多糖降解菌產(chǎn)多糖酶的發(fā)酵條件(卡拉膠濃度、瓊脂粉濃度、溫度、鹽度和PH)進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明:選擇0.25%、0.20‰卡拉膠分別作為YD1菌株和YD2菌株生產(chǎn)多糖酶的最佳發(fā)酵濃度;選擇0.20%、0.25%瓊脂粉作為YD1菌株和YD2菌株生產(chǎn)多糖酶的最佳發(fā)酵濃度;選擇35℃作為YD1和YD2菌株生產(chǎn)多糖酶的最佳發(fā)酵溫度;選擇30‰鹽度作為YD1菌株生產(chǎn)多糖酶的最佳發(fā)酵鹽度,選擇20‰、0‰、30‰鹽度分別作為YD2菌株生產(chǎn)多糖酶的最佳發(fā)酵鹽度;選擇PH值為7和8分別作為YD1菌株和YD2菌株生產(chǎn)多糖酶的最佳發(fā)酵PH值。綜上所述,br菌落和zh菌落中的YD1菌株和YD2菌株對多糖的降解效果較好,可大量開發(fā)應(yīng)用于市場。Redalgaepolysaccharidedegradationbacteriaarewidelyfoundinsomemicroorganismsinnature.Byproducingspecificenzymemolecules,suchasredalgaepolysaccharideenzymes,theycaneffectivelydegraderedalgaepolysaccharides,andcandegradepolysaccharidesintofunctionaloligosaccharideswithdifferentdegreesofpolymerization,whichisconsideredtohavegreatapplicationpotential.Inthisexperiment,twosinglestrains(YD1,TD2)wereisolatedfromthebrflora(thefloraisolatedfromtheXijiRiver)andthezhflora(thefloraisolatedbyQiongzhi).Twosinglestrainswereidentified,verifiedthatthetwosinglestrainshadpolysaccharidedegradationability,andstudiedthegrowthandexplorationofpolysaccharide-degradingbacteria.Theconditionsforoptimizingtheenzymeactivityofpolysaccharidedegradationbacteria.Themainresearchresultsareasfollows:Inthisexperiment,twosinglestrains(YD1,TD2)wereisolatedfromthebrandzhflora,andthenthetotalDNAofthetwosinglestrainswasextracted.Throughthespecificamplificationofthe16SrRNAsequence,theobtainedsequencewascomparedusingBLASTontheNCBIwebsite.YD1andYD2wereidentifiedasVibrioharveyiandHalomonaslitopenaeirespectively.ThisstudyverifiedthepolysaccharidedegradationabilityofYD1andYD2strainsaccordingtothedeterminationofpolysaccharideactivitybyDNSmethod.Thisexperimentstudiesthegrowthofpolysaccharidedegradationbacteria.TheresultsshowthatundertheconditionofshakeroscillationcultureofDmedium,30℃and100r/min,6-24hoursafterinoculationistherapidgrowthperiodofVibrioHavirioandshrimpsaltmononas.Inordertoimprovetheamountofpolysaccharideenzymesproducedbypolysaccharide-degradingbacteria,thefermentationconditionsofpolysaccharide-producingpolysaccharide-producingbacteria(carrageenanconcentration,agarpowderconcentration,temperature,salinityandPH)wereoptimizedinthisexperiment.Theresultsshowthat0.25%and0.20‰carrageenaneseareselectedasthebestfermentationconcentrationofpolysaccharaseproducedbyYD1andYD2strainsrespectively;0.20%and0.25%agarpowderareselectedasthebestfermentationconcentrationfortheproductionofpolysaccharasebyYD1andYD2strains;35℃isselectedasYD.Thebestfermentationtemperaturefortheproductionofpolysaccharasein1andYD2strains;30‰salinityisselectedasthebestfermentationsalinityfortheproductionofpolysaccharinesinYD1strains,and20‰,0‰and30‰salinityasthebestfermentationsalinityfortheproductionofpolysaccharideenzymesinYD2strains;PHvaluesof7and8areselectedasYD1bacteria.TheoptimalfermentationPHvalueofpolysaccharideenzymesproducedbystrainsandYD2strains.Tosumup,YD1andYD2strainsinthebrcolonyandzhcolonyhaveagooddegradationeffectonpolysaccharidesandcanbewidelydevelopedandappliedtothemarket.Keywords:Redalgaepolysaccharide;polysaccharidedegradationbacteria;YD1andYD2strains;16srRNAsequence
Ⅰ Ⅱ前言 PAGE參考文獻(xiàn)[1]王小桃.新型細(xì)菌瓊膠酶水解紅藻產(chǎn)瓊膠寡糖的研究[D].成都大學(xué),2023.DOI:10.27917/ki.gcxdy.2022.000030.[2]HitchensAP,LeikindMC.TheIntroductionofAgar-AgarintoBacteriology[J].JournalofBacteriology,1939,37(5):485-493.[3]宣雯燕,張瑩瑩,陳瓊琳,羅素雅,孫雪,徐年軍.龍須菜(Gracilariopsis)/江蘺(Gracilaria)的生長和種質(zhì)特性分析[J].海洋科學(xué),2022,46(12):148-158.[4]石碩,孫康婷,李繼偉,等.瓊枝麒麟菜多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及降血糖活性[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2023,38(05):866-873.DOI:10.16535/ki.dlhyxb.2023-034.[5]冀曉龍,郭建行,田靜源,等.植物多糖降解方法及降解產(chǎn)物特性研究進(jìn)展[J].輕工學(xué)報(bào),2023,38(03):55-62.[6]岳真,李守玲,李璽,等.羥自由基降解海帶硫酸多糖的可行性研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2009,20(06):1459-1460.[7]RODRIGUEZ-JASSORM,MUSSATTOSI,PASTRANALetal.Fucoidan-degradingfungalstrains:Screening,morphometricevaluation,andinfluenceofmediumcomposition[J].AppliedBiochemistryandBiotechnology,2010,162(8):2177-2188.[8]桂媛媛,谷曉倩,李江,張培玉.南極大型海藻表面可培養(yǎng)瓊膠降解菌多樣性分析[J].極地研究,2020,32(04):504-511.[9]白新峰,賈愛榮,劉雪,張綿松,崔婷婷,劉德亭,劉昌衡.海參腸道內(nèi)容物中海藻多糖降解菌的篩選及鑒定[J].生物技術(shù)通報(bào),2021,37(06):147-153.[10]朱強(qiáng),夏艷秋,顧冬瑩,費(fèi)雪蓮,李偉偉.滸苔降解菌分離篩選與鑒定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,45(32):152-155.[11]黎芯怡,王靜涵,甄莉,徐展,戴景程,閆達(dá)中,陳靜.滸苔多糖降解菌的篩選及其碳源利用譜分析[J].廣西科技大學(xué)學(xué)報(bào),2023,34(03):123-131.[12]S.Vishnupriya,T.Jabir,B.M.Adarsh,KattatheyilHafsa,S.ShahanaKabeer,K.P.Krishnan,C.K.Radhakrishnan,A.A.MohamedHatha.DiversityofcomplexpolysaccharidedegradingbacteriafromthesedimentsofinterlinkedhighArcticfjords,Svalbard[J].RegionalStudiesinMarineScience,2023,63.[13]BhaktaBubai,SatohMiho,OhnishiKouhei.DraftGenomeSequencesofMarineBacteria,DegradersoftheSulfatedPolysaccharideUlvan,ExtractedfromaGreenAlga,Ulvameridionalis.[J].Microbiologyresourceannouncements,2023,12(4)[14]D'SouzaGlen,EbrahimiAli,StubbuschAstrid,DanielsMichael,KeegstraJohannes,StockerRoman,CorderoOtto,AckermannMartin.Cellaggregationisassociatedwithenzymesecretionstrategiesinmari
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