莆田市中醫(yī)院激光顯微切割考核一、單選題（每題2分，共20題）1.激光顯微切割技術(shù)中，以下哪種光源最常用于激光捕獲顯微鏡？A.氦氖激光B.二極管激光C.氬離子激光D.氦離子激光2.在莆田地區(qū)，進(jìn)行激光顯微切割時(shí)，優(yōu)先選擇的組織固定方式是？A.甲醛固定B.乙醇固定C.戊二醛固定D.甲醇固定3.激光顯微切割的主要優(yōu)勢(shì)不包括？A.可避免RNA降解B.可精確分離單個(gè)細(xì)胞C.可提高組織切片效率D.可適用于所有類型的組織4.莆田市中醫(yī)院在激光顯微切割中，常用的捕獲膜材質(zhì)是？A.聚丙烯膜B.硅化膜C.尼龍膜D.玻璃膜5.當(dāng)進(jìn)行激光顯微切割時(shí)，以下哪種參數(shù)調(diào)整可減少熱損傷？A.增加激光能量B.縮短脈沖時(shí)間C.加大掃描速度D.使用更長的激光波長6.激光顯微切割后，用于下游分析時(shí)，首選的RNA提取方法是？A.傳統(tǒng)酚-氯仿法B.RNeasyMiniKitC.Trizol試劑法D.直接PCR擴(kuò)增法7.在莆田地區(qū)，激光顯微切割技術(shù)最常見的應(yīng)用領(lǐng)域是？A.腫瘤精準(zhǔn)治療B.神經(jīng)科學(xué)研究C.微生物學(xué)檢測(cè)D.藥物代謝研究8.激光顯微切割前，組織預(yù)處理中，以下哪項(xiàng)操作不正確？A.充分脫水B.固定時(shí)間過長C.脫蠟徹底D.適當(dāng)濕潤切片9.激光顯微切割的樣品厚度一般控制在？A.2-5μmB.10-15μmC.50-100μmD.200-500μm10.在莆田市中醫(yī)院，激光顯微切割系統(tǒng)最常配套的檢測(cè)技術(shù)是？A.流式細(xì)胞術(shù)B.蛋白質(zhì)組學(xué)C.深度測(cè)序D.電子顯微鏡二、多選題（每題3分，共10題）1.激光顯微切割技術(shù)的關(guān)鍵組成部分包括？A.激光系統(tǒng)B.顯微鏡平臺(tái)C.捕獲裝置D.計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)E.組織處理臺(tái)2.莆田地區(qū)進(jìn)行激光顯微切割時(shí)，需注意的潛在問題有？A.組織收縮B.RNA降解C.細(xì)胞交叉污染D.激光損傷E.設(shè)備成本高3.激光顯微切割在腫瘤研究中的應(yīng)用價(jià)值包括？A.精確分離腫瘤異質(zhì)性細(xì)胞B.檢測(cè)腫瘤微環(huán)境C.進(jìn)行單細(xì)胞測(cè)序D.評(píng)估藥物敏感性E.研究腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制4.激光顯微切割前，組織切片的制備要求包括？A.切片厚度均勻B.組織貼壁牢固C.切片表面光滑D.固定劑滲透充分E.切片編號(hào)清晰5.激光顯微切割技術(shù)對(duì)光源的要求有？A.高分辨率B.可調(diào)焦距C.穩(wěn)定輸出D.多波長可選E.低熱效應(yīng)6.激光顯微切割后的RNA質(zhì)量評(píng)估指標(biāo)包括？A.RIN值B.28S/18SrRNA比例C.OD260值D.RNA純度E.沉降實(shí)驗(yàn)結(jié)果7.莆田市中醫(yī)院開展激光顯微切割技術(shù)的優(yōu)勢(shì)有？A.依托中醫(yī)藥背景，可結(jié)合傳統(tǒng)方劑研究B.醫(yī)療資源豐富，樣本來源多樣C.技術(shù)平臺(tái)先進(jìn)，設(shè)備維護(hù)完善D.研究團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)豐富E.政策支持力度大8.激光顯微切割中，影響切割效果的因素包括？A.激光能量B.脈沖寬度C.掃描速度D.組織含水量E.捕獲膜類型9.激光顯微切割在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用場(chǎng)景有？A.腎臟病模型研究B.糖尿病并發(fā)癥分析C.中藥藥效機(jī)制研究D.慢性炎癥病理分析E.中藥毒性評(píng)價(jià)10.激光顯微切割技術(shù)的未來發(fā)展趨勢(shì)包括？A.單細(xì)胞多組學(xué)聯(lián)用B.智能化自動(dòng)化切割C.微流控結(jié)合切割D.便攜式設(shè)備開發(fā)E.成本進(jìn)一步降低三、判斷題（每題1分，共10題）1.激光顯微切割技術(shù)適用于所有類型的組織樣本。（×）2.莆田地區(qū)的中醫(yī)院普遍配備激光顯微切割系統(tǒng)。（√）3.激光顯微切割過程中，RNA降解不可避免。（×）4.激光顯微切割前，組織需進(jìn)行充分脫蠟處理。（√）5.激光顯微切割的樣品厚度越厚，效果越好。（×）6.激光顯微切割技術(shù)可替代傳統(tǒng)組織學(xué)方法。（×）7.莆田市中醫(yī)院在激光顯微切割中，主要應(yīng)用于腫瘤研究。（√）8.激光顯微切割的捕獲膜可重復(fù)使用。（×）9.激光顯微切割對(duì)操作人員的技術(shù)要求較高。（√）10.激光顯微切割技術(shù)的成本較傳統(tǒng)方法低。（×）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共5題）1.簡(jiǎn)述激光顯微切割技術(shù)的原理及其在莆田市中醫(yī)院的應(yīng)用價(jià)值。2.激光顯微切割前，組織樣本的預(yù)處理步驟有哪些？3.激光顯微切割過程中，如何減少RNA降解？4.莆田地區(qū)開展激光顯微切割技術(shù)面臨的挑戰(zhàn)有哪些？5.激光顯微切割與流式細(xì)胞術(shù)相比，有何獨(dú)特優(yōu)勢(shì)？五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合莆田市中醫(yī)院的特色，論述激光顯微切割技術(shù)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用前景。2.分析激光顯微切割技術(shù)的臨床應(yīng)用潛力，并探討其在莆田地區(qū)的推廣價(jià)值。答案與解析一、單選題答案1.B2.A3.D4.A5.B6.B7.A8.B9.C10.C解析：1.二極管激光是目前激光捕獲顯微鏡最常用的光源，因其成本低、效率高且可調(diào)性強(qiáng)。2.甲醛固定是激光顯微切割中最常用的組織固定方式，能較好地保存RNA和蛋白質(zhì)。3.激光顯微切割不適用于所有類型的組織，特別是硬度過高或含水量過大的樣本。4.聚丙烯膜是目前最常用的捕獲膜材質(zhì)，因其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定且能高效捕獲細(xì)胞。5.縮短脈沖時(shí)間可減少熱損傷，提高切割精度。6.RNeasyMiniKit是激光顯微切割后提取RNA的首選方法，能高效純化RNA。7.莆田地區(qū)腫瘤發(fā)病率較高，激光顯微切割在腫瘤精準(zhǔn)診斷和治療中應(yīng)用廣泛。8.固定時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致組織過度硬化，不利于切割。9.激光顯微切割的樣品厚度一般控制在10-15μm，以保證切割精度。10.激光顯微切割后，深度測(cè)序是常用的下游分析技術(shù)，可研究基因表達(dá)調(diào)控。二、多選題答案1.A,B,C,D,E2.A,B,C,D,E3.A,B,C,D,E4.A,B,C,D,E5.A,B,C,D,E6.A,B,C,D,E7.A,B,C,D,E8.A,B,C,D,E9.A,B,C,D,E10.A,B,C,D,E解析：1.激光顯微切割系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分包括激光系統(tǒng)、顯微鏡平臺(tái)、捕獲裝置、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)和組織處理臺(tái)。2.潛在問題包括組織收縮、RNA降解、細(xì)胞交叉污染、激光損傷和設(shè)備成本高。3.激光顯微切割在腫瘤研究中的應(yīng)用價(jià)值包括分離腫瘤異質(zhì)性細(xì)胞、檢測(cè)腫瘤微環(huán)境、進(jìn)行單細(xì)胞測(cè)序、評(píng)估藥物敏感性和研究腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制。4.組織切片的制備要求包括切片厚度均勻、組織貼壁牢固、切片表面光滑、固定劑滲透充分和切片編號(hào)清晰。5.激光顯微切割對(duì)光源的要求包括高分辨率、可調(diào)焦距、穩(wěn)定輸出、多波長可選和低熱效應(yīng)。6.RNA質(zhì)量評(píng)估指標(biāo)包括RIN值、28S/18SrRNA比例、OD260值、RNA純度和沉降實(shí)驗(yàn)結(jié)果。7.莆田市中醫(yī)院開展激光顯微切割技術(shù)的優(yōu)勢(shì)包括依托中醫(yī)藥背景、醫(yī)療資源豐富、技術(shù)平臺(tái)先進(jìn)、研究團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)豐富和政策支持力度大。8.影響切割效果的因素包括激光能量、脈沖寬度、掃描速度、組織含水量和捕獲膜類型。9.激光顯微切割在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用場(chǎng)景包括腎臟病模型研究、糖尿病并發(fā)癥分析、中藥藥效機(jī)制研究、慢性炎癥病理分析和中藥毒性評(píng)價(jià)。10.未來發(fā)展趨勢(shì)包括單細(xì)胞多組學(xué)聯(lián)用、智能化自動(dòng)化切割、微流控結(jié)合切割、便攜式設(shè)備開發(fā)和成本進(jìn)一步降低。三、判斷題答案1.×2.√3.×4.√5.×6.×7.√8.×9.√10.×解析：1.激光顯微切割技術(shù)對(duì)組織類型有要求，不適用于所有樣本。2.莆田地區(qū)的中醫(yī)院部分已配備激光顯微切割系統(tǒng)。3.通過優(yōu)化切割參數(shù)和下游處理，可有效減少RNA降解。4.脫蠟是組織切片預(yù)處理的關(guān)鍵步驟。5.樣品過厚會(huì)導(dǎo)致切割效率降低和RNA降解風(fēng)險(xiǎn)增加。6.激光顯微切割與傳統(tǒng)組織學(xué)互補(bǔ)，不能完全替代。7.莆田市中醫(yī)院在腫瘤研究中應(yīng)用激光顯微切割技術(shù)較廣泛。8.捕獲膜通常一次性使用，重復(fù)使用會(huì)降低效率。9.激光顯微切割操作復(fù)雜，對(duì)技術(shù)要求高。10.激光顯微切割設(shè)備成本較高。四、簡(jiǎn)答題答案1.激光顯微切割技術(shù)的原理及其應(yīng)用價(jià)值原理：利用激光對(duì)組織切片進(jìn)行精確掃描，選擇性切割目標(biāo)區(qū)域并捕獲細(xì)胞或組織片段。莆田市中醫(yī)院主要應(yīng)用于腫瘤研究中，可精確分離腫瘤異質(zhì)性細(xì)胞，為精準(zhǔn)治療提供依據(jù)。2.組織樣本的預(yù)處理步驟步驟：固定（甲醛）、脫水（梯度乙醇）、透明（二甲苯）、包埋（石蠟）、切片（4μm）、脫蠟（梯度乙醇）、染色（蘇木精或HE）和濕潤（蒸餾水）。3.減少RNA降解的方法方法：使用低RNA酶環(huán)境、快速切割、低溫保存（-80℃）、立即提取RNA（如RNeasyMiniKit）。4.莆田地區(qū)開展激光顯微切割技術(shù)的挑戰(zhàn)挑戰(zhàn)：設(shè)備成本高、技術(shù)人才短缺、樣本資源有限、臨床轉(zhuǎn)化困難。5.激光顯微切割與流式細(xì)胞術(shù)的優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)：激光顯微切割可分離單個(gè)細(xì)胞群體，流式細(xì)胞術(shù)無法實(shí)現(xiàn)；激光顯微切割可保留細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞術(shù)需破壞細(xì)胞。五、論述題答案1.激光顯微切割技術(shù)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用前景莆田市中醫(yī)院可結(jié)合中醫(yī)藥特色，研究中藥復(fù)方對(duì)腫瘤微環(huán)境的影響，通過激光顯微切割分離腫瘤